全 文 ：收稿日期:2015-03-24; 修订日期:2015-07-10
基金项目:国家科技部支撑课题(No． 2011BAI101B09)
作者简介:肖 岚(1983-)，女(汉族)，湖南长沙人，湖南中医药大学药学院
讲师，硕士学位，主要从事中药炮制理论及中药资源质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:刘塔斯(1952-) ，女(汉族) ，湖南长沙人，湖南中医药大
学药学院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事中药资源及其质量
控制研究工作．
玉竹化感作用的初步研究
肖 岚，刘应蛟，徐 贝，喻亚飞，刘塔斯*
(湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208)
摘要:目的 探讨玉竹连作障碍产生的原因和建立合理的轮作制度。方法 以油菜、玉米、大蒜和根腐病原菌为受体材料，
进行种子萌发生长实验和菌丝生长测定。结果 0． 1g /ml玉竹根茎水浸提液对受体种子发芽率、胚根、胚芽长均有极显著
的抑制作用;0． 0125g /ml玉竹根茎水浸提液对受体种子发芽率的影响不明显，玉竹根茎水浸液对根腐病茄镰孢菌具有化
感促进作用。结论 玉竹根茎水浸提液对受体植物和根腐病害有化感作用。
关键词:玉竹; 水浸液; 化感作用; 种子萌发; 菌丝生长
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 10． 079
中图分类号:S567 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)10-2510-02
化感作用是植物通过淋溶、挥发、残茬降解和根系分泌向环
境中释放化学物质，从而对自身或周围其他植物的生长产生影响
的现象［1］。化感作用普遍存在于自然界，中草药栽培过程 60%
以上根茎类药材都存在着连作障碍现象，如当归、西洋参等中草
药的连作障碍与化感作用有关［2，3］。另外，由于化感作用存在于
大多数植物中，植物根分泌物直接或间接地影响植物病原菌，主
要的作用在于抵消土壤的抑菌作用，诱变病原体繁殖体萌发，致
使植物病害加剧［4］。近些年来，对于药用植物的化感作用的研
究愈来愈引起关注，对于科学进行复合系统中植物配置、合理安
排耕作制度和采取有效栽培措施，促进生物多样性和农业可持续
发展意义重大。在当今国内外对玉竹的研究中，针对玉竹药性、
药理、种植技术、加工技术的研究居多，而对于玉竹连作不能超过
3年或者连作之后根腐病发病率高的原因是否与化感作用有关，
尚无人探讨。本研究拟通过常规化感作用生物测定的方法研究
玉竹根系分泌物对受体植物种子萌发、幼苗生长和根腐病病原菌
(茄镰孢菌)的化感效应，明确玉竹分泌物对受体作用的化感作
用和对茄镰孢菌的化感促进作用，为揭示玉竹连作障碍产生机
理、建立合理的耕作制度奠定理论基础。
1 材料与仪器
1． 1 材料 受体材料为湘玉竹营养期根茎，2014 年 10 月采挖于
湖南省邵东县国家级玉竹 GAP 规范化种植基地，经湖南中医药
大学中药鉴定教研室主任刘塔斯教授鉴定为百合科植物玉竹
Polygonatum odoratum(Mill．)Druce 的干燥根茎及须根。因玉竹
在秋季后出现“倒苗”，且在玉竹基地有种植过某些其他作物不
受影响，故受体材料选定为当地普遍种的大蒜、油菜、玉米作为对
比。受体种子均购于湖南省长沙市含浦镇学士生蔬市场。
受体病原菌，由课题组成员于 2014 年 6 月自行分离获得，并
经湖南农业大学植物保护学高必达教授鉴定为茄镰孢菌 Fusari-
um solani．属半知菌属亚门真菌。
1． 2 仪器 仪器:DZX － 1(6050B)真空干燥箱、ＲE － 52CS 型旋
转蒸发仪、AB104 － N 型电子天平、KQ500DE 型超声波清洗仪、
FZ102 型粉碎机、BPX － 52 型电热恒温培养箱。
1． 3 培养基 马铃薯葡萄糖培养基(PDA)。
2 方法
2． 1 玉竹根茎水浸液的制备 将玉竹鲜材料冲洗干净，自然晾干
后粉碎，过 40 目筛，称取 100g粉末放进大烧杯中，加入 500ml蒸
馏水进行浸泡。把大烧杯放进恒温摇床中，在 25℃超声清洗仪
中超声浸泡 24h。把浸泡液倒出，连续自然过滤两次后就得到浓
度为 1∶ 5(0． 2g /ml)玉竹水浸提液，存于 4℃冰箱备用。采用倍
量稀释法，稀释成 0． 1000、0． 0500、0． 0250 和 0． 0125 g /ml浓度梯
度的玉竹水浸提物，进行生物学测定。
2． 2 带药培养基的配制 将 PDA 培养基加热融化，冷却至 50℃
左右，每个培养皿内分别加 1ml 不同浓度的玉竹根茎水浸液，另
加约 9ml培养基，混匀后备用。每浓度处理 3 次重复，另设一组
加入 1ml灭菌后的蒸馏水作为空白对照(CK)。
2． 3 玉竹根茎水浸提液对种子萌发的影响 在培养皿(大蒜采
用直径 15cm，其他种子采用直径 9 cm)底部垫放 2 张滤纸，于
105℃高温灭菌;油菜、玉米和大蒜种子用 0． 3%高锰酸钾溶液消
毒 10min后，在相应无菌培养皿内各均匀摆放 40 粒(大蒜 15
粒) ，每皿分别加入 10ml(大蒜加入 20 ml)不同浓度的玉竹水浸
液，以蒸馏水作为对照。重复 3 次，置于光照培养箱培养，温度
25℃，光照时间为 12 h /d。培养过程中所有处理定时补充适量蒸
馏水，保持纸床湿润。从种子萌发之日开始记录萌发种子数，每
24 h观察记录一次，直至种子不再萌发。96 h后测量种子的胚根
和胚芽长度。
2． 4 玉竹根茎水浸提液对玉竹根腐病菌菌丝生长的影响 采用
菌丝生长速率法测定玉竹根系分泌物对根腐病镰孢菌菌丝生长
的影响。用打孔器(直径为 3mm)取菌落边缘长势一致的菌丝，
接入到添加不同浓度量的玉竹根茎浸提液的 PDA 平板中。25℃
培养，3d、5d和 7d 后分别测定菌落直径大小。每个处理 3 个重
复，空白处理作为对照。
2． 5 数据分析 发芽率(%)=(发芽种子个数 /供试种子数)×
100
发芽指数(GI)=∑(Gt /Dt)。Gt为发芽第 t 天时的发芽数，
Dt为相应的发芽天数。化感作用评价采用 Williamson G B［5］
(1988)等的方法，应用化感作用效应指数(ＲI) ，公式如下:
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 10
式中:C －对照值，T －处理值，ＲI －化感作用效应指数。ＲI
＞ 0 时为促进作用，ＲI ＜ 0 时为抑制作用。绝对值的大小与作用
强度一致。
试验数据先经 Excel2007 处理，再用 SPSS 17． 0 统计分校软
件利用单因素方差分析结合多重比较，分析受体种子的发芽数、
胚根、胚芽长度的差异以及菌丝直径大小。
3 结果
3． 1 对种子萌发的影响 由表 1 可知，随着浓度的增高，玉竹根
茎水浸提液对油菜、玉米、大蒜种子的萌发抑制作用在逐渐增强;
对于大蒜种子萌发抑制作用最显著(P ＜ 0． 01) ，与高浓度组比
较，浓度为 0． 05g /ml和 0． 025g /ml 时对于油菜种子萌发率的影
响差异不显著，无统计学意义(P ＞ 0． 05)。各浓度玉竹根茎水浸
提物对胚根长有较强抑制作用，浓度为 0． 1000g /ml 时，对油菜、
玉米、小麦均表现出极显著的抑制作用，化感效应指数 ＲI分别为
－ 0． 79，－ 0． 81 和 － 0． 68。
表 1 玉竹根茎水浸提液对不同受体作物的化感效应
受体
作物
处理浓度
/g·ml － 1
萌发率 /%
均数差 ＲI
胚根长 /mm
均数差 ＲI
胚芽长 /mm
均数差 ＲI
CK 92． 5 － 4． 00 － 2． 73 －
0． 1000 45． 83 － 0． 50 0． 83 － 0． 79 0． 33 － 0． 87
油菜 0． 0500 63． 33 － 0． 31 1． 50 － 0． 62 0． 66 － 0． 75
0． 0250 72． 50 － 0． 21 2． 33 － 0． 42★★ 3． 00 0． 05★
0． 0125 85． 83 － 0． 31★★ 6． 66 0． 39★★ 4． 66 0． 40★★
CK 61． 16 － 7． 00 － 3． 331 －
0． 1000 24． 16 － 0． 65 1． 33 － 0． 81 0． 83 － 0． 75
玉米 0． 0500 34． 16 － 0． 50 2． 00 － 0． 71 2． 16 － 0． 35
0． 0250 56． 66 － 0． 18★★ 5． 83 － 0． 16★★ 5． 33 0． 35★
0． 0125 73． 33 － 0． 06★★10． 6 0． 33★★ 7． 90 0． 57★★
CK 86． 66 － 18． 16 － 13． 33 －
0． 1000 15． 55 － 0． 82 5． 50 － 0． 68 3． 66 － 0． 72
大蒜 0． 0500 35． 5 － 0． 59★★11． 00 － 0． 36★ 3． 65 － 0． 72
0． 0250 71． 1 － 0． 18★★18． 00 0． 04★ 14． 66 0． 07★
0． 0125 95． 55 － 0． 09★★20． 33 0． 15★★17． 66 0． 24★★
玉竹根茎水浸提液浓度为 0． 025g /ml时，对大蒜胚根生长的
有轻微促进作用(ＲI = 0． 04) ，对油菜、玉米根的生长则表现为较
明显的抑制作用(ＲI 分别为 － 0． 42 和 － 0． 16) ;但是当浓度为
0． 0125g /ml时则不同程度地促进各受体作物胚根生长，并且与
高浓度处理组相比差异显著(P ＜ 0． 01) (图 1)。随着浓度的增
高，玉竹根茎水浸提液对油菜、玉米、大蒜种子的胚芽生长呈现出
“高抑低促”现象，大蒜表现最明显，油菜、玉米变化不大;浓度低
于 0． 05g /ml时对大蒜胚芽生长促进作用最显著( (P ＜ 0． 01) )
(图 2)。
图 1 玉竹水提液对受体种子胚根长的影响
3． 2 对菌丝生长的影响 由表 2 和图 3 可知，玉竹根茎水浸提液
各处理浓度对根腐病原菌茄镰孢菌菌丝生长具有促进作用，其化
感效应随培养时间逐渐减弱。处理浓度为 0． 10g /ml 时，对茄镰
孢菌菌丝生长正向刺激作用最显著，接种后培养 3d、5d 和 7d，ＲI
值分别为 0． 25、0． 11 和 0． 21。与高浓度组比较，接种 3d 时各处
理浓度对茄镰孢菌菌丝生长的化感作用差异显著(P ＜ 0． 01)。
图 2 玉竹水提液对受体种子胚芽长的影响
表 2 玉竹根茎水浸提液对茄镰孢菌菌丝生长的影响
处理
浓度
3d
菌落直径
/mm
ＲI
5d
菌落直径
/mm
ＲI
7d
菌落直径
/mm
ＲI
CK 13． 56 － 22． 56 26． 33
0． 1000 18． 33 0． 25 22． 50 0． 11 33． 50 0． 21
0． 0500 13． 33 － 0． 02★★ 24． 50 0． 08 31． 50 0． 16
0． 0250 10． 83 － 0． 20★★ 21． 50 － 0． 70★★ 28． 76 0． 08★★
0． 0125 8． 83 － 0． 35★★ 13． 66 － 0． 39★ 18． 83 － 0． 28★
图 3 玉竹水提液对茄镰孢菌菌丝生长的影响
4 讨论
化感物质的浓度效应是化感作用研究的一个重要内容，同一
化感物质对同一植物，浓度高低不同时，则会产生抑制或促进两
种截然不同的作用，一般情况下，随着浓度的降低，化感物质的抑
制或促进作用会逐渐减弱、消失［6］。本研究中，玉竹根茎水浸提
液各处理浓度对油菜、玉米、大蒜的种子萌发、胚根根长及胚芽长
均表现出不同的化感效应(促进、抑制或无显著性影响)说明玉
竹所含的次生代谢物的化感潜力不同，在高浓度处理下(0． 10g /
ml)对于三种作物种子发芽率均有较强抑制作用;不同处理浓度
对大蒜的正向化感效应最明显。因此，长期种植玉竹的土地宜与
油菜、玉米、大蒜多种作物进行轮番耕作。同等条件下，可以优先
考虑玉竹与大蒜进行间作。当处理浓度为 0． 10g /ml 时，对茄镰
孢菌菌丝生长正向刺激作用最显著，可见玉竹自身化感物质可以
作为根腐病菌的营养来源，刺激病菌生长，连作可以使玉竹自身
的化感物质在根际土壤中积累，为病菌生长提供适宜的根际环境
和良好的繁殖条件，原菌数量不断增加，从而导致根腐病蔓延。
但由于实验时间较短，对于玉竹自身幼苗生长的影响还没有体现
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 10 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 10 期
出来，到底是何种原因，尚需深入研究。
参考文献:
［1］ 孔垂华，胡 飞．植物化感作用及其应用［M］．北京:中国农业出版
社，2001．
［2］ 张新慧，张恩和．不同茬口对当归根际微生物数量及产量的影［J］．
中草药，2008，39(2) :267．
［3］ 王玉萍，赵杨景，杨峻山，等．西洋参根系分泌物的初步研究［J］．中
国中药杂志，2005，30(3) :229．
［4］ 陆雅海，张福锁．根际微生物研究进展［J］．土壤，2006，38(2) :113．
［5］ Willamson GB，Ｒichardson D． Bioassays for allelopathy Measuring
treatment responses with independent controls［J］． J Chem Ecol，1988，
14(1) :181．
［6］ 张新慧，郎多勇，张恩和．当归根际土壤水浸液的自毒作用研究及
化感物质的鉴定［J］．中草药，2010，41(12) :2063．
收稿日期:2014-03-30; 修订日期:2015-07-07
基金项目:港澳台科技合作专项项目(2014DFH30010)
作者简介:帅银花(1967-) ，女(汉族) ，江西南昌人，中山火炬职业技术学
院副主任药师，学士学位，主要从事中药提取与分离及质量研究工作．
* 通讯作者简介:李远彬(1984-) ，男(汉族) ，广东河源人，广州中医药大
学博士研究生，博士学位，主要从事中药新药研究工作．
不同部位黄藤果实中血竭素的含量比较研究
帅银花1，李远彬2* ，陈燕燕2，袁凯伦2，赖小平2
(1．中山火炬职业技术学院，广东 中山 528436; 2．广州中医药大学，广东 广州 510006)
摘要:目的 建立高效液相色谱测定黄藤果实中血竭素含量的方法，比较分析不同部位黄藤果实中血竭素的含量。方法
HPLC法测定黄藤果实中血竭素的含量(Waters Atlantis dC18色谱柱(250mm × 4． 6mm，5μm) ，流动相为乙腈 － 0． 05mol /L
磷酸二氢钾溶液(50∶ 50) ，流速为 1． 0 ml·min －1，检测波长为 440nm。结果 血竭素高氯酸盐在 0． 009 ～ 0． 090mg·ml －1
范围内线性关系良好(r = 0． 9998) ，平均回收率为 101． 20%，ＲSD = 1． 93%;5 个不同产地黄藤果实中的血竭素含量为 0．
186 ～ 0． 796 mg·g －1，果皮中血竭素含量在 0． 861 ～ 3． 811mg /g，果肉未检出血竭素。结论 黄藤果实中所含血竭素主要
来自果皮部位，开发应用前景广阔。
关键词:黄藤; 血竭素; 果实; 高效液相色谱法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 10． 080
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2015)10-2512-02
黄藤 Daemonorops margaritae (Hance)Becc．为属棕榈科黄藤
属植物黄藤。目前对黄藤的研究尚少，黄藤植物与血竭的植物来
源相近，同时研究发现黄藤果实里面含有血竭素成分，具有重要
药用开发价值［1，2］。血竭为传统名贵中药，被誉为“活血之圣
药”，具有活血定痛、化瘀止血、敛疮生肌的功效。目前临床中使
用的血竭主要分为进口血竭和国产血竭［3，4］。进口血竭，俗称
“麒麟竭”，是由东南亚热带地区进口的棕榈科黄藤属麒麟竭
Daemonorops draco Bl．果实分泌的树脂，血竭素是其主要药效成
分之一;国产血竭，即“龙血竭”是主产于广西、云南、海南等地，
来自于龙舌兰科植物剑叶龙血树植物 Dracaena cochinchinensis S．
C． Chen含脂木材提取得到的树脂。2010 版《中国药典》中收载
的血竭为棕榈科麒麟竭果实的树脂［5］，价格高昂，阻碍其医药中
的应用，同时国内医药市场对国产血竭(龙血竭)需求的不断扩
大和对龙血树野生源的掠夺性采伐和环境的破坏，龙血树野生资
源日趋枯竭，濒危灭绝，被很多国家列为珍稀濒危保护植物。我
们对血竭资源加强管理，合理开发利用的同时，寻找血竭替代品
对满足市场需求十分必要。我们认为从血竭同属植物中寻找血
竭替代品更能接近血竭的功效，由于黄藤与麒麟竭植物基源相近
且其果实中含有血竭素，黄藤果实成为血竭替代品的首选。本研
究主要用 HPLC法建立黄藤果实中血竭素含量的测定方法，比较
不同地区不同部位黄藤果实中血竭素的含量，为黄藤果实进一步
开发利用提供参考。
1 仪器与试药
Agilent 1100 型高效液相色谱仪，DAD 检测器，Agilent 1100
化学工作站;电子天平(Sartorius CP225D，Sartorius BP110S) ;超声
波清洗仪(KQ3200DE，昆山市超声仪器有限公司) ;血竭素高氯
酸盐对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110811 － 200704，
含量测定用) ;乙腈为色谱纯;甲醇、磷酸二氢钾为分析纯;水为
纯净水。黄藤果实样品经广州中医药大学新药开发研究中心赖
小平教授鉴定。
2 方法与结果
2． 1 供试品溶液的制备 精密称取全果粗粉 1g，置棕色具塞锥
形瓶中，精密加入甲醇溶液 20ml，称重，超声提取 30min，取出放
冷，补足重量，过滤，取续滤液，用 0． 45μm微孔滤膜滤过，即得。
将黄藤果分别分离出果皮和果肉，打成粗粉，精密称取果皮
和果肉粗粉各 1g，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液
20ml，称重，超声提取 30min，取出放冷，补足重量，过滤，取续滤
液，用 0． 45μm微孔滤膜滤过，即得。
2． 2 血竭素的含量测定［6，7］
2． 2． 1 色谱条件 Waters Atlantis dC18色谱柱(250mm × 4． 6mm，
5μm) ，流动相为乙腈 － 0． 05mol·L －1磷酸二氢钾溶液(50∶ 50) ，
流速为 1． 0 ml·min －1，检测波长为 440nm，柱温为 40℃，进样量
为 20μl。见图 1。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 10