全 文 ：玉竹提取物 B对人结肠癌 CL -187细胞的抑制作用
李尘远 , 刘艳华 , 李淑华 , 潘兴瑜
(锦州医学院医学生物学与遗传学教研室 , 辽宁　锦州　121001)
【摘要】　目的　研究中药玉竹提取物 B (EB-PAOA)对人结肠癌 CL-187 细胞株的抑制作用。方法　体外培
养结肠癌 CL-187细胞 , 绘制生长曲线 , 然后将其与不同浓度的 EB-PAOA 共育 , 用 MT T 比色分析法测定 EB
-PAOA对 CL-187细胞的抑制率。结果　EB-PAOA 抑制了 CL-187 细胞的增殖 , 且呈时间一剂量依赖性。
结论　EB-PAOA 有一定的抗肿瘤作用。
【关键词】　玉竹提取物 B;结肠癌 CL-187 细胞株;MTT 比色分析法
【中图分类号】　R979.1　【文献标识码】 　A　【文章编号】 　1000-5161(2003)01-0040-03
The Inhibition Effect of the Extract B of Polygonatum Odoratum
on Human Cancer CL-187 Cell Line
LI Chen-yuan , LIU Yan-hua , LI Shu-hua , et al
(Department of Medical Biology , Jinzhou Medical College , Jinzhou 121001 China)
【Abstract】　Objective　To study the inhibit ion ef fect of the ex tract B of Polygonatum odo ratum
(EB-PAOA)on human colon cancer CL-187 cell line.Methods　Colon cancer CL-187 cells w ere
cultured in vit ro and the growing curve w as draw n.And then different concentration of EB-PAOA
were added to CL-187 cells.MT T assay w as adopted to determine the inhibi tion rate to CL -187
cells.Results　EB-PAOA can inhibit the proliferation of CL -187 cells , and the inhibition rate is
dependent on time and dose.Conclusion　EB-PAOA has anti cancer effect.
【Key words】　EB-PAOA;colon cancer CL-187 cell line;MTT assay
　　目前临床上广泛使用的化疗药物 , 如 5-氟尿
嘧啶 、环磷酰胺等都是 DNA合成的抑制剂 , 具有
较强的细胞毒作用〔1〕 , 而中药 , 以其毒副作用小 ,
易于被患者接受等特点 , 在抗肿瘤药物中占有重要
地位 。
玉竹是我国传统中药材 , 具有扶正固本 、养阴
润燥之功效 , 现代研究发现 , 玉竹提取物 B (EB
-PAOA)具有一定的抗肿瘤作用〔2〕 , 本实验以人
结肠癌 CL -187细胞为研究对象 , 进一步研究了
EB-PAOA对肿瘤细胞株的抑制作用。
1　材料与方法
1.1　仪器与试剂
1.1.1　实验仪器
免疫酶联检测仪:国营华东电子管厂 , 南京
平板式离心机:LDZ5-2 型 , 北京医用离心
机厂 , 北京 。
台式离心机:TGL-16C型 , 上海安亭科学仪
器厂出品 , 上海。
电子天平:Tmp-1 , 湖南仪器仪表总厂出品 ,
湖南。
光学显微镜:倒置显微镜 , O LYMPUS , 日
本 。CO2 温箱:Model MCO-15AC , 日本 。
1.1.2　主要试剂
RPM I1640 完全培养基:HYCLONE 公司 ,
10.4g 粉剂加三蒸水至 1000ml , 内含谷氨酰胺
2mmol/ L , Hepes 2mmol/L , 青链霉素各 100u/ml。
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锦州医学院学报
J Jinzhou Med Colleg e　2003 Feb., 24(1)
0.22μm微孔滤膜过滤除菌 , 4℃保存 , 使用前加
入灭活新生小牛血清 , 使其终浓度为 15%。
玉竹提取物 B:锦州医学院免疫学教研室潘兴
瑜教授提供。
甲基四氮唑蓝 (MTT):Fluka , 瑞士 , 50mg
溶于 0.01mol/L PBS10ml , 配成 5mg/ml浓度 , 过
滤除菌 , 4℃避光保存。
1.2　实验方法
将结肠癌 CL -187 细胞培养于 RPM I1640 培
养基中 , 置 5%CO2 孵箱中培养 , 24h 换液 1次 ,
48h 传代 1次 。传代时用 0.02%EDTA 和 0.25%
胰蛋白酶混合液 (按 1∶1比例)进行消化 , 时间为
5min。
1.2.1　绘制结肠癌 CL-187细胞的生长曲线
对数生长期 CL -187细胞消化后移入离心管 ,
配制成 105/ml细胞悬液 , 接种于 6 孔培养板中 ,
每孔 3m l , 每 24h计数 3孔 , 记录计数结果 , 计算
平均数值 , 计数 4d , 绘制生长曲线图 (Grow th
Curve)。
1.2.2　MTT 比色法〔3〕检测 EB-PAOA 对结肠癌
CL-187细胞生长的抑制作用
(1)取对数生长期结肠癌 CL -187 细胞株 ,
0.25%胰蛋白酶消化后 , 用完全 RPM I1640 培养
液制成细胞悬液 , 调整细胞浓度为 5×104/ml。
(2)将CL-187细胞接种于 4 块 40孔培养板
中 , 每孔 0.1ml , 培养 24h 。
(3)吸去上清液 , 第 1孔为细胞对照 , 每孔加
小牛血清培养液 0.1ml , 第 2孔起分别加入不同浓
度的 EB -PAOA0.1ml , 浓度 (V/V)为 1∶500 、
1∶1000 、1∶1500 , 各设 12个复孔。
(4)加样后在 37℃、 5%CO2 培养箱中分别培
养 4h 、 8h和 16h。
(5)在终止培养前 3 ～ 4h , 加入 MTT 液每孔
0.01ml , 结束培养时离心 2000rpm ×10min , 用
PBS离心洗细胞 2次 。
(6)37℃12h 干燥后加正丁醇 , 振荡培养板
10min , 待孔中沉淀完全溶解 , 即在免疫酶联检测
仪上 590nm 波长处 , 检测 OD 值并计算细胞增殖
的抑制率 。
细胞抑制率=(1-实验组细胞 OD值对照组细胞 OD值) ×100%
1.2.3　统计学处理 　数据均用 Excel统计软件处
理。
2　结　　果
2.1　CL -187细胞培养生长曲线
绘制生长曲线各组细胞计数结果见表 1 。
表 1　不同时间细胞计数结果
时间 (h) 细胞数目 (×105)
24 15.12±0.78
48 27.26±1.26
72 34.22±3.64
96 37.40±1.13
　　根据上述结果绘制的生长曲线见图 1。
图 1　CL-187 细胞株体外生长曲线
2.2　EB-PAOA 对CL-187细胞的抑制率
实验结果详见表 2
表 2　EB-PAOA对 CL-187
细胞的抑制率
EB-PAOA浓度
(V/V)
作用时间 (h)
4 8 16
1∶1500 8.3±2.6 10.7±1.4 16.0±3.2
1∶1000 16.7±5.9 35.7±4.1＊ 52.1±5.3＊＊
1∶500 25.0±2.3＊ 71.4±1.9＊＊ 90.7±1.0＊＊
　处理组与对照组 , ＊P<0.05;＊＊P <0.01。
如表 2所示 , EB-PAOA 对结肠癌 CL -187
细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性 。时间越长 ,
剂量越大 , 抑制越明显 , 与对照组相比 , 组间差异
均有显著性 (P<0.05)。
3　讨　　论
玉竹 (polygonatum odo ratum var plurif lo rum o-
hw i), 是属于百合科 、 黄精属的中草药。现代医学
研究认为 , 玉竹是一种免疫调节剂〔3〕 , 锦州医学
院潘兴瑜等人对玉竹的有效成份进行了提取 、 纯化
和分析 , 发现玉竹提取物 B (EB-PAOA)对肿瘤
41李尘远 ,等.玉竹提取物 B对人结肠癌 CL-187细胞的抑制作用
细胞株 CEM 的增殖具有显著的抑制作用 , 并能诱
导促进 CEM 的分化 , 对 CEM 的逆转具有一定的
作用 。另外 , EB-PAOA 对 S-180移植小鼠足垫
所形成的移植瘤有明显的抑制作用 , 对移植瘤生长
的抑制百分率达 68.5%;EB-PAOA 对 S-180腹
腔移植的荷瘤鼠可延长其存活期〔4〕 。这都说明 EB
-PAOA具有显著的抑瘤作用。
为研究 EB-PAOA 对其它肿瘤细胞的作用 ,
本实验采用 MTT 法测定了 EB-PAOA 对体外培
养的结肠癌 CL-187细胞株的作用 , 结果显示 EB
-PAOA 对 CL -187 细胞具有显著的抑制作用 ,
并呈时间-剂量的依赖性 , 1∶500 的 EB -PAOA
作用 6h和 1∶1000的 EB-PAOA 作用 16h后 , 细
胞的抑制率均达到 50%左右 , 这进一步证实了 EB
-PAOA的抗癌效果 。当然 , EB-PAOA 抗肿瘤
的作用机制还有待探讨 。
参　考　文　献
〔1〕 张覃沐.抗肿瘤药物的药理与临床应用.郑州:河南医科大学
出版社 , 1999.229.
〔2〕 林厚文 , 韩公明 , 谬时萱.中药玉竹有效成份研究.药理学
报 , 1997 , 29 (3):215.
〔3〕 潘兴瑜 , 李宏伟.M TT 比色法改进的研究.中国免疫学杂志 ,
1999 , 15 (12):559.
〔4〕 潘兴瑜 , 张明策 , 李宏伟.玉竹提取物 B对肿瘤的抑制作用.
中国免疫学杂志 , 2000, 16 (7):460.
收稿日期:2002-10-08
用铸造核桩冠修复老年人残根残冠的体会
汤立群
(锦州医学院附属第二医院修复科 , 辽宁　锦州　121000)
【中图分类号】　R783　【文献标识码】 　B　【文章编号】　1000-5161(2003)01-0042-01
　　铸造核桩冠作为一种修复体 , 在口腔临床修复中已被
广泛应用 , 选择性的保留残根 、 残冠 , 经过完善的根管治
疗后 , 再做核桩冠或冠桥修复。
1　临床资料
患者 60 例 , 为 50～ 65岁老年患者 , 男性 40 例 , 女性
20 例。口腔检查:牙周基本健康 , 残根 、 残冠均无松动 ,
残牙质地坚硬 , 髓室底完整 , 残根至龈下不超过 2mm , X
-ray 示牙根有足够长度和粗度 , 无弯曲 , 根尖区无明显病
变或吸收。
2　方　　法
(1)对患者实施常规根管治疗 , 治疗后观察 2 ～ 3 周 ,
并再拍 X线牙片 , 检查根充及根尖区情况。 (2)常规制作
核桩及全冠或冠桥修复。(3)每年定期进行 1 次复查。
3　结　　果
60 例患者 , 共修复 136 颗患牙 , 前牙 38 颗 , 前磨牙
46 颗 , 磨牙 52 颗。其中前牙 6 颗 , 前磨牙 8 颗 , 磨牙 16
颗以核桩做基牙用固定桥修复。修复 1 年后 , 复查 136 颗
牙 , 成功率 100%。 2 年后复查 136 颗 , 3 颗牙根折裂 , 4
颗修复体松动脱落 , 成功率 94.6%, 失败原因分析 , 牙根
折裂与根管预备不当致根管径过大 , 管壁薄弱有关 , 也不
排除调颌不够 , 致合力过大及咀嚼过硬食物等因素。核桩
脱落与桩核长度不够 , 根管内残留腐质较多影响黏结质量 ,
黏结剂在根管内分布不均匀 , 存在气泡等因素有关。
4　体　　会
(1)随着社会老龄化 , 老年口腔患者逐年增加 , 以往 ,
对残根 、 残冠多考虑拔除患牙后 , 再做活动义齿修复。 而
今 , 由于根管治疗技术的完善 , 更多残根残冠可以保留 ,
进而再利用治疗过的残根残冠做核桩冠修复。这样不仅使
患者有效的恢复了咀嚼功能及美观 , 且异物感小 , 稳定性
强 , 减缓牙槽骨吸收萎缩 , 维持牙周组织正常生理功能。
(2)桩修复成功的关键。首先 , 对所要保留的残根残
冠作出正确的评估。应根据口腔检查 , 结合 X 线牙片 , 综
合分析判断其保留的价值。其次 , 完善的根管治疗和成功
的牙体预备 , 在满足临床需要的情况下 , 最大限度地保留
牙体组织 , 以达到最大的牙体强度 , 根管预备时应达根长
的 1/ 2 或 2/ 3 , 以保证核桩有足够的长度。牙冠制作应注意
咬合平衡。牙面应减径 , 增加锐度。
(3)桩的黏结也十分重要。向根管内充填黏结剂时要
均匀足量 , 防止空隙或气泡 , 使桩核与根管紧密粘合 , 增
强牙根断裂的抵抗力。使整个牙根结构的应力分布更均匀。
实践证明 , 此方法对中 、 老年患者均适用 , 把握好适
应症 , 并在临床实践中不断完善 , 可以获得更多的成功。
收稿日期:2002-11-14
42 锦州医学院学报　2003 年 2 月 , 24(1)