全 文 ：第 34 卷第 1 期
2015 年 2 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 34 No． 1
Feb． 2015
收稿日期:2014 － 07 － 12
基金项目:山东中医药大学 2012 年 SＲT资助项目。
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2015． 01． 006
HPLC法测定有柄石韦及华北石韦中绿原酸和木犀草素的
含量及不同浸提物的指纹图谱分析
高 贝，程丹丹，辛晓伟，高德民*
(山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355)
摘 要 目的:通过 HPLC法对有柄石韦及华北石韦中绿原酸和木犀草素含量的测定，以控制石韦药材质量，建立
石韦药材中绿原酸及木犀草素的含量测定方法，同时对有柄石韦及华北石韦中绿原酸及木犀草素的含量进行比较
以及对不同浸提物的指纹图谱进行分析。方法:用 hypersil ODS － 2 柱，流动相为乙腈 － 0． 5%磷酸水(9 ∶ 91) ，检测
波长 326 nm，流速 1 mL·min －1。结果:各峰可较好的分离，有柄石韦中绿原酸的含量可达到 1． 51%。结论:该方
法操作简便，结果准确，具有较好的重现性与稳定性，可用于有柄石韦及华北石韦中绿原酸和木犀草素含量测定。
关键词 HPLC;有柄石韦;华北石韦;绿原酸;木犀草素
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2015)01 － 0019 － 03
Determination of Chlorogenic Acid and Mignonette in Pyrrosia petiolosa
(Christ)Ching and Pyrrosia davidii (Baker)Ching by HPLC and
Analysis of Fingerprints from Different Extraction
Gao Bei，Cheng Dandan，Xin Xiaowei，Gao Demin
(School of Pharmacy，Shandong University of TCM，Jinan 250355，China)
Abstract Objective:HPLC method for simultaneous determination of chlorogenic acid and mignonette in
Pyrrosia petiolosa (Christ)Ching and Pyrrosia davidii (Baker)Ching，for quality control，establish the
content determination method and the comparison in content of chlorogenic acid and mignonette in Pyrro-
sia petiolosa (Christ)Ching and Pyrrosia davidii (Baker)Ching，at the same time，analyze fingerprints
from different extraction． Method:With ODS-C18 column，mobile phase acetonitrile-phosphate (0． 5% )
(9:91) ，wavelength 326 nm，flow rate 1 mL·min －1 ． Ｒesults:The peaks can be good separated，the
content of chlorogenic acid can reach 1． 51% in Pyrrosia petiolosa (Christ)Ching． Conclusion:The meth-
od is simple and good reproducibility，and can be used for determination of chlorogenic acid and mignon-
ette in Pyrrosia petiolosa (Christ)Ching and Pyrrosia davidii (Baker)Ching．
Key words HPLC;Pyrrosia petiolosa (Christ)Ching;Pyrrosia davidii (Baker)Ching;chlorogenic
acid;mignonette
石韦为水龙骨科(Polypodiaceae)植物庐山石韦
［Pyrrosia sheareri (Bak．)Ching］、石韦［Pyrrosia lin-
gua (Thunb．)Farwell］和有柄石韦［Pyrrosia petiolosa
(Christ)Ching］的干燥叶［1］。生于裸露干旱岩石上，
海拔 250 ～2 200 m。绿原酸具有广泛的生物活性，可
以有效清除体内的自由基，具有较强的抑制突变，抗
癌，抑菌的作用，能利胆、降压、显著增加胃肠蠕动和
促进胃液分泌［2］;木犀草素具有抗肿瘤、抗应变性、抗
病毒、抗炎、抗氧化、和保护细胞的作用，对白血病细
胞、肿瘤细胞和神经元细胞生物学功能有影响［3］。华
北石韦未被药典收录到石韦药材中，HPLC 为药典规
定的石韦中绿原酸含量测定方法。本研究主要采用
高效液相色谱法对两种石韦中绿原酸和木犀草素的
含量测定，以期为药用石韦扩大资源，合理开发利用，
控制药材质量及进一步化学研究提供科学依据。
1 仪器与试药
1． 1 主要试药
对照品绿原酸(上海金穗生物科技有限公司;
20130916) ，木犀草素(上海金穗生物科技有限公
—91—
中 国 野 生 植 物 资 源 第 34 卷
司;20131021)乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，
其余试剂均为分析纯。有柄石韦，华北石韦(采自胶
东，2013． 09． 06)经高德民副教授鉴定，保存于山东
中医药大学标本馆。
1． 2 仪器
浙大智达 N2000 高效液相色谱仪(浙江大学智
达信息工程有限公司) ;万分之一分析天平(上海菁
海仪器有限公司)
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
色谱柱 Shim － pack VP － ODS (4． 6 mm × 250
mm，5μm) ;流动相为乙腈 － 0． 5% 磷酸水(9 ∶ 91) ;
检测波长 0 ～ 45 min 为 326 nm，流速为 1． 0 mL·
min;柱温为 25 ℃［1，8］。
2． 2 溶液的制备［1］
2． 2． 1 对照品溶液的制备［4，5］
精密称取绿原酸、木犀草素对照品各 5 mg，加
50%甲醇溶解，分别制成 0． 5，0． 25 mg·mL －1的对
照品溶液。
2． 2． 2 供试品溶液的制备
精密称取有柄石韦及华北石韦粉末(过 2 号
筛)1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 50% 甲醇 40
mL，密塞，称重，超声处理 45 min，取出，放冷，再称
重，用 50%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即
得，备用。精密称取有柄石韦粉末 1 g，按以上方法，
制备水，甲醇，乙醇(50%) ，丙酮浸提物［6 － 7］。
2． 3 线性关系考察试验
分别精密量取上述绿原酸，木犀草素对照品溶液
2，5，10，15，20μL进样［8］，以色谱峰面积(Y)对质量(X)
进行回归，木犀草素的线性回归方程为 Y =3 634 201X
+26 587，r = 0． 999 9，线性范围为 0． 029 7 ～ 0． 42 μg。
绿原酸的线性回归方程为 Y = 25 089X + 840 462，r =
0．999 8，线性范围为 0． 018 ～0. 89 μg。
2． 4 精密度试验
取上述对照品溶液 20 μL，连续进样 5 次，测得
木犀草素的峰面积 ＲSD为 0． 75%，绿原酸的峰面积
ＲSD为 0． 45%，表明仪器进样精密度良好［9 － 10］。
2． 5 稳定性试验取
取上述对照品溶液 20 μL 分别在 0、2、4、6、8、
12 h进样，测定木犀草素的峰面积 ＲSD 为 1． 98%，
绿原酸的峰面积 ＲSD为 0． 87%表明样品溶液在 12
h内稳定［11］。
2． 6 重现性试验
取同批有柄石韦及华北药材，按供试品制备方
法配制 6 份，分别进样 20 μL，测定木犀草素，绿原
酸的峰而积 ＲSD 分别为 1． 98%，1，69%，表明该方
法的重现性较好［12］。
2． 7 样品测定
按上述待测溶液的制备方法制备溶液，按绿原
酸和木犀草素测定色谱条件，对待测样品进行测
定［1］，外标法计算含量，得到回归方程为:绿原酸 Y
= 25 089X + 840 462，r = 0． 999 0;木犀草素 Y =
11 651X + 10 r = 0． 999 7。利用面积归一化法对 1 ～
8 号物质进行相对含量测定。
2． 8 结果
图 1 有柄石韦(A)、华北石韦(B)、对照品(C)、阴性对照(D)的 HPLC指纹图谱
—02—
第 1 期 高 贝，等:HPLC法测定有柄石韦及华北石韦中绿原酸和木犀草素的含量及不同浸提物的指纹图谱分析
图 2 有柄石韦水(A)，甲醇(B)，乙醇(50%)(C)，丙酮(D)浸出物 HPLC指纹图谱
表 1 有柄石韦、华北石韦中绿原酸及木犀草素的含量
材料 绿原酸(%) 木犀草素(%)
有柄石韦 1． 51 ± 0． 096 0． 021 ± 0． 0012
华北石韦 0． 76 ± 0． 053 0． 047 ± 0． 0017
图 3 有柄石韦不同浸出物中各峰处物质的相对含量
2． 8． 1 结果分析
有 HPLC 指纹图谱可知各峰分离效果较好，与
相邻峰能达到基线分离，无重叠峰，Ｒ ＞ 2． 0，保留时
间合适，稳定，重现性好。
2． 8． 2 验证试验
按照实验条件进行多次实验，以验证该工艺的
精密性，可重复性和稳定性，结果无显著差异，结果
精密度良好，方法稳定，准确，可靠。
3 讨 论
结果表明有柄石韦和华北石韦所含化学成分的
种类基本相似，但各成分的含量有很大差异。HPLC
指纹图谱分离度较好(图 1) ，稳定可靠，建立了石韦
中绿原酸与木犀草素的 HPLC测定方法。可作为石
韦近似种的鉴别及进一步的成分研究提供基础材
料。有柄石韦和华北石韦中绿原酸的含量均达到药
典要求(不得少于 0． 20%) ，有柄石韦中绿原酸的含
量明显高于华北石韦，但木犀草素的含量明显低于
华北石韦(表 1)。单从绿原酸含量可以考虑将其归
入药用石韦，但仍需做进一步的药效，药理及临床实
验。这为中药石韦的深入开发研究提供参考，也为
药材鉴别提供了科学依据［13 － 14］。
有柄石韦不同浸提物中的成分及含量存在很大
差异，化合物 1 在甲醇和乙醇浸提物中含量较高，5，
6 在丙酮，8 在水提物中相对含量较高，2，5 在水提
物中相对含量较少，4 在乙醇提取物中的含量最低，
在其它提取物中相差不大，7 在各提取物中所咱的
相对含量没有明显差别(图 2，3)。这为进一步有柄
石韦的提取，分离及有效成分分析提供基础材
料［15］，也为石韦药材的质量控制提供科学依据。
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