全 文 ：分子植物育种，2016年，第 14卷，第 5期，第 1107-1114页
Molecular Plant Breeding, 2016, Vol.14, No.5, 1107-1114
研究报告
Research Report
橡胶树 HbDAHPS基因过表达对拟南芥抗逆性的影响
曹明瑞 1, 2* 李雅超 2* 安泽伟 2** 程汉 2 胡彦师 2 黄华孙 2
1海南大学农学院,海口, 570228; 2国家橡胶树育种中心,中国热带农业科学院橡胶研究所,儋州, 571737
*同等贡献作者
**通讯作者, azwcn@126.com
摘 要 莽草酸途径与植物的抗逆相关，研究莽草酸途径中的关键酶，有助于了解莽草酸途径在整个植物抗
逆过程中的作用机制。3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶(DAHPS)是莽草酸途径七个酶促反应中
的第一个关键酶，在控制分支酸的合成中有着十分重要的作用，为明确橡胶树 HbDAHPS在响应非生物胁迫
中的功能，将 HbDAHPS在拟南芥中进行了过表达，对单拷贝转基因株系进行低温、干旱、盐害等胁迫处理，
结果表明，橡胶树 HbDAHPS的过表达增强了拟南芥植株的抗旱性、抗盐性和抗寒性。
关键词 橡胶树, DAHPS,拟南芥,过表达,非生物胁迫
Effects of Overexpression of HbDAHPS on Stress Tolerance in Arabidopsis
thaliana
Cao Mingrui 1,2* Li Yachao 2* An Zewei 2** Cheng Han 2 Hu Yanshi 2 Huang Huasun 2
1 College of Agriculture, Hainan University, Haikou, 570228; 2 State Center for Rubber Breeding & Rubber Research Institute, Chinese Academy
of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou, 571737
* These authors contributed equally to this work
** Corresponding author, azwcn@126.com
DOI: 10.13271/j.mpb.014.001107
Abstract Shikimate pathway is associated with plant resistance. The study of key enzymes in shikimate pathway
is helpful to understand the mechanism of plant stress resistance. The main trunk of shikimate pathway consists of
seven catalyzed reactions. 3-Deoxy-d-arabino-heptulosonate-7-phosphate synthetase (DAHPS) is the key enzyme
which catalyzes the first reaction in shikimate pathway, playing a vital role in controlling chorismate biosynthesis.
In order to investigate the function of HbDAHPS under abiotic stress, HbDAHPS was overexpressed in Arabidopsis
thaliana. The transgenic plants were analyzed under drought, salt and cold stress, respectively. All of the results
showed that the overexpression of HbDAHPS enhanced drought, salt and cold resistance in Arabidopsis.
Keywords Rubber tree, DAHPS, Arabidopsis thaliana, Overexpression, Abiotic stress
基金项目：本研究由国家天然橡胶产业技术体系(No.CARS-34)和国家自然科学基金(No.30960319; 3127196)共同资助
莽草酸途径是芳香族氨基酸的生物合成途径，
同时也控制着芳香族次生代谢产物的产出，是糖代
谢和次生代谢的连接纽带(Herrmann, 1995)。在高等
植物中莽草酸途径一般发生在叶绿体，这些芳香族
氨基酸除了用来合成蛋白质外，还作为前体生成种
类繁多的具有芳香环结构的次级代谢产物，如木质
素、维生素 E、花青素、植物抗毒素、吲哚乙酸酯、紫草
素、水杨酸、丹宁酸、肉桂酸、黄酮及黄酮类等。这些
物质的作用可以分为三类，第一类作为信号分子参
与调节植物的生长发育(Durner et al., 1999)；第二类
与植物抗紫外线损伤、抗虫性、抗病性、抗低温、抗机
械损伤等抗生物胁迫和非生物胁迫相关(Rippert et
al., 2004; Rvero et al., 2001; Oh et al., 2009)；第三类是
构成植物特征香气和植物特有品质的主要物质(Tzin
and Galili, 2010)。由此可见，莽草酸途径是植物体内
一条重要的多功能代谢途径。3-脱氧-D-阿拉伯-
庚酮糖酸-7-磷酸合成酶(DAHPS)是在高等植物的
莽草酸途径中的第一个关键酶，它能够催化 PEP和
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 1 植物表达载体 pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS的鉴定
(1.2%琼脂糖)
注: 1,2: HbDAHPS特异引物扩增; 3: pCAMBIA2301-MSP-H-
bDAHPS重组质粒 SmaⅠ和 SalⅠ双酶切鉴定; 4: pCAMBI-
A2301-MSP-HbDAHPS重组质粒; +: PCR 阳性对照;-:阴性
对照(pCAMBIA2301-MSP-NOS质粒);M: 100 bp ladderMarker;
Figure 1 The identification of the pCAMBIA2301-MSP-HbDA-
HPS recombinant vectors (1.2% agarose gel)
Note: 1,2: PCR identification of HbDAHPS; 3: Double digestion
of pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS with restriction enzyme
SmaⅠ and SalⅠ; 4: pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS recombi-
nant vectors; +: The positive control of PCR; -: The negative
control of PCR (pCAMBIA2301-MSP-NOS recombinant vec-
tors); M: 100 bp ladder Marker
图 2转 HbDAHPS基因 T1代植株 PCR检测(1.2%琼脂糖)
注: +: pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS阳性质粒对照;-:阴性
对照 , 野生型植株 ; 1~5: 转 pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS
基因株系; M: 100 bp ladder marker
Figure 2 PCR identification of T1 progeny of HbDAHPS trans-
genic Arabidopsis (1.2% agarose gel)
Note: +: pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS recombinant vectors;
-: wild type Arabidopsis; 1~5:HbDAHPS transgenic lines; M:
100 bp ladder marker
E4P缩合生成 3-脱氧-D-阿拉伯-庚酮糖酸-7-磷
酸(DAHP)，在控制分支酸的合成中有着十分重要的
作用(Heyes et al., 2014)。第一个植物 DAHPS是从花
椰菜中发现的(Huisman and Kosuge, 1974)。随后，豇
豆(Rubin et al., 1982)、胡萝卜(Suzich et al., 1985)、土
豆(Pinto et a1., 1986)和番茄(G觟rlach et a1., 1993)等
物种的 DAHPS也相继被发现。目前，DAHPS应答胁
迫反应的相关研究主要集中在其蛋白活性和转录水
平上的调控这两方面。植物体在外界的生物胁迫和
非生物胁迫刺激下，植物碳流合成转向莽草酸途径，
同时产生大量的次级代谢产物，次级代谢产物在提高
植物自身保护和生存竞争能力的同时，还可以协调植
物与环境的关系，提高植物的抗逆性(何水林等, 2002)。
因此，作为莽草酸途径的第一个酶，DAHPS很可能与
植物对生物和非生物胁迫的响应机制密切相关。
我国属世界最北端植胶区，橡胶树每年都受到
不同程度的寒害影响。并且，我国在橡胶树种植和生
产的过程中，经常遭受到风害、干旱等影响。因此，在
我国橡胶树育种工作中，有效提高橡胶树的抗逆性，
特别是抗寒性，是当前的重中之重。巴西橡胶树是多
年生的异花授粉乔木，目前品种选育主要依靠常规
育种，育种周期长、遗传基础狭窄、杂种优势受到限
制。而采用分子生物学技术手段，利用转基因技术培
育，可以加快橡胶树优良品种的选育速度。尽快培育
出适用于我国各个植胶区气候的具有抗寒、抗风、高
产、抗病等优良性状的橡胶树新品种。莽草酸途径同
植物的抗逆过程关系密切，研究莽草酸途径中的关
键酶可以帮助我们了解该途径在橡胶树抗逆中的作
用机制。本研究将橡胶树 DAHPS基因在拟南芥中进
行过表达处理，并观察其响应低温、盐害及干旱等非
生物胁迫的表型特征，为今后进一步了解橡胶树
DAHPS基因在抗逆中的分子调控机制奠定基础。
1结果与分析
1.1 植物表达载体 pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS
的构建
对构建好的植物表达载体 pCAMBIA2301-MSP-
HbDAHPS进行 PCR检测和酶切检测(Sma Ⅰ和 Sal
Ⅰ)，PCR和酶切均能检测到目的片段，说明 HbDAH-
PS已连接到表达载体中(图 1)。
1.2转基因拟南芥的筛选与鉴定
1.2.1转基因拟南芥的 PCR鉴定
提取转 HbDAHPS的拟南芥 T1代植株的 DNA，
用扩增基因 ORF的引物进行 PCR鉴定，所检测的样
品中都能扩增到目的片段(图 2)，说明所检测的植株
均为转基因阳性植株。
1.2.2转基因拟南芥的 GUS染色鉴定
对选取的拟南芥分别在幼苗期和生殖生长期进
行 GUS组织学染色，观察 GUS瞬时表达情况。结果
表明，野生型植株经酒精脱色后，叶绿素溶解在酒精
1108
图 3拟南芥的 GUS染色
注: A:刚出长第二片真叶的拟南芥; B:刚开花的拟南芥
Figure 3 GUS staining of Arabidopsis
Note: A: The Arabidopsis with the second euphylla; B: The flow-
ering Arabidopsis
图 4 HbDAHPS在拟南芥中的表达分析
Figure 4 Expression analysis of HbDAHPS in Arabidopsis
图 5拟南芥植株的干旱胁迫
注: A:处理前的拟南芥; B:处理 7天后的拟南芥; C:复水 10 d
后的拟南芥
Figure 5 Arabidopsis plants under drought stress
Note: A: Arabidopsis growing under normal conditions; B: Ara-
bidopsis suffering from drought stress for 7 days; C: Arabidopsis
after rehydrating for 10 days
中，两个不同时期的植株均成无色状态，没有检测到
GUS信号；而转基因植株经酒精脱色后，两个不同时
期的植株都呈现蓝色，包括根、茎、叶、花，但是颜色
深浅有别，说明植物表达载体的 T-DNA区已经整合
到拟南芥的基因组中并成功地表达出来，但在不同
组织和同一组织的不同位置表达量有差异(图 3)。
1.2.3转基因拟南芥的实时荧光定量 PCR分析
对筛选出的单拷贝纯系植株进行目的基因的
qRT-PCR反应，检测结果表明，HbDAHPS在过表达
拟南芥株系中均能够组成型地表达，只是在三个株
系中的表达量有所不同(图 4)。
1.3转 HbDAHPS基因拟南芥的抗逆性分析
1.3.1转 HbDAHPS基因株系的抗旱性研究
选取拟南芥 T3代的 S1-1、S1-2和 S1-3三个株
系，将四周大的野生型拟南芥和转基因 S1-1、S1-2和
S1-3株系进行干旱处理，观察干旱前后和复水之后
拟南芥表型(图 5)，统计存活率。结果表明，失水一周
后，野生型和转基因植株叶片均出现萎蔫现象，野生
型植株的萎蔫情况比转基因植株更加严重(图 5B)；
复水 10 d后，野生型植株存活率为 0，转基因植株株
系 S1-1、S1-2和 S1-3的存活率分别为 64.3%、57.1%
和 57.1%，明显高于野生型植株(图 5C)，说明 HbDAH-
PS的超表达提高了拟南芥植株的抗旱性。
1.3.2转 HbDAHPS基因株系的耐盐性研究
野生型拟南芥和转基因拟南芥 S1-1和 S1-2株
系的 NaCl处理结果表明，NaCl处理三次后，野生型
和转基因植株叶片均出现萎蔫现象，叶片变黄、变
白，野生型植株的萎蔫情况比转基因植株更加严重
(图 6B)；复水 10天后，转基因植株的长势明显优于
野生型植株，单片叶面积大、叶片更厚(图 6C)；复水
15天后，野生型植株存活率为 86.7%，转基因植株株
系 S1-1和 S1-2的存活率分别为 93.3%和 92.5%，
HbDAHPS的超表达提高了拟南芥植株的耐盐性。
1.3.3转 HbDAHPS基因株系对 PEG的耐受性研究
野生型拟南芥和转基因拟南芥 S1-1和 S1-2株
系的 PEG处理结果表明，PEG处理三天后，野生型
植株出现萎蔫现象，叶片出现干枯、脱水的状况，转
基因植株中只有极少数叶片出现这种现象(图 7B)；
复水 10 d后，野生型植株存活率为 13.3%，转基因植株
株系 S1-1和 S1-2的存活率分别为 93.3%和 97.5%，
明显高于野生型植株(图 7C)，说明 HbDAHPS 的超
表达明显提高了拟南芥植株对 PEG的耐受性。
1.3.4转 HbDAHPS基因株系响应低温胁迫的研究
野生型植株和转基因株系 S1-1、S1-2株系在低
温处理后的生理指标变化结果表明(图 8)，未处理
橡胶树 HbDAHPS基因过表达对拟南芥抗逆性的影响
Effects of Overexpression of HbDAHPS on Stress Tolerance in Arabidopsis thaliana 1109
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
前，转基因株系 S1-1、S1-2的糖和脯氨酸含量都比
野生型植系略低；低温处理后，三个株系的糖含量都
提高了 40%以上，转基因株系 S1-2的增长幅度明显
高于另外两个株系；脯氨酸含量也都增加了 2倍以
上，转基因株系 S1-1增长幅度明显大于野生型株系
和转基因植株 S1-2。
虽然经过低温胁迫的野生型植株和转基因株系
S1、S2均能存活，完成正常的生理周期，但野生型拟
南芥的受害程度明显比转基因株系的严重，野生型
植株的大小及抽苔高度均小于转基因植株，说明
HbDAHPS 的超表达在一定程度上提高了拟南芥植
株对寒冷的耐受性(图 9)。
2讨论
植物的生长发育容易受到非生物胁迫的影响，
其中干旱和高盐胁迫的影响尤为突出，是制约植物
产量的主要胁迫因素。大量研究表明，低温，高盐或
干旱等胁迫条件下，植物的部分相关基因能够被诱
导表达(Xiong and Zhu, 2001; Ingrain and Bartels, 1996;
Thomashow, 1999)。一般情况下，这些被诱导基因的
表达产物分成两大类，即调节蛋白和功能蛋白。功能
蛋白包括活性氧清除的酶，小分子渗透保护剂合成
相关的酶，胁迫反应中蛋白质代谢相关的酶和大分
子渗透保护的蛋白。调节蛋白则一般是与基因表达
以及胁迫信号转导的相关蛋白质，如转录因子和蛋
白激酶(沙琴等, 2009)。本研究中的 HbDAHPS基因
在干旱、PEG模拟干旱和高盐胁迫下，在一定程度上
增加了植物碳流进入莽草酸途径的总量，并且很可
能提高了下游抗逆物质的产生。拟南芥中转 HbDA-
HPS基因过表达株系在干旱和高盐胁迫下也表现出
了比野生型拟南芥更加优良的耐受性，说明 HbDAH-
PS基因有利于提高植物的抗旱性和抗盐性。
甘蓝型油菜在越冬过程中，伴随温度的降低，可
溶性糖的积累大幅度上升(刘艳等, 2002)。普通菠菜
经过低温处理，植物组织中的可溶性糖含量大幅度
上升，而且抗寒性较弱的胜先锋菠菜与抗寒性较强
的班德菠菜相比，可溶性糖的含量增幅明显更低(张
南和秦智伟, 2007)。植物的抗逆性在一定程度上与
植物的可溶性糖的含量密切相关，抗逆性强的品种
含量较高，而弱的品种则含量较低，并且在逆境胁迫
的情况下，植物体内可溶性糖的含量都是呈升高趋
势的，用以抵御寒冷环境对细胞造成的伤害。低温胁
迫下，由于脯氨酸的原因，蛋白质水合作用加强，其
胶体亲水面积增大，酶的空间结构受到保护，此时植
物体细胞内生理活性相关物质和自由水充足，从而在
在一定程度上对植物起保护作用(刘成运等, 1993)。正
常情况下植物体细胞内游离的脯氨酸含量相对较
低，但当植物体受到外界胁迫时，这些游离脯氨酸的
含量会有很大变化(Holmberg et al., 2001)。斑茅中脯
氨酸的含量在不同季节差异明显，其中冬季为夏季
的 7.7倍(丁灿等, 2006)。有研究报道在拟南芥中转
入脯氨酸基因，将对照和转基因拟南芥植株在-2℃
处理 12 h，结果对照植株全部死亡，而转基因拟南芥
株系存活，说明脯氨酸能提高拟南芥植株的抗冻性
(Parvanova et al., 2004)。本研究中，未经低温处理前，
转基因植株的糖和脯氨酸含量都略低于野生型植
株；低温处理后，转基因植株的糖含量都相应提高；
脯氨酸含量也都增加了 2倍以上，转基因植株增长
图 6拟南芥植株的盐胁迫
注: A:处理前的拟南芥; B:处理 9 d后的拟南芥; C:复水 10 d
后的拟南芥
Figure 6 Arabidopsis plants under salt stress
Note: A: Arabidopsis growing under normal conditions; B: Arab-
idopsis suffering from salt stress for 9 days; C: Arabidopsis after
rehydrating for 10 days
1110
图 7拟南芥植株的 PEG胁迫
注: A:处理前的拟南芥; B:处理 9天后的拟南芥; C-1:复水 10天后的拟南芥; C-2:复水 10天后的拟南芥 (侧视图)
Figure 7 Arabidopsis plants under PEG stress
Note: A: Arabidopsis growing under normal conditions; B: Arabidopsis under PEG stress for 9 days; C-1:Arabidopsis after rehydrating
for 10 days; C-2:Arabidopsis after rehydrating for 10 days (side view)
图 8低温条件下野生型植株和转 HbDAHPS基因植株的糖和脯氨酸含量的测定
Figure 8 The sugar and proline contents of wild type and HbDAHPS overexpressing plants under low temperature stress
幅度明显大于野生型植株，模拟寒害实验中转基因
植株长势也好于野生型植株，说明 HbDAHPS基因有
利于提高植物的抗寒性。
3材料与方法
3.1植物材料与试剂
本实验所用橡胶树热研 7-33-97幼苗为 2年生
嫁接苗。拟南芥为 Columbia生态型。氨苄青霉素钠盐
购自上海生工生物工程技术服务有限公司；大肠杆
菌(Escherichia coli)菌株 DH5α购自 TransGene公司，
凝胶回收试剂盒为 Axygen公司产品；RNA反转录试
剂盒、Taq 酶以及 T4 DNA 连接酶均为 Fermentas 公
司产品；pMD19-T载体和购自 TaKaRa公司；PCR产
物测序和基因克隆引物合成由北京六合华大基因科
技股份有限公司完成。其它试剂均为国产分析纯。
橡胶树 HbDAHPS基因过表达对拟南芥抗逆性的影响
Effects of Overexpression of HbDAHPS on Stress Tolerance in Arabidopsis thaliana 1111
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
图 9拟南芥植株的寒害胁迫
注: A:处理前的拟南芥; B:处理后的拟南芥; C-1:复水 7 d后的拟南芥; C-2:复水 7 d后的拟南芥 (侧视图); D-1:复水 14 d后
的拟南芥; D-2:复水 14 d后的拟南芥(侧视图)
Figure 9 Arabidopsis plants under cold stress
Note: A: Arabidopsis growing under normal; B: Arabidopsis suffered from cold stress; C-1:Arabidopsis after rehydrating for 7 days;
C-2:Arabidopsis after rehydrating for 7 days (side view); D-1:Arabidopsis after rehydrating for 14 days; D-2:Arabidopsis after rehy-
drating for 14 days (side view)
3.2方法
3.2.1农杆菌转化和过表达纯合子的筛选
将克隆的HbDAHPS 导入实验室构建的表达载
体 pCAMBIA2301-MSP-MCS中，构建植物表达载
体。取 10 μL pCAMBIA2301-MSP-HbDAHPS质粒
至 100 μL农杆菌 EHA105冻融法感受态细胞中，混
匀冰浴 30 min后，加入液氮中速冻 1 min，捞出后立
即 37 ℃水浴 3 min，取出后再次置于冰上迅速冷却
3 min，立即向 1.5 mL离心管中加入 600 μL LB培养
基于，28℃，200 rpm培养 3 h后，取 100 μL菌液涂布
于含四种抗生素的 LB平板(40 mg/L的 Rif, 50 mg/L
的 Str, 50 mg/L的 Amp, 50 mg/L的 Kan) 上，72 h后
挑取单菌落震荡培养。扩大培养后进行菌液 PCR验
证。采用喷雾法转化拟南芥，成熟期收取转基因种
子。先将 T1代种子用 75%的酒精消毒 1 min，次氯酸
1112
钠消毒 10 min，再用 ddH2O洗 5遍，消毒完毕后种于
含 50 mg/L Kan的筛选培养基(1/2 MS培养基+0.8%
琼脂+1%蔗糖)上。把培养皿放在 4℃春化 2 d后，置
于人工培养箱培养，待长出第二枚真叶后将抗 Kan
的转化植株移栽至培养基质上，单株收集 T1代植株
种子即为 T2代。T2、T3代种子筛选方法同上。
3.2.2转基因拟南芥植株的鉴定
选择符合 3:1 (存活与死亡的比例)分离比的 T2
代株系移栽到培养基质上，进行转基因拟南芥植株
的 PCR检测、Southern杂交和 GUS染色，选定株系
培养至收获 T3代种子。选用部分 T3代种子再次进行
抗性筛选，不再发生分离的拟南芥株系即认为是纯
系，选取进行后续实验。以刚长出真叶不久和刚开花
的转基因拟南芥纯系和野生型(WT)植株为材料，对
其进行 GUS染色，鉴定基因的表达情况。
对筛选出的纯系植株进行 qRT-PCR分析，检测
目的基因的表达情况。qRT-PCR反应在 Roche公司
的 Light Cycler2.0荧光定量 PCR仪上进行，以拟南
芥 Atactin作为内参基因校正和标准化目的基因，每
个样品重复 3次。PCR扩增程序为 95℃ 30 s；95℃ 5 s，
60℃ 20 s，72℃ 20 s，共 45个循环；60℃以 0.2℃/s的
速率上升到 95℃，1个循环；50℃一个循环。荧光定
量结果用 LightCycler Software 4.05进行分析。
3.2.3拟南芥的胁迫处理
干旱处理：待转基因拟南芥纯系和野生型植株生
长至 4周时，停止浇水 7 d，之后复水(每 3天浇一次
水)，复水完成后进行表型观察，并且统计存活率。
PEG处理：待转基因拟南芥纯系和野生型植株
生长至 4周时，用 20%的 PEG溶液进行植株浇灌，
浇灌至培养基质底部渗出溶液，每 3天浇一次，处理
3次后复水(每 3天浇一次水)，复水完成后进行表型
表型观察，并且统计存活率。
盐胁迫处理：待转基因拟南芥纯系和野生型植
株生长至 4周时，用 300 mmol/L的 NaCl溶液进行
植株浇灌，浇灌至培养基质底部渗出溶液，每 3天浇
一次，处理 3次后复水(每 3天浇一次水)，复水完成
后进行表型表型观察，并且统计存活率。
低温处理：待转基因拟南芥纯系和野生型植株
生长至 4周时，将所有材料在 4℃处理 3 d后进行生
理指标测定，分别在恢复正常生长 7 d和 14 d时观
察表型。
3.2.4拟南芥生理指标测定
采用蒽酮法测定低温处理的转基因拟南芥和野
生型拟南芥可溶性糖含量(钟方晓等, 2007,时珍国医
国药, 8: 1916-1917)：称取 0.5 g拟南芥混合样叶片，
剪碎加 6 mL蒸馏水煮沸 60 min。冷却后，用蒸馏水
定容至 10 mL得到还原糖提取液。取 0.2 mL提取
液，加 1.8 mL水和 0.5 mL蒽酮试剂。再缓慢加入
5 mL浓硫酸，轻轻摇匀，沸水浴 10 min。冷却至室
温，测定 620 nm下的吸光度，根据吸光度查标准曲
线计算葡萄糖含量。
采用乙醇浸提法测定低温处理的转基因拟南芥
和野生型拟南芥脯氨酸含量(Troll and Lindsley, 1955)：
称取 0.5 g拟南芥混合样叶片，经液氮研磨后，加入
10 mL 80%的乙醇，黑暗中浸提 24 h，加入 0.2 g活性
炭，涡旋 5 min混匀。6 000 rpm离心 20 min脱色，沸
水浴 20 min，除去乙醇，冷却，定容至 10 mL得到粗
酶提取液。测定 515 nm下的吸光度，根据吸光度查
标准曲线计算脯氨酸含量。
作者贡献
曹明瑞和李雅超负责实验的具体实施、实验数
据分析和初稿撰写；程汉和胡彦师参与实验材料的
准备和拟南芥抗逆性结果分析；安泽伟为本文的责
任作者，负责实验的总体构思；黄华孙指导论文写
作。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家天然橡胶产业技术体系(No.CARS-
34)和国家自然科学基金(No.30960319; 3127196)共
同资助。感谢中国热带农业科学院橡胶研究所李维
国研究员在本研究实施过程中给予的帮助。
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