全 文 ：收稿日期:2009-05-27;　修订日期:2009-08-21
基金项目:国家药典委员会项目(No.YZ-173、YZ-174);
上海市科委科研计划项目(No.08DZ1970103;06DZ19737)
作者简介:王　瑞(1973-),女(汉族),辽宁本溪人 ,现任上海中医药大学
中药学院副教授 ,博士学位 ,主要从事中药药效物质基础与质量标准研究
工作.
＊通讯作者简介:王峥涛(1956-), 男(汉族),辽宁新民人 , 现任上海中医
药大学 、中国药科大学教授 ,博士研究生导师 ,主要从事中药活性成分与
质量标准研究工作.
高效液相色谱法测定独活中
二氢欧山芹醇当归酸酯的含量
王　瑞 1, 2 ,陈海云3 ,杨琪伟 1 ,黄山君1 ,王峥涛 1, 2＊
(1.上海中医药大学中药学院 中药研究所 教育部中药标准化重点实验室 ,上海　201203;
2.上海中药标准化研究中心 ,上海　201203;
3.云南民族大学化学与生物技术学院 ,云南 昆明　650031)
摘要:目的 建立独活药材与饮片中二氢欧山芹醇当归酸酯的 HPLC分析方法。方法 采用 ShiseidoC18 MG(4.6 mm ×
250mm, 5 μm)色谱柱 ,以乙腈 -水(49∶51)为流动相 ,流速 1 ml· min-1 , 检测波长 330 nm, 柱温 30℃。结果 二氢欧山
芹醇当归酸酯在 0.003 6 ～ 1.536 mg· ml-1呈良好的线性关系 , r=0.999 9,平均回收率为 99.1%(RSD=2.8%)。 22批
不同产地独活药材与饮片中二氢欧山芹醇当归酸酯的质量分数在 0.058 % ～ 0.778%, 平均值 0.178 %。结论 该方法
简单 、重复性好 ,可用于独活的质量控制。
关键词:独活;　二氢欧山芹醇当归酸酯;　高效液相色谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)03-0610-02
DeterminationofColumbianadininRadixAngelicaePubescentisbyHPLC
WANGRui1, 2 , CHENHai-yun3 , YANGQi-wei1 , HUANGShan-jun1 , WANGZheng-tao1, 2＊
(1.ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine, Shanghai201203, China;2.ShanghaiR＆DCenter
forStandardizationofTraditionalChineseMedicine, Shanghai201203, China;3.SchoolofChemistryandBi-
otechnology, YunnanNationalitiesUniversity, Kunming, 650031 , China)
Abstract:ObjectiveTodevelopaquantitativemethodfordeterminationofcolumbianadininRadixAngelicaePubescentis.
MethodsThesampleswereseparatedat30℃ onaShiseidoC18 MG(5μm, 4.6 mm×250 mm)columnelutedwithacetonitrile
-water(49∶51)asthemobilephase.Flowratewassetat1.0ml· min-1andthedetectionwavelengthwassetat330nm.Re-
sultsThecalibrationcurvewaslinearwithintherangefrom0.0036to1.536mg· ml-1(r=0.999 9)andtheaveragerecovery
was99.1 %(RSD=2.8%).22batchesofthedrugspurchasedfromdiferentareasweredeterminedandthecontentsofcolum-
bianadininRadixangelicaepubescentiswerefluctuatedfrom0.058% to0.778%.ConclusionThemethodissimple, repeat-
ableandcanbeusedforthequalitycontrolofRadixAngelicaePubescentis.
Keywords:RadixAngelicaePubescentis;　Columbianadin;　HPLC
　　独活为常用中药 , 为伞形科植物重齿毛当归 Angelicapu-
bescensMaxim.f.biserrataShanetYuan的根 , 具有祛风除湿 、通痹
止痛之功效 , 用于治疗风寒湿痹 、腰膝疼痛 、少阴伏风头痛 [ 1] 。
药理研究表明 , 独活中的香豆素类成分具有抑制血小板聚集 、抗
炎 、镇痛等作用 [ 2 , 3] 。对独活及其制剂中甲氧基欧芹素等香豆素
类成分的含量测定已有文献报道 [ 4 ～ 7] , 但尚未见对独活药材和饮
片(又称二氢欧山芹素 , Columbianadin)含量测定的相关报道。现
行《中国药典》以蛇床子素作为指标成分建立独活药材的定量分
析方法 , 但蛇床子素并非独活的特征性成分 , 缺乏专属性。
本研究选择二氢欧山芹醇当归酸酯为指标成分 ,建立了独活
药材和饮片(净片)的高效液相色谱含量测定方法 , 具有一定的
专属性 ,并测定了 22批不同产地独活药材和饮片中二氢欧山芹
醇当归酸酯的含量 ,为完善独活的质量标准提供了实验数据 , 对
保证其质量具有重要意义。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津公司 , 包括四元泵 、自动进样器 、
柱温箱 、检测器 、工作站);乙腈(色谱纯 , 德国 Merck公司);水
(纯净水);其它试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。
二氢欧山芹醇当归酸酯对照品由上海中药标准化研究中心制备 ,
经 HPLC检测纯度 >98%。
独活药材 10批 , 饮片(净片)12批 , 由上海中药标准化研
究中心吴立宏博士收集并鉴定 , 标本保存在上海中药标准化
研究中心。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 ShiseidoC
18
MG色谱柱(4.6 mm × 250 mm, 5
μm);流动相为乙腈 -水(49∶ 51);检测波长 330 nm;流速 1.0
ml· min-1;柱温 30℃;进样量 10 μl。理论板数按二氢欧山芹醇
当归酸酯计算应不低于 5 000。对照品和样品的 HPLC图见图 1。
2.2 　对照品溶液的制备 精密称取二氢欧山芹醇当归酸酯对
照品适量 ,加甲醇制成每毫升含 50 μg的溶液 , 即得。
2.3 　供试品溶液的制备 取样品粉末约 0.5 g, 精密称定 ,置具
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.3
塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 20 ml, 密塞 , 称定重量 , 超声提取 30
min,放冷 ,再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 ,滤过 ,取续
滤液 , 即得。
A-对照品　B-样品　1-二氢欧山芹醇当归酸酯
图 1　对照品及样品的 HPLC图谱
2.4　 线性关系考察 取二氢欧山芹醇当归酸酯对照品适量 ,精
密称定 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成含二氢欧山芹醇当
归酸酯 1.5 mg· ml-1对照品贮备溶液。分别精密吸取不同体积
的对照品储备溶液 , 制成不同浓度的系列溶液 , 按上述色谱条件
测定 , 进样 10 μl, 分别以对照品的浓度(X)为横坐标 , 峰面积积
分值(Y)为纵坐标 , 得回归方程为 Y=25 776 X -2.413 6, r=
0.999 9,线性范围 0.003 6 ～ 1.536 mg· ml-1。
2.5 　检测限和定量限 取对照品溶液 , 用甲醇依次稀释制成系
列浓度由高到低的溶液 , 测得二氢欧山芹醇当归酸酯的检测限
(S/N=3)为 0.06μg· ml-1 ,定量限(S/N=10)为 0.2 μg· ml-1
(RSD=2.7%)。
2.6　精密度实验 取同一供试品溶液 , 在上述色谱条件下连续进
样 6次 , 测得二氢欧山芹醇当归酸酯色谱峰面积的 RSD为
0.5%,精密度良好。
2.7　重复性实验 取同一样品 6份 , 精密称定 , 按 “ 2.3”项下操
作 , 在上述色谱条件下进样测定 , 测得二氢欧山芹醇当归酸酯色
谱峰单位峰面积 RSD为 1.4 %。
2.8　稳定性实验 取同一样品粉末约 0.5 g, 精密称定 , 按 “ 2.3”
项下操作 , 在上述色谱条件下 , 分别于 0, 1, 8, 24, 48, 72 h进样分
析 , 测得二氢欧山芹醇当归酸酯色谱峰面积的 RSD为 0.8 %,表
明样品溶液在 72h内稳定。
2.9　加样回收实验 取已知含量的独活粉末 9份 , 精密称定 ,分
别按已知含量的 50%, 100%和 150% 3个水平加入二氢欧山芹
醇当归酸酯对照品 , 按 “ 2.3”项下操作 ,在上述色谱条件下进样
测定 , 平均回收率为 99.1 %(RSD=2.8 %)。
2.10　样品测定 分别取独活样品粉末约 0.5 g, 精密称定 , 按
“ 2.3”项下操作 , 制成供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与
供试品溶液各 10μl进样分析 , 计算含量。结果见表 1。
3 　讨论
本研究建立了独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的 HPLC含量
测定法 , 并测定了 22批独活药材和饮片(净片)中二氢欧山芹醇
当归酸酯的含量 , 方法简便 ,稳定可靠 , 重复性好 ,可用于独活的
质量控制。
表 1　独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的含量测定结果
No. 商品名 产地 /收集地 质量分数(%)
1 独活　　药材 四川菘藩 0.146
2 独活　　药材 湖北恩施 0.091
3 独活　　药材 甘肃 0.092
4 独活　　药材 湖北巴东 0.285
5 独活　　药材 湖北巴东 0.778
6 独活　　药材 四川成都阿坝 0.092
7 独活　　药材 安徽 0.116
8 独活　　药材 四川 0.081
9 独活　　药材 四川 0.202
10 独活　　药材 四川 0.173
11 独活　　饮片 四川菘藩 0.156
12 独活　　饮片 湖北恩施 0.109
13 独活　　饮片 甘肃 0.110
14 独活　　饮片 四川 /亳州足珍 0.306
15 独活　　饮片 甘肃 /河南中原正信 0.097
16 独活　　饮片 四川 /哈尔滨三棵树 0.214
17 独活　　饮片 河北安国 0.058
18 独活　　饮片 湖南 0.342
19 独活　　饮片 安徽 0.081
20 独活　　饮片 四川 0.091
21 独活　　饮片 上海 0.128
22 独活　　饮片 上海 0.171
　　n=3
不同批次独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的质量分数在
0.058% ～ 0.778%, 均值 0.178 %,按均值下浮 50%计算 , 其中质
量分数在 0.089 %以上的样品占 86.4%, 为独活新质量标准的
制定提供参考。
在供试品溶液制备方法上 , 对提取溶剂(正己烷 、乙醇 、甲
醇)、提取方法(冷浸 、超声振荡 、直接回流)、提取时间(15, 30,
45, 60min)和提取溶剂量(10, 20, 30, 40倍)进行考察 , 最终确定
提取方法为 20 ml甲醇超声提取 30 min。
耐受性试验中 ,对不同色谱柱(ShiseidoC18 MG, VARIANPo-
larisC18 -A, UltimateXB-C18 , UltimateAQ-C18;5μm, 4.6mm×
250 mm)进行考察 ,结果均符合含量测定要求 ,耐受性良好。
参考文献:
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