全 文 ：华北农学报·2016，31(4):94 -99
收稿日期:2016 － 05 － 18
基金项目:国家自然科学基金专项(31040052);国家自然科学基金青年基金项目(31101022) ;植物生理学与生物化学国家重点实验室开
放课题项目(SKLPPBKF1504)
作者简介:谢 鑫(1990 －)，女，河北邯郸人，在读硕士，主要从事植物逆境研究。谢鑫、孙宁为同等贡献作者。
通讯作者:魏凤菊(1979 －)，女，河北衡水人，讲师，博士，主要从事植物抵抗逆境分子机制方面的研究。
拟南芥 CPK10 /CPK30 双突变体的构建及表型分析
谢 鑫，孙 宁，魏凤菊
(河北农业大学 生命科学学院，河北省植物生理与分子病理学重点实验室，河北 保定 071001)
摘要:CDPKs是植物细胞内一类重要的钙感受器，拟南芥 CPK10 属于 CDPK 家族成员。为研究 CPK10 及与其同
源性较高的 CPK30 是否共同参与逆境响应。首先构建了 cpk10 × cpk30 双突变体，然后进行多种逆境下的生理表现检
测，并利用 ＲT-PCＲ方法分析 2 个基因的表达情况。结果显示，模拟干旱、盐、ABA处理拟南芥幼苗后，双突变体与野
生型无差异;成苗期双突变体与单突变体对干旱敏感程度类似。转录水平检测到，在干旱胁迫时双突变体中 ＲD29A
的表达与野生型及单突变体趋势相反，呈下降趋势;响应 ABA的 OST1 在双突变体中受干旱诱导后 0． 5 h明显表达上
调。成功获得了 cpk10 × cpk30 双突变体，由生理表型和表达分析结果推测 CPK10 与 CPK30 可能共同参与了依赖
ABA的干旱逆境信号转导过程，且二者之间存在功能冗余。
关键词:钙依赖的蛋白激酶;双突变体;逆境胁迫;表型分析
中图分类号:Q78 文献标识码:A 文章编号:1000 － 7091(2016)04 － 0094 － 06
doi:10． 7668 /hbnxb． 2016． 04． 016
Construction and Phenotype Analysis of CPK10 /CPK30
Double Mutantin Arabidopsis
XIE Xin，SUN Ning，WEI Fengju
(College of Life Sciences，Agricultural University of Hebei，Hebei Province Key Laboratory of Plant
Physiology and Molecular Pathology，Baoding 071001，China)
Abstract:Calcium-dependent protein kinases (CDPKs)function as Ca2 + sensor in various plant physiological
processes． CPK10 was one member of CDPK family． In order to investigate the molecular mechanisms of CPK10 and
its high homology CPK30 in response to stress，cpk10 × cpk30 double mutant was firstly constructed． The pheno-
types in response to various stress were detected，and the ＲT-PCＲ method was used to analyzed the two genes ex-
pression． The results showed that there was no difference in the seed germination stage between double mutant and
wild-type plants in the treatment of drought，salt and ABA． In the mature stage，double mutant exhibited no differ-
ence to drought stress compared with wild-type and single mutant． Nevertheless，the expression levels of ＲD29A was
decreased in the double mutant and showed opposite trend in wild-type and single mutant during drought stress． The
expression of ABA-responsive gene OST1 was enhanced obviously in double mutant after drought stress 0． 5 h． The
cpk10 × cpk30 double mutant was successfully obtained． Our data indicated that CPK10 and CPK30 might be in-
volved in ABA-dependent signal transduction pathway，and showed redundant functions．
Key words:CDPK;Double mutant;Adversity stress;Phenotype analysis
钙依赖的蛋白激酶(Calcium-dependent protein
kinases，CDPKs)作为生物体内重要的钙信号感受
器，在胞内钙信号的级联传递过程中起着重要的作
用。植物 CDPK属于多基因家族，家族中许多成员
在应答非生物逆境过程发挥重要功能。尤其在干
旱、高盐胁迫方面最为明显，如拟南芥 AtCPK10 和
AtCPK11 可 以 受 干 旱 和 高 盐 诱 导 表 达［1 － 2］;
AtCPK27［3］参与植株对盐胁迫的应答;过量表达
AtCPK8［4］和 AtCPK10［5］可以使植株耐旱力明显增
强;其他植物中如玉米 ZmCPK4［6］、葡萄 VaCPK20［7］、
4 期 谢鑫等:拟南芥 CPK10 /CPK30 双突变体的构建及表型分析 95
姜 ZoCDPK1［8］过量表达后，植株对干旱胁迫的耐受
性明显增强;OsCPK12［9］正调控水稻应答高盐胁迫。
有些 CDPK 成 员 表 现 对 逆 境 的 负 调 控，如
AtCPK21［10］的突变体表现出对逆境胁迫耐受力增
强。由于多基因家族中结构域的保守性，会存在多
个基因的功能冗余现象，如 AtCPK4 和 AtCPK11 共
同介导了 ABA 信号转导过程［11］;AtCPK2 和
AtCPK20 共同调控花粉管阴离子通道 SLAH3［12］。
烟草的 NaCDPK4 和 NaCDPK5 共同参与茉莉酸的
早期合成过程，二者同时被沉默后，会导致茉莉酸的
积累［13］。
前期研究发现，拟南芥 CPK10 参与对干旱胁迫
的响应，通过 ABA及钙离子介导了对气孔运动的调
节［5］。在干旱处理条件下，Atcpk10 突变体比野生型
叶片失水萎蔫明显。拟南芥 CDPK 家族中，
AtCPK30 与 AtCPK10 属于同一亚家族，且序列相似
性为家族最高，有研究显示 AtCPK30 参与了拟南芥
幼苗期 ABA等激素信号途径［14］，而在应答逆境方
面的研究未见报道。是否高度同源性的 AtCPK30
与 AtCPK10 基因存在相似或冗余的功能，这 2 个基
因在同时缺失的情况下，对于逆境会发生怎样的表
型变化，它们在参与逆境过程中的作用有什么相关
性，这些问题都尚不清楚。本研究分别以 CPK10 基
因及 CPK30 基因单突变体为父母本，通过单突变体
杂交获得双突变体，结合生理表型及逆境相关基因
检测，为深入探讨 AtCPK10 及 AtCPK30 在非生物逆
境中的功能提供理论依据。
1 材料和方法
1． 1 试验材料
拟南芥 cpk10(SALK_082441)及 cpk30(SALK_
087240)T-DNA插入突变体自 SALK 库购得。植物
总 ＲNA提取试剂、反转录酶、Taq 聚合酶、dNTP 等
购自大连宝生物公司(TaKaＲa);胶回收试剂盒等购
自天根生物科技公司(Tiangen) ;质粒提取试剂盒购
自北京全式金生物技术(TransGen Biotech)有限公
司。植物激素 ABA、MOPS 等购自 Sigma 公司。其
他化学药品为进口或国产分析纯试剂。
1． 2 植物材料培养方法
1． 2． 1 植物材料培养 首先用 0． 5%次氯酸钠消
毒液(0． 5%(V /V)NaClO + 0． 01%(V /V)Triton X-
100)对拟南芥(Arabidopsis thaliana)种子进行消毒
处理，4 ℃黑暗处理 2 ～ 3 d，之后播种于 MS 培养基
上生长约 7 d。将幼苗移栽到土壤(蛭石 ∶ 营养土
1 ∶ 1 ～ 1 ∶ 2)中培养(用透明塑料膜覆盖保湿 4 ～5 d)。
温室培养条件为:光 /暗周期为 16 h /8 h，温度 22 ℃，
湿度 60%，光照强度 80 ～ 100 μmol /(m2·s)。
1． 2． 2 杂交试验 采用常规的人工杂交方法获得
双突变体。选取纯合单突变体作为亲本，杂交前去
除母本已长角果和已开花以及未开花的花瓣和雄
蕊，将父本的花粉涂布在母本未沾花粉的柱头上。
授粉 10 h后柱头毛萎蔫，3 d后角果形成并伸长，即
为杂交成功。对杂交子代 F1 进行 PCＲ检测，获得 2
个目的基因均杂合的个体，然后进行自交，分别从
DNA和 ＲNA水平对 F2 进行纯合鉴定，最终获得纯
合体。
1． 2． 3 逆境生理表型试验 种子萌发阶段表型筛
选:将各种基因型的种子播种在 MS 筛选培养基上。
每种筛选浓度均进行 3 次重复试验。播种好的培养
皿竖直放于温室中培养，定期交换摆放位置，排除位
置效应可能对试验结果产生影响。培养 14 d 观察
并照相。
幼苗阶段表型筛选:播种于 MS 培养基上的种
子，竖直培养 4 d。选取不同基因型长势相同的幼苗
移栽到 MS筛选培养基上。每种筛选浓度均进行 3
次重复试验。培养条件同上。生长 14 d，观察照相。
成苗阶段表型筛选:温室培养钵中生长 21 d 左
右的幼苗，进行干旱、高盐处理。定期交换培养钵位
置，避免位置效应对试验结果造成影响，观察植株长
势并照相。
1． 3 分子试验相关方法
1． 3． 1 T-DNA 插入检测 参照 CTAB 法提取成熟
叶片基因组 DNA，T-DNA插入突变体的鉴定引物依
据 Signal 网站(http:/ / siganl． salk． edu / tdnaprimers．
html)的方法设计。以基因组 DNA 为模板，不同引
物组合进行 PCＲ扩增，检测其 T-DNA插入情况。
1． 3． 2 总 ＲNA 的提取及 ＲT-PCＲ 利用 TＲIzol 方
法提取成熟叶片 ＲNA，以反转录所得 cDNA 为模板
扩增拟南芥组成型表达的持家基因 EF1a，通过调整
模板的加入量使得 EF1a基因电泳检测时条带亮度
基本一致。扩增目的基因，观察分析目的基因的亮
度变化。
1． 4 引物设计与合成
PCＲ引物由上海生工通过 PAGE 纯化方式合
成，各引物名称及序列如表 1 所示。
2 结果与分析
2． 1 F1 cpk10 × cpk30 双突变杂合体的获得
拟南芥 CDPK家族中，CPK30 与 CPK10 的序列
相似性为86%。是否这二者共同参与了幼苗期植
96 华 北 农 学 报 31 卷
表 1 引物序列
Tab． 1 Sequences of primers
引物名称
Primer name
引物序列
Primer sequence
CPK10TF 5-ATCCTGATCCGACTAAGCG-3
CPK10TＲ 5-CCAACAATCCGACTCAGAA-3
LBa1 5-TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG-3
CPK30TF 5-ATCCTGATCCGACTAAGCG-3
CPK30TＲ 5-CCAACAATCCGACTCAGAA-3
CPK10Full-F 5-ATGGGTAACTGTAACGCCTG-3
CPK10Full-Ｒ 5-TTAAACAGGAACAGTTTGTCCA-3
CPK30Full-F 5-ATGGGTAATTGTATCGCCTG-3
CPK30Full-Ｒ 5-TCAAACTGCAATAGATTGTCCA-3
EF1α-F 5-ATGCCCCAGGACATCGTGATTTCAT-3
EF1α-Ｒ 5-TTGGCGGCACCCTTACGTGGATCA-3
ＲD29A-F 5-CACTCAACACACACCAGC-3
ＲD29A-Ｒ 5-CAGAAAGCAGAGAGACCG-3
OST1-F 5-AGGGAGATAATCAACCACA-3
OST1-Ｒ 5-GGCGACATTCAGGAGATA-3
ABA3-F 5-GTTGCTTATTCACCTCCG-3
ABA3-Ｒ 5-GCATCATTCCGTACAAGG-3
MYB2-F 5-AACTCAAACTCTCCAACACA-3
MYB2-Ｒ 5-TGACTCCACTTGTTCACAC-3
株响应逆境的过程，通过纯合单突变体杂交，构建
cpk10 × cpk30 的双突变体，以 cpk10 × cpk30 杂交 F1
各株基因组 DNA 为模板检测和筛选两基因的杂合
体，利用 CPK30TF/LBa1 进行 PCＲ扩增，只有 cpk10 ×
cpk30 双突变杂合体能够扩增出条带。本试验随机
选取约 40 棵 F1 植株进行检测，其中 1，6，36，38 号
植株为 cpk10 × cpk30 双突变杂合体，如图 1 所示。
图 1 双突变 F1杂合体鉴定
Fig． 1 Identification of the double mutant in F1
2． 2 F2 双突变纯合体筛选
F1 杂合体自交后，获得 4 个 F2 株系分别标记
为:H1、H6、H36、H38。对这 4 个株系进行 DNA 水
平鉴定以获得纯合的双突变体。首先检测 CPK10
基因的纯合情况。如果以 CPK10TF和 CPK10TＲ引
物对进行 PCＲ扩增，杂合体与野生型植株一样可以
扩增出 CPK10 基因的片段;利用 LBa1 与 CPK10TF
组成引物对扩增，杂合体与纯合体植株均能扩增出
条带。利用上述 PCＲ方法对 H1(24 个植株样品)、
H6(24 个样品)、H36(6 个样品)以及 H38(18 个样
品)4 个株系的材料分别进行了 CPK10 基因鉴定
(图 2-A)。结果显示，H1 株系的 10 棵植株;H6 株
系的 3 棵植株;H36 株系的 4 号植株;H38 株系的 5
棵植株为 cpk10 纯合突变体(图 2-A)。
经鉴定为 CPK10 基因插入纯合的植株再进行
CPK30 基因的插入突变鉴定。分别利用 CPK30TF
和 CPK30TＲ、CPK30TF 和 LBa1 2 对引物搭配进行
PCＲ扩增。确定 H1 株系中 1，3，4 号植株;H38 株
系中 5，7，13，15，17 号植株;H36 的 4 号植株为 DNA
水平上 cpk10 × cpk30 双突变纯合体(图 2-B)。
A． F2 双突变纯合体 CPK10 基因纯合鉴定;B． F2 双突变纯合体 CPK30 基因纯合鉴定。
A． Identification of the CPK10 mutant in F2 generation;B． Identification of the CPK30mutant in F2 generation．
图 2 F2 双突变纯合体筛选电泳图
Fig． 2 Electrophoresis pattern of CPK10 /CPK30 double mutant in F2 generation
4 期 谢鑫等:拟南芥 CPK10 /CPK30 双突变体的构建及表型分析 97
2． 3 F3纯合双突变体的筛选
DNA水平上确定为 CPK10 和 CPK30 基因双突
变的纯合体，接下来通过 ＲT-PCＲ 技术，在 ＲNA 水
平检查 2 个基因的转录情况。野生型材料中能检查
到特异扩增出的 CPK10 与 CPK30 基因片段(图 3);
cpk10 单突变体中能检测到 CPK30 基因的片段，而
没有扩增出 CPK10 基因的特异性条带;cpk30 突变
体材料中能够扩增出 CPK10 特异片段，而不能扩增
出 CPK30 基因片段;双突变体材料中 CPK10 与
CPK30 2 个基因的目的片段都不能扩增出来。由以
上结果得出，H1 株系的 4 号植株为 cpk10 × cpk30 的
双突变纯合体。
图 3 ＲT-PCＲ鉴定双突变纯合体
Fig． 3 ＲT-PCＲ analysis of cpk10 × cpk30 double mutant
2． 4 双突变的表型筛选
2． 4． 1 萌发期表型观察 在含有 ABA 的 MS 筛选
培养基上，双突变体与单突变体均未见与野生型明
显差异的表型。在 MS培养基中加入 Mannitol，观察
各基因型在渗透物质处理条件下种子萌发情况，同
样没有发现 cpk10 × cpk30 双突变体与 cpk10、cpk30
植株及野生型有明显差异(图 4)。将双突变体种子
播种在含有 100 mmol /L NaCl 的 MS 筛选培养基上
(图 4)，与正常培养基相比，双突变体、单突变体及
野生型都表现为冠小发黄、根短;几种材料与野生型
图 4 双突变在处理培养基上种子萌发表型观察
Fig． 4 Germination phenotype of double
mutant on treatment medium
相比无明显差异。表型检测结果表明，在种子萌发
阶段 CPK10 与 CPK30 可能不是拟南芥响应逆境胁
迫过程中的关键基因。
2． 4． 2 萌发后表型观察 把 MS 培养基上长势相
同的幼苗移到含有不同浓度的渗透物质(Manni-
tol)、ABA、NaCl的处理培养基上，双突变体、单突变
体与野生型之间长势基本相同，无明显差异(图 5)。
这表明 CPK10、CPK30 基因的敲除，并没有使植株
对以上逆境的应答发生改变，证明这 2 个基因不是
拟南芥幼苗生长期响应上述逆境的关键因子。
图 5 各基因型材料在处理培养基上表型观察
Fig． 5 Phenotype analysis of mutants
seedlings on treatment medium
2． 4． 3 成苗期表型观察 正常生长 14 d 后的幼苗
经干旱处理后，双突变体表现出与单突变体相似的
干旱敏感表型:叶片萎蔫，茎秆倒伏(图 6)。CPK10
基因的缺失会导致植株耐旱能力减弱［11］，双突变体
也变现同样的表型，说明 CPK30 基因的缺失并没有
使双突变体比 cpk10 对干旱更敏感。
图 6 双突变体成苗期干旱胁迫表型观察
Fig． 6 Phenotype analysis of double mutants
in response to drought treatment
2． 5 干旱相关基因转录水平分析
为了探讨 CPK10 /CPK30 是否共同参与了响应
98 华 北 农 学 报 31 卷
干旱胁迫的信号转导过程，本研究通过双突变体、单
突变体及野生型植株进行干旱处理，利用 ＲT-PCＲ
技术对干旱逆境信号通路的关键基因表达情况进行
了分析。对成苗莲座叶片进行 0，0． 5，1． 0，3． 0 h 的
干旱处理，ＲT-PCＲ结果显示，干旱胁迫响应的关键
基因 ＲD29A，随着时间的变化在野生型及单突变体
中呈现明显的上升趋势，而在双突变体中呈现明显
的下降趋势(图 7)，表明 CPK10 /CPK30 基因与水分
胁迫响应相关。OST1 是依赖于 ABA的干旱胁迫信
号途径的关键基因。通过检测发现，双突变体中
OST1 基因在干旱处理 0． 5 h 时表达量增加，而后又
逐渐恢复到原来的水平;而在野生型与单突变体中
OST1 的表达量并没有明显变化(图 7)。这预示着
CPK10 与 CPK30 基因可能共同参与了 ABA 依赖的
干旱胁迫信号转导过程。那么，在该信号途径中这
2 个基因是否参与了对 ABA 合成的调控。接下来，
选择了 ABA合成关键基因 ABA3 和转录因子 MYB2
作为标记基因，结果显示这 2 个基因在干旱处理下
的表达趋势在 4 种不同材料中并没有明显差异(图
7)，推测 CPK10 与 CPK30 可能在植株响应干旱胁
迫过程中只参与 ABA 信号的转导，并未参与 ABA
的合成。
图 7 干旱逆境标记基因的 ＲT-PCＲ分析
Fig． 7 ＲT-PCＲ analysis of drought stress-related genes
3 讨论
对于多基因家族，一些成员表现为功能冗余，可
使得植物对不良环境做出适应性调整。CDPKs 家
族成员在植物响应非生物逆境过程中发挥着重要作
用，有些核心 CDPKs 对植物生存至关重要，序列同
源性较高的 CDPK 基因，功能相似或冗余的可能性
较大，如拟南芥 CPK4、CPK5、CPK6 和 CPK11 几个
成员共同参与调控早期 MAMP 信号途径中基因的
表达，4 个成员同时缺失的突变体对 flg22 的抗性明
显减弱［15］。马铃薯 StCDPK4 和 StCDPK5 共同参与
对 NADPH 氧化酶的磷酸化，进而促使活性氧爆
发［16］。AtCPK4、AtCPK11［11］、AtCPK10、AtCPK30 和
AtCPK32［17］都能通过转录因子 ABF4 调控植物对
ABA的响应。AtCPK10 与 AtCPK30 具有高度的序
列相似性，本研究通过构建二者的 T-DNA插入双突
变体，进而分析探讨二者响应非生物逆境方面的功
能。结果表明，幼苗期各种处理条件下双突变体与
野生型无差异;成苗时期干旱处理条件下，双突变体
与 cpk10 单突变体没有表型差异。由表型检测结果
推测，在植株成苗期对干旱逆境的应答过程中，
CPK10 和 CPK30 二者并不存在功能冗余。接下来
的转录水平检测显示，CPK30 参与了对干旱逆境的
应答，表型检测和转录水平检测结果的不一致性，暗
示着在应答干旱逆境过程中，可能还有该家族的其
他成员发挥功能。
CDPK属于钙受体激酶，逆境胁迫引发的钙信
号经 CDPK传递给下游哪些蛋白，这是探讨 CDPK
作用机制的关键所在。AtCPK10 和 AtCPK30 是 CD-
PK家族中最早报道的正向调控 ABA信号的蛋白因
子［18 － 19］。本研究结果显示，CPK10 /CPK30 在植株
响应干旱胁迫过程中参与 ABA信号的转导过程，这
与前人研究结果一致。体外试验证明，AtCPK10、
AtCPK30 都能通过转录因子 ABF4 调控植物对 ABA
的响应，表明 CDPK介导的 ABA信号的转录调控可
能是通过转录因子 ABFs 起作用。体内试验也证实
了这一点:AtCPK32 可以体内激活 ABF4 并启动下
游基因的表达［17］。AtCPK4、AtCPK11 可以调控
ABF1 和 ABF4 而影响逆境基因的表达，cpk4 /cpk11
双突变体表现出耐旱力减弱，双突变体中 ABA响应
的基因表达受到影响［11］。同样水稻的 OsCPK21［20］
过表达后，ABA 响应基因会因 ABFs 活性变化而改
变。CPK10［5］与 CPK30［14］二者均定位于细胞膜，它
们在体内是否会直接影响到细胞核中 ABFs 的活
4 期 谢鑫等:拟南芥 CPK10 /CPK30 双突变体的构建及表型分析 99
性，它们如何通过磷酸化作用将干旱逆境信号向下
传递，这是我们将来进一步探讨的方向。
通过杂交获得 cpk10 × cpk30 双突变体;表型检
测得出，在种子萌发过程和幼苗时期 CPK10 和
CPK30 可能不是参与非生物逆境响应的关键蛋白;
在植株成苗期二者参与干旱胁迫响应，并在依赖
ABA的逆境响应信号途径中发挥功能。
参考文献:
［1］ Qin L X，Nie X Y，Hu Ｒ，et al． Phosphorylation of serine
residue modulates cotton Di19-1 and Di19-2 activities for
responding to high salinity stress and abscisic acid signa-
ling［J］． Scientific Ｒeports，2016，6:20371．
［2］ Urao T，Katagiri T，Mizoguchi T，et al． Two genes that en-
code Ca2 + dependent protein kinases are induced by
drought and high-salt stresses in Arabidopsis thaliana［J］．
Molecular ＆ General Genetics，1994，244(4):331 － 340．
［3］ Zhao Ｒ，Sun H，Zhao N，et al． The arabidopsis Ca2 + de-
pendent protein kinase CPK27 is required for plant re-
sponse to salt-stress［J］． Gene，2015，563(2):203 － 214．
［4］ Zou J J，Li X D，Ｒatnasekera D，et al． Arabidopsis calci-
um-dependent protein KINASE8 and CATALASE3 func-
tion in abscisic Acid-Mediated signaling and H2O2 home-
ostasis in stomatal guard cells under drought stress［J］．
The Plant Cell，2015，27(5):1445 － 1460．
［5］ Zou J J，Wei F J，Wang C，et al． Arabidopsis calcium-de-
pendent protein kinase CPK10 functions in abscisic acid-
and Ca2 + -mediated stomatal regulation in response to
drought stress［J］． Plant Physiology，2010，154(3):1232 －
1243．
［6］ Jiang S，Zhang D，Wang L，et al． A maize calcium-de-
pendent protein kinase gene，ZmCPK4，positively regula-
ted abscisic acid signaling and enhanced drought stress
tolerance in transgenic Arabidopsis［J］． Plant Physiology
and Biochemistry，2013，71:112 － 120．
［7］ Dubrovina A S，Kiselev K V，Khristenko V S，et al．
VaCPK20，a calcium-dependent protein kinase gene of
wild grapevine Vitis amurensis Ｒupr．，mediates cold and
drought stress tolerance［J］． Journal of Plant Physiology，
2015，185:1 － 12．
［8］ Vivek P J，Tuteja N，Soniya E V． CDPK1 from ginger pro-
motes salinity and drought stress tolerance without yield
penalty by improving growth and photosynthesis in Nicoti-
anatabacum［J］． PLoS One，2013，8(10) :e76392．
［9］ Asano T，Hayashi N，Kobayashi M，et al． A rice calcium-
dependent protein kinase OsCPK12 oppositely modulates
salt-stress tolerance and blast disease resistance［J］． The
Plant Journal:for Cell and Molecular Biology，2012，69
(1) :26 － 36．
［10］ Franz S，Ehlert B，Liese A，et al． Calcium-dependent pro-
tein kinase CPK21 functions in abiotic stress response in
Arabidopsis thaliana［J］． Molecular Plant，2011，4(1) :
83 － 96．
［11］ Zhu S Y，Yu X C，Wang X J，et al． Two calcium-depend-
ent protein kinases，CPK4 and CPK11，regulate abscisic
acid signal transduction in Arabidopsis［J］． The Plant
Cell，2007，19(10) :3019 － 3036．
［12］ Gutermuth T，Lassig Ｒ，Portes M T，et al． Pollen tube
growth regulation by free anions depends on the interac-
tion between the anion Channel SLAH3 and calcium-de-
pendent protein kinases CPK2 and CPK20［J］． The
Plant Cell，2013，25(11) :4525 － 4543．
［13］ Hettenhausen C，Yang D H，Baldwin I T，et al． Calcium-
dependent protein kinases，CDPK4 and CDPK5，affect
early steps of jasmonic acid biosynthesis in Nicotiana-
tabacum［J］． Plant Signaling ＆ Behavior，2013，8(1) :
e22784．
［14］ Yuan X，Deng K Q，Zhao X Y，et al． A calcium-depend-
ent protein kinase is involved in plant hormone signal
transduction in Arabidopsis［J］． Journal of Plant Physiol-
ogy and Molecular Biology，2007，33(3) :227 － 234．
［15］ Boudsocq M，Willmann M Ｒ，Mccormack M，et al． Differ-
ential innate immune signalling via Ca2 + sensor protein
kinases［J］． Nature，2010，464(7287):418 － 422．
［16］ Witte C P，Keinath N，Dubiella U，et al． Tobacco calci-
um-dependent protein kinases are differentially phospho-
rylated in vivo as part of a kinase cascade that regulates
stress response［J］． The Journal of Biological Chemistry，
2010，285(13) :9740 － 9748．
［17］ Choi H I，Park H J，Park J H，et al． Arabidopsis calcium-
dependent protein kinase AtCPK32 interacts with ABF4，
a transcriptional regulator of abscisic acid-responsive
gene expression，and modulates its activity［J］． Plant
Physiology，2005，139(4) :1750 － 1761．
［18］ Simeunovic A，Mair A，Wurzinger B，et al． Know where
your clients are:subcellular localization and targets of
calcium-dependent protein kinases［J］． Journal of Exper-
imental Botany，2016，67(13) :3855 － 3872．
［19］ Sheen J． Ca2 + -dependent protein kinases and stress sig-
nal transduction in plants［J］． Science，1996，274
(5294):1900 － 1902．
［20］ Asano T，Hakata M，Nakamura H，et al． Functional char-
acterisation of OsCPK21，a calcium-dependent protein
kinase that confers salt tolerance in rice［J］． Plant Mo-
lecular Biology，2011，75(1 /2) :179 － 191．