全 文 ：西北林学院学报 ２０１６，３１（１）：２３８～２４２
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７４６１．２０１６．０１．４１
黄精多糖酶法脱蛋白的工艺研究
　收稿日期：２０１５－０４－２７　修回日期：２０１５－１０－１２
　基金项目：湖南省科技计划项目（２０１３ＮＫ４１０７）。
　作者简介：刘小攀，男，在读硕士，研究方向：林产化学加工工程。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｘｐ１９９０２２１＠１６３．ｃｏｍ
＊通信作者：田启建，男，研究员，研究方向：中药材ＧＡＰ及活性成分等。Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｉａｎｑｉｊｉａｎ６８＠１６３．ｃｏｍ
刘小攀１，田启建２＊，田春莲１
（１．吉首大学 林产化工工程湖南省重点实验室，湖南 张家界４２７０００；
２．吉首大学 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首４１６０００）
摘　要：以黄精多糖为原料，研究酶解温度、酶解时间、酶解ｐＨ、酶用量对蛋白质脱除率和多糖损
失率的影响。通过正交试验分析得到酶法脱除黄精多糖中蛋白质的最优工艺，并与Ｓｅｖａｇｅ法相比
较。结果表明，酶法是最佳的脱蛋白方法，其脱蛋白最佳工艺为：木瓜蛋白酶添加量２．５％，温度
６０℃，时间２．５ｈ，ｐＨ为６．５，蛋白质脱除率为７１．２３％，多糖损失率１３．７％。
关键词：黄精；多糖；酶法；脱蛋白
中图分类号：Ｓ５６７．２３９　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－７４６１（２０１６）０１－０２３８－０５
Ｄｅｐｒｏｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ＬＩＵ　Ｘｉａｏ－ｐａｎ１，ＴＩＡＮ　Ｑｉ－ｊｉａｎ２＊，ＴＩＡＮ　Ｃｈｕｎ－ｌｉａｎ１
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｏｎ　Ｈｕｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｊｉｓｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｚｈａｎｇｊｉａｊｉｅ，Ｈｕｎａｎ４２７０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｕｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，
Ｊｉｓｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｓｈｏｕ，Ｈｕｎａｎ４１６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｎｚｙｍｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｒｅｍｏｖｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｈｉｚｏｍｅｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ．Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｓｅｖａｇｅ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｅｎｚｙｍｉｃ　ｍｅｔｈ－
ｏｄ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　Ｓｅｖａｇｅ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｅｎｚｙｍｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ｐａｐａｉｎ　ｄｏｓａｇｅ　２．５％，
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　６０℃，ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　２．５ｈ，ｐＨ　６．５，ｕｎｄｅｒ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｅｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ
７１．２３％，ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｌｏｓｓ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１３．７％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ；ｄｅｐｒｏｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ
　　黄精是百合科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）黄精属（Ｐｏｌｙｇｏｎａ－
ｔｕｍ）多年生草本植物的总称，我国有３０多种［１］。其
中黄精（Ｐ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ）、多花黄精 （Ｐ．ｃｙｒｔｏｎｅｍａ）及
滇黄精 （Ｐ．ｋｉｎｇｉａｎｕｍ）为原生药来源，属于药食同
源性中草药［２］。黄精含有丰富的皂甙［３－４］和多糖等
有效成分，其中黄精多糖除具有降脂和抗实验性动
脉粥样硬化形成、提高机体免疫能力、抑制和杀灭肿
瘤细胞生长［５－７］外，还有明显的抗菌消炎和延缓衰老
作用［８－９］。所以它在新药研制和保健品开发领域具
有广阔的发展前景。目前黄精多糖提取主要有浸提
法、微波辅助提取、闪式提取等方法［１０－１２］，分离纯化
主要运用乙醇醇沉、大孔树脂吸附、Ｓｅｖａｇｅ法及
ＴＣＡ法脱蛋白等［１３－１５］，酶法由于专属性强，普遍认
为是较好的脱蛋白方法，酶法脱除黄精蛋白研究未
涉及。因此，本试验以蛋白质脱除率和多糖损失率
为指标，探讨黄精多糖的酶法脱蛋白工艺，并与传统
的Ｓｅｖａｇｅ法脱多糖蛋白相比较，旨在得到一种黄精
多糖脱蛋白效率高且多糖损失小的方法，对黄精多
糖产业化和黄精资源的深度开发具有重要意义。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　植物材料　２０１４年７月采自湖南湘西州永
顺县小溪乡少车村，经吉首大学资环学院刘世彪教
授鉴定为药用植物黄精（Ｐ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ）的根状茎。
将样品洗净后于４５℃烘干、粉碎，备用。
１．１．２　试剂　木瓜蛋白酶（≥６０万 Ｕ·ｇ－１）购自
北京索莱宝生物科技有限公司，牛血清蛋白（ＢＳＡ）、
考马斯亮蓝Ｇ－２５０、蒽酮、乙醇、浓硫酸、氯仿、正丁
醇、葡萄糖、碳酸氢钠、氢氧化钠、氯化钠等为ＡＲ。
１．１．３　仪器　ＵＶ－３９００型紫外可见分光光度计
（日本日立公司）；ＲＥ－５２０５旋转蒸发器（上海亚荣生
化仪器厂）；ＨＭ－３５Ｖ酸度计（日本东亚电波公司）；
ＬＤ５－２Ａ离心机（北京医用离心机厂）；ＡＥＬ－４０ＳＭ
十万分之一分析天平（日本岛津公司）；数显恒温水
浴箱（金坛市富华仪器有限公司）。
１．２　方法
１．２．１　黄精粗多糖的提取［１６］　称取黄精根状茎粉
末４００ｇ，以１∶１５的料液比于９０℃恒温提取４ｈ，
离心，过滤，滤渣再加水提取１次，过滤，合并滤液，
减压浓缩至原液的１／５，加无水乙醇至含醇量达到
８０％，４℃下沉淀２４ｈ，离心，沉淀加水溶解，冷冻干
燥，备用。
１．２．２　黄精多糖含量的测定
１．２．２．１　标准曲线的制备　准确称取在１０５℃干
燥到恒重的５０ｍｇ葡萄糖对照品，用双蒸馏水溶
解，定容至１００ｍＬ，得到浓度为０．５ｍｇ·ｍＬ－１的
标准品溶液。吸取对照品溶液１．０、２．０、４．０、５．０、
６．０、８．０、１０．０ｍＬ用蒸馏水定容至５０ｍＬ，分别加
入０．２％的蒽酮－硫酸试剂（８０％的浓硫酸）８ｍＬ，
沸水浴１０ｍｉｎ，迅速冷却至室温，在６２５ｎｍ测定吸
光度。以葡萄糖浓度Ｃ（ｍｇ·ｍＬ－１）为横坐标，吸
光度Ａ为纵坐标，得回归方程Ａ＝９．１８Ｃ＋０．０１３，
相关系数０．９９９　５。
１．２．２．２　多糖含量的测定　黄精多糖含量测定采
用蒽酮 － 硫酸法［１７］准确量取样液 ２．０ ｍＬ，按
１．２．２．１显色方法操作，测定吸光度，然后计算样品
多糖含量与多糖损失率。
多糖含量＝Ｃ×Ｖ×ＤＷ
式中：Ｃ为供试液中多糖浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），Ｖ 为供
试液的体积（ｍＬ），Ｄ 为供试液的稀释因子，Ｗ 为样
品质量（ｍｇ）。
多糖损失率＝
　　
（脱蛋白前的多糖含量－脱蛋白后的多糖含量）
脱蛋白前的多糖含量 ×１００％
１．２．３　蛋白质含量测定　
１．２．３．１　制备标准曲线　首先称取牛血清蛋白
（ＢＳＡ）０．１ｇ溶解后定容到１００ｍＬ，得到１ｍｇ·
ｍＬ－１的标准蛋白质储备液，然后分别配成０．００５、
０．０１、０．０２、０．０４、０．０６、０．０８ｍｇ·ｍＬ－１溶液。蛋
白质含量检测采用考马斯亮蓝法［１８］。横坐标为蛋
白质浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），纵坐标为吸光值（λ＝５９５
ｎｍ）绘制标准曲线，回归方程为ｙ＝６．３２４ｘ＋
０．００８　９，ｒ＝０．９９９　３，吸光度与蛋白质浓度线性关
系良好（图１）。
图１　蛋白质的标准曲线
Ｆｉｇ．１　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ
１．２．３．２　样品蛋白质含量检测　首先吸取浓度为
１ｍｇ·ｍＬ－１的多糖溶液１ｍＬ于试管中，然后加入
考马斯亮蓝Ｇ－２５０溶液５．０ｍＬ，摇匀，３次平行；空
白管以蒸馏水代替多糖溶液，测吸光度，计算样品蛋
白质含量及蛋白质脱除率。
蛋白质含量＝Ｃ×Ｖ×ＤＷ
式中：Ｃ表示供试液蛋白质浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），Ｖ 为
供试液的体积（ｍＬ），Ｄ 为供试液的稀释因子，Ｗ 为
样品质量（ｍｇ）。
蛋白脱除率＝
　　
脱蛋白前蛋白质含量－脱蛋白后蛋白质含量
脱蛋白前蛋白质含量 ×１００％
１．３　黄精多糖脱蛋白工艺
１．３．１　ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白　取黄精粗多糖溶液（５
ｍｇ·ｍＬ－１）２０ｍＬ，加１／５ｓｅｖａｇｅ（氯仿∶正丁醇＝
４∶１）试剂，剧烈震荡２０ｍｉｎ，离心弃去中间变性蛋
白和下层溶剂，重复多次，采用１．２．２．２和１．２．３．２
中方法检测多糖和蛋白质含量，然后计算多糖损失
率和蛋白除去率。
１．３．３　酶法脱蛋白工艺的研究
１．３．３．１　单因素试验　取黄精粗多糖溶液，加入木
瓜蛋白酶，调至酶反应的适宜ｐＨ，在一定温度下水
浴一定时间，然后煮沸灭酶１０ｍｉｎ，使酶失活沉淀，
酶解液４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上清液加入
无水乙醇４℃放置过夜，离心，将多糖沉淀烘干，复
溶，最后测蛋白质含量。单因素考察条件分别为酶
解温度３０、４０、５０、６０、７０ ℃（木瓜蛋白酶添加量
２％、ｐＨ为６．５，时间２ｈ），酶解时间０．５、１．５、２．５、
９３２第１期 刘小攀 等：黄精多糖酶法脱蛋白的工艺研究
３．５、４．５ｈ（木瓜蛋白酶添加量２％，ｐＨ 为６．５，温
度为５０℃），酶解ｐＨ　３．５、４．５、５．５、６．５、７．５（木瓜
蛋白酶添加量２％，时间２．５ｈ，温度为５０℃），酶用量
１％、１．５％、２％、２．５％、３％（时间２．５ｈ，ｐＨ为５．５，温
度为５０℃），这些因素对蛋白质脱除率的影响。
１．３．３．２　正交试验　在上述单因素试验基础上采
用酶解温度、酶解时间、酶解ｐＨ及酶用量４因素正
交试验（表１），优选黄精多糖中蛋白质酶法脱除的
最佳工艺参数。
表１　因素水平
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ
水平
酶解温度
（Ａ）／℃
酶解时间
（Ｂ）／ｈ
ｐＨ值
（Ｃ）
酶用量
（Ｄ）／％
１　 ４０　 ２　 ４．５　 ２
２　 ５０　 ２．５　 ５．５　 ２．５
３　 ６０　 ３　 ６．５　 ３
２　结果与分析
２．１　酶法脱蛋白工艺条件的优化
２．１．１　单因素试验结果
２．１．１．１　酶解温度　从图２（ａ）可以看出，酶解温
度３０～５０℃时，由于酶活力随温度上升而增加，从
而对蛋白脱除率提高。温度达５０℃，蛋白脱除率达
最大值。在酶解温度作用范围内，最适温度酶作用
最强，低温抑制酶活性，而较高的温度可促进酶作
用，使蛋白质脱除率显著增加。在此之后，再继续增
加温度，蛋白脱除率反而下降，可能是由于温度过高
导致酶失活及多糖分解。故酶解温度以５０℃为宜。
２．１．１．２　酶解时间　由图２（ｂ）得到，在一定范围
内，蛋白质去除效果随着酶解时间的增大而呈上升
趋势，当酶解时间达到２．５ｈ时，蛋白脱除率达最高
为６４．７３％，再增加酶解时间，蛋白脱除率基本趋于
平稳。主要因为随着反应时间的增加，使酶与蛋白
充分作用，但当酶反应达到饱和时，蛋白的脱除效果
受反应时间延长影响不大。因此，考虑到蛋白除杂
效率，酶解时间确定为２．５ｈ。
２．１．１．３　ｐＨ　酶液ｐＨ对蛋白脱除率影响见图２
（ｃ）。当酶液ｐＨ　５．５时，蛋白脱除率达最高。酶液
ｐＨ＞５．５或＜５．５，都减弱蛋白的脱除，可能是过高
或过低的ｐＨ能导致木瓜蛋白酶结构的变化，从而
降低酶活性。所以酶解ｐＨ确定为５．５。
２．１．１．４　酶用量　由图２（ｄ）看出，木瓜蛋白酶的
用量有一定影响。木瓜蛋白酶的用量较低时黄精多
糖中的蛋白质含量随酶用量的增加而减少，但当酶
用量为２．５％时，蛋白脱除率最高达到６２．１９％，然
后随酶用量的增加蛋白质脱除效果基本趋于平稳。
说明木瓜蛋白酶能降解多糖中的蛋白质，从而达到
脱除效果，从考虑酶成本和避免酶蛋白过多而进入
酶解液，木瓜蛋白酶用量以２．５％为好。
图２　酶解温度、酶解时间、ｐＨ、酶用量对蛋白脱除率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（ａ），ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ（ｂ），ｐＨ （ｃ），ｅｎｚｙｍｅ　ｔｏ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｒａｔｉｏ（ｄ）ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｒａｔｅ
２．１．２　酶法脱蛋白正交试验结果与分析　以蛋白
质脱除率为指标，通过正交试验考察酶解温度（Ａ）、
酶解时间（Ｂ）、酶解ｐＨ（Ｃ）和酶用量（Ｄ）４因素，研
究黄精粗多糖中蛋白质的酶法脱除最佳工艺。正交
０４２ 西北林学院学报 ３１卷　
试验结果见表２和表３。由表２直观分析可知，各
因素对蛋白质脱除率影响顺序为 酶解温度Ａ＞酶
解ｐＨ值Ｃ＞酶解时间Ｂ＞酶用量Ｄ，以温度对多
糖中蛋白质脱除影响最关键。酶法脱除黄精粗多糖
蛋白质的最优工艺参数为Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ３，即酶解温度
６０℃，ｐＨ为６．５，作用时间２．５ｈ，酶用量为３％。因
酶用量对试验结果影响不显著，酶用量在３％和２．
５％时变化很小，因此选择Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２ 进行验证性试
验，在此条件下，蛋白质脱除率为７１．２３％，多糖损
失率１３．７％。经方差分析（表３），可看出酶解温度
和ｐＨ值达显著水平（ｐ＜０．０５），而酶解时间及酶用
量对蛋白质脱除率影响不明显。
表２　正交试验结果与分析
Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
试验号 Ａ　 Ｂ　 Ｃ　 Ｄ
蛋白质
脱除率／％
１　 １　 １　 １　 １　 ６１．３７
２　 １　 ２　 ２　 ２　 ６３．０３
３　 １　 ３　 ３　 ３　 ６６．２１
４　 ２　 １　 ２　 ３　 ６４．５１
５　 ２　 ２　 ３　 １　 ６９．０２
６　 ２　 ３　 １　 ２　 ６６．５７
７　 ３　 １　 ３　 ２　 ７０．２９
８　 ３　 ２　 １　 ３　 ６９．４０
９　 ３　 ３　 ２　 １　 ６７．４３
ｋ１　 ６３．５３７　 ６５．３９０　 ６５．７８０　 ６５．９４０
ｋ２　 ６６．７００　 ６７．１５０　 ６４．９９０　 ６６．６３０
ｋ３　 ６９．０４０　 ６６．７３７　 ６８．５０７　 ６６．７０７
Ｒ　 ５．５０３　 １．７６０　 ３．５１７　 ０．７６７
表３　方差分析
Ｔａｂｌｅ　３　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ
因素
偏差
平方和
自由度 Ｆ比 Ｆ
临界值
显著性
Ａ　 ４５．７６９　 ２　 ４２．７７５　 ｐ＜０．０５
Ｂ　 ５．０８２　 ２　 ４．７５０
Ｃ ２０．４２６　 ２　 １９．０９０　 １９．０００　 ｐ＜０．０５
Ｄ　 １．０７０　 ２　 １．０００
误差 １．０７　 ２
２．２　Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白
由图３得出，Ｓｅｖａｇｅ法脱黄精粗多糖中蛋白质
进行了１０次，随脱蛋白次数的增加蛋白质含量减
少，但减少幅度不大，尤其是第８～第１０次脱蛋白
之间蛋白质脱除率变化更小，可认为达到终点。蛋
白质脱除率为６１．３２％，多糖损失率为２５．８１％。可
见，Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白次数需要较多，消耗有机溶剂
量大，同时由于有机溶剂的多次处理，导致少量多糖
物质夹带于所形成的凝胶状物质中，特别是随形成
糖复合物的多糖一同沉淀，造成多糖损失率增大。
图３　Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白
Ｆｉｇ．３　Ｓｅｖａｇｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｒｅｍｏｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
３　结论与讨论
采用正交试验设计，以蛋白脱除率为指标，优选
了木瓜蛋白酶去除黄精多糖蛋白质工艺。正交试验
结果表明，酶解温度和ｐＨ 值对蛋白质脱除率影响
达显著水平（ｐ＜０．０５），时间和酶用量对蛋白质脱
除率效果影响不显著。最佳工艺条件为：酶解温度
６０℃，ｐＨ６．５，作用时间２．５ｈ，酶用量为２．５％。验
证试验表明，蛋白脱除率为７１．２３％，多糖损失率
１３．７％。
酶法和Ｓｅｖａｇｅ法除蛋白方法一定程度上都能
将黄精多糖中的蛋白质脱除。蛋白质脱除主要是为
了分离纯化黄精粗多糖，进而研究黄精多糖的理化
性质，为黄精多糖的药理活性研究和深度开发提供
试验依据，故除去多糖蛋白质的同时尽量减少多糖
损失。图３中，利用Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白的蛋白质脱除
率较酶法低且脱除过程非常复杂，多糖损失率也高。
运用木瓜蛋白酶来酶解蛋白，使其成为相对分子质
量较小多肽或者更为彻底的氨基酸，然后醇沉，绝大
多数大分子多糖将沉淀，而分子质量相对较小的多
肽和氨基酸则大部分保留于溶液中，因此，酶法是黄
精多糖脱蛋白较好的方法。
参考文献：
［１］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第１５卷
［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７８：５２－８０．
［２］　国家药典委员会．中华人民共和国药典：Ｉ部［Ｍ］．北京：化学工
业出版社，２００５：２７５－２８７．
［３］　尤新军，郭蕊，王琳，等．黄精总皂苷超声提取工艺研究［Ｊ］．西
北林学院学报，２０１０，２５（３）：１６３－１６６．
ＹＯＵ　Ｘ　Ｊ，ＧＵＯ　Ｒ，ＷＡＮＧ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ
ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ
Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１０，２５（３）：１６３－１６６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［４］　王冬梅，朱玮，张存莉，等．卷叶黄精总皂苷含量测定方法及提
取工艺研究［Ｊ］．西北林学院学报，２００６，２１（３）：１０７－１１０．
ＷＡＮＧ　Ｄ　Ｍ，ＺＨＵ　Ｗ，ＺＨＡＮＧ　Ｃ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒ－ｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｉｄｓ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｐｏ－
１４２第１期 刘小攀 等：黄精多糖酶法脱蛋白的工艺研究
ｌｙｇｏｎａｔｕｍ　ｃｉｒｒｈｉｆｏｌｉｕｍ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔ－ｒｙ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６，２１（３）：１０７－１１０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［５］　李友元，邓洪波，向大雄，等．黄精多糖的降血脂及抗动脉粥样
硬化作用［Ｊ］．中国动脉硬化杂志，２００５，１３（４）：４２９－４３１．
ＬＩ　Ｙ　Ｙ，ＤＥＮＧ　Ｈ　Ｂ，ＸＩＡＮＧ　Ｄ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｇｏ－
ｎａｔｉｃ　ｒｈｉｚｏｍｅ　ｏｎ　ｈｙｐｅｒｌｉｐｏｉｄｅｍｉａ　ａｎｄ　ａｎｔｉ－ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２００５，１３（４）：４２９－４３１．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［６］　傅圣斌，钱建鸿，陈乐意，等．黄精多糖的提取及其对小鼠免疫
活性的影响［Ｊ］．中国食品学报，２０１３，１３（１）：６８－７２．
ＦＵ　Ｓ　Ｂ，ＱＩＡＮ　Ｊ　Ｈ，ＣＨＥＮ　Ｌ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｇｏｎａ－
ｔｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ
Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，１３（１）：６８－７２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　江华．黄精多糖的抗肿瘤活性研究［Ｊ］．南京中医药大学学报，
２０１０，２６（６）：４７９－４８１．
ＪＩＡＮＧ　Ｈ．Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｕｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｐｏｌｙｇ－
ｏｎａｔｉ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｔｃｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１０，２６（６）：４７９－
４８１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［８］　郑春燕，汪好芬，张庭廷．黄精多糖的抑菌和抗炎作用研究［Ｊ］．
安徽师范大学学报：自然科学版，２０１０，３３（３）：２７２－２７５．
［９］　刘萍．黄精多糖对老龄大鼠老化相关酶的影响［Ｊ］．华西医药，
２０１０，２５（７）：１２５９－１２６１．
ＬＩＵ　Ｐ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｍｕ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｏｎ　ｅｎ－
ｚｙｍｅｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｇｉｎｇ　ｏｆ　ａｇｅｄ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１０，２５（７）：１２５９－１２６１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　孙庭阁，赵瑞萌，张玲．热水浸提法提取黄精多糖最佳工艺研
究［Ｊ］．泰山医学院学报，２０１０，１３１（２）：１２８－１３０．
ＳＵＮ　Ｔ　Ｇ，ＺＨＡＯ　Ｒ　Ｍ，ＺＨＡＮＧ　Ｌ．Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｆｌｏｗ－ｓｈｅｅｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｉｔｈ
ｈｏｔｗａｔｅｒ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔａｉｓｈａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，
２０１０，１３１（２）：１２８－１３０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１１］　张瑞堂，石晓峰，马趣环，等．微波辅助提取黄精多糖的工艺研
究［Ｊ］．中国药师，２００９，１２（１２）：１７３３－１７３５．
ＺＨＡＮＧ　Ｒ　Ｔ，ＳＨＩ　Ｘ　Ｆ，ＭＡ　Ｑ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏ－
ｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔａｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ
ｓｉｂｉｒｉｃｕｍｒｅｄ ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ，２００９，１２（１２）：１７３３－
１７３５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１２］　徐蔚，王宫，王瑾，等．闪式提取黄精多糖［Ｊ］．实用中医内科杂
志，２０１３，２７（８）：４９－５０．
ＸＵ　Ｗ，ＷＡＮＧ　Ｇ，ＷＡＮＧ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｌａｓｈ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｈｉｚｏｍａ
ｐｏｌｙｇｏｎａｔｉ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１３，２７（８）：
４９－５０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１３］　白俊毅，沈立，张艳琳，等．复方中黄精多糖的提取纯化工艺研
究［Ｊ］．现代中药研究与实践，２０１０，２４（３）：５２－５５．
ＢＡＩ　Ｊ　Ｙ，ＳＨＥＮ　Ｌ，ＺＨＡＮＧ　Ｙ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉ　ｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｒｈｉｚｏｍａ－ｐｏｌｙｇｏｎａｔｉ－ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
［Ｊ］．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１０，２４
（３）：５２－５５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１４］　高嵩，王鹤潼，王立芳，等．黄精多糖提取纯化工艺研究［Ｊ］．上
海中医药大学学报，２０１５，２９（３）：８６－９０．
ＧＡＯ　Ｓ，ＷＡＮＧ　Ｈ　Ｔ，ＷＡＮＧ　Ｌ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉ－
ｃａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｐｏｌｙｇｏｎａｔｉ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ［Ｊ］．Ａｃｔａ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎｉｓ　Ｍｅｄｉｃａｌｉｓ　Ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉａｅｑｕｅ
Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０１５，２９（３）：８６－９０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１５］　梁引库．吴三桥．黄精多糖脱色和脱蛋白工艺研究［Ｊ］．食品科
技，２０１２，３７（１２）：１６６－１６９．
ＬＩＡＮＧ　Ｙ　Ｋ，ＷＵ　Ｓ　Ｑ．Ｂｌｅａｃｈｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｐｏ－
ｌｙｇｏｎａｔｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
２０１２，３７（１２）：１６６－１６９．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　梁引库．黄精多糖提取工艺的研究［Ｊ］．中国农学通报，２０１２，
２８（１２）：２６９－２７２．
ＬＩＡＮＧ　Ｙ　Ｋ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｂｕｌｅｔｉｎ，
２０１２，２８（１２）：２６９－２７２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１７］　刘小攀，田春莲，覃基信，等．响应面法优化超声波辅助提取忽
地笑多糖工艺研究［Ｊ］．中药材，２０１５，３８（７）：１５２０－１５２３
［１８］　史德芳，韩淑琴．仙人掌多糖提取过程中三种脱蛋白方法的比
较研究［Ｊ］．现代食品科学，２００６，２２（４）：９３－９５．
ＳＨＩ　Ｄ　Ｆ，ＨＡＮ　Ｓ　Ｑ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｒｅｍｏ－
ｖｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｃｔｕｓ［Ｊ］．
Ｍｏｄｅｒｎ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，２２（４）：９３－９５．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ
櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲櫲
）
（上接第２３０页）
［１１］　邹勇，尉芹，赵忠，等．木屑快速热解生物油中酚类提取物的抗
氧化及抑真菌活性研究［Ｊ］．西北林学院学报，２０１４，２９（１）：
１１６－１２１．
ＺＯＵ　Ｙ，ＷＥＩ　Ｑ，ＺＨＡＯ　Ｚ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｂｉｏ－ｏｉｌ　ｂｙ　ｆａｓｔ　ｐｙｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ
ｓａｗｄｕｓｔ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
２０１４，２９（１）：１１６－１２１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１２］　钱华，王衍彬，许炯，等．竹醋液中酚类化合物Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ
法测定［Ｊ］．林产化学与工业，２００７，１０（２７）：１０５－１０８．
ＱＩＡＮ　Ｈ，ＷＡＮＧ　Ｙ　Ｂ，ＸＵ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｎ－
ｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｅｎｏｌｉｃ　ｃｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　ｂｍｂｏｏ　ｖｎｅｇａｒ　ｂｙ　ｆｏｌｉｎ－ｃｉｏｃａｌｔｅｕ’ｓ
ｍｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．２００７，
（２７）：１０５－１０８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１３］　ＺＢＡＹＡ　Ｇ，ＡＹＲＩＬＭＩＳＢ　Ｎ．Ｂｏｎｄｉｎｇ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｗｏｏｄ
ｂｏｎｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｄｈｅｓｉｖｅ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌ　ｆｏｒｍａｌｄｅ－
ｈｙｄｅ　ａｎｄ　ｂｉｏ－ｏｉｌ［Ｊ］．Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｃｒｏｐｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，２０１５，６６：
６８－７２．
［１４］　ＣＨＯＩ　Ｇ　Ｇ，ＯＨ　Ｓ　Ｊ，ＬＥＥ　Ｓ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏ－ｂａｓｅｄ
ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｒｅｓｉｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｉｏ－ｏｉｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈａｒ
ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆａｓｔ　ｐｙｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐａｌｍ　ｋｅｒｎｅｌ　ｓｈｅｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅ－
ｓｏｕｒｃｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，１７８：９９－１０７．
［１５］　杜洪双，徐显涛，拱国华，等．生物油脲醛树脂胶合成研究［Ｊ］．
木材加工机械，２０１５（５）：５９－６１．
ＤＵ　Ｈ　Ｓ，ＸＵ　Ｘ　Ｔ，ＧＯＮＧ　Ｇ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｂｉｏ－ｏｉｌ　ｕｒｅａ－ｆｏｒｍ－
ａｌｄｅｈｙｄｅ　ｒｅｓｉｎ［Ｊ］．Ｗｏｏｄ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，２０１５（５）：５９－６１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　伊江平，李本，王宇飞，等．可发性生物油－酚醛树脂制备工艺
研究［Ｊ］．热固性树脂，２０１３，２８（４）：２９－３３．
ＹＩ　Ｊ　Ｐ，ＬＩ　Ｂ，ＷＡＮＧ　Ｙ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｆｏａｍａｂｌｅ　ｂｉｏ－ｏｉｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｒｅｓｉｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｒｍｏｓｅｔｔｉｎｇ　Ｒｅｓｉｎ，
２０１３，２８（４）：２９－３３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
２４２ 西北林学院学报 ３１卷