全 文 ：参 考 文 献
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金盏银盘指纹图谱的建立及其活性成分的研究
马陶陶，谢 晋，张群林，许 慧，李 俊，陈飞虎*
(安徽医科大学药学院 /国家中医药管理局重点实验室，安徽 合肥 230032)
摘要 目的:建立不同产地金盏银盘药材的高效液相色谱指纹图谱，并同时测定金丝桃苷、异槲皮苷、鬼针聚
炔苷和紫云英苷 4 种主要成分的含量。方法:采用反相高效液相色谱法，选用 Hypersil ODS C18(250 mm ×4. 6 mm，
5 μm)色谱柱，乙腈-3%冰醋酸为流动相梯度洗脱，采用药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004 A)评价图谱的相似性，同时测定药材中 4 种主要成分的含量。结果:建立了不同产地金盏银盘药材的 HPLC
指纹图谱，方法学符合指纹图谱要求，不同产地药材相似度差异不大，但 4 种主要成分含量差异较大。结论:该方
法稳定、准确、可靠，指纹图谱结合含量测定为金盏银盘药材质控标准的制定提供了科学依据。
关键词 金盏银盘;HPLC;指纹图谱;金丝桃苷;异槲皮苷;鬼针聚炔苷;紫云英苷
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)06-0892-05
Analysis of Fingerprint and Bioactive Components of
Bidens biternata by HPLC
MA Tao-tao，XIE Jin，ZHANG Qun-lin，XU Hui，LI Jun，CHEN Fei-hu
(School of pharmacy，Key Laboratory of State administration of traditional Chinese medicine，Anhui medical university，Hefei 230032，
China)
Abstract Objective:To establish HPLC fingerprint of Bidens biternata from different habitats and determine the contents of hy-
peroside，isoquercetin，astragalin and bipinnatapolyacetylpside. Methods:Analysis was carried on Hypersil ODS C18 column (4. 6 mm
× 250 mm，5. 0 μm)with acetonitrile and 3% acetic acid as the mobile phase in a gradient elution. The contents of 4 components
were determined simultaneously. Results:The fingerprint of 10 populations were established and the data were analyzed by the similari-
ty evaluation software. There were almost no differences between the similarities of 10 population，but the contents of 4 main compoerls
were different among them. Conclusion:This method is stable and reliable which could be applied in quality assessment.
Key words Bidens biternata (Lour. )Merr. et sherff.;HPLC;Fingerprint;Hyperoside;Isoquercetin;Astragalin;Bipinnata-
polyacetylpside
收稿日期:2011-10-08
基金项目:国家重大新药创制专项(No. 2009ZX09103386)
作者简介:马陶陶(1982-) ，女，讲师，研究方向:中药活性成分研究;Tel:0551-5161176，E-mail:cynthia. tt@ 163. com。
* 通讯作者:陈飞虎，Tel:0551-5161115，E-mail:chfhchina@ sohu. com。
金盏银盘 Bidens biternata (Lour. )Merr. et
Sherff. 为菊科植物金盏银盘的干燥地上部分〔1〕，具
有清热解毒、凉血止血、散瘀消肿、抗氧化之功
效〔2-4〕。金盏银盘为一年生草本，全国大部分地区均
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.06.016
有分布，对生态环境要求不严格，分布集中，易于采
集，是一种理想和有广阔开发应用前景的天然药物
资源。
本课题组在前期国家重大新药创制专项资金的
资助下，研究发现金盏银盘有效部位总黄酮具有较
好的抗肝纤维化作用〔5，6〕，为此将其开发为抗肝纤
维化新药。为了从根本上保证新药鬼针草胶囊质量
的稳定可靠，从源头上确保药材质量，本研究拟用
HPLC系统地对 10 批不同产地金盏银盘药材的指
纹图谱进行研究，建立了金盏银盘药材 HPLC 指纹
图谱。同时金盏银盘中的黄酮类成分金丝桃苷、异
槲皮苷、紫云英苷以及聚炔类成分鬼针聚炔苷作为
主要活性成分，其含量直接影响药材质量，因此笔者
也对这 4 种主要成分进行了含量测定，为新药的研
发和质量控制提供依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Agilent-1200 高效液相色谱仪(在线脱
气机，四元泵，PDA检测器) ;Agilent chemoffice 工作
站;SCQ-200 超声波清洗器(100 W，25 kHz，上海声
谱超声波设备厂) ;Millipore纯水机(USA)。
1. 2 药品与试剂 金丝桃苷(中国药品生物制品
检定所，批号:111521-200303) ，异槲皮苷(上海融禾
医药科技有限公司，批号:100406，纯度大于
98. 0%) ，紫云英苷(上海融禾医药科技有限公司，
批号:100320，纯度大于 98. 0%) ，鬼针聚炔苷由安
徽医科大学药学院天然药化实验室制取(纯度大于
95. 0%) ;乙腈为色谱纯(美国迪马公司) ，水为超纯
水，其它试剂均为分析纯。
金盏银盘药材由安徽中医学院王德群教授鉴
定，为菊科植物金盏银盘 Bidens biternata (Lour. )
Merr. et Sherff. 的干燥地上部分，产地及生态环境
数据见表 1。
表 1 金盏银盘药材样品来源
No. 产地 经度 纬度 采集时间
1 安徽省绩溪县龙川 118. 57 30. 07 2010. 08. 24
2 安徽省亳州市十九里镇 116. 76 33. 86 2010. 08. 31
3 安徽省桐城市龙眠山 116. 94 31. 04 2010. 10. 28
4 安徽省合肥市大蜀山 117. 27 31. 86 2010. 08. 07
5 安徽省巢湖市鼓山 117. 87 31. 62 2010. 08. 14
6 河南省商丘市郊 115. 38 34. 26 2010. 09. 02
7 安徽省蚌埠市怀远县 117. 19 32. 95 2010. 10. 24
8 安徽省黄山市汤口镇 118. 06 30. 19 2010. 07. 10
9 安徽省庐江县冶父山 117. 29 31. 23 2010. 10. 29
10 安徽省金寨县桃岭乡 115. 87 31. 67 2010. 10. 25
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS C18(250
mm ×4. 6 mm，5 μm) ;以 3. 0 %冰醋酸溶液为流动
相 A，以乙腈为流动相 B，按表 2 中的规定进行二元
梯度洗脱，流速 1. 0 mL /min，检测波长 255 nm，柱温
30 ℃，进样量 20 μL，洗脱时间 60 min，理论塔板数
以 11 号峰记，不低于 3000。
表 2 线性梯度洗脱
时间 /min A. 3. 0%冰醋酸 /% B. 乙腈 /%
0 95 5
10 88 12
20 85 15
40 70 30
50 60 40
60 40 60
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取金盏银盘药材
粉末 1. 0 g(过 40 目筛) ，加入 25mL 70%乙醇于具
塞的锥形瓶中，称重。超声提取 40 min，放冷，称重，
补足损失重量。石油醚萃取至无色，0. 45 μm 微孔
滤膜滤过，并精密量取 4 mL稀释至 10 mL，进样。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取 5. 02 mg 金丝
桃苷、4. 89 mg异槲皮苷、5. 10 mg 鬼针聚炔苷、4. 85
mg紫云英苷对照品，溶解于 50. 0 mL 甲醇溶液，定
容，置于4 ℃冰箱，作为储备液备用。
2. 4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 20
μL，分别在 0、3、6、12、18、24、36 h 进样，记录色谱
图，测定各峰的峰面积和保留时间，计算相对保留时
间和相对峰面积，考察样品溶液的稳定性。结果表
明，在 36 h范围内所有色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积的 RSD均小于 3. 0%，说明样品溶液在 36
h内基本稳定。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 20
μL，连续进样 6 次，记录色谱图，测定各峰的峰面积
和保留时间，计算其相对保留时间和相对峰面积，考
察仪器的精密度。结果表明，所有色谱峰的相对保
留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3. 0%，说明仪
器的精密度良好。
2. 6 重现性试验 取同一批号的金盏银盘药材粗
粉 6 份，精密称定，按照“2. 2”项下方法制备供试品
溶液，分别进样 20 μL，测定各峰的峰面积和保留时
间，计算相对峰面积和相对保留时间，考察方法的重
现性。结果表明，所有色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积的 RSD 均小于 3. 0%，符合色谱指纹图谱
·398·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
的研究要求。
2. 7 金盏银盘药材 HPLC指纹图谱的建立 将 10
批金盏银盘药材按“2. 2”项下方法制备供试品溶
液，精密吸取同一供试品溶液 20 μL，记录色谱图。
按照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂
行)》，建立金盏银盘药材指纹图谱。采用国家药典
委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004A)”进行数据分析处理，设定 1 号样品为参
照图谱，将其他样品的色谱峰与参照图谱进行匹配，
建立金盏银盘药材指纹图谱色谱叠加图(见图 1)。
图 1 10 批金盏银盘药材叠加指纹图谱
2. 7. 1 共有指纹峰的标定:根据 10 批药材的指纹
图谱检测结果，利用“中药色谱指纹图谱相似度评
价系统(2004A)”，在对照图谱上共标定14个共有
峰(占总峰面积的 90%以上) ，色谱图中保留时间为
23. 50 min处的 3 号色谱峰(金丝桃苷)分离良好，
保留时间适宜，故选为参照峰。其中 1 为儿茶素，3
为金丝桃苷，4 为异槲皮苷，6 为鬼针聚炔苷，8 为紫
云英苷，结果见图 2。分别计算 10 批金盏银盘样品
的指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间和相对峰面
积，结果见表 3、4。
2. 7. 2 指纹图谱相似度分析:利用国家药典委员
会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”，
以 1 号样品的指纹图谱为参照图谱，采用多点校正
后进行自动匹配，结果 10 批样品图谱相对于对照
指纹图谱的相似度分别为 0. 905、0. 918、0. 915、
0. 931、0. 951、0. 949、0. 921、0. 958、0. 917，符合中药
指纹图谱标准要求。
2. 8 含量测定
2. 8. 1 线性关系考察:分别精密吸取上述混合对
照品溶液 1. 0、2. 0、4. 0、8. 0、12. 0、20. 0 μL 注入液
相色谱仪，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量
为横坐标进行线性回归，得到金丝桃苷的回归方程
Y = 35885. 77X + 4. 00，r = 0. 9996;异槲皮苷的回归
方程 Y = 32671. 84X － 3. 29，r = 0. 9998;鬼针聚炔苷
回归方程 Y = 255407. 36X + 47. 32，r = 0. 9996，紫云
英苷的回归方程 Y = 28732. 71X + 9. 08，r = 0. 9991。
金丝桃苷、异槲皮苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷的线性
范围分别为 0. 4 ～ 50. 0 μg /ml、0. 35 ～ 25. 0 μg /ml、
1. 25 ～ 50. 0 μg /ml、1. 25 ～ 50. 0 μg /ml。
表 3 10 批金盏银盘样品共有峰相对保留时间
批峰 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0. 19 0. 90 0. 18 0. 18 0. 18 0. 17 0. 19 0. 18 0. 17 0. 18
2 0. 25 0. 42 0. 25 0. 25 0. 25 0. 26 0. 26 0. 26 0. 25 0. 25
3(S) 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00
4 1. 04 0. 56 1. 05 1. 04 1. 04 1. 06 1. 06 1. 05 1. 05 1. 05
5 1. 17 1. 14 1. 15 1. 15 1. 16 1. 19 1. 17 1. 17 1. 17 1. 18
6 1. 21 6. 77 1. 21 1. 21 1. 21 1. 23 1. 22 1. 22 1. 21 1. 22
7 1. 26 2. 99 1. 27 1. 24 1. 25 1. 28 1. 27 1. 27 1. 26 1. 27
8 1. 29 4. 19 1. 29 1. 29 1. 29 1. 31 1. 30 1. 30 1. 29 1. 30
9 1. 45 0. 68 1. 45 1. 45 1. 44 1. 47 1. 46 1. 46 1. 45 1. 46
10 1. 48 0. 87 1. 49 1. 48 1. 48 1. 51 1. 50 1. 49 1. 49 1. 50
11 1. 83 0. 62 1. 83 1. 83 1. 82 1. 86 1. 85 1. 84 1. 83 1. 84
12 1. 96 0. 64 1. 96 1. 96 1. 95 1. 99 1. 97 1. 97 1. 96 1. 97
13 1. 99 1. 11 2. 00 1. 99 1. 99 2. 02 2. 00 2. 00 1. 99 2. 00
14 2. 03 0. 72 2. 04 2. 03 2. 03 2. 07 2. 06 2. 05 2. 04 2. 05
·498· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
表 4 10 批金盏银盘样品共有峰相对峰面积
批峰 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0. 90 0. 90 0. 91 0. 91 0. 91 0. 91 0. 91 0. 91 0. 91 0. 90
2 0. 42 0. 42 0. 43 0. 43 0. 43 0. 43 0. 43 0. 44 0. 43 0. 42
3(S) 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00
4 0. 56 0. 56 0. 56 0. 56 0. 56 0. 56 0. 56 0. 55 0. 57 0. 56
5 1. 14 1. 15 11. 79 1. 16 1. 16 1. 16 1. 16 1. 15 1. 17 1. 15
6 6. 77 6. 81 6. 90 6. 84 6. 82 6. 88 6. 83 6. 83 6. 89 6. 80
7 2. 99 3. 01 3. 03 3. 02 3. 02 3. 04 3. 02 3. 01 3. 05 3. 02
8 4. 19 4. 22 4. 27 4. 23 4. 22 4. 27 4. 24 4. 23 4. 27 4. 21
9 0. 68 0. 69 0. 70 0. 69 0. 68 0. 70 0. 69 0. 69 0. 71 0. 70
10 0. 87 0. 87 0. 88 0. 88 0. 87 0. 87 0. 88 0. 87 0. 88 0. 87
11 0. 62 0. 64 0. 65 0. 64 0. 63 0. 64 0. 64 0. 64 0. 65 0. 63
12 0. 64 0. 66 0. 67 0. 66 0. 66 0. 67 0. 67 0. 67 0. 67 0. 65
13 1. 11 1. 11 1. 12 1. 12 1. 11 1. 11 1. 12 1. 12 1. 11 1. 11
14 0. 72 0. 73 0. 73 0. 73 0. 73 0. 74 0. 73 0. 74 0. 74 0. 74
图 2 金盏银盘药材 HPLC指纹图谱
1. 儿茶素 3. 金丝桃苷 4. 异槲皮苷 6. 鬼针聚炔苷
8. 紫云英苷
2. 8. 2 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液 20
μL，连续进样 6 次，记录峰面积，结果金丝桃苷、异
槲皮苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷的峰面积的 RSD 分
别为 0. 2%、0. 8%、1. 3%、1. 0%。
2. 8. 3 重现性试验:取同一批号的金盏银盘药材
粗粉 6 份，精密称定，按照“2. 2”项下方法制备供试
品溶液，分别进样 20 μL，测定峰面积，结果金丝桃
苷、异槲皮苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷峰面积的
RSD分别为 0. 5%、0. 8%、0. 9%、1. 4%。
2. 8. 4 稳定性实验:精密吸取同一供试品溶液 20
μL，分别在 0、3、6、12、18、24、36 h 进样，记录色谱
图，测定峰面积，结果金丝桃苷、异槲皮苷、鬼针聚炔
苷和紫云英苷的峰面积的 RSD 分别为 0. 5%、
1. 1%、2. 0%、1. 3%，样品溶液在 36 h 内基本稳
定。
2. 8. 5 回收率试验:精密称取已知含量的样品(1
号)6 份，分别精密加入一定量的金丝桃苷、异槲皮
苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷对照品溶液，按“2. 2”项
下方法制备供试品溶液，依法测定，结果金丝桃苷、
异槲皮苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷的平均回收率分
别 98. 9%、100. 6%、97. 1%、96. 8%，RSD 分别为
1. 5%、0. 8%、1. 0%、1. 1%。
2. 8. 6 含量测定:分别精密吸取各批药材的供试
品溶液 20 μL，按“2. 1”项色谱条件进行测定，计算
金丝桃苷、异槲皮苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷的含
量，结果见表 5。
表 5 10 批金盏银盘药材中 4 种主要成分的含量(%)
No. 金丝桃苷 异槲皮苷 鬼针聚炔苷 紫云英苷
1 0. 018 0. 023 0. 020 0. 192
2 0. 001 0. 003 0. 009 0. 462
3 0. 031 0. 026 0. 063 0. 776
4 0. 023 0. 018 0. 050 1. 001
5 0. 002 0. 004 0. 007 0. 264
6 0. 002 0. 005 0. 031 0. 982
7 0. 055 0. 050 0. 089 0. 942
8 0. 001 0. 004 0. 004 0. 213
9 0. 071 0. 043 0. 019 0. 354
10 0. 132 0. 104 0. 061 0. 848
均值 0. 034 0. 028 0. 035 0. 604
·598·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
3 讨论
本研究初步建立了不同产地的金盏银盘药材
HPLC指纹图谱，对 10 批药材进行了相似度评价;
同时对金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷及鬼针聚炔苷
4 种主要成分进行了含量测定。指纹图谱结合含量
测定，有效全面地反映了金盏银盘药材的化学特征，
为金盏银盘药材内在质量的评价和质量标准的制订
提供重要依据。
3. 1 检测波长的选择 利用全波长扫描从光谱图
数据中筛选信号，获得分离色谱峰信息较多的检测
波长，最终确定 255 nm 作为指纹图谱的检测波长，
进行试验研究。
3. 2 提取溶剂的优化 分别以 25%乙醇、50%乙
醇、70%乙醇、乙醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇及水
作为提取溶剂，提取药材，优化筛选出峰数目较多，
分离较好，峰形较尖锐，保留时间适中的 70%乙醇
作为提取溶剂。
3. 3 提取方法的优化 分别采用加热回流、索氏
提取以及超声提取的方法，优化结果筛选出峰数目
较多，分离较好，提取效率较高的超声提取法。
3. 4 含量测定 不同产地金盏银盘药材的指纹图
谱相似度差异不大，但 10 批样品中的主要活性成分
金丝桃苷、异槲皮苷、鬼针聚炔苷和紫云英苷的含量
均有一定的差异，其中绩溪、桐城、合肥、蚌埠四产地
的样品中金丝桃苷、异槲皮苷的含量接近药材均值，
鬼针聚炔苷、紫云英苷的含量相对较高。而巢湖鼓
山和黄山汤口的样品 4 种成分含量较低。笔者在各
地采样时发现，金盏银盘多生于路边、村旁、林缘及
山野荒地，对生长环境要求并不甚严格，虽然某些地
区是贫瘠的荒地、废地，而金盏银盘基本上都能良好
生长。但由于 10 个地区地理位置的差异，造成气
候、土壤、光照等生态因子以及植被的不同，金盏银
盘在群落中所处的位置也不一样，因而其黄酮类成
分和鬼针聚炔苷的含量也随之变化，差异甚大。含
量的差异与药材的生态环境有着密切的关系，笔者
将进一步对药材的生态环境与有效成分分布的相关
性作进一步探讨，为中药 GAP生产奠定基础。
参 考 文 献
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Journal of Pharmacy and Pharmacology，2008，60(10) :
1393.
收稿日期:2011-12-27
基金项目:武汉市卫生局基金(WZ10A01) ;湖北省自然科学基金(2011CDB438)
作者简介:谭明格(1968-) ，男，副主任医师，主要从事传染病中西医治疗研究;Tel:13217287889，E-mail:xph68@ hotmail. com。
* 通讯作者:徐海星，Tel:027-87859019，E-mail:xuhaixingwhut@ 163. com。
药材白英红外指纹图谱鉴别及相似度分析
谭明格1，许沛虎2，徐海星2* ，黄志军2，林世和3
(1. 湖北省巴东县人民医院，湖北 恩施 444300;2. 武汉理工大学化学工程学院制药工程系，湖北 武汉
430070;3. 武汉市第一医院中心实验室，湖北 武汉 430022)
摘要 目的:建立白英药材红外光谱鉴定分析新方法。方法:对不同产地白英药材进行红外光谱指纹鉴别，并
进行相似度计算与分析。结果:获得了 5 批不同产地白英药材的红外指纹图谱。结论:粉末的红外指纹图谱鉴定
法可用于不同产地白英药材的鉴定和识别，相似度的计算结果进一步证明了方法的可行性。
关键词 白英;药材鉴定;FTIR指纹图谱;相似度
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)0896-03
·698· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月