全 文 ：调是 ＲA的典型特征之一，是与 ＲA 发病直接相关的
重要细胞因子。IFN － γ 由活化 T 细胞和自然杀伤细
胞(NK)产生，活化的 NK细胞可合成和分泌 IFN － γ;
也可通过直接刺激 CD4 + T细胞产生 IFN － γ。IFN － γ
是 Th1 型细胞因子，主要参与 T细胞介导的免疫应答。
Th1 细胞分泌 IFN － γ，通过激活抗原递呈细胞，发挥
其促炎性功能。TNF － α 由单核细胞和巨噬细胞产
生，在 ＲA 的发病中其主要作用为:1)致热原作用，激
活 B细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞、血管内皮细胞
等介导免疫反应;2)诱导软骨和成纤维细胞合成与分
泌胶原酶、前列腺素等炎性介质，介导滑膜炎性反应和
软骨破坏。故而降低 TNF － α 水平是治疗 ＲA 显效环
节之一。因此，在 ＲA的治疗中，有效降低 TNF － α 和
IFN － γ 的水平能对 ＲA 的疗效及预后起积极作用。
本研究在中医理论指导下，研究尖叶假龙胆与秦艽不
同比例配伍对 ＲA 大鼠的疗效及对血清 IFN － γ 和
TNF － α含量的影响。
本实验研究结果表明，尖叶假龙胆与秦艽不同比
例配伍可以使胶原诱导性关节炎模型大鼠的关节肿胀
体积明显降低。在模型组中大鼠血清 IFN － γ、TNF －
α含量较正常组明显升高(P ＜ 0． 01)。阳性药物组，
尖叶假龙胆与秦艽配伍各组中 IFN － γ、TNF － α 含量
较模型组明显降低(P ＜ 0． 01)，其中 2 ∶ 1 组最明显
(P ＜ 0． 01)尖叶假龙胆及秦艽配伍通过降低血清中的
IFN － γ、TNF － α含量而减轻炎症反应及调节免疫，其
具体作用机制有待于进一步深入研究。
参考文献:
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2243．
尖叶假龙胆入血成分的初步研究
高彦宇，张雪，谢建先，李永鑫，胡晓阳，马育轩，李冀*
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:研究尖叶假龙胆的入血成分。方法:建立尖叶假龙胆生药材与不同采血时间含药血浆的
UPLC图谱，通过比对图谱，确认尖叶假龙胆入血成分。结果:尖叶假龙胆中去甲基雏菊叶龙胆酮以原
型成分入血。结论:血浆中去甲基雏菊叶龙胆酮直接作用于体内，对其进行后续药理学研究，将有助于
阐述尖叶假龙胆治疗疾病的物质基础与药理作用。
关键词:尖叶假龙胆;入血成分;稳心草;去甲基雏菊叶龙胆酮
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2016)03 － 0078 － 03
基金项目:黑龙江省自然科学基金项目(No． H2015021);国家自然科学
基金项目(No． 12511516);国家自然科学基金青年基金项目
(No． 81202638)
作者简介:高彦宇(1963 －)，男，博士，副研究员，硕士研究生导师，主要
研究方向:药效物质基础。
通讯作者:李冀* (1960 －)，男，教授，博士研究生导师，主要研究方向:
方剂配伍规律研究。
收稿日期:2015 － 12 － 22
修回日期:2016 － 01 － 15
尖叶假龙胆系龙胆科假龙胆属尖叶假龙胆(Gen- tianella acuta (Michx．)Hulten)的干燥全草。民间称
其为“稳心草”。因其在民间有治疗心率失常的功效
而受到研究者们的注意。尖叶假龙胆中含有丰富的山
酮类化合物，其山酮类化合物主要有当药醇苷、去甲基
雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮等。匡海学［1］等人发现
尖叶假龙胆提取物可以治疗冠心病、缺血性心脏病引
起的心率失常。李旻辉［2］等人发现雏菊叶龙胆酮有
抗心率失常的药理作用。UPLC 法测定尖叶假龙胆中
的入血成分还未见研究。本文主要研究尖叶假龙胆中
的血中移行成分。
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中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
2016 年 5 月第 33 卷第 3 期
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1 实验材料
1． 1 实验仪器
岛津超高效液相色谱仪(Nexera X2 LC 30 － A，
Nexera X2 SIL － 30AC ，Nexera X2 SPD － M30A);
Shim － pack XＲ － ODS III 色谱柱(2． 0 mmi． d． ×
75 mm，1． 6 μm);Millipore 纯水仪;Hettich MIKＲO
220Ｒ超高速低温离心机;DＲAGON LAB MX － S 涡
旋仪。
1． 2 药品与试剂
尖叶假龙胆，购于内蒙古根河市，经黑龙江中医药
大学药用植物教研室主任樊锐峰鉴定为龙胆科尖叶假
龙胆(Gentianella acuta (Michx．)Hulten)的全草。去
甲基雏菊叶龙胆酮(上海维塔化学试剂有限公司，
CAS:2980 － 32 － 7);雏菊叶龙胆酮(上海市维塔化学
试剂有限公司，CAS:2798 － 25 － 6);当药醇苷(Huich
Bio － tech inc，CAS:23445 － 00 － 3);标准品经 HPLC
检测纯度均≥98%。乙腈，色谱级(美国 Dikama 试剂
公司);磷酸(优级纯);水(实验室 Millipore 纯水仪自
制);其余试剂为分析纯。
1． 3 动物
健康 SD大鼠 5 只，雄性，体质量(280 ± 20)g，由
黑龙江中医药大学动物实验中心提供。
2 实验方法
2． 1 尖叶假龙胆供试液的制备
取尖叶假龙胆 0． 15 g，溶于 15 ml甲醇中，超声震
荡提取 30 min。甲醇定容至 10 ml容量瓶中。取上清
液 1 ml置于 1． 5 ml离心管中，室温条件下 6000 rpm，
离心 5 min，取上清液经 0． 22 μm 有机滤器过滤。精
密称量当药醇苷，雏菊叶龙胆酮及去甲基雏菊叶龙胆
酮 1 mg，置于 10 ml 容量瓶中。对照品及样品溶液置
于 4℃冰箱保存，备 UPLC检测。进样量为 5 μl。
2． 2 空白血浆及含药血浆样品的制备
2． 2． 1 生药的提取
取 30 g 尖叶假龙胆干燥全草，加入 15 倍量 75%
乙醇，室温浸泡 1 h，后加热回流 30 min，煎出液经 16
层纱布过滤，残渣加入 10 倍量 75%乙醇，加热回流 30
min，过滤，两次的滤液合并，减压浓缩至 0． 55 g /ml。
2． 2． 2 空白血浆及含药血浆样品的制备
大鼠给药剂量为 6． 3 g /kg，取材前 1 天大鼠禁食
不禁水并更换鼠笼内垫料。大鼠给药前乙醚呼吸麻
醉，眼眶静脉窦取血 1 ml 置于肝素管中，4 ℃，3500
rpm条件下离心 10 min，取上清液设立自身空白对照。
给药后于 5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、60
min、90 min、2 h、8 h、24 h不同的采血时间眼眶静脉窦
取血 1 ml，置于肝素纳处理过的 EP 管中，采血后轻轻
摇晃 EP 管使血液充分抗凝。4℃，3500 rpm 条件下，
离心 10 min，取上清液，置于 － 20℃冰箱中保存，采血
过程中时刻注意给大鼠补充生理盐水。
2． 2． 3 血浆的处理
取空白血浆和含药血浆 300 μl，加入 3 倍量乙腈
与 30 μl磷酸溶液，涡旋 3 s，4 ℃，13000 rpm条件下离
心 10 min，取上清液，氮气吹干后加入 150 μl 乙腈溶
液复溶，并使用 0． 22 μm 有机滤器过滤，过滤后样品
备 UPLC检测。进样量为 10 μl。
2． 3 色谱条件
Shim － pack XＲ － ODSIII 色谱柱(2． 0 mmi． d． ×
75 mm，1． 6 μm);柱温:35℃;样品室温度:4℃;流速
0． 4 ml /min;190 ～ 400 nm 全波长扫描;流动相:A 为
0． 1%磷酸水，B 为乙腈，梯度洗脱:0 ～ 2 min，5% B;
2 ～ 13 min，5% B ～ 60% B;13 ～ 15 min，60% B ～
100%B。
2． 4 尖叶假龙胆及其血浆中成分分析
取尖叶假龙胆供试品溶液，标准品溶液以及不同
采血时间尖叶假龙胆含药血浆样品及对应的空白血浆
样品在相同的色谱条件下进行 UPLC分析，建立 UPLC
色谱图，分析尖叶假龙胆的入血成分。其中不同时间
点含药血浆共有图见图 1。生药材、空白血浆、含药血
浆与标准品对比图见图 2。
图 1 尖叶假龙胆不同时间点含药血浆共有峰图
图 2 含药血浆与生药材、标准品、空白血浆的对照
注:数据 1 为标准品，数据 2 为尖叶假龙胆生药，数据 3 为
不同时间点含药血浆，数据 4 为空白血浆。
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3 结果与讨论
3． 1 尖叶假龙胆血中移行成分
从图 1 中，我们可以看到尖叶假龙胆的含药血浆
中共出现了相对稳定的 9 个吸收峰。通过图二的对比
发现，生药中去甲基雏菊叶龙胆酮以原型成分入血。
而雏菊叶龙胆酮在最初吸收时并未以原型成分入血
(峰 8)，但随时间的推移，含药血浆中出现雏菊叶龙胆
酮的原型成分(峰 9)。而生药中含量较高的成分当药
醇苷并未以原型成分出现，而血浆中的 2，3 号峰含量
较高，其可能由生药中当药醇苷或其他成分代谢而来。
通过比对血浆中 2，3 号峰的紫外吸收波长图，见图 3，
图 4，发现 2 号峰最大吸收波长为 252 nm，3 号峰最大
吸收波长为 250 nm。尖叶假龙胆生药材中含有的山
酮类成分在此吸收波长均有强吸收，可以进一步验证
血浆中的 2，3 号峰是由尖叶假龙胆中山酮类成分代谢
图 3 2 号峰紫外吸收波长
图 4 3 号峰紫外吸收波长
而来。我们在药代动力学研究中还发现，3 号峰，6 号
峰(去甲基雏菊叶龙胆酮)，8 号峰在给药 5min 后就能
检出，而其中 3 号峰 24h后仍能检出，说明 3 号峰成分
是一个快速吸收，缓慢消除的成分，见图 5。
图 5 3 号峰 5 min，30 min，24 h对比图
3． 2 血液样品的选择
前期通过比较尖叶假龙胆含药血浆和含药血清中
的成分，发现同等条件下，峰 1，峰 2 仅在血浆中出现，
而血清中并无此成分，且血浆中各成分的含量均大于
血清中成分含量。故本实验采用血浆。见图 6。
图 6 血液样品的选择
3． 3 小结
已有的研究表明，尖叶假龙胆中当药醇苷，雏菊叶
龙胆酮均具有抗心率失常的药理作用。在我们的研究
中发现，去甲基雏菊叶龙胆酮已原型成分入血，且其很
快就被吸收，见图 5，初步推断其可能为尖叶假龙胆治
疗心率失常的物质基础之一。
参考文献:
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2012 － 10 － 24．
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