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紫茎泽兰提取物对粘虫触杀作用研究初探



全 文 :紫茎泽兰提取物对粘虫触杀作用研究初探
王云梅,付立会,黄修芬,罗晓玲
(凉山州西昌农业科学研究所,四川西昌 615000)
摘 要:为了探索紫茎泽兰活性成分对农业害虫的影响,采用浸虫法测定了紫茎泽兰提取物对粘虫幼虫
的触杀作用,并测定不同浓度紫茎泽兰花甲醇提取物对粘虫的触杀和抑制生长发育作用。结果表明:紫
茎泽兰不同部位不同萃取剂提取物均对粘虫具有一定的触杀作用,触杀效果较好部位是花和叶,萃取剂
是甲醇、丙酮、石油醚。触杀作用随浓度增加而增强,随时间增加而增大,24、48、72 h的致死中量LD50分
别为15.27、11.41、7.11 mg/mL。
关键词:紫茎泽兰;提取物;粘虫;触杀作用;致死中量(LD50)
中图分类号:S451;S435.622 文献标志码:A 论文编号:casb15090067
Contact Toxicity of Extracts of Eupatorium adenophorum Against Armyworm
Wang Yunmei, Fu Lihui, Huang Xiufen, Luo Xiaoling
(Agricultural Research Institute of Xichang Prefecture in Liangshan, Xichang Sichuan 615000)
Abstract: In order to explore the effect of active ingredients from Eupatorium adenophorum on agricultural
pests, contact toxicity of extracts of Eupatorium adenophorum against armyworm larvae was studied in this
paper by dipping method. Then contact toxicity and development inhibition of methanol extracts of Eupatorium
adenophorum at different concentrations to armyworm were analyzed. The results showed that there was certain
contact toxicity of different concentration extracts from different parts of Eupatorium adenophorum against
armyworm. The extract from flowers and leaves of Eupatorium adenophorum using methanol, acetone and
petroleum ether as extraction agents had better contact toxicity to armyworm. Contact toxicity was enhanced
with the increase of methanol extracts concentration and the increase of time, and LD50 at 24, 48 and 72 h was
15.27, 11.41 and 7.11 mg/mL, respectively.
Key words: Eupatorium adenophorum; extracts; armyworm; contact toxicity; median lethal dose (LD50)
0 引言
紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)作为世
界性的恶性入侵杂草,是一种典型的泽兰属植物。截至
2015年,紫茎泽兰在凉山州境内的危害面积达60万hm2
以上,为开展紫茎泽兰综合利用的研究提供了丰富资
源。一些研究结果表明,其自身含有多种生物活性成分
存在[1-3],对多种农业害虫具有毒杀活性。李云寿等[4]研
究表明紫茎泽兰提取物对米象、玉米象、绿豆象和蚕豆
象等4种储粮害虫成虫具有强烈的熏杀活性。尼泊尔发
现紫茎泽兰叶片能直接防治马铃薯的害虫黄蚂蚁[5-6],周
天雄等[7]测定出紫茎泽兰A-1提取物对菜粉蝶幼虫拒食
活性最强;刘燕萍等[8]研究表明紫茎泽兰乙醇提取物对
农业上危害严重的二斑叶螨和柑橘全瓜螨具有很高的
触杀作用;王一丁[9]发现紫茎泽兰提取物对棉蚜有很高
的毒杀作用。粘虫是一种农作物害虫,取食植物叶片,
造成农作物叶片缺口和虫粪污染,形成严重经济损
失[10]。本研究通过对紫茎泽兰活性成分对粘虫的影响进
行研究,旨在验证紫茎泽兰对粘虫的触杀作用,为今后
紫茎泽兰综合开发利用提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 供试植物材料
试验在西昌学院植物生理生化试验室进行,于
2014年2月26日采集紫茎泽兰花的样品,2014年6—8
月采集紫茎泽兰叶和茎样品,带回试验室自然阴干,用
基金项目:凉山州西昌农业科学研究所自立项目“紫茎泽兰活性成分在农业害虫上的应用研究”。
第一作者简介:王云梅,女,1982年出生,四川盐源人,农艺师,硕士,从事植保及园艺相关的研究。通信地址:615000四川省凉山州西昌市胜利南路
142号凉山州西昌农业科学研究所,E-mail:938431676@qq.com。
收稿日期:2015-09-16,修回日期:2015-10-23。
中国农学通报 2016,32(2):61-67
Chinese Agricultural Science Bulletin
中国农学通报 http://www.casb.org.cn
多功能粉粹机粉碎后制成干粉,用自封袋密封,置于
4℃冰箱中保存备用[11-12]。
1.2 供试昆虫
粘虫采自四川省西昌市普格县五道箐乡试验基地
燕麦田,于室内用新鲜燕麦叶或玉米叶饲养供试。
1.3 供试药剂和仪器
主要试剂和仪器:丙酮、乙酸乙酯、甲醇、石油醚、
无水乙醇均为四川西陇化工有限公司生产分析纯,吐
温 80为成都金山化学试剂有限公司生产分析纯。
500 mL三角烧杯,500 mL棕色广口瓶、布氏漏斗、球
形烧杯,定量滤纸,旋转蒸发仪器RE-52为上海亚荣生
化有限公司生产,超声波清洗器B3500S-MT为必能信
超声(上海)有限公司生产,植物粉粹机为永康市帅康
五金制品有限公司生产。
1.4 试验方法
1.4.1 提取物的制备 准确称取紫茎泽兰各部位(花、
叶、茎)干粉 50 g,置于 500 mL棕色广口瓶中,在不同
瓶中分别加入 500 mL甲醇、无水乙醇、丙酮、石油醚、
乙酸乙酯和水,40℃水浴超声波震荡30 min,布氏漏斗
过滤;第二次分别加入相应萃取剂 400 mL,40℃水浴
超声波震荡30 min,布氏漏斗过滤;第三次分别加入相
应的萃取剂 300 mL,40℃水浴超声波震荡 30 min,布
氏漏斗过滤,合并3次滤液,滤液经65℃水浴旋转蒸发
仪减压蒸馏至稠膏状,称量出膏状物的质量,计算提取
率。将浸提稠膏先分别加入少量甲醇、无水乙醇、丙
酮、石油醚、乙酸乙酯和水,均用丙酮稀释定容至
50 mL,然后置于4℃冰箱中备用。
1.4.2 对粘虫触杀活性测定 采用虫体浸渍法,提取物
分别用 1%的吐温 80水溶液稀释 5倍液,挑选大小一
致、健康活泼 4龄或 5龄初期幼虫,在药液中浸渍 3 s,
迅速用吸水纸吸干虫体及附近多余的药液,取出后放
入铺有直径 10 cm滤纸保湿的培养皿中,饲养新鲜的
玉米叶或燕麦叶[13-18],每处理 25头幼虫,重复 5次,1%
的吐温80水溶液稀释5倍丙酮溶液为对照,最后用保
鲜膜覆盖并打上孔。在温度(25±1)℃,湿度 60%~
80%,光照L:D=14:10条件下饲养;视取食情况及时添
加玉米叶或燕麦叶,24、48、72 h后调查死亡情况,计算
死亡率和校正死亡率,见公式(1)和(2)。
死亡率 = 死亡虫数总虫数 × 100% ………………… (1)
校正死亡率 =
对照试虫存活率 -处理试虫存活率
对照试虫存活率 × 100%
………………………………………………… (2)
1.4.3 致死中量测定 选择最佳部位和萃取剂的提取物
用 1%的吐温 80稀释至 10、25、50、75、100 mg/mL,对
照为1%吐温80水溶液稀释10倍丙酮溶液。采用浸虫
法[11],方法与 1.4.2一致。挑选健康活泼的粘虫 3龄幼
虫,分别用10、25、50、75、100 mg/mL的药液中处理后,
再放入铺有直径 15 cm滤纸保湿的培养皿中,用新鲜
的燕麦或者玉米叶进行饲养,每处理10头幼虫,重复5
次,最后用保鲜膜覆盖并打上孔。在温度(25+1)℃、湿
度60%~80%、光照L:D=14:10条件下饲养[19];视取食情
况及时添加燕麦叶或者玉米叶,24、48、72 h后调查死
亡数,计算死亡率、校正死亡率,然后采用DPS统计分
析软件计算致死中量(LD50)。
1.4.4 粘虫生长发育影响测定 对生长发育的影响采用
称体重法[19]:方法与叶碟法基本相同,处理试液浓度为
48 h的最佳触杀浓度。挑选大小一致的粘虫4龄幼虫
称重后分别置入有处理叶碟的培养皿中,10个重复,
并于24、48、72 h分别称体重,计算体重增长率,见公式
(3)。
体重增长率 =
每时段平均体重 -初始平均体重
初始平均体重 × 100%
…… (3)
2 结果与分析
2.1 触杀活性分析
从表 1可以看出,紫茎泽兰不同部位不同萃取剂
提取物均对粘虫有一定的杀虫活性,杀虫活性随着时
间增加或不变。24 h杀虫活性达到“++++”(71%~
90%)的有紫茎泽兰叶丙酮、乙酸乙酯提取物,紫茎泽
兰茎丙酮、石油醚提取物;达到“+++”(51%~70%)的有
紫茎泽兰花甲醇、石油醚、乙酸乙酯提取物,紫茎泽兰
叶乙醇、石油醚提取物,仅达到“+”(11%~30%)是紫茎
泽兰叶的甲醇提取物和紫茎泽兰茎乙醇和水提取物。
48 h大部分处理杀虫活性均有所提高,48 h杀虫活性
达到“++++”(71%~90%)的有紫茎泽兰花甲醇、丙酮、
石油醚、乙酸乙酯提取物,紫茎泽兰叶乙醇、丙酮、石油
醚、乙酸乙酯提取物,紫茎泽兰茎丙酮、石油醚提取物;
其次达到“+++”(51%~70%)的有紫茎泽兰花乙醇、水
提取物,紫茎泽兰叶水提取物,紫茎泽兰茎甲醇、乙酸
乙酯提取物;仅达到“+”(11%~30%)是紫茎泽兰茎乙醇
提取物。72 h与 48 h的校正死亡率变化不大,仅紫茎
泽兰叶甲醇、水提取物和紫茎泽兰茎乙酸乙酯提取物
的杀虫活性增加一个“+”,其余处理变化不大。
由图 1、表 2可以看出,紫茎泽兰不同部位不同萃
取剂的提取物触杀粘虫死亡率和校正死亡率均随时间
增加而增大,死亡率均显著高于对照。从时间上看,
·· 62
24 h时,死亡率和校正死亡率最高的为紫茎泽兰叶乙
酸乙酯提取物,校正死亡率为 79.46%,除与紫茎泽兰
茎丙酮、石油醚提取物,紫茎泽兰叶丙酮提取物,紫茎
泽兰花乙酸乙酯、石油醚提取物无显著差异外,显著或
极显著高于其他处理;48 h时,死亡率和校正死亡率最
高为紫茎泽兰叶丙酮提取物,校正死亡率为 87.57%,
除与紫茎泽兰茎石油醚、丙酮提取物,紫茎泽兰叶乙酸
乙酯、乙醇、石油醚提取物,紫茎泽兰花石油醚、乙酸乙
酯、丙酮、甲醇提取物无显著差异外,显著或极显著高
于其他处理;72 h时,死亡率和校正死亡率最高的为紫
茎泽兰叶乙酸乙酯提取物,校正死亡率为 90.05%,显
著高于紫茎泽兰花乙醇、水提取物和紫茎泽兰茎甲醇
提取物,极显著高于紫茎泽兰叶甲醇提取物,紫茎泽兰
茎水、乙醇提取物,与其他各处理之间无显著性差异。
从不同部位来看(见图 1),紫茎泽兰花和叶含杀
虫活性物质高于茎;从萃取剂来看,花中最好是甲醇、
植株的名称和部位
紫茎泽兰花
紫茎泽兰叶
紫茎泽兰茎
提取溶剂
甲醇
乙醇
丙酮
石油醚
乙酸乙酯

甲醇
乙醇
丙酮
石油醚
乙酸乙酯

甲醇
乙醇
丙酮
石油醚
乙酸乙酯

提取率/%
11.4
10.8
10.6
11.6
4.8
14.2
10.8
10.8
10.4
11.2
4.4
14
10.6
10.2
10.4
10.8
3.4
13
对粘虫的杀虫活性
24 h
+++
++
++
+++
+++
++
+
+++
++++
+++
++++
++
++
+
++++
++++
++
+
48 h
++++
+++
++++
++++
++++
+++
++
++++
++++
++++
++++
+++
+++
+
++++
++++
+++
++
72 h
++++
+++
++++
++++
++++
+++
+++
++++
++++
++++
++++
++++
+++
+
++++
++++
++++
++
表1 紫茎泽兰不同部位不同萃取剂提取物对粘虫杀虫活性分析
注:5%提取物稀释 5倍;-:校正死亡率为 0%~10%;+:校正死亡率为 11%~30%;++:校正死亡率为 31%~50%;+++:校正死亡率为 51%~
70%;++++:校正死亡率为71%~90%;+++++:校正死亡率为91%~100%。
王云梅等:紫茎泽兰提取物对粘虫触杀作用研究初探 ·· 63
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乙酸乙酯、石油醚,紫茎泽兰叶最好是乙醇、丙酮、石
油醚、乙酸乙酯,紫茎泽兰茎是丙酮和石油醚。从提
取率来看,水的提取率最高,其次是甲醇、乙醇、石油
醚、丙酮(表 1)。综合各项,最佳提取部位和萃取剂
分别为紫茎泽兰花和叶,萃取剂分别为甲醇、丙酮、石
油醚。
2.2 致死中量分析
选择紫茎泽兰花甲醇提取物来分析不同浓度提取
物对粘虫的触杀作用,找到触杀粘虫的致死中量LD50。
表 3结果显示,不同浓度紫茎泽兰花甲醇提取物
均对粘虫3龄幼虫具有较高的触杀作用。触杀作用随
着提取物浓度逐渐升高而增强,并随着时间延长,触杀
图1 紫茎泽兰不同时间不同部位不同萃取物对粘虫死亡率对比图
植株的名称和部位
紫茎泽兰花
紫茎泽兰叶
紫茎泽兰茎
对照(1%的吐温80+丙酮)
提取溶剂
甲醇
乙醇
丙酮
石油醚
乙酸乙酯

甲醇
乙醇
丙酮
石油醚
乙酸乙酯

甲醇
乙醇
丙酮
石油醚
乙酸乙酯

稀释倍数
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
供试虫头数/头
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
校正死亡率/%
24 h
52.93±5.31bcdeABCDE
34.80±9.03efEF
41.57±4.85deDEF
60.09±10.59abcdABCDE
69.26±5.51abcABCD
48.63±3.12cdeBCDE
13.43±7.31fgEF
53.00±9.17bcdeABCDE
73.43±5.88abABC
52.94±8.98bcdeABCDE
79.46±6.26aA
44.00±9.14deDE
37.21±11.6eEF
12.74±8.55gF
74.79±10.05abAB
78.64±3.42aA
44.57±10.13deCDE
48.07±3.79cdeBCDE

48 h
71.63±10.96abcdefABCDE
61.60±6.68defghBCDEF
72.35±5.18abcdefABCDE
80.79±4.60abcABCD
78.94±4.05abcdABCD
66.10±3.13cdefgABCDEF
45.29±8.29hF
76.76±4.03abcdeABCD
87.57±5.07aA
76.32±7.31abcdefABCD
83.76±3.22abcABC
68.11±6.88bcdefgABCDEF
57.98±6.50fghDEF
18.49±6.00iG
82.62±6.08abcABCD
84.92±4.7abAB
59.92±9.34efghCDEF
49.56±10.38ghEF

72 h
80.60±7.16abAB
64.57±8.37bcABC
77.29±5.32abAB
86.43±5.13aA
81.90±4.52abA
64.81±6.38bcABC
53.94±12.37cBC
81.76±1.82abA
89.52±3.41aA
81.00±7.87abA
90.05±1.48aA
77.14±5.36abAB
64.29±7.13bcABC
22.67±15.77dD
83.32±5.97abA
83.33±7.22aA
82.33±10.51abA
47.38±10.7cCD

表2 紫茎泽兰不同部位不同萃取剂提取物对粘虫的触杀作用
注:数据为平均值±标准误,同列数据后不同大小写字母分别表示P<0.05和P<0.01差异显著。
·· 64
作用进一步提高,即48 h的触杀作用高于24 h,72 h触
杀作用高于 48 h。各处理显著高于对照,各处理之间
存在一定差异。触杀作用最高的浓度为100 mg/mL。
测定紫茎泽兰花甲醇提取物不同浓度触杀粘虫3
龄幼虫在24、48、72 h的LD50,结果见表4,紫茎泽兰花
甲醇提取物的触杀活性在 72 h 最强 ,LD50 为
7.11 mg/mL,其次是 48 h,LD50为 11.41 mg/mL,最弱是
24 h,LD50仅为15.27 mg/mL。
2.3 对粘虫生长发育影响分析
以 25 mg/mL浓度的紫茎泽兰花甲醇提取物浸叶
植物名称和部位
紫茎泽兰花
对照(1%的吐温80+丙酮)
药液浓度/(mg/mL)
100
75
50
25
10
校正死亡率/%
24 h
100.00±0.00aA
95.83±4.17aA
83.57±4.48abAB
67.38±5.36bB
32.86±8.89cC

48 h
100.00±0.00aA
100.00±0.00aA
96.30±3.70aA
82.20±4.23aA
54.10±10.43bB

72 h
100.00±0.00aA
100.00±0.00aA
100.00±0.00aA
94.44±5.67aA
69.44±2.78bB

处理时间/h
24
48
72
毒力回归方程
y=0.1294+4.114x
y=-0.2521+4.9673x
y=0.9331+4.7738x
相关系数
r=0.8279
r=0.9082
r=0.9467
LD50/(mg/mL)
15.27
11.41
7.11
95%置信区间
[7.859, 48.3773]
[5.1156, 52.4739]
[3.2807, 48.1857]
时间/h
0
24
48
72
对照
试虫平均体重/(g/头)
0.26
0.39
0.47
0.68
体重增长率/%
0.00
50.00
80.77
161.54
处理
试虫平均体重/(g/头)
0.22
0.23
0.17
0.13
体重增长率/%
0.00
4.55
-22.73
-40.91
表3 不同浓度紫茎泽兰花甲醇提取物对粘虫的触杀作用
注:数据为平均值±标准误,同列数据后不同大、小写字母分别表示P<0.05和P<0.01差异显著。
表4 紫茎泽兰花甲醇提取物对粘虫的LD50测定
碟,采用称体重的方法进行测定[19]。由表5可以看出,
在接虫后每隔24 h称试虫体重一次,72 h后,提取物对
粘虫生长发育的抑制作用比较明显。对照试虫的平均
体重与处理试虫的平均体重刚开始时很接近,但在
72 h后两者间的平均体重的差距开始变大(图2),分别
为 0.68 g和 0.13 g,对照试虫的平均体重在不断地增
长,处理试虫的平均体重 24 h后略涨,但随着时间推
移,逐渐低于初始的平均体重。从表5、图2可看出,对
照和处理体重增长的趋势正好相反,处理试虫的体重
增长率在48~72 h之内在不断降低,出现负增长,而对
照试虫的体重增长率在 24~72 h却在不断升高,说明
紫茎泽兰花甲醇提取物对粘虫生长发育有一定抑制
作用。
3 结论
紫茎泽兰花叶茎用甲醇、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸
乙酯、水不同萃取剂的提取物均对粘虫有一定的触杀
作用,杀虫活性、死亡率和校正死亡率随时间增加或不
变。综合各种因素,萃取剂较好有甲醇、丙酮和石油
醚,紫茎泽兰花叶部位含触杀活性成分高于茎。选择
其中触杀效果较好的紫茎泽兰花甲醇提取物来分析浓
表5 紫茎泽兰甲醇萃取物对粘虫4龄幼虫生长发育的抑制作用
注:萃取物的浓度为25 mg/mL,对照为1%的吐温80+丙酮。
王云梅等:紫茎泽兰提取物对粘虫触杀作用研究初探 ·· 65
中国农学通报 http://www.casb.org.cn
度对粘虫触杀作用的影响,结果表明:不同浓度紫茎泽
兰花甲醇提取物对粘虫均有触杀活性,并随浓度增加
而增强,随时间延长而增大;致死中量也随着时间增加
而增强,触杀活性72 h最强,LD50为7.11 mg/mL,另外,
研究也证实了紫茎泽兰花甲醇提取物对粘虫生长发育
有一定抑制作用,试虫在48、72 h出现负增长率,分别
为-22.73%和-40.91%。
4 讨论
4.1 存在问题及建议
农业害虫种类繁多,大多数害虫拥有幼虫和成虫
2种虫态,但对农作物危害大的是幼虫,防治不及时,
常常在一夜之间把农作物整棵吃光,造成缺苗断垄,甚
至绝产,给人们经济带来严重影响。在触杀、抑制生长
发育试验中,幼虫龄数的选择应引起注意,易选择 3
龄、4龄或5龄初期的幼虫,3龄以下幼虫太小,操作不
当引起人工致死,5龄中后期幼虫在试验中易因环境
改变,加快幼虫蛹化,都会影响试验结果。
紫茎泽兰花叶茎均含有一定活性成分,但花和叶
含活性物质均高于茎,而采花受到时间的限制,建议选
择叶作为紫茎泽兰开发利用主要部位。同时研究表
明:用醇类萃取剂提取物中也含有较高的杀虫活性物
质,并且醇类萃取剂成本较低、对人体危害较小,所以
建议用醇类萃取剂作为紫茎泽兰的最佳萃取剂。
紫茎泽兰的花期为每年 12月至次年 3月 [1-2],繁
殖能力强,每个顶端有伞状花絮,花繁茂程度非常
高,研究结果表明,紫茎泽兰花里含有较高杀虫活性
物质,如果能开发利用紫茎泽兰花,就可以大大减少
紫茎泽兰种子的生存,从而间接控制紫茎泽兰危害
的蔓延。
4.2 应用前景
随着化学农药的大量使用对环境污染的弊端日益
突出,现在大力提倡绿色防控,绿色防控技术的核心就
是使用生物农药防治病虫害,而生物农药主要成分大
多数来源于植物的活性成分[20-22],从天然植株中寻找农
药活性成分成为未来农药发展方向。紫茎泽兰虽然是
一种对环境危害极大的外来入侵生物,但有害生物自
身存在一定潜在的利用价值。紫茎泽兰在凉山州分布
面积大,为紫茎泽兰综合利用研究提供丰富的资源,为
试验的正常开展提供有力保障。试验结果表明,紫茎
泽兰含有很高的杀虫活性成分,但具体是什么物质发
挥主要的作用仍需要进一步的研究和证实;另外,相关
病理学研究也证实紫茎泽兰毒性属于低毒,有望将其
有价值的部分开发利用出来,为农业生产服务,变害为
宝,具有很重要的现实意义。
本研究仅对紫茎泽兰提取物对粘虫的触杀作用、
生长抑制作用展开了一定的研究,但农业害虫种类繁
多,其中很多蔬菜害虫繁殖能力强,危害严重,为进一
步验证紫茎泽兰活性成分物质对害虫触杀作用的普遍
性、针对性,应多选择几种害虫进行系统研究。
参考文献
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致谢:本文是在罗老师和付老师精心指导和大力支持
下完成的,特别感谢罗老师对试验以及论文写作的指
导,感谢她为完成这篇论文给予的很大帮助、宝贵
意见。
王云梅等:紫茎泽兰提取物对粘虫触杀作用研究初探 ·· 67