全 文 ：　 〔作者简介〕 李尘远 (1972-), 女 , 河北省迁安县人 , 讲师 , 硕士学位 , 从事中药抗肿瘤研究。
玉竹提取物 B对 Hela细胞的抑制作用
李尘远 , 刘　玲 , 潘兴瑜
(锦州医学院医学生物学与遗传学教研室 , 辽宁　锦州　121001)
【摘要】目的　观察玉竹提取物 B (EB-PAOA)对人宫颈癌 Hela细胞株的抑制作用。方法　体外培养宫颈癌
Hela细胞 , 将其与不同浓度的 EB-PAOA共育 , 观察细胞变化并绘制 EB-PAOA 对 Hela 细胞的生长曲线;用
M TT 比色分析法测定 EB-PAOA对 Hela细胞的抑制率。结果　EB-PAOA抑制了 Hela细胞的增殖 , 且呈时间
-剂量依赖性。结论　EB-PAOA 对体外培养的 Hela 细胞具有明显的抑制作用。
【关键词】玉竹提取物 B;宫颈癌 Hela细胞;M TT 比色分析法
【中图分类号】　R979.1　　　【文献标识码】 　A　　　【文章编号】　1000-5161(2003)05-0001-03
The Inhibition Effect of the Extract B of Polygonatum
Odoratum on Hela Cells
LI Chen-yuan , LIU Ling , PAN Xing-yu
(Department of Medical Biology , Jinzhou Medical College , Jinzhou 121001 China)
【Abstract】　Objective　To observe the inhibition effect of the ext ract B of Polygonatum odo ratum
(EB-PAOA)on human cervix cancer Hela cells.Methods　Cervix cancer Hela cells were cultured in
vi tro and then different concentration of EB-PAOA were added to Hela cells.The g row ing curve was
draw n.MTT assay w as adopted to determine the inhibition rate to Hela cells.Results　EB-PAOA
can inhibit the proliferation of Hela cells , and the inhibition rate is of time and dose dependent.Con-
clusions　EB-PAOA has obvious inhibition effect on Hela cells.
【Key words】　EB-PAOA;cervix cancer Hela cells;MTT assay
　　中药因其毒副作用小 , 更易于被患者所接受等
特点 , 在抗肿瘤药物中占有重要地位 , 从中草药中
寻找抗肿瘤药物或放射增敏和防治放疗反应药物 ,
以提高治疗效果 , 正越来越成为人们注目的焦点 。
玉竹是我国传统中药材 , 具有扶正固本 、养阴润燥
之功效 , 现代研究发现 , 玉竹提取物 B (EB -
PAOA)具有一定的抗肿瘤作用[ 1 , 2] , 但是 , 对它
的研究有待进一步的完善 。
宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之
一 , 化疗是其主要的治疗手段 , 目前临床上普遍使
用的化疗药物大多具有较强的细胞毒作用[ 3] , 不
利于患者的康复 。目前已发现某些中药对 Hela 细
胞的生长有一定的抑制作用[ 4 , 5] , 本实验以人宫颈
癌Hela细胞为研究对象 , 观察了 EB-PAOA 对它
的抑制作用 。
1　材料与方法
1.1　仪器与试剂
1.1.1　实验仪器
免疫酶联检测仪:国营华东电子管厂 , 南京。
平板式离心机:LDZ5-2 型 , 北京医用离心
机厂 , 北京 。
台式离心机:TGL-16C型 , 上海安亭科学仪
器厂出品 , 上海。
电子天平:Tmp-1 , 湖南仪器仪表总厂出品 ,
湖南。
光学显微镜:倒置显微镜 , O LYMPUS , 日
1
锦州医学院学报
J Jinzhou Med College　2003 Oct., 24(5)
本。
CO2 温箱:Model MCO-15AC , 日本。
1.1.2　主要试剂
RPM I1640 完全培养基:HYCLONE 公司 ,
10.4g 粉剂加三蒸水至 1000m l , 内含谷氨酰胺
2mmol/L , Hepes 2mmol/ L , 青链霉素各 100u/ml。
0.22μm微孔滤膜过滤除菌 , 4℃保存 , 使用前加
入灭活新生小牛血清 , 使其终浓度为 15%。
玉竹提取物 B:锦州医学院免疫学教研室潘兴
瑜教授提供。
甲基四氮唑蓝 (MTT):Fluka , 瑞士 , 50mg
溶于 0.01mol/L PBS10ml , 配成 5mg/ml浓度 , 过
滤除菌 , 4℃避光保存。
1.2　实验方法
将宫颈癌 Hela细胞培养于 RPM I1640 完全培
养基中 , 置 37℃、 5%CO2 孵箱中培养 , 24h 换液
1 次 , 3d 传代 1 次。传代时用 0.02%EDTA 和
0.25%胰蛋白酶混合液 (按 1∶1比例)进行消化 ,
时间为 2.5min 。
1.2.1　EB-PAOA 对Hela细胞生长及形态的影响
将对数生长期 Hela 细胞消化后移入离心管 ,
配制成 1.8×105ml细胞悬液 , 接种于 24孔培养板
中 , 每孔 1ml , 设空白对照组和 1∶500;1∶1000;
1∶1500 3个用药组 , 每 12h 观察细胞形态变化 ,
每 24h 计数 3孔 , 记录计数结果 , 计算平均数值 ,
连续计数 6d , 绘制生长曲线图。
1.2.2　MTT 比色法[ 6]检测 EB-PAOA 对宫颈癌
Hela细胞生长的抑制作用
(1)取对数生长期宫颈癌 Hela细胞株 , 0.25%
胰蛋白酶消化后 , 用 RPM I1640 培养液制成细胞
悬液 , 调整细胞浓度为 1×105/ml。
(2)将 Hela细胞接种于 4 块 40孔培养板中 ,
每孔 0.1m l , 培养 24h。
(3)吸去上清液 , 第 1孔为细胞对照 , 每孔加
小牛血清培养液 0.1ml , 第 2孔起分别加入不同浓
度的 EB-PAOA 0.1m l , 浓度 (V/V)为 1∶500 、
1∶1000 、 1∶1500 , 各设 12个复孔 。
(4)加样后在 37℃、 5%CO2 培养箱中分别培
养 24h 、 48h和 72h。
(5)在终止培养前 3 ～ 4h , 加入 MT T 液每孔
0.01ml , 结束培养时离心 2000rpm ×10min , 用
PBS 离心洗细胞 2次。
(6)37℃12h 干燥后加正丁醇 , 振荡培养板
10min , 待孔中沉淀完全溶解 , 即在免疫酶联检测
仪上 590nm 波长处 , 检测 OD 值并计算细胞增殖
的抑制率。
细胞抑制率=(1-实验组细胞OD值对照组细胞OD值)×100%
1.2.3　统计学处理 , 所有有效数据均用 Excel统
计软件处理 。
2　结　　果
2.1　Hela细胞形态变化及生长曲线
在正常培养情况下 , Hela 细胞生长良好 , 表
现为梭形或多边形 , 并可融合形成集落。经 EB-
PAOA处理后 , 出现伪足回缩 , 细胞变圆 、 变小 ,
细胞失去连接 , 部分细胞脱落漂浮于培养液中 。作
用时间越长 , 药物剂量越大 , 上述表现越明显 , 漂
浮细胞越多 。绘制的生长曲线见图 1。
图 1　EB-PAOA 对 Hela细胞生长曲线
2.2　EB-PAOA对 Hela细胞的抑制率 实验结果见表 1。
2 锦州医学院学报　2003 年 10 月 , 24(5)
表 1　EB-PAOA对 Hela 细胞的抑制率 (%)
EB-PAOA 浓度
(V/V)
作用时间 (h)
24 48 72
1∶1500 5.9±2.1 8.2±2.4 13.6±1.5
1∶1000 11.7±4.6 23.2±1.1＊ 49.1±5.0＊
1∶500 19.0±3.4＊＊ 48.5±1.7＊＊ 82.3±1.4＊＊
　　Treatment group vs cont rol group , ＊P<0.05;＊＊P<0.01
　　如表 1所示 , EB-PAOA对宫颈癌 Hela 细胞
的抑制作用呈时间和剂量依赖性。与对照组相比 ,
组间差异均有显著性 (P <0.05)。
3　讨　　论
肿瘤严重地威胁着人类的生存与健康 , 抗肿瘤
的药物研究一直是一个活跃的研究领地 , 中药在这
里占据着重要的地位 。玉竹是我国传统的中草药 ,
研究发现玉竹提取物 B (EB-PAOA)对肿瘤细胞
株CEM 的增殖具有显著的抑制作用 , 对 S -180
移植小鼠足垫所形成的移植瘤有明显的抑制作用 ,
对移植瘤生长抑制百分率达 68.5%;EB -PAOA
对S-180 腹腔移植的荷瘤鼠可延长其存活期[ 1] 。
这都说明 EB-PAOA 具有显著的抑瘤作用 。另有
研究表明 , EB-PAOA对体外培养的人结肠癌 CL
-187细胞也具有抑制作用[ 2] 。
为进一步研究 EB-PAOA对其他肿瘤的作用 ,
本实验检测了 EB-PAOA处理后的宫颈癌 Hela 细
胞的形态变化及生长情况 , 根据所得的生长曲线 ,
显示Hela细胞发生了生长抑制 , 且其抑制作用有
如下特点:1.与剂量有关 , 剂量越大 , 抑制越明
显;2.与作用时间有关 , 随时间延长 , 抑制率增
高 。MTT 检测结果显示了 EB-PAOA 对 Hela 细
胞的抑制作用呈时间-剂量的依赖性 , 1∶500的
EB-PAOA作用 48h和 1∶1000的 EB-PAOA作
用 72h 后 , 细胞的抑制率均达到 50%左右。本实
验的结果为开发 EB-PAOA成为新型抗肿瘤药物
提供了又一理论依据。
〔参　考　文　献〕
[ 1] 　潘兴瑜 , 张明策 , 李宏伟.玉竹提取物B对肿瘤的抑制作用
[ J] .中国免疫学杂志.2000 , 16 (7):460.
[ 2] 　李尘远 , 潘兴瑜 , 张明策 , 等.玉竹提取物B抗肿瘤机制的
初步研究 [ J] .中国免疫学杂志.2003 , 19 (4):253.
[ 3] 　张覃沐.抗肿瘤药物的药理与临床应用 [ M] .郑州:河南
医科大学出版社, 1999.229.
[ 4] 　李坚 , 孙丽媛 , 王立霞 , 等.紫杉醇对 Hela 细胞生长影响
的研究 [ J] .吉林医学院学报 , 1999 , 19 (2):9.
[ 5] 　张如松 , 叶益萍 , 刘雪莉.白首乌甾体总苷的体外抗肿瘤作
用 [ J] .中草药.2000.31 (8):599.
[ 6] 　潘兴瑜 , 李宏伟.M TT 比色法改进的研究 [ J] .中国免疫
学杂志 , 1999 , 15 (12):559.
〔收稿日期〕 2003-07-29
柏蚣糊外用治疗带状疱疹
杜守峰
(辽宁省武警总队二支队卫生队, 辽宁　锦州　121000)
　　带状疱疹病例 15 人 , 其中男 8 例 , 女 7 例 , 年龄最小
9 岁 , 最大 73 岁 , 病程最短 3d , 最长 12d。疱疹部位:前
胸 8 例 , 胁肋 、 腰背部 6 例 , 面颊部 1 例。主要表现为沿
神经走向分布的皮肤丘疹 、 水疱 , 自觉瘙痒 , 灼热刺痛 ,
皮疹呈带状分布 , 3 例伴低热 , 1 例伴轻度腹泻。采用柏蚣
糊外涂方法:黄柏 20g , 蜈蚣 6 条 , 冰片 2g , 紫草 15g ,研成细
末 ,香油调糊 , 涂擦患处 , 每日 2 次 , 重者每日 3 ～ 4 次。结
果:5 例用药 1d , 水泡干涸 , 红肿及皮肤消退 , 8 例 2d , 1 例
3d , 1例 1w , 15 例均在 7 ～ 10d 内脱痂痊愈 , 未见不良反应。
可以看出 , 柏蚣糊外用治疗带状疱疹是十分有效的。
带状疱疹 , 是水痘———带状疱疹病毒引起的急性炎症
性神经性皮肤病。中医认为本病为湿热火毒 , 蕴积肌肤而
成 , 方中黄柏苦寒 , 苦燥涩 , 寒胜热 , 能泻一切有余之火 ,
蜈蚣新开温散 , 能攻毒拔毒 , 散瘀解毒 , 紫草清热解毒 ,
两血止痒痛 , 三药寒热并存 , 互相协同作用 , 更加冰片一
味芳香走窜 , 增加药物的渗透力 , 且具有抗炎 , 止痛之效 ,
药糊外涂患处 , 直接迅速发挥作用 , 故疗效较好。
〔收稿日期〕 2003-06-18
3李尘远 ,等.玉竹提取物 B对 Hela细胞的抑制作用