全 文 ：第４１卷　第７期
２０１３年７月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４１ Ｎｏ．７
Ｊｕｌ．２０１３
网络出版时间：２０１３－０６－２０　１６：１７
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１３０６２０．１６１７．０２６．ｈｔｍｌ
真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立
　［收稿日期］　２０１２－０９－２６
　［基金项目］　国家“８６３”高新技术研究与发展计划项目（２０１１ＡＡ１００２０７）
　［作者简介］　朱丹红（１９８８－），女，北京人，在读硕士，主要从事园林植物与观赏园艺研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｕｄａｎｈｏｎｇ－ｒｕｂｙ＠１６３．ｃｏｍ
　［通信作者］　张启翔（１９５６－），男，湖北黄冈人，教授，博士生导师，主要从事花卉种质资源与育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｑｘｂｊｆｕ＠１２６．ｃｏｍ
朱丹红，杨炜茹，李　媛，张启翔
（北京林业大学 园林学院，国家花卉工程技术研究中心，北京１０００８３）
［摘　要］　 【目的】初步建立真梅系梅花叶片的再生体系，为真梅系梅花良种培育及叶盘法基因转化等研究奠
定基础。【方法】以真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片为试验材料，通过正交试验对外植体处理方法以及愈伤组织诱导、分
化和生根培养基进行筛选，探讨真梅系梅花叶片再生的影响因素。【结果】选用梅花‘三轮玉蝶’１年生枝条基部的叶
片，背面向上接种并黑暗培养，有益于愈伤组织形成。在培养基１／２ＭＳ＋ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ中，叶片愈伤组织诱导率可以达到８５．０４％；愈伤组织转接在培养基１／２ＭＳ＋ＴＤＺ　１．０
ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ中，分化率可达４６．４４％；分化出的不定芽在添加６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＳ培养基上诱导生根效果较好，生根率达８８．２９％。【结论】明确了处理方法和部分
外源激素对梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织形成的影响，初步建立了梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系。
［关键词］　梅花；三轮玉蝶；叶片外植体；再生体系
［中图分类号］　Ｓ６８５．９９３．６；Ｑ９４３．１ ［文献标志码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１３）０７－０２０９－０８
Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｆｏｒ
Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｆ－ｅｘｐｌａｎｔｓ
ＺＨＵ　Ｄａｎ－ｈｏｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｒｕ，ＬＩ　Ｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｑｉ－ｘｉａｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ　ｌｅａｆ－ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｏ　ｉｍ－
ｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｄｉｓｃ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｗｅｒｅ
ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉ－
ｍａｌ　ｃａｌｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｒｏｏｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉ－
ｍｅｎｔ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ，ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ　ｂａｓｅ，ｂａｃｋ　ｕｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄａｒｋ，
ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｉｖｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　１／２ＭＳ＋ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ＋６－
ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　８５．０４％．Ｂｙ　ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ，１／２ＭＳ＋ＴＤＺ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ　ｗａｓ　４６．４４％．Ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ，１／２ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３
ｍｇ／Ｌ，ｗａｓ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｅｒ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　８８．２９％．【Ｃｏｎ－
ｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍＰ．ｍｕｍｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ
ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｆｉｎｅｄ　ｂａｓｉｃａｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｐ．ｍｕｍｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｆ－ｅｘ－
ｐｌａｎｔｓ　ｗａｓ　ｉｎｉｔｉａｌｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ；Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ；ｌｅａｆ－ｅｘｐｌａｎｔｓ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2013.07.024
　　梅花（Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ　Ｓｉｅｂ．ｅｔ　Ｚｕｃｃ．）再生体系
的建立可为梅花良种快繁提供新的途径，也是梅花
遗传转化体系建立和育种工作深入开展的重要步
骤。真梅系梅花品种占梅花品种的绝大多数，对于
梅花品种选育等工作有重要借鉴意义；但有研究认
为，真梅系梅花的诱导培养难于杏梅系和樱李梅
系［１］，目前成功的研究案例也多集中于真梅系外的
其他梅花品系［２－８］，真梅系梅花再生体系的建立一直
是组培上的难题。
对于植物转基因研究，农杆菌转化法是目前最
常用的基因转化方法，其外植体通常选用植物叶片，
具有取材不受季节限制、材料广泛、易灭菌、对母株
影响小等优点。然而，目前仅有的有关梅花再生体
系的报道多集中于三大品系梅花的茎段离体繁
殖［１－４，９－１１］，以及真梅系梅花品种利用胚培养［１２－１５］获
得再生植株等方面，通过叶片再生出不定芽并获得
完整植株的报道也仅见于樱李梅系的‘美人’梅［６－８］，
但至今还未有真梅系梅花叶片离体再生获得组培苗
的成功先例。
为此，本研究选取真梅系梅花品种‘三轮玉蝶’
（Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｅｄｉｅ’）的叶片进行愈伤
组织诱导，摸索真梅系梅花叶片的再生途径，旨在为
真梅系梅花良种培育及通过叶盘法开展基因转化方
面的研究奠定基础。
１　材料与方法
１．１　 材　料
试验选取真梅系梅花‘三轮玉蝶’当年生新鲜叶
片，流水冲洗６０ｍｉｎ，在超净工作台上进行表面灭
菌，以体积分数７５％的乙醇浸泡３０ｓ，无菌水冲洗３
遍；再用含有微量吐温的１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２ 溶液消毒３～
５ｍｉｎ，无菌水冲洗３遍。剪切叶片成０．５ｃｍ见方
并确保每个剪切的小叶片有叶片中脉。
１．２　 叶片愈伤组织诱导培养条件的筛选
选取真梅系梅花‘三轮玉蝶’当年生枝条尖端嫩
叶和基部成熟度较高的叶片进行试验，消毒切割后
将叶片正面向上或背面向上接入培养基中，并分别
放置在光下或黑暗中进行愈伤组织诱导培养，采用
Ｌ８（２７）正交设计，进行４因子２水平试验，研究叶片
成熟情况（枝条尖端或基部叶片）、叶片接种方式（背
面向上或正面向上）、是否黑暗处理以及２种培养基
（Ｙ１：１／２ＭＳ＋ＴＤＺ　２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．７ｍｇ／Ｌ＋
ＩＢＡ　１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，Ｙ９：１／２ＭＳ＋ＴＤＺ
１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．２ｍｇ／Ｌ）对叶片愈伤组织形成的影响，３０ｄ后统
计愈伤组织诱导率。
１．３　叶片愈伤组织诱导培养
根据前人研究结果，选用１／２ＭＳ培养基作为
基础培养基。综合考虑４种激素 ＴＤＺ、６－ＢＡ、ＩＢＡ
和 ＮＡＡ 的交互作用，各设 ３ 种质量浓度进行
Ｌ９（３４）正交试验。根据叶片愈伤组织诱导培养条件
的筛选结果，分别进行梅花叶片愈伤组织培养，选择
当年生枝条成熟度较好的叶片消毒切割处理后，背
面向上接入培养基中，每处理２０瓶，每瓶７～１５个
剪切的叶片，放置于黑暗条件下进行愈伤组织诱导
培养。所用培养基均添加蔗糖３０ｇ／Ｌ、琼脂６～７
ｇ／Ｌ，ｐＨ值调至５．８～６．０。３５ｄ后转移至光下，统
计愈伤组织诱导率并观察愈伤组织的生长状况。
１．４　叶片愈伤组织分化培养基的筛选
将暗培养后的‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织置于光
下培养１周后，将愈伤组织接入分化培养基中进行
培养，分化培养基选择１／２ＭＳ培养基作为基础培
养基，附加３种不同质量浓度的ＴＤＺ、６－ＢＡ、ＩＢＡ和
ＮＡＡ，采用Ｌ９（３４）正交试验，进行愈伤组织分化培
养试验，每处理７瓶，每瓶３～６个愈伤组织团。观
察分化情况，１５ｄ后统计愈伤组织分化率。
１．５　不定芽生根培养基的筛选
待分化出的‘三轮玉蝶’不定芽生长超过１ｃｍ
后，转接进行生根培养试验。生根培养基选择１／２
ＭＳ培养基作为基础培养基，附加３种不同质量浓
度的６－ＢＡ、ＩＢＡ和ＮＡＡ，采用Ｌ９（３４）正交试验，进
行生根培养，观察生根情况，１６ｄ后统计生根率。
１．６　数据的统计与分析
愈伤组织诱导率＝（分化出较好愈伤组织的叶
片数／接种总叶片数）×１００％；
愈伤组织分化率＝（分化出不定芽的愈伤组织
数目／愈伤组织总数）×１００％；
生根率＝（生根的不定芽数／不定芽总数）×
１００％。
本试验数据用Ｅｘｃｅｌ　２００７进行整理，用ＳＰＳＳ
１９．０进行多因素方差分析。
２　结果与分析
２．１　培养条件对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导的
影响
　　前人研究发现，叶中脉部位的愈伤组织形成较
多［５］，因此本试验中也确保切割的每一小片叶都有
中脉。并且本试验还发现，叶片靠近叶柄部分的愈
０１２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４１卷
伤组织形成更快更多，更易于愈伤组织的诱导。真
梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导培养条件的
正交试验结果见表１。
表１　培养条件对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｆ－ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
编号
Ｃｏｄｅ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
叶片位置
Ｌｅａｖｅｓ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ
叶片接种方式
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ
黑暗处理
Ｌｉｇｈｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
诱导率／％
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
１ Ｙ９（１）
枝条尖端叶片（１）
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ　ｔｏｐ
背面朝上（１）
Ｌｅａｖｅｓ’ｂａｃｋ　ｕｐ
黑暗（１）
Ｄａｒｋ ８４．３６
２ Ｙ９
枝条尖端叶片
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ　ｔｏｐ
背面朝上
Ｌｅａｖｅｓ’ｂａｃｋ　ｕｐ
光照（２）
Ｌｉｇｈｔ ７．０６
３ Ｙ９
枝条基部叶片（２）
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ
正面朝上（２）
Ｌｅａｖｅｓ’ｆａｃｅ　ｕｐ
黑暗
Ｄａｒｋ ８３．３４
４ Ｙ９
枝条基部叶片
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ
正面朝上
Ｌｅａｖｅｓ’ｆａｃｅ　ｕｐ
光照
Ｌｉｇｈｔ ２３．２５
５ Ｙ１（２）
枝条尖端叶片
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ　ｔｏｐ
正面朝上
Ｌｅａｖｅｓ’ｆａｃｅ　ｕｐ
黑暗
Ｄａｒｋ ３８．４６
６ Ｙ１
枝条尖端叶片
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ　ｔｏｐ
正面朝上
Ｌｅａｖｅｓ’ｆａｃｅ　ｕｐ
光照
Ｌｉｇｈｔ ５．４１
７ Ｙ１
枝条基部叶片
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ
背面朝上
Ｌｅａｖｅｓ’ｂａｃｋ　ｕｐ
黑暗
Ｄａｒｋ ６４．５７
８ Ｙ１
枝条基部叶片
Ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｎｎｕａｌ　ｔｗｉｇ
背面朝上
Ｌｅａｖｅｓ’ｂａｃｋ　ｕｐ
光照
Ｌｉｇｈｔ ２．５７
Ｋ１ ４９．５０　 ３３．８２　 ３９．６４　 ６７．６８
Ｋ２ ２７．７５　 ４３．４３　 ３７．６２　 ９．５７
　　注：括号内的数字为各因素的水平代码，下表同；Ｋ１、Ｋ２为对应因素同一水平下所考察指标的均值，表２、表５的Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３与此相同。
Ｎｏｔｅ：Ｆｉｇｕｒｅｓ　ｉｎ　ｂｒａｃｋｅｔｓ　ａｒｅ　ｌｅｖｅｌ　ｃｏｄｅｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｆａｃｔｏｒ，ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｌｏｗ；Ｋ１，Ｋ２，ａｒｅ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｅｖｅｌ’ｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓ，Ｋ１，Ｋ２，Ｋ３ａｒｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｉｎ　ｔａｂｌｅ　２ａｎｄ　ｔａｂｌｅ　５．
　　根据对试验中各个因素同一水平平均值的分析
（表１）可知，叶片外植体应选用枝条基部叶片并采
用背面向上的接种方法来诱导愈伤组织，外植体经
过黑暗处理诱导愈伤组织的效果较光照条件下好，
培养基 Ｙ９的愈伤组织平均诱导率也高于培养基
Ｙ１的平均诱导率。对叶片愈伤组织诱导培养条件
的正交试验结果（表１）进行方差分析，可知黑暗处
理对叶片愈伤组织的诱导有极显著促进作用（Ｆ＝
３９．９１０　２，Ｐ＜０．０１），培养基的选择对试验结果有
一定的影响（Ｆ＝５．５９１　１，Ｐ＜０．１），因此，将在后续
试验中进一步研究培养基激素成分对愈伤组织诱导
率的影响。方差分析中对各影响因素间的交互作用
进行了分析，结果显示，叶片位置及其接种方式对叶
片愈伤组织的诱导有一定的交互影响（Ｆ＝５．５９１　１，
Ｐ＜０．１）。根据本试验结果和预试验结果，认为选
取１年生枝条基部叶片，并以背面向上的方式接种，
在Ｙ９培养基上进行暗培养时，愈伤组织的诱导率
较高。
２．２　‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导培养基的筛选
对真梅系梅花品种‘三轮玉蝶’叶片进行愈伤组
织诱导培养并统计愈伤组织诱导率，结果见表２。
表２　‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导培养基筛选的正交试验结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｖｅｓ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
编号
Ｃｏｄｅ ＴＤＺ
／（ｍｇ·Ｌ－１） ６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
诱导率／％
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
１　 ２．０（１） ０．７（１） １．０（１） ０．２（１） ２９．５１
２　 ２．０　 ０．５（２） ０．５（２） ０．１（２） ８５．０４
３　 ２．０　 ０．２（３） ０．２（３） ０．０（３） ４９．０７
４　 ０．５（２） ０．７　 ０．５　 ０．０　 １４．８１
５　 ０．５　 ０．５　 ０．２　 ０．２　 １０．５５
６　 ０．５　 ０．２　 １．０　 ０．１　 ３０．６１
７　 １．０（３） ０．７　 ０．２　 ０．１　 ２６．９２
８　 １．０　 ０．５　 １．０　 ０．０　 １３．０４
９　 １．０　 ０．２　 ０．５　 ０．２　 ２３．０８
Ｋ１ ５４．５４　 ２３．７５　 ２４．３９　 ２１．０５
Ｋ２ １８．６６　 ３６．２１　 ４０．９８　 ４７．５２
Ｋ３ ２１．０１　 ３４．２５　 ２８．８５　 ２５．６４
１１２第７期 朱丹红，等：真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立
　　如图１所示，通过暗培养得到的叶片愈伤组织
多数呈球状堆积，以透明白色至乳黄色为主，或有微
绿色，个别叶片愈伤组织呈红至紫红色。
图１　梅花‘三轮玉蝶’叶片切口产生的愈伤组织
Ｆｉｇ．１　Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍＰ．ｍｕｍｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｖｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
　　由表２正交试验结果可知，‘三轮玉蝶’叶片愈
伤组织诱导培养中附加的ＴＤＺ、６－ＢＡ、ＩＢＡ和ＮＡＡ
的质量浓度分别应为２．０，０．５，０．５，０．１ｍｇ／Ｌ。对
正交试验结果进行方差分析，可知培养基中的ＴＤＺ
质量浓度对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导率有极显
著影响（Ｆ＝６．７８５　７，Ｐ＜０．０１）；并且发现，添加适
量ＴＤＺ所诱导产生的愈伤组织在后续的分化中表
现更好。６－ＢＡ与ＩＢＡ之间的交互作用对‘三轮玉
蝶’叶片愈伤组织诱导率也有极显著影响（Ｆ＝
５．０７８　６，Ｐ＜０．０１），根据表２和表３均可得出，
６－ＢＡ和ＩＢＡ的质量浓度均宜选用０．５ｍｇ／Ｌ。
　　根据方差分析结果还可知，ＮＡＡ质量浓度的
改变对叶片愈伤组织诱导率有显著影响（Ｆ＝
３．３７１　５，Ｐ＜０．０５），６－ＢＡ与ＮＡＡ之间的交互作用
（Ｆ＝４．０１３　６，Ｐ＜０．０５）、ＩＢＡ与 ＮＡＡ之间的交互
作用（Ｆ＝３．７７１　２，Ｐ＜０．０５）对愈伤组织诱导率也
有显著影响。根据表２和表４均可得出，６－ＢＡ、
ＮＡＡ、ＩＢＡ分别宜选择０．５，０．１和０．５ｍｇ／Ｌ。
表３　６－ＢＡ与ＩＢＡ的交互作用对‘三轮玉蝶’叶片
愈伤组织诱导率的影响
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　６－ＢＡ　ａｎｄ　ＩＢＡ　ｆｏｒ
ｔｈｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｖｅｓ’ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ ％
６－ＢＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
１．０　 ０．５　 ０．２
０．７　 ２９．５１　 １４．８１　 ２６．９２
０．５　 １３．０４　 ８５．０４　 １０．５５
０．２　 ３０．６１　 ２３．０８　 ４９．０７
表４　ＮＡＡ与６－ＢＡ、ＩＢＡ的交互作用对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织诱导率的影响
Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＮＡＡ　ａｎｄ　６－ＢＡ　ｏｒ　ＩＢＡ　ｆｏｒ　ｔｈｅ
‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｖｅｓ’ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ ％
ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
１．０　 ０．５　 ０．２
６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
０．７　 ０．５　 ０．２
０．２　 ２９．５１　 ２３．０８　 １０．５５　 ２９．５１　 １０．５５　 ２３．０８
０．１　 ３０．６１　 ８５．０４　 ２６．９２　 ２６．９２　 ８５．０４　 ３０．６１
０．０　 １３．０４　 １４．８１　 ４９．０７　 １４．８１　 １３．０４　 ４９．０７
　　综合以上研究结果可知，在本试验所选择的激
素及其质量浓度中，对于‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织
诱导表现较佳的培养基为 １／２ ＭＳ＋ＴＤＺ　２．０
ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．１ｍｇ／Ｌ，愈伤组织诱导率可以达到８５．０４％。
２．３　‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化培养基的筛选
将暗培养的‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织置光下培
养１周后，愈伤组织由原来的黄白色变为绿色，原有
个别呈现红色的愈伤组织逐渐变褐直至死亡。对愈
伤组织进行分化试验，结果（图２）发现，表面紧致、
近球形、有明显亮绿色生长点甚至整体呈现绿色的
愈伤组织分化效果较好；培养初期，愈伤组织表面绿
色生长点出现芽状分化后，逐渐有簇状不定芽出现，
不定芽持续生长，有个别黄化死亡；将生长良好且高
度超过１ｃｍ的不定芽连同愈伤组织转接出来，以进
行下一步生根培养。
２１２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４１卷
图２　‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织的分化表现
Ａ．培养初期芽状分化；Ｂ．簇状不定芽分化；Ｃ．不定芽生长超过１ｃｍ
Ｆｉｇ．２　 Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｆ　ｃａｌｕｓ
Ａ．Ｓｍａｌ　ｂｕｄｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｂ．Ｃｌｕｓｔｅｒｓ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ；Ｃ．Ｓｈｏｏｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　１ｃｍ
　　真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化培养 筛选的正交试验结果见表５。
表５　‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化培养基筛选的正交试验结果
Ｔａｂｌｅ　５　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｖｅｓ　ｃａｌｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
编号
Ｃｏｄｅ
ＴＤＺ／（ｍｇ·Ｌ－１） ６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
分化率／％
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
１　 ２．０（１） １．０（１） １．０（１） ０．２（１） １５．１６
２　 ２．０　 ０．５（２） ０．５（２） ０．１（２） ３６．２４
３　 ２．０　 ０．０（３） ０．０（３） ０．５（３） ４．３７
４　 ０．０（２） １．０　 ０．５　 ０．５　 ４０．５９
５　 ０．０　 ０．５　 ０．０　 ０．２　 １２．１７
６　 ０．０　 ０．０　 １．０　 ０．１　 ９．０７
７　 １．０（３） １．０　 ０．０　 ０．１　 １１．２３
８　 １．０　 ０．５　 １．０　 ０．５　 ４３．１８
９　 １．０　 ０．０　 ０．５　 ０．２　 ４６．４４
Ｋ１ １８．５９　 ２２．３３　 ２２．４７　 ２４．５９
Ｋ２ ２０．６１　 ３０．５３　 ４１．０９　 １８．８５
Ｋ３ ３３．６２　 １９．９６　 ９．２６　 ２９．３８
　　由表５试验结果可知，‘三轮玉蝶’叶片愈伤组
织分化培养基中附加的 ＴＤＺ、６－ＢＡ、ＩＢＡ 和 ＮＡＡ
的质量浓度分别应选择１．０，０．５，０．５，０．５ｍｇ／Ｌ。
对正交试验结果进行方差分析发现，培养基中的
ＩＢＡ质量浓度对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化率有
显著影响（Ｆ＝４．３９３　１，Ｐ＜０．０５），培养基中６－ＢＡ
与ＮＡＡ的交互作用对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分
化率也有显著的影响（Ｆ＝２．７６７　７，Ｐ＜０．０５）。
表５还表明，６－ＢＡ 和 ＮＡＡ 均应该选取０．５
ｍｇ／Ｌ，但方差分析结果显示，二者的交互作用也应
受到重视。由二者的交互作用对愈伤组织分化率的
影响结果（表６）可知，６－ＢＡ和 ＮＡＡ分别应选择０
和０．２ｍｇ／Ｌ。
表６　ＮＡＡ与６－ＢＡ交互作用对‘三轮玉蝶’叶片愈伤
组织分化率的影响
Ｔａｂｌｅ　６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＮＡＡ　ａｎｄ　６－ＢＡ　ｆｏｒ
ｔｈｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ｌｅａｖｅｓ　ｃａｌｕｓ’ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ ％
ＮＡＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
１．０　 ０．５　 ０．０
０．２　 １５．１６　 １２．１７　 ４６．４４
０．１　 １１．２３　 ３６．２４　 ９．０７
０．５　 ４０．５９　 ４３．１８　 ４．３７
　　ＴＤＺ与６－ＢＡ的交互作用（Ｆ＝２．４３５　４，Ｐ＜
０．１）、ＴＤＺ与 ＮＡＡ 间的交互作用（Ｆ＝２．４６０　８，
Ｐ＜０．１）对‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化率也有影
响，但均未达到显著水平。
３１２第７期 朱丹红，等：真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立
综上可知，以本试验选择的激素及其质量浓度
水平，较适合‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化的培养
基应为 １／２ ＭＳ＋ＴＤＺ　１．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，分化率可达到４６．４４％。
２．４　‘三轮玉蝶’不定芽生根培养基的筛选
待‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织分化出的不定芽生
长超过１ｃｍ后，移入生根培养基中进行培养。若不
添加生长调节激素，在１／２ＭＳ培养基中，不定芽生
长缓慢且稀疏；但在添加不同质量浓度各种激素的
培养基（表７）中，根的生长有不同程度改善，培养７
ｄ后根开始生长；１６ｄ后，表现最佳的一组生根率达
到８８．２９％，平均生根数达到６根，根长约１ｃｍ且
粗壮（图３）。
表７　‘三轮玉蝶’不定芽生根培养基筛选的正交试验结果
Ｔａｂｌｅ　７　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
编号
Ｃｏｄｅ
６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
生根率／％
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
平均根数
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ
平均根长／ｍｍ
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｌｅｎｇｔｈ
１　 ０．７（１） １．０（１） ０．１（１） ７９．１５　 ４．９１　 ９
２　 ０．５（２） ０．５（２） ０．３（２） ８８．２９　 ６．１７　 １０
３　 ０．０（３） ０．２（３） ０．０（３） ６．９４　 ０．５１　 ２
４　 ０．７　 ０．５　 ０．０　 ４６．６２　 ２．７４　 ４
５　 ０．５　 ０．２　 ０．１　 １３．１３　 ０．３３　 ３
６　 ０．０　 １．０　 ０．３　 ４３．５７　 ２．０４　 ５
７　 ０．７　 ０．２　 ０．３　 ２３．１７　 １．８６　 ２
８　 ０．５　 １．０　 ０．０　 ７８．０８　 ５．４１　 ７
９　 ０．０　 ０．５　 ０．１　 ６４．３４　 ３．８９　 ７
Ｋ１ ４９．６５　 ６６．９３　 ５２．２１
Ｋ２ ５９．８３　 ６６．４２　 ５１．６８
Ｋ３ ３８．２８　 １４．４１　 ４３．８８
Ｋ′１ ３．１７０　０　 ４．１２０　０　 ３．０４３　３
Ｋ′２ ３．９７０　０　 ４．２６６　７　 ３．３５６　７
Ｋ′３ ２．１４６　７　 ０．９００　０　 ２．８８６　７
　 注：Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３为各因素同一水平下的平均生根率，Ｋ′１、Ｋ′２、Ｋ′３为各因素同一水平下的平均生根数。
Ｎｏｔｅ：Ｋ１，Ｋ２，Ｋ３ａｒｅ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｅｖｅｌ　ｆｏｒ　ｅａｃｈ　ｆａｃｔｏｒｓ，Ｋ′１，Ｋ′２，Ｋ′３ａｒｅ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ
ｌｅｖｅｌ　ｆｏｒ　ｅａｃｈ　ｆａｃｔｏｒｓ．
图３　‘三轮玉蝶’不定芽的生根表现
Ａ．培养１６ｄ；Ｂ．培养２７ｄ；Ｃ．培养３５ｄ；Ｄ．１６ｄ后不定芽的生根状况
Ｆｉｇ．３　Ｇｒｏｗｔｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｔａｋｉｎｇ　ｒｏｏｔｓ
Ａ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　１６ｄ；Ｂ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　２７ｄ；Ｃ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　３５ｄ；
Ｄ．Ｒｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　１６ｄ
　　由表７的正交试验结果可知，在以平均生根率
和平均生根数为评价指标时，６－ＢＡ 应选择０．５
ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ应选择１．０或０．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ应选择
０．１或０．３ｍｇ／Ｌ。对正交试验结果进行方差分析，
结果（表８）显示，培养基中６－ＢＡ与ＮＡＡ的交互作
用对‘三轮玉蝶’不定芽生根率和生根数均有显著影
响。根据表９对６－ＢＡ和ＮＡＡ交互作用的分析和
表７的试验结果，当６－ＢＡ选择０．５ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ选
择０．３ｍｇ／Ｌ时，不定芽生根数和生根率均达到最
高值。培养基中６－ＢＡ质量浓度的改变以及６－ＢＡ
４１２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４１卷
与ＩＢＡ之间的交互作用对生根数有一定影响，但对 生根率无明显影响。
表８　‘三轮玉蝶’不定芽生根培养基筛选试验的方差分析
Ｔａｂｌｅ　８　Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
数据来源
Ｒｅｓｕｌｔ　ｄａｔａ　ｓｏｕｒｃｅｓ
方差来源
Ｖａｒｉａｎｃｅ　ｓｏｕｒｃｅｓ
６－ＢＡ　 ＩＢＡ　 ＮＡＡ　 ６－ＢＡ×ＩＢＡ　 ６－ＢＡ×ＮＡＡ　 ＩＢＡ×ＮＡＡ
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
Ｆ　 ５．３４７　３　 ４１．８９３　２＊ １．０００　０　 ４．３３６　１　 ２４．７８２　７＊ ６．５０９　８
平均根数
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ
Ｆ　 １４．５８５　１⊙ ６３．２２１　６＊ １．０００　０　 １３．２３６　５⊙ ４４．３４７　３＊ ２０．０２９　０＊
　　注：Ｆ０．０５（２，２）＝１９，Ｆ０．１（２，２）＝９；Ｆ０．０５（４，２）＝１９．２，Ｆ０．１（４，２）＝９．２４。＊表示在α＝０．０５水平有显著影响；⊙表示在α＝０．１水平有一定影响。
Ｎｏｔｅ：Ｆ０．０５（２，２）＝１９，Ｆ０．１（２，２）＝９；Ｆ０．０５（４，２）＝１９．２，Ｆ０．１（４，２）＝９．２４．＊ｄｅｎｏｔｅｓ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆα＝０．０５；⊙ｄｅｎｏｔｅｓ　ｔｈｅ　ｌｅｓｓ　ｓｉｇｎｉｆｉ－
ｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆα＝０．１．
表９　ＮＡＡ与６－ＢＡ、ＩＢＡ的交互作用对‘三轮玉蝶’不定芽生根的影响
Ｔａｂｌｅ　９　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＮＡＡ　ａｎｄ　６－ＢＡ　ｏｒ　ＩＢＡ　ｆｏｒ　ｔｈｅ‘Ｓａｎｌｕｎ　Ｙｕｄｉｅ’ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ
ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
６－ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
０．７　 ０．５　 ０．０
ＩＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）
１．０　 ０．５　 ０．２
０．１　 ４．９１　 ０．３３　 ３．８９　 ４．９１　 ３．８９　 ０．３３
０．３　 １．８６　 ６．１７　 ２．０４　 ２．０４　 ６．１７　 １．８６
０．０　 ２．７４　 ５．４１　 ０．５１　 ５．４１　 ２．７４　 ０．５１
　　由表８还可以看出，培养基中ＩＢＡ质量浓度的
改变对‘三轮玉蝶’不定芽生根率和生根数均有显著
影响。由表７可知，ＩＢＡ质量浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时
生根率最高，但与０．５ｍｇ／Ｌ时的生根率相差不大；
ＩＢＡ质量浓度为０．５ｍｇ／Ｌ时生根数最多，但与１．０
ｍｇ／Ｌ时的生根数相差不大。
由表８可知，培养基中ＩＢＡ与ＮＡＡ的交互作
用虽对‘三轮玉蝶’不定芽生根率无明显影响，但却
对生根数有显著影响。根据表９中ＩＢＡ与ＮＡＡ交
互作用的分析结果可知，当ＩＢＡ 质量浓度为０．５
ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ 质量浓度为０．３ｍｇ／Ｌ时，生根数最
多。
　　综合考虑以上各种因素，在本试验所选择的激
素及其质量浓度中，最适合‘三轮玉蝶’不定芽生根
的培养基应为１／２ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．３ｍｇ／Ｌ，生根率为８８．２９％。
３　结论与讨论
对于梅花成熟叶片的组织培养，仅见樱李梅系
的‘美人’梅有获得完整植株的报道［１，６］，关于真梅
系梅花叶片离体再生的研究较少，并且还没有成功
获得组培苗的先例。本研究从梅花叶片取材处理着
手，获得真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织，并成
功诱导叶片愈伤组织分化、生根。
本研究结果显示，真梅系梅花叶片应取材１年
生枝条基部的叶片，并且于黑暗条件下培养愈伤组
织为宜。多次试验分析表明，叶片背面朝上放于培
养基上诱导愈伤组织时的诱导效果更佳。这与前人
研究结果［１］相悖，其原因可能是由于取材来源不同
所致，前人试验取材于‘铁骨红’、‘美人’梅试管苗，
本研究取材于‘三轮玉蝶’室外实生苗。梅花品系间
的基因型差异可能导致不同品种内源激素含量的不
同，取材苗木生长状态各异可能导致外植体所处的
分化程度、生理状态不一。
本研究通过正交试验，研究了真梅系梅花‘三轮
玉蝶’叶片愈伤组织的诱导培养条件，就 ＴＤＺ、６－
ＢＡ、ＩＢＡ和ＮＡＡ这４种激素各自不同的质量浓度
而言，ＴＤＺ质量浓度的改变对‘三轮玉蝶’叶片愈伤
组织的诱导效果有极显著影响，并且对于后续愈伤
组织的分化也产生了良好的促进作用。关于 ＴＤＺ
对于梅花愈伤组织形成和分化的显著作用，前人也
曾得到类似结论［１，１２］。在本研究中，‘三轮玉蝶’叶
片愈伤组织虽能够成功分化出不定芽，但是最佳分
化率仅有４６．４４％，因此其分化条件还有待进一步
研究和优化。固然，外源植物生长激素的介入对愈
伤组织的分化具有重要影响，但是由于基因型和内
源激素含量的差异，影响愈伤组织生长状况的培养
时间和条件控制也是影响分化的重要因素，如何找
到愈伤组织分化的关键时期并加入适量的外源植物
生长激素，将是解决梅花叶片愈伤组织分化难题的
关键。此外，基因型差异对形态发生也有重要影响
作用，真梅系梅花其他品系的再生还有待进一步研
５１２第７期 朱丹红，等：真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立
究。激素ＩＢＡ在影响‘三轮玉蝶’愈伤组织分化、不
定芽生根的过程中具有重要的作用，关于其对不定
芽生根的重要影响前人也有相似的结论［１２］，但对于
ＩＢＡ不同质量浓度的具体影响以及ＩＢＡ与‘三轮玉
蝶’内源激素的关系，仍有待更进一步的研究。
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Ｎｉｎｇ　Ｇ　Ｇ，ＬüＨ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｖｉａ　ｅｍｂｒｙｏ　ｇｅｎｅｓｉｓ
ｆｒｏｍ　ｉｍｍａｔｕｒｅ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ　ｏｆ　Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉ－
ｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｓｉｎｉｃａ，２０１０，３７（１）：１１４－１２０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
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ｌｉｍｉｌａｒｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｕｎｕｓ　ｍｕｍｅ
［Ｄ］．Ｗｕｈａｎ：Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００９．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
６１２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４１卷