全 文 ： 收稿日期：2007-12-05
作者简介：邓樱(1971-)，男，湖南邵阳人，农艺师，硕士，从事花卉组织培养及育种研究。
注：陈继敏为通讯作者。

秋水仙素诱导兰属‘素心黄’多倍体的方法研究
邓 樱，周 晔，陈继敏
(珠海市农业科学研究中心，广东 珠海 519070)

摘 要：采用继代培养法和侧芽萌动培养法比较秋水仙素诱导‘素心黄’多倍体的效果。结果表明，继代培养法
加倍效果较好，其诱导率为 16.7%；细胞学鉴定表明，该方法诱导培育的植株具有多倍体表型特征，其体细
胞染色体数 2n=80，未见嵌合现象，而对照 2n=40。
关键词：兰属‘素心黄’；原球茎；根尖；秋水仙素；多倍体诱导
中图分类号：Q943; S682.31 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)02-0038-03

Methods of Polyploid Induction of Cymbidium with Colchicine
DENG Ying, ZHOU Ye, CHEN Ji-min
(Zhuhai Research Center of Agricultural Sciences, Zhuhai 519070, Guangdong China)

Abstract：The methods of polyploid induction of Cymbidium by colchicine were studied in this
paper. The results showed that the methods of multiplicating PLBs gave a best result for polyploid
induction, and about 16.7% protocorms developed into polyploidies. Cytological observation
showed that the plantlets had the characteristics of polyploid phenotype and the chromosome
number was 2n=80, but no mosaic phenomenon were observed, and the chromosome number of the
control (no treated with colchicines) was 2n=40.
Key words：Cymbidium; protocorm; root tip; colchicine; polyploid induction

‘素心黄’是兰属的一个栽培品种，起源于天然变异植株，在兰花中小有名气，唯一令人遗憾的是花
朵较小。前人利用秋水仙碱已在许多园艺作物上诱导出有价值的多倍体[1]，如百合(Liliumd avidii)[2]、
芦荟[3,4]；在兰科倍性育种方面也有不少报道，如齿斑石斛兰[5]、沉香虎头兰[6]等。本文以秋水仙素为
诱导剂，探讨继代培养法和侧芽萌动培养法对‘素心黄’多倍体的诱导效果，以期为改进该品种花较小之
缺陷提供新的途径。
1 材料与方法
1.1 材料
旺盛分化或增殖的无菌原球茎(PLB)、无菌小植株。
1.2 培养条件
光照强度1 500～2 000 lx，光照12～14h/d。
1.3 多倍体诱导方法
1.3.1 秋水仙素浓度梯度 0.1%、0.05%、0.01%、0.005%、0.001%、CK。
1.3.2 处理时间 1d、3d、5d。
以上每处理重复4次。
1.3.3 处理方法 采用两种方法。

2008,37(2):38-40.
Subtropical Plant Science
第 2 期 邓樱,等：秋水仙素诱导兰属‘素心黄’多倍体的方法研究 ﹒39﹒
(1) 继代培养法：将旺盛分化的原球茎去顶后，接种于含有秋水仙素液体的继代培养基(花宝一号 +
6-BA 1.5mg/L)振荡培养1～5d，处理后用无菌水清洗，接种于不含秋水仙素的继代培养基中继续培养
30d，然后进行分化培养，形成再生植株。对具有多倍体表型特征的植株取其根尖进行细胞学鉴定。
(2) 侧芽萌动培养法：将旺盛生长的小苗截顶后，接种于含秋水仙素的侧芽萌动增殖培养基(花宝
一号 + NAA 0.5mg/L + 6-BA 1.5mg/L)中，处理后再将小苗转入不含秋水仙素的相同培养基中培养30d，
最后壮苗、生根，进行细胞学观察。
以上分别设对照，即不加秋水仙素进行相应培养。
1.4 多倍体鉴定方法
上午9:30～10:30取幼嫩的原球茎、再生植株生长旺盛的根尖，苏木精－铁矾压片法镜检。
2 结果与分析
2.1 倍性鉴定
以旺盛生长的未经秋水仙素处理的组培苗根尖、原球茎为材料，用苏木精－铁矾压片法观察，通
过大量具有清晰的分裂中期相的细胞统计表明，这些成苗和原球茎体细胞染色体数目是稳定的
(2n=2x=40)(图1)。这一结果表明，供试的‘素心黄’为正常的二倍体品种，可为后期的多倍体植株诱导提
供可靠的倍性证据。
2.2 多倍体诱导方法研究
2.2.1 继代培养法 研究结果（表1）表明，秋水仙素0.05%至0.001%及对照等各种处理都获得了再生植
株，但只有0.01%和0.005%浓度获得2n=80较纯合的多倍体植株（图2），其多倍体得率为4.1%～16.7%。
其中以0.005%处理3d的效果最好，多倍体得率高达16.7%。
2.2.2 侧芽萌动培养法 从表2可见，侧芽萌动法诱导多倍体的获得率较低，而获得加倍效果的秋水仙
素浓度也较前法高一个浓度梯度，即当浓度为0.05%～0.01%时处理有效；当浓度小于或等于0.005%时，
不能诱发芽体的侧芽或休眠芽体细胞大部分或完全加倍，因而无多倍体植株产生。细胞学检查表明，
该法获得了较多嵌合体，但嵌合体在试管苗形态与二倍体并无明显区别，只是在芽体的初期，基叶稍
宽，其生长后期所形成的根比正常的短且粗；苗期嵌合体生长发育稍落后于正常的二倍体植株。
表 1 继代培养法处理后原球茎的死亡率及加倍效果
倍 性 效 应 秋水仙素
浓度(%)
处理天
数(d)
接种原球
茎数(块)
30d后原球茎
死亡数(块)
原球茎死
亡率(%)
获得再生
植株数(株)
形态变异
株数(株) 2n=40 2n=80 2n=嵌合
2n=80 植株所
占比例(%)
1 60 0 0 119 0 0 0 0 0
3 62 1 2.0 156 0 0 0 0 0 CK
5 64 0 0 143 0 0 0 0 0
1 64 53 82.8 0 0 0 0 0 0
3 61 58 95.1 0 0 0 0 0 0 0.1
5 60 60 100 0 0 0 0 0 0
1 60 25 41.7 27 3 2 0 1 0
3 60 26 43.3 10 1 1 0 0 0 0.05
5 60 41 68.3 5 0 0 0 0 0
1 63 13 20.6 51 10 4 4 2 7.8
3 60 18 30.0 27 13 7 3 4 11.1 0.01
5 62 26 41.9 24 7 3 1 3 4.2
1 60 7 11.7 72 10 3 5 2 6.9
3 61 10 16.4 48 12 1 8 3 16.7 0.005
5 62 11 17.7 44 12 2 4 6 9.1
1 60 0 0 112 1 1 0 0 0
3 63 2 3.2 96 4 2 0 2 0 0.001
5 60 5 8.3 97 0 0 0 0 0
第 37 卷 ﹒40﹒
3 结 论
本实验通过继代(振荡)培养法和侧芽萌动培养法，应用不同浓度的秋水仙素对‘素心黄’进行同源多
倍体诱导，结果表明，两种方法均能获得不同数量的纯合四倍体，其优劣程度为继代(振荡)培养法优于
侧芽萌动培养法。对‘素心黄’而言，较好的多倍体诱导处理组合是：液体振荡培养，以0.005%秋水仙素
溶液处理旺盛增殖的原球茎3d，诱导率可达16.7%。
同源多倍体的鉴定方法是多倍体诱导研究的重要问题。本研究采用形态初选及根尖体细胞进行倍
性鉴定。
参考文献：
[1] 张全美,等. 园艺植物多倍体诱导研究进展[J]. 细胞生物学杂志, 2003,25(4): 223-227.
[2] 张兴翠,等. 药用百合的多倍体诱导及快速繁殖[J]. 西南农业大学学报, 2003,25(1): 14-17.
[3] 张兴翠,等. 芦荟的快速繁殖与多倍体诱导[J]. 中国中药杂志, 2001,26(8): 538-540.
[4] 王俐,等. 库拉索芦荟的多倍体诱导及其变异初报[J]. 云南植物研究, 2001,23(4): 493-496.
[5] 李涵,等. 齿瓣石斛多倍体的诱导初报[J]. 云南植物研究, 2005,27(5): 552-556.
[6] 李涵,等. 沉香虎头兰多倍体诱导及其鉴定[J]. 园艺学报, 2005,32(5): 853.
表 2 侧芽萌动培养法处理后芽体的死亡率及加倍效果
倍 性 效 应 秋水仙素
浓度(%)
处理天
数(d)
接种芽
数(株)
30d 后死亡
芽数(株)
芽死亡率
(%)
获得再生
植株数(株)
形态变异
株数(株) 2n=40 2n=80 2n=嵌合
2n=80 植株
所占比例(%)
1 62 0 0 172 0 0 0 0 0
3 60 0 0 156 0 0 0 0 0 CK
5 60 0 0 133 0 0 0 0 0
1 65 24 36.9 8 0 0 0 0 0
3 61 38 62.3 15 0 0 0 0 0 0.1
5 61 59 96.7 0 0 0 0 0 0
1 60 10 16.7 56 10 1 6 3 10.7
3 61 17 27.9 58 6 2 4 0 6.9 0.05
5 60 22 36.7 27 3 2 0 1 0
1 60 3 5.0 93 18 3 1 14 1.1
3 60 4 6.7 70 20 7 5 14 7.1 0.01
5 61 4 6.6 67 11 1 2 8 3
1 60 0 0 124 14 6 0 8 0
3 62 1 1.6 118 20 10 0 10 0 0.005
5 60 0 0 99 12 9 0 3 0
1 62 0 0 170 4 1 0 3 0
3 60 0 0 171 5 2 0 3 0 0.001
5 60 0 0 162 0 0 0 0 0
图 1 ‘素心黄’二倍体体细胞染色体(2n=40) 图 2 ‘素心黄’四倍体体细胞染色体(2n=80)