全 文 ：收稿日期:2009-01-19基金项目:广东省中医药局建设中医药强省科研课题(1060035);广东省科技计划项目(2007B031407002)作者简介:赖珊(1977-),女 ,主管药师 ,主要从事药品质量标准研究;Tel:020-85819270, E-mail:laishan 77@163.com。＊通讯作者:欧国灯 , Tel:020-81870106, E-mail:ouguodeng@qq.com。
毛冬青注射液 HPLC指纹图谱研究
赖　珊 ,杨立伟 ,欧国灯＊ ,李泳雪
(广东省药品检验所 ,广东 广州 510180)
　　摘要　目的:应用 HPLC法建立毛冬青注射液的指纹图谱。方法:采用 ODS-2 HypersilC
18
(4.6mm×200 mm, 5
μm)色谱柱 ,以乙腈和 0.05%磷酸为流动相 , 梯度洗脱 ,流速 1 mL/min,柱温 30℃, 检测波长为 325 nm。结果:建立
了毛冬青注射液的指纹图谱 ,并检测了 8批毛冬青注射液样品;采用 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A
版)”标定了 13个共有峰 , 相似度较高 ,各色谱峰分离较好 , 达到中药注射剂指纹图谱研究的技术要求。结论:本方
法准确可靠 , 为更好地控制毛冬青注射液的内在质量提供了科学依据。
关键词　毛冬青注射液;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)07-1132-03
StudyonFingerprintofMaodongqingInjectionbyHPLC
LAIShan, YANGLi-wei, OUGuo-deng, LIYong-xue
(GuangdongInstituteforDrugControl, Guangzhou510180, China)
　　Abstract　Objective:ToestablishthefingerprintofMaodongqinginjectionbyHPLC.Methods:ThecolumnofODS-2 Hypersil
C
18
(4.6mm×200mm, 5 μm)wasused.Themobilephaseconsistedofacetonitrile-0.05% phosphoricacidwithgradientelution.
Theflowratewas1mL/min, thecolumntemperaturewas30℃, andthedetectionwavelengthwas325nm.Results:Thefingerprintof
Maodongqinginjectionwasestablished, and8samplesofdiferentbatchesofMaodongqinginjectionweredetected.Thirteenpeaksin
thechromatogram weremarkedby“SimilarityEvaluationSystem forChromatographicFingerprintsofTraditionalChineseMedicine
(Version2004 A)”.Therewasahighsimilarityandeachchromatographicpeakwasobtainedwithgoodseparationandcorrelationac-
cordingtothetechnicalrequirementsofthefingerprintsofChinesetraditionalmedicine.Conclusion:Thismethodisaccurate, reliable
andprovidesascientificbasisforcontrolingthequalityofMaodongqinginjection.
Keywords　Maodongqinginjection;HPLC;Fingerprint
　　毛冬青为冬青科冬青属植物毛冬青 (Ilexpu-
bescensHook.etAm)的根 ,主产于广东 、广西 、安徽 、
福建等地 ,具有活血通脉 、消肿止痛 、清热解毒之功
效 。临床上常用于冠心病 、心绞痛和脉管炎等的治
疗 〔1〕。毛冬青注射液为毛冬青经加工制成的灭菌
水溶液 ,为心血管疾病用药 ,有扩张血管及抗菌消炎
的作用 。由于缺乏合理 、完善的质量控制指标及方
法 ,现在市售的大多数毛冬青制剂均以毛冬青根中
不含有的芦丁为指标性成分控制制剂中总黄酮的含
量 ,显然这是不合理和不科学的〔2〕。国家食品药品
监督管理局已经明确规定所有的中药注射剂及其原
料药材必须建立以色谱指纹图谱控制的质量标准 ,
所以建立能系统 、完整地反映毛冬青注射液内在质
量的分析方法是当务之急 。本研究即采用 HPLC法
建立该种注射剂的指纹图谱 ,旨在能更客观且有效
地评价和控制毛冬青注射液的质量。
1　仪器与材料
1.1　仪器　Waters2695高效液相色谱仪 (美国
Waters公司), Waters2996DAD二极管阵列检测器
(美国 Waters公司), Milennium32色谱处理系统 ,
Milipore超纯水机(美国 Milipore公司),中药色谱
指纹图谱相似度评价系统(2004A版)。
1.2　材料　样品是由广东省博罗先锋药业集团有
限公司提供的毛冬青注射液 , 产品批号:060803 ～
060806、061001 ～ 061004,乙腈 、磷酸为色谱纯 ,水为
超纯水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　ODS-2 HypersilC18色谱柱 (4.6
mm×200 mm, 5 μm);流动相:A(乙腈)-B(0.05%
磷酸),梯度洗脱:0 ～ 8 min(3%A～ 3%A), 8 ～ 80
min(3%A～ 20%A), 80 ～ 81 min(20%A～ 3%A),
81 ～ 90 min(3%A～ 3%A),所有组分均在 80 min内
洗脱出柱;流速:1 mL/min;检测波长:325 nm;柱温:
30℃;进样量:10 μL。
2.2　供试品溶液的制备　因毛冬青注射液为注射
剂 ,经过复杂的提取后杂质较少 ,预实验表明 ,毛冬
·1132· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 7期 2009年 7月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.07.024
青注射液经微孔滤膜过滤后直接进样 ,所得到的图
谱中成分较多 ,杂质影响也较少 ,故不再进行提取处
理 。取毛冬青注射液 ,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,
取滤液 ,即得 。
2.3　方法学考察
2.3.1　确定共有峰:按照上述色谱条件对 8批样
品分别进行试验 ,由得到的色谱图初步确定共有峰 。
2.3.2　精密度试验:取同一供试品溶液 (批号
061004),连续进样 6次 ,检测指纹图谱 ,结果表明 ,
相似度为 0.981 ～ 0.991 ,各色谱图相似度高 ,符合
指纹图谱要求 ,精密度良好 。
2.3.3　重复性试验:取同一批次供试品溶液(批号
061004),按 “2.2”项下方法分别制备 6份供试品 ,
检测指纹图谱 ,结果表明 ,相似度为 0.997 ～ 0.999,
各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无
明显变化 ,相似度高 ,符合指纹图谱的要求 ,重现性
良好。
2.3.4　稳定性试验:取同一批次供试品溶液(批号
061004),在室温下放置 ,分别于 0、6、10、16、25 h进
行指纹图谱测定 , 结果表明 , 相似度为 0.968 ～
0.996 ,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积
比值无明显变化 ,相似度高 ,符合指纹图谱的要求 ,
表明样品溶液在 25 h内稳定。
2.4　样品测定　取 8批样品 ,按 “ 2.2”项下方法 ,
制备成供试品溶液 ,注入液相色谱仪 ,记录 90 min
色谱图即得。
2.5　指纹图谱分析与评价
2.5.1　共有峰标定:根据 8批毛冬青注射液 HPLC
指纹图谱检测结果 ,利用 “中药色谱指纹图谱相似
度评价系统(2004A版)”生成毛冬青注射液共有模
式的对照 HPLC指纹图谱 ,见图 1,其中共有特征峰
为 13个。保留时间在 26.2 min和 27.0 min的两个
峰其峰高和峰面积较为适中 ,与相邻峰分离较好 ,出
峰位置适中 ,故选定为该指纹图谱参照峰。
图 1　8批毛冬青注射液样品的共有峰
图 2　8批毛冬青注射液的 HPLC叠加图谱
·1133·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 7期 2009年 7月
　　表 1 　8批毛冬青注射液样品指纹图谱的相似度
批号 060803 060804 060805 060806 061001 061002 061003 061004
相似度 0.981 0.947 0.993 0.990 0.980 0.983 0.981 0.976
2.5.2　相似度评价:利用 “中药色谱指纹图谱相似
度评价系统 (2004A版)”软件 ,分别对 8批毛冬青
注射液指纹图谱进行匹配 ,并以 8批样品生成的对
照图谱(平均数法)作为对照模板 ,计算各图谱的相
似度 ,范围分别在 0.947 ～ 0.983,见图 2及表 1。
3　讨论
3.1　毛冬青注射液所含成分复杂 ,且极性范围跨
度很大 ,等度洗脱很难分离 ,故采用梯度洗脱方式 。
经比较优化色谱条件 ,采用乙腈-磷酸溶液系统梯度
洗脱法 ,所得峰形尖锐且各峰之间分离较好 ,得到较
完整的 HPLC指纹图谱 。磷酸不同比例比较发现 ,
增加酸的浓度并没有提高分离度和改善峰形 ,而且
考虑到色谱柱所能承受的 pH值 ,故控制加入磷酸
的浓度为 0.05%。
3.2　毛冬青的主要化学成分为毛冬青总皂苷和黄
酮苷 ,毛冬青根中主要成分为三萜皂苷类 〔3〕。近年
来的研究表明具有抗心肌缺血 、抗血栓形成等多种
生理活性的毛冬青甲素系从毛冬青根中提取纯化后
的 18-去氢乌索酸经琥珀酰化所得的五环三萜类化
合物 ,其结构为 3β-琥珀酰基-18-去氢-乌索酸二钠
盐 〔4〕。但是在本实验中由于缺乏对照品 ,尚未能对
毛冬青注射液的指纹图谱中各个峰与成分之间的关
系进行归属 ,有待进一步研究 。
3.3　毛冬青是我国南方常用中药 ,临床应用广泛 ,
疗效确切 。但从文献资料分析 ,毛冬青的整体研究
尚不深入 ,特别是在化学成分 、制剂工艺与质量控
制 、单体化学成分(或群)的药理作用等方面存在不
足。本实验尝试建立毛冬青注射液指纹图谱的研究
方法 ,并验证了该方法的稳定性 、精密度和重现性 ,
结果令人满意 。可见 ,该方法可用于毛冬青注射液
指纹图谱的研究工作 ,具有一定的现实意义 。
参 考 文 献
[ 1] 郑虎占 , 董泽宏 , 佘靖 .中药现代研究与应用 [ M] .北
京:学苑出版社 , 1997:1036-1044.
[ 2] 刘毅 , 方芳 ,袁海龙 , 等 .毛冬青药材中 neopudescensin
的含量测定研究 [ J] .中药材 , 2006, 29(2):144-145.
[ 3] 熊友香 ,李昶 , 罗宪堂.毛冬青的化学成分 、药理作用研
究进展 [ J] .中药材 , 2002, 25(5):371-374.
[ 4] 蔡雄 , 刘中秋 ,祝晨蔯 , 等 .毛冬青化学成分 、药理作用
及临床应用研究进展 [ J] .广东药学 , 2001, 11(1):4-6.
收稿日期:2008-10-20作者简介:王捷(1969-),男 ,制药工程师 ,研究方向:中药制剂和检测;Tel:15077157100, E-mail:420882554@QQ.com。
高效液相色谱法测定安神养血口服液中
钩藤碱和异钩藤碱含量
王　捷 1 , 刘宗河2 , 龙　禹 3 , 辛丽娜 4
(1.广西医科大学制药厂 ,广西 南宁 530021;2.广西医科大学附属肿瘤医院 ,广西 南宁 530021;3.广西
医科大学第一附属医院 ,广西 南宁 530021;4.南宁食品药品检验所 ,广西 南宁 530001)
　　摘要　目的:建立安神养血口服液的含量测定方法。方法:运用 HPLC测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩
藤碱含量。色谱柱:依利特 KromasilC18柱(5μm, 4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(55∶45)(含 0.01mol/L三乙
胺 , 用冰醋酸调 pH值至 7.5);柱温:25℃;检测波长:254nm;流速:1.0mL/min。结果:钩藤碱的平均回收率为
99.04%,异钩藤碱为 98.75%。钩藤碱在进样量 0.12 ～ 1.20μg范围内线性关系良好(r1 =0.9999),异钩藤碱在进
样量 0.08 ～ 0.80μg范围内线性关系良好(r2 =0.9993)。结论:该方法简便 、快速 、准确 ,可用于安神养血口服液的
质量控制。
关键词　安神养血口服液;钩藤碱;异钩藤碱;高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)07-1134-04
·1134· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 7期 2009年 7月