全 文 ：2 7
.
79 ( 6 )
,
2 2
.
7 7 ( 7 )
, 4 0
.
9 1 ( 8 )
, 4 2
.
3 9 ( 9 )
,
3 8
.
1 9 ( 10 )
,
7 5
.
0 2 ( 1 1 )
,
2 13
.
3 5 ( 12 )
,
63
.
7 7 ( 13 )
,
8 6
·
2 9 ( 14 )
, 3 4
·
7 5 ( 15 )
,
2 9
,
0 1 ( 1 6 )
, 4 1
·
8 0 ( 17 )
,
17
.
9 7 ( 18 )
,
2 3
.
8 8 ( 1 9 )
,
12 3
.
12 ( 2 0 )
, 15 1
.
6 1
( 2 1 )
,
1 4 9
.
0 6 ( 2 2 )
, 1 1 5
.
7 7 ( 2 3 )
,
1 6 J
.
3 0 ( 2 4 )
。 以
上各数值与文献 〔“ 〕中化合物 I的相 应值基 本一
致 。 ’ H N M R ( C D 3 O D , 4 o 0 M H z ) 特征峰 6 :
0
.
7 1 ( s
,
3 H
,
H 1 8 )
,
1
.
0 ( s
,
3 H
,
H 19 )
,
4
.
0 (d
d
,
I H
,
J = 7
.
3
,
7
.
3 H z
,
H 17 )
,
4
.
2 ( d
,
I H
,
J =
1 1
.
2 H z
,
H l l )
, 6
·
15 ( 6
,
I H
,
J = 9
.
6H z
, 比 3 ) ,
7
.
3 5 ( d
, I H
,
J二 l · g H z , 日2 1 ) , 7 . 了5 ( d d , I H , z二 2 . 4 ,
2
.
6 H
, ,
H 2 )
。 这些数值也与文献〔 7 〕中同类型质子
的化学位移值接近 。 IR ( K B r ) c m 一 ’ : 34 3 0 , 3 3 80 (子
H )
,
17 0 0 ( ) C = O )
,
16 3 5 和 1 5 3 4 ( C = C ) , 与文
献〔 7 〕相 应基因吸收值近似 。 U V ( C H 3 O H ) : 入m a x
2 9 s n m
, 而文献「“ 〕 I的相应值为入m a x 2 9 6 n m 。
比较上述测定值与文 献值 , 可确定本文化
合物 B 为阿瑞那蟾 蛛精 。
3
. 生物活性 : 样品B 10 照在豚鼠回肠纵行肌
肠肌丛上产生较强兴奋活性 。 大鼠血压测定中, B
3 0 0叹使血压升高5 . 33 k P a ( 4 om , n H g ) , 维持 4 0
m i n ; 当用 1 0 0陀时 , 升高 3 . 3 3 k P a ( 2 5 m m H g ) ,
维持 12 m i n 。 体外微量抗肿瘤筛选实验表明 , 10件 g
的 B对小鼠 P 3 8 白血病细胞生长的抑制率为52 % 。
讨 论
, , 今
实其皮肤 中含有化合物 l , 可 为资源的利用提供
依据 。 文献 〔 ’ 〕记载 蟾蛛皮 肤干粉有兴奋平滑肌 ,
升高血压和治疗恶性肿瘤等功效 。 本文报道的
则是蟾皮中单一成分的生物作用 。
2
. 因为在用 S e p 一 P a k C , 8 筒柱分离粗品
的方法中 , 须先将样品溶解于不含有机溶剂 ,
或有机溶剂 含量较少的缓冲液或水 中 , 而化合
物 I在。 . 1% T F A 中有相 当的溶解度 , 所 以本
文便以过量的稀酸液溶解 蟾皮 甲醇提取物中的
I
。 显然 , 由于 I的溶解是不够完全的 , 所 以在上
述 蟾皮的 甲醇提取物 中便可能残存少部分的 I ,
从而 影响收率 。
致谢 : 本所分析室代测所有光谱。
参 考 文 献
〔 1 工江苏新医 学院编 . 中药大辞 典 .第一版 . 上海 : 人民出版社 ,
19 7 7 : 2 7 13
一 2 7 14
〔 2 〕 H o f e r 尸 e t a l . Z了七I v C h i m A o t a 19 6 0 . 4 3 : 14 95
【3 } l、 e 11 E e t a l . I b ` d 1 9 65 : 48 : 10 9 3
: 4 ] 唐易全等 . 中国科学 ( B 辑 ) x 9 8 s ; ( 9 ) : 96 7
[ 5 } B
r o w n 尸 夕t a l . O r g M a s s S 钾 e t r o 优 [ 9 72 ; 6 : 47
[ 6 ] R
o b i e n W e t a !
.
P r o 腼 e l 材叮n R e s o ” S P e e -
t r o s e 19 8 7
吕 19 : 13 1
七7 J M ` 、 i .l w a 口d
3 0 55
c 1 J i
.
J 理m C h 口爪 S o e 19 79 : 10 1 :
[ 8 ] D i
e t i o o a r 刀 of O r g a o i e C o 。 闪 u n d s . e d l 4 .
a n d e o m u l a t i v e s u p p l o rn e n t
.
L 一) n d o n : E y 一 e
5 P o 一t i 、 w 、 , o d e , 19 6 0 : 6 7
1 . t h
a 一l d
1
. 华西大 蟾蛛系我国产品种 。 本文首次证
紫其小菇等天麻种子萌发菌分离方法的研究
中国医学科学院药用植物资源开发研究所 ( 10 0 洲 ) 徐 牛书堂 冉现珠
提要 19 79 ~ 1 9 81 年 间 , 从 天 麻种 子发芽 的原 球 茎中 ,
萌发营 养的 菌株 , 证 明在 自然 条 件下 . 天麻有性繁 殖阶段 ,
发 芽。
共 分 离到 紫其 小 菇等12 种可供 给 天 麻种子
必 须 同化 紫其 小 菇 等萌发 菌获得 营 养才能
关键词 天麻 ; 原 球 茎 ; 紫其 小 菇 ; 蜜 环 菌 ; 萌发 菌
天麻 ( ` 。 : r r o ` 。。 。 l a t心 B I · ) 种子构 造
简单 , 由胚 及种皮构成 , 无胚乳 及其它营养贮
备 。 据资 料报道 , 天麻 种子 萌发所需营养 , 可
下两丽骊蔽菇而流万雨石丽一
由周围的溶液渗入与胚细胞 中贮存的脂肪 、 多 ,
糖等物质提供 , 天麻 种胚可无菌萌发 〔 ’ J。 据 我
们试验 , 天麻 种子胚 细胞 中虽有脂肪 、 多糖存
在 , 但无 外源营养供给种子 亦不能发芽〔“ 」。 在
室 内利 用培养基播种虽证 明天麻 种子可直接吸
收培养基 营养而发芽二“ · “几但还未 见到在 自然条
件下 , 天麻 种子 能吸收 土壤及周 围环境 中的营
养而萌发的报道 。 长期 以来都认 为夫麻整 个生
长周期都靠蜜环菌 ( 且 r 川 `z l a r ` a 川 e l l e Q
F r
.
) 提供营养 「J ’ , 但近几年试验证 明 , 蜜环 菌
不但不能提供种子萌发所需的营养 , 或 刺激种
子发芽 , 反而 有明显抑制 种子 发芽的作用二“ · 5七
在此理论指 导下 , 试验成功 天麻 有性繁殖—树叶菌床法 二“ 。 但种子 是怎样利用树叶的营养
而发芽? 种子发芽的营 养来 源以及其与真菌有
什么关系 ? 研究清楚这些 问题 , 对天麻 有性 繁
殖的理论 和生产 , 是有非常重大意义的 。
方法与结果
一 、 自然条件下夭麻 种子萌发观察研究
1 9 7 8年我 们对树叶菌床 中播种的天麻 种子
进行调查 时 , 多次发现发芽原球茎 的原球柄 部
有纤细的 白色菌丝索与树 叶相连 , 明 1 6日观察到
在叶片上有 8 粒原球 茎外蒙 了一层 白色菌丝 ,
忽隐忽显 , 剥去菌丝可看到完整的原球 茎 , 以
后又多次观察到类似的现象 。 采集原球 茎作切
片观察 , 在原球柄 的细胞 中都 有菌丝存在 , 为
了排除蜜环 菌的干扰 , 将 种子 播种在无蜜环菌
林间收 集的树叶 中 , 不但可 以发芽 , 同时在原
球茎的切片 中 , 同样 有菌 丝存在 ( 图 l ) 。 采集
播 种于 蜜环菌 床 中半年 被 蜜环 菌包 围的种子切
片观察 , 种胚 内未见有菌丝 侵入 , 胚 分生细胞
也无分裂的迹象 , ( 图 2 ) 。 19 7 8年 冬进行 了以下
处理试验 : ( A ) 采集壳 斗科 ( F a g a ce ae ) 植物
树上未脱落的枯黄树叶 , 在室内用腐植土层积
保湿培 养 4 个月伴播天麻 种子 ; ( B ) 处理 八的
树叶不与土壤接触 。 保湿 伴播天森 种子 , ( C )
收 集林间地 面湿润 的同种 落叶伴播天麻种子 (对
照 ) 。 于 19 7 9年 4 月 6 日在室内砖池 播种 , 用灭
过菌 的树叶复盖 , 每 10 d取样观察 l 次 , 统 计
发 芽率 。 5月 6 日播后 1 个 月发芽结果见附表 。
附表 用腐殖土培养树叶伴播天麻种子发芽率统计
处理法 瞥嘿笋 护黔犷气 发芽原珠茎数 (个 )
A
B
C (C K )
10 17 3 1
10 1 ] 50
10 107 4 二
发芽 率
一一些止 、
0
.
46
0
2
。
24
图 1 萌发菌侵种子胚 、 分生细胞分裂 圈 2 蜜环菌包 围的种子 , 胚内未见菌丝 , 分生 细胞也未分裂
中国药学杂志 19 90 年第 2s 卷第 3 期
界后连续观察 4个月 , B 法未见 1 粒种子发芽 ,
其它处理均有不 同程度的发芽效果 。试验证 明 ,
不 与土壤接触的树叶伴播天麻种子不能发芽 ,
将这些树叶 用腐植土培养后 , 伴播种子虽发芽
率低 , 但有发芽效果 , 而从 林间地面收集的湿
润落 叶 , 未经任何处理 , 天麻种子发芽率都 较
其它处理高 。 这给我们 以很 大启示 , 天麻种子
发芽 , 是否与土壤中侵染 树 叶 上 的 非蜜环 菌
的某些真菌有关 ? 我们多次观察到的纤细 白色
菌丝索是否是供给天麻种子萌发 的外源营养源 ?
需通过菌种分离筛选 , 进一步证实 。 -
二 、 天麻种子萌发菌的分离
1
. 群体混合分 离 : 1 9 7 9 一 1 9 8 0年天麻种子
萌发菌的分 离工作 , 在陕西 省宁强 县天麻产 区
及北京我所 内的实验室 同时进行 。
分离材料 : 天麻种子发芽的原球茎 ; 在其
上发芽较多的树叶 ; 原球茎上的 白色菌丝索 。
分离方法 : 采用常规组织分 离方法 , 将原
球茎混合样品及树叶 、 菌丝索 , 用 H g C ! : 消
毒后 , 剪成 o . Z m m 的小段 , 置于 P D A 培养基
的平面培养皿中 , 在 25 ℃ 恒温下培养 。
分离结果 : 1 9 7 9年冬从 天麻产 区树叶菌床
中采集的原球茎样品带回北京实验 室 , 于 当年
n 月间分离到京 79 1 1一 01 号及 京 79 1 1一 02 号两个
菌株 。 1 9 8 0年夏季播种后采集分 离材料 , 从树
叶 _ L分离的菌株 , 为深黄色和其 它杂色 , 与我
们原观察到的白色菌丝不 同 ; 而 从原球茎上采
集的菌丝索 , 分离时都污染杂菌 , 只有从原球
茎中分离到的一些 菌株 , 较接近于 自然界观察
到的 白色菌丝 , 共分离到 10 个菌株进行初筛 ,
京陕 8 0 7 一 0 2号 、 京陕8 0 7一 0 5号等有效菌株 , 就
是 1 9 8 0年采用群体混合分离获得的 。
2
. 单体分离 : 为了能选择出发芽率高 、 原
球茎健壮 , 粗大 、 生 长速度快的优 良菌株 , 19 81
年仍采用上述分 离方法 , 选择健壮 、 肥大 、 生
长快的原球茎分 别编号 , 进行单体分 离 , 共 分
离到 9 个有妙菌株 , 其中有些菌株对天麻发芽
及原球茎生 长都有很好妙果 。 紫其小菇 ( M y c -
e ” a 0 5 巾 u ” d i e o l a LJ a o g e ) 等 优 良菌株 , 就
是在 19 81 年采用单体 分离获得 的 。
三 、 天麻种子萌发菌的初步筛选
1
. 快速筛选方法 : 将壳斗科植物的树叶装
入粗试管中 1 一 2 片 。 注入 一定量 的 P D A 培
养基 , 高压灭菌后分别接入分 离出的菌株 , 约
7 一 s d即可取出染菌树叶 , 洗去培养基 , 在菌
叶上播种天麻种子 , 然后埋入小花盆中 , 用灭
过菌的树叶复盖 , 在 25 ℃ 下培养 , 每隔 10 d 检
查一次发芽效果 。
2
. 初筛结果 : 19 8 0年 7 月 , 将当年分离的
京 陕 8 0 7一 01 等 4 个菌株 , 采用快速培养菌叶的
方法培 养出供试菌叶 , 将 当年采收的种子播在
菌叶上 , 用灭菌树叶埋于木箱中。 为了防止 P D A
培 养基 的 营 养 对 天 麻种子发芽有干扰 , 用与
P D A培 养 基 同时高压灭 菌的不接菌叶片 , 及
普通灭 菌的叶片 为对照 , 重复 2 次 , 将一次重
复带 回北京 , 另一 次重复留产 区观察 。 播 后两 ’
个月在两地同时发现在京陕 8 0 7一 0 2号菌叶上有
发芽的原球茎 (图 3 ) , 其它菌株及对照均未发
芽 。 虽然发芽率只有 1 . 8% , 但它是我们首次分
离出的第一个能供给天麻种子 萌发营养的菌株 , ` 、
有力地证明 了天麻种子发芽的营养不是来源于
蜜环菌 , 而是其它真 菌 , 对否定天麻整个生长
周期都靠蜜环 菌提供营养这一理论 , 提 出了客
观的事实依据 。
19 7 9 一 1 9 81 年 3 年间 , 共接种了7 4 8个分 离
体 , 其中有原球茎 47 8个 , 树叶 2 70 片 (用菌丝
作分 离材料未计数 ) , 共分 离到菌株 7 种 , 经初
中国药学杂志 19 90 年第2 5卷第 3 期
步 归类及汰除 了杂色 菌外 , 初筛出24 种 , 从中
筛选出紫其小菇等 12 种能供给天麻种子发 芽营
养的有效菌株 。 结果 见表 2 。 从天麻种子萌发
的原球茎中 , 分离出可供·给种子 萌发营养的真
菌 , 表明树叶落在林中地面后 , 感染了地表及
土壤中半腐树枝树叶 卜腐生的紫 其小菇等真菌 ,
天麻播种在树叶 上 , 真菌侵入种子 , 被胚细胞
消化 , 种胚获得营养而萌发 , 树叶是这些真菌
的培养基 , 是种子萌发的间接营养来 源 , 而侵
入种胚的萌发菌 , 才是天麻种子萌发的直接营
养来源 , 这也是树叶菌床法播种成功 的机理 。
表 2 天麻种子萌发菌分离结果
年份 菌株代 号 种 一 r 发芽效应 年 价 菌株代 号 种子发 芽效应
京 7们 l 一川 一 卜一…徽, …19 79 } (奋S 】了一 8 1 0 2 +京 7马飞、一` 12 - 1 (下5 1· 8 1 0 3 +京 8 0 8一 f) 1 一 } 些 1下 ,卜簇 +1 98 0 { r了只 I了一 R l n斤 十京 8 0 8 一 02 一 } C S I了一 8 、 0 6 +
京 8 0 8 一。:飞 - ( 石S 子少一 8 1 07 +
京 8 0 9一 0 2 一 ( 下S }户一 8 1 08 +
京陕 80 7一 0 1 一 C S I矛一 81 09 +
户溅 80 7一 0 2 十
京陕 8 0 7 一岭 一
京陕8 0 7 一O , 一
京陕 80 7一。 S +
京陕 8 07一 0 6 +
讨 论
从天麻种子 萌发的原球 茎中 , 共分离到 12
种有效菌株 , 证明在 自然界中提供天麻种子萌
发营养的萌发 菌 , 不是单独的 一 种菌 , 而是京
陕 8 0 7一 02号等一类真菌 , 其中除原编 G S F 一 8 1 0 4
号已诱导 出子实体 , 经 鉴定 为紫其小菇外 . 而
其它菌株的分类科属 , 有待进一步 鉴定 。
从 1 9 81 年单体分离的 9种有效菌株中 , 其中
G S F 一 8 1 05和 G S F 一 8 1 06 、 G S F 一 8 1 0 1和 G S F
一 8 1 0 3 、 G S F 一 8 1 07和 G S F 一 8 1 0 8等 3 对菌
株 , 是从同一 个原球茎中分离获得的 , 它们 菌
丝 、 菌落的形 态 , 对天麻种子的发芽率 、 原球茎
生 长的速度 、 大小 , 都有较大差异 , 说明侵入
同一个 天麻种子 胚的萌发菌可能是一 种 菌 , 也
可能侵入两种菌同时供给种子萌发营养 , 促使
种子发芽 , 但这一看法还需进一步研究得 出最
终的结论 。
参 考 文 献
川 周 钱等 . 天麻形 态学 . 第 飞版 . 北京 : 科学出版社 , 19 8丁:
l l
[ 2 ] 徐锦堂等 . 中草药 19 8 0 ; 1] : 1 2 5
【刘 沈栋侠等 . 南京药学院学报 19 7 9 . ( 1 ) : 88
「4 了 K u 、 a n 。 , 5 . J。 “ r 〔 0 1 1 一 1君 r i r l川户 了一” i : , 了一 o k刀 ` )
19 11
; 4 ( 1 ) : 1
f s ] 冉砚珠等 . 中药通报 19 58 : x 3 ( 一。 ) : 15
f 6 〕 徐锦堂等 . 药学学报 19 5 0 : 一5 : 1 00
注 : + 有发芽效果 ; 一 无发芽效果 。
. 读者园地 ·
贮 藏 红 枣 的 方 法
湖南降 回县卫校 黄 海 平
红枣含有糖分 , 若保管不当 , 极易生霉 、 变质 、
虫蛀 。 可采用下述方法贮藏红枣 : 、 将稻谷壳烧成黑灰
后放冷 , 再装入盆子里和红枣一块拌匀 , 最后一起倒
入木箱中用手压平 , 盖好箱盖 , 放通风 、 阴凉处 。 我
们用此法贮藏红枣多年 , 没有一点霉烂和虫蛀现象 。
还可将红枣晒干后 , 装入布袋 , 放入有生石灰的缸中 ,
然后用盐水瓶装入 10 m ! 氯仿 , 在瓶盖 卜插一只 6 号
注射针头 , 使氯仿能慢慢蒸发 , 最后用石灰黄泥密封
缸口 , 我们用此法存放 4 年 , 不变味 、 不变质 、 无虫
蛀 。
A B S T R A C T S O F O R I G I N A L A R T I C L E S
I s o la t i朋 , s t犷u c t u ar l id e n t i fl e a t二o n a n d
b盆。口Og 三e a l a e t i v云t i e s o f a er n o加 fa g i n e
f or m t加 sk in o f C h i n e se t o a d 五“ 了。
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T A N ( ; Y i 一 q u a n
,
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,
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,
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一 x ia n g , H A N J i a 一 x i a n
,
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G u o 一 y u a n
,
J I X i n 一 q u a n
,
Z O U G a n g ( s h a n g h a s
15 o la t e d f r o m t h e p r o t o c o r nsr o f g
e r m i n a t i o n
s e e d s o f G a s t r o d i a e l a t a i n 19 7 9 之0 1 9 8 1 . I t
h a s b e e n P r o v e d t h a t ` . e l a t a s e e d s m u s t d i -
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. 毋m u n d i e ol a , e t e o b t a i n 主n g n u t r s t室o n
f o r
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g e r m i n a t i o n u n d e r n a t u r a l e o n d盛t 应o n .
K e y w o r d s G a s 一r o d i o e l a t a , p r o t o e o r m ,
A r 川 f l l a ir a 脚 e l l e a , g e r -
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哥。 s 亡睡t 日 t e o f M a t e r 亩a M e d 蓄e a , cA a d e rn i a S s n i e a 20 0 0 3 1 )
W U G
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Z H A O E r 一 m i ( C h e n ` d u I n s t 云 -
t u r e 〔 ) f B `o ! o g y , A e a d e m i a S s n i e a )
T h e t o a d s ( B
.
b
.
a n d r e 川 J 一 ) w e r e e o l l e c -
t e d f r o m B a o x in e o u n t y o f s s e h u a n p r o v i 幻 e e ,
C h i n a
.
T h e f r e s h s k i n s w e r e e x t r a e t e d w i t h
m e t h a n o l
.
T h e m e t h a n o l e x t r a e t w a s s e P a r a -
t e d f i r s t t h r o u 风h e a r t r i d g e s o f S e P一 P a k C x a
a n d t h e n b y LI P L C s e m i一 p r e p a r a t i v e l y t o
9 i v e t h e p u r e a r e n o b u f a 又 i n e ( l ) , w h i e h w a s
i d e n t i f i e d b y m p
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, a n d U V
.
P r e l i m i n a r y b i o l o g i e a l a s s a y s s h o w e d
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r e s P o n s e— a b o u t 4 0 m m H g o f i n e r e a s e i nb l o o d p r e s s u r e w h e n s n j e e t e d i n t r a v e n o u s l y i n
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m u r 主。 e P 3 a s l e o k e m i a e e l l s b y 5 2% .
K e y , or ds
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,
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e e n 。 “ 阴 u n d f e o l a ,
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( O
r i g i n a l a r t i e l e P a g e 13 9 )
E f fe e t s o f a gr i n i n e
f u n e t i o n a l e ha n g e s
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Z H A O Z h i 一 q i n g
,
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d i e o l a 1 0 G a s t r o d i a e l a t a s e e d s
入 U J i n一 t a n g , R A N Y a n 一 z h u f l 。 s t i t u t e o f
M e d i e i n a l P l a n t 块 v e lo p m e n t , C h i n e s e 从 a d e m y
o f M e d j e a l S o i
e n c e s , B e j j j n g 20 00 9 4 )
T w e ] v e s t r a i n s
, s u e h a s M y e e ” a os m 劫n
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d矛e o l a L a n g e a n d o 亡h e r s w h i e h e a n p r o v i d e n u -
` r i t , o n f o r s e e d s ` e r m i n o t i o n , h a v 6 b e e 。
Z HU M i a o 一 z h a n g
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r t h M i l i t a r y M e d i e a l C o l le g e
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T h e e f f e e t s o f a r g i n s n e a s p i r i n o n e h a n g e s
i n w h o l e a n d r e g i o n a l d i a s t o l i c f u n e t i o n o r
t h e l e f t v e n t r i e u l a r m u s e l e d u r i n g t h e e a r l y
p h a s e o f m y o e a r d i a l i s e h e m i a w e r e o b s e r y -
e d s n 2 8 a n e s t h t s z e d o p e n 一 e h e s t d o g s
.
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s s h o w e d t h a t p l a t e l e t a g g r e g a t j o n
r a t e s a n d I e f t v e n t r i e u l a r e n d d i a s t o l i e p r e s
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s u r e w e r e m a r卜e d l y i n c r e a s e d , 一 d p / d t m a x ,
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V
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e r e S s g n i f i e a n t l y
d e e r e a s e d a f t e r m y o e a r d i a l i s e h e m i a
.
O n t h e
o t h e r h a n d
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p r o l o n g e d
,
p e r e e n t s e g m
e n t s h o r t e n i n g
, e n d
d i a s t o l i e w a l l t h i e k n e s s a n d p e r e e n t w a l l
t h i c k e n i n g i n t h e b o r d e r i s e h e m i e z o n e w e r e
a 11 d e e r e a s e d
.
C h a n g e s i n t h e a b o v e m e n t i o n e d p a r a m e -
t e r s o f t h e l e f t v e n t r i e u la r d i a s t o l i e f u n e t i o r -
a f t e r m y o e a r d i a l i s e h e m i a w e r e 陀 l i e v e d b y
i n t r a v e n o u s 立n f u s i o n o f a r g i n i n e a s p i r j n t o i , , -
h i b主t t h e f u n e t s o n o f p l a t e l e t a g g r e g a t i o n a t
18 8 中国药学杂志 19 90 年第25 卷第 3期