全 文 ：不足。因而 ,我国政府长期坚持中西医并重的卫生工作方
针 ,由此也体现出我国医疗卫生保障体系的特色和优势。
既然如此 ,从我国农村的实际出发 ,充分发挥中医药 “简 、
便 、效 、廉 ”的特色和优势 ,确立其在新农合体系中的主体
地位 ,就不能因噎废食 ,因突出中医药而从政策措施上对
新农合体系中的西医药有所偏废;相反 ,为了确保广大农
民群众各种疾患都能得到良好 、及时的诊治 ,新农合机构
在具体开展医疗服务时 ,仍必须坚持从实际需要出发 ,按
照优势互补的原则 、对一些用西医药诊治具有优势的病
种 ,采取西医药或中西医结合的方式进行诊治 ,并建立严
格的转院和流行病报告制度 ,在需要转诊或发现流行病
时 ,及时向上级医院转诊或向上级卫生行政部门报告 ,不
能矫枉过正 ,延误疾病的正确诊治和对危重症的及时施
救 。只是对具体运作中一个带共性的矛盾问题要引起重
视 、妥善解决:即现行中医服务及中药价格均偏低 ,有的村
卫生室 ,针灸 、按摩 、拔罐等还往往不收费 ,不像西医做一
次检查 、打一次针 、开一点药 ,随便就是好多钱 。如果经济
效益一旦与单位或医生个人的收益挂钩 ,即使是科班的中
医 ,也可能在利益的驱动下 ,以 “不偏废西医药 ”为借口 ,在
具体诊疗过程中多开西药 、少开中药;多开检验单 、少做推
拿按摩 ,结果又会让中医药靠边站 ,主体地位也成了 “挂羊
头卖狗肉 ”的虚假广告 ,贫苦农民就又会饱尝 “看病难 、看
病贵 ”之苦。因而 ,不偏废西医药 、坚持中西医结合 ,还得
始终处理好中医药与西医药二者间相辅相成的辩证关系 ,
制定出实事求是 、一切从患者利益 、从减轻农民负担出发
的规章制度和奖惩办法 ,坚决纠正以经济效益挂帅 、“一切
向钱看 ”的行业不正之风 ,确保患者真正感受到中医药为
主 、中西医结合 、二者优势互补的好处。
总之 ,正如国家中医药管理局一位领导同志所指出的
那样:从试点县的经验已可看出 ,中医药不仅在广东等经
济条件好的省份有广阔的农村市场 ,而且在云南省弥渡县
这样的国家级贫困县也一样可以大有作为 ,因为群众需要
中医药 ,中医药也符合新农合 “低水平 、广覆盖 ”的宗旨。
据不完全统计 ,截止到 2005年 9月 ,全国 671个试点县的
509所县级中医院已被确定为新农合定点医疗机构。今年
新农合试点县将扩大到全国县级总数的 40%。在党中央 、
国务院的高度重视下 ,各级政府都正在千方百计地为没有
保险的几亿农民切实解决医疗保障问题 。因此 ,完全有理
由相信 ,如果尽快确立中医药在新农合体系中的主体地
位 ,随着新农合的不断推进和政策制度的不断完善 ,我国
农村居民的健康状况一定会有较大幅度的改善 ,农民 “因
病致贫 ”和 “因病返贫 ”的现象也一定会被迅速杜绝 ,农村
经济也就必然会因之而得到更快发展 ,一个城乡协调 、经
济和社会和谐发展的 “和谐社会 ”的出现也就为期不远了。
本文在写作中参考了罗荣汉 《坚持科学发展观 ,重建中
医药重大战略地位 ,为中华民族的伟大复兴贡献力量 》,刘
军民 《新型农村合作医疗的制度缺陷及挑战 》 ,刘燕玲 《中医
药要在新型农村合作医疗中发挥作用 》 ,陈宏宇 《打造新型
农村合作医疗 》 ,王娅妮 、董振国 、李钧德 《新型农村合作医
疗制度暴露出制度缺陷 》,陈宁 《给农民实实在在的好处 》等
文章。
[收稿日期 ] 2006-05-08
◆论　著◆
2型糖尿病家兔模型的建立及大叶蛇葡萄总黄酮降血糖作用研究
黄先菊 1 ,朱慧玲1 ,邓云帆 2 ,肖　魁 2 ,陈建华2
(1.长江大学医学院药理教研室 ,湖北 荆州 434000;2.长江大学医学院临床医疗 2002级 ,湖北 荆州 434000)
[中图分类号 ] R285.6　[文献标识码 ] B　[文章编号 ] 1004-2814(2006)10-603-03
　　[摘　要 ] 　目的:建立 2型糖尿病家兔模型 ,研究大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病家兔的降糖作用及机理 。方法:通过给
家兔饲以高脂高糖饲料并耳缘静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ),建立 2型糖尿病(Type2 diabetesmelitus,
T2DM)兔模型 ,给药 5周后检测家兔空腹血糖浓度 ,血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平 ,观察肾脏组织病理
变化。结果:制备出稳定的 T2DM家兔模型 。证实大叶蛇葡萄总黄酮可明显降低糖尿病家兔血糖 ,减轻其肾组织损害 ,显
著抑制 iNOS的活性 ,稳定血清 NO的含量 。结论:大叶蛇葡萄总黄酮对 T2DM有一定的治疗作用。
[关键词 ] 　2型糖尿病;家兔模型;大叶蛇葡萄总黄酮;血糖;一氧化氮;一氧化氮合酶;作用研究
[ Abstract]Objective:toestablishmentType2 DiabetesMelitus(T2DM)ModelonRabbitandstudytheefectandmecha-
nismoftotalflavoneofAmpleopsis(TFA)onbloodsugarofdiabetesrabbit.Methods:Therabbitswereintravenousinjectedthe
streptozotoncin(STZ)afterreceivedhighfatandhighsucrosediettoinduceT2DM.Givingmedicinefor5 weeksandmeasuring
thebloodsugarofeachgrouptimely.Thelevelofnitricoxidesynthase(NOS)andnitricoxide(NO)inserumwasdetectedbefore
andaftertakingmedicinesrespectively.ThepathologicalchangesofthekidneyswereoBservedbyHEstained.Results:Successful
T2DMrabbitmodelcanbeinducedbythemethodsabove.TFAcoulddeclineT2DMrabbitsbloodsugarandreleasedkidneydamages
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ofT2DMrabbits.ItcouldrestraintheactivityoftheiNOSandstabilizetheNOcontentinT2DMrabbitsserum.Conclusion:TFA
hascertaintherapeuticalfunctiononT2DM.
[ Key　words] T2Dm;Ampelopsis;diabetes;flavone;bloodsugar;NO;NOS;studyonefect
　　为建立糖尿病动物模型 ,可以给小鼠 、大鼠 、豚鼠等注
射链脲佐菌素(Streptozotosin, STZ)、四氧嘧啶(Aloxan)或
喂诱发糖尿病饲料;前二者可致动物发生类似人类的 1型
糖尿病 [ 1 ～ 3] ,后者可使动物发生 2型糖尿病 [ 4 , 5] 。参考文献
方法 [ 6 , 7] ,我们结合两者优点 ,给新西兰兔喂诱发糖尿病饲
料(10%猪油 , 37%蔗糖)并一次性低剂量给 STZ,建立 2型
糖尿病家兔模型。大叶蛇葡萄(Ampelopsismegalo-phyla
DielsetGilg)又名霉茶 ,是葡萄科蛇葡萄属植物 ,具有清热
凉血的功效 ,可用于高血压病 、头昏目胀等 [ 8] ,为湖北省鄂
西地区民间常用中药。现代药理研究其同属植物广西藤
茶总黄酮 ,具有降血糖 、抗炎 、镇痛和增强免疫作用 [ 9] 。我
们观察大叶蛇葡萄总黄酮对 T2DM兔的降糖作用 ,以及对
动物血清内 NO及 NOS含量的影响 ,探讨其治疗 2型糖尿
病(T2DM)的作用及作用机理。
1　材料与方法
1.1　实验材料
实验动物:纯种新西兰家幼兔 40只 ,体重 1.5kg,雌雄
各半 ,由长江大学医学院实验动物中心提供。
药品与试剂:大叶蛇葡萄购自湖北省恩施州来凤县 ,
由长江大学医学院中医系鉴定 ,化学与环境工程学院提取
总黄酮 ,浅黄结晶 ,用时加数滴吐温 -80研磨成乳浊液供
实验用 。盐酸二甲双胍(市售 ,上海医药有限公司信谊制
药总厂生产 ,批号 041103), STZ(美国 sigma公司产品 ,
0.1mol/L的枸橼酸缓冲液溶解 , pH=4.2), NO试剂盒(硝
酸还原酶法)、NOS测定试剂盒(分型)购自南京建成生物
工程研究所 ,乐康全血糖试纸购自罗氏诊断公司(厂家批
号 04622915231)。
仪器与设备:乐康全血糖测定仪为罗氏诊断公司产品
(批号 2005-06　22381501),紫外分光光度计(Cary50 A-
mericanEL05023310)。
1.2　实验方法
糖尿病家兔模型的建立:将新西兰幼兔 30只饲以高糖
高脂饲料(含 10%的猪油和 37%的蔗糖),每只动物每天
约摄取 75g饲料 , 3个月后测定空腹血糖值 , 80%家兔血糖
值均为 6.0 ～ 6.7mmol/L,再一次使用 STZ30mg/kg耳缘静
脉注射 , 2周后模型稳定 ,参考糖尿病中国地鼠血糖值 ,可
将 2次空腹血糖值 >6.7mmol/L的动物判断为糖尿病
兔 [ 10, 11] 。
实验分组及给药:将糖尿病家兔随机分为 4组 ,每组 6
只 ,即糖尿病模型组 、二甲双胍组 、大叶蛇葡萄总黄酮大小剂
量组 ,另以正常饲料喂养的 6只作为正常对照组。正常组 、
模型组给予等剂量的生理盐水 ,二甲双胍组给予二甲双胍
0.15g/(kg·d),大叶蛇葡萄总黄酮大小剂量组分别给予大
叶蛇葡萄总黄酮 0.33g/(kg·d)和 0.165g/(kg· d),连续 5
周灌胃给药。
血糖及血清 NO、NOS测定方法:于实验第 1、5、9、13、
15、19周分别用血糖试纸测定实验动物体重和空腹血糖 ,
于给药前及给药完成后第 2、第 6周分别从各组实验动物
耳中动脉采血 , 3500r/min离心 10min,取血清 ,按照试剂盒
说明步骤以测定 NO和总 NOS、iNOS浓度 。
肾脏组织切片及形态学观察:给药结束后 ,将动物过
量麻醉处死 ,分别取肾脏作 HE染色 ,在光镜下观察形态学
变化。
统计学方法:所有实验数据用均值 ±标准差( x±s)表
示 ,两组间比较采用 t检验 。
2　结　果
大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病兔血糖的影响:3个月后 ,
T2DM组家兔平均空腹血糖值显著高于对照组(P<0.01)。
大叶蛇葡萄总黄酮大小剂量均能明显降低 T2DM兔血糖 ,给
药后家兔空腹血糖值下降 ,与模型对照组相比均有极显著
性差异(P<0.01),并且其降血糖作用随治疗时间延长而
日趋显著。大叶蛇葡萄总黄酮大剂量治疗组降糖效果优
于小剂量治疗组(P<0.05),但与二甲双胍组比较无明显
差别(P>0.05)。见表 1。
表 1　大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病兔空腹血糖值的影响(mmol/L, x±s)
组别 n 给药前血糖值 给药后 2周血糖值 给药后 6周血糖值
正常对照组 6 5.03±1.02 5.15±1.05 5.12±1.03
模型对照组 6 6.79±1.13＊＊ 6.62±1.16＊＊ 6.8±1.22＊＊
二甲双胍组 6 6.9±1.23＊＊ 5.93±1.09■ 5.21±1.15■■
大叶蛇葡萄总
黄酮大剂量组 6 6.95±1.18＊＊ 6.3±1.32■ 5.34±1.09■■
大叶蛇葡萄总
黄酮小剂量组 6 6.91±1.25＊＊ 6.45±1.21 5.87±1.11■■
　　注:与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型组比较 , ■P<0.05 , ■■P<
0.01。
大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病兔 NO的影响:给药前 ,各
组兔血清的 NO含量均比正常组高(P<0.05),模型对照
组的 NO呈现明显的早期升高后期下降趋势 ,与正常组及
给药前比较均有极明显差异(P<0.01)。大叶蛇葡葡总黄
酮大小剂量组在给药后 2周时能抑制 NO升高 , 6周时抑制
NO降低 ,与同期的模型组比较有明显的差异(P<0.05)。
二甲双胍组与同期模型组比较差异不明显 。见表 2。
表 2　大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病兔 NO的影响(μmol/L, x±s)
组别 n 给药前 NO含量 给药后 2周 NO含量 给药后 6周 NO含量
正常对照组 6 80.75±4 83.44±2.45 82.34±2.17
模型对照组 6 92.53±5.37＊＊ 110.78±4.896＊＊☆☆ 64.27±6.85＊＊☆☆
二甲双胍组 6 94.44±7.43＊＊ 103.35±8.47 68.13±4.81☆☆
大叶蛇葡萄总
黄酮大剂量组 6 90.08±6.31
＊＊ 93.10±7.64＊＊■ 84.89±5.23■
大叶蛇葡萄总
黄酮小剂量组 6 88.79±5.83
＊＊ 95.37±6.96＊＊■☆ 80.78±4.28■
　　注:与正常对照组比较 , ＊＊P<0.05;与模型组比较 , ■P<0.05, 与给药前比较☆P<
0.05;☆☆P<0.01。
大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病兔 iNOS与总 NOS的影
响:同正常组比较 ,给药前各组动物血清 iNOS含量均明显
增高 ,与模型对照组比较 ,在给药后 6周大叶蛇葡萄总黄
酮大小剂量组血清 iNOS含量明显降低(P<0.01),而二甲
双胍组变化不明显 。随着时间延长 ,模型组总 NOS呈现前
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期升高后期下降的趋势 ,在给药后 6周 ,模型对照组与同
期正常组总 NOS比较均极明显降低(P<0.01)。随着给
药时间的延长 ,模型组 、二甲双胍组 、大叶蛇葡萄总黄酮大
小剂量组的 iNOS、总 NOS均有所下降 ,但大叶蛇葡萄总黄
酮大剂量组的 iNOS下降更显著(P<0.01)。见表 3。
表 3　大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病兔 iNOS及总 NOS的影响(μmol/L, x±s)
组别 给药前含量 给药后 2周含量 给药后 6周含量iNOS 总 NOS iNOS 总NOS iNOS 总 NOS
正常对照组 13.21±3.02 22.54±3.65 13.55±2.90 22.18±2.99 12.73±2.15 21.46±2.55
模型对照组 18.79±2.43＊ 24.42±3.15＊ 21.23±6.85＊＊☆ 25.65±5.85＊☆☆ 15.55±3.51＊ 18.70±1.10＊＊
二甲双胍组 19.12±2.14＊＊ 23.09±3.45 19.80±0.52＊＊☆ 24.52±0.94☆ 14.55±3.09＊ 16.05±2.36＊
大叶蛇葡萄总黄酮大剂量组 17.66±2.89＊ 24.76±3.16 19.25±6.40＊＊☆☆ 23.41±3.92■☆ 11.28±2.21■■ 18.09±2.54＊■
大叶蛇葡萄总黄酮小剂量组 18.75±2.53＊ 25.87±3.74 19.87±2.90＊＊☆☆ 22.28±3.40■☆ 10.92±2.99■■ 16.83±2.01＊
　　注:与正常组比较＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与模型组比较■P<0.05 , ■■P<0.01;与给药前比较☆P<0.05, ☆☆P<0.01。
　　形态学观察:通过 HE染色 ,在光镜下观察。模型组皮
质肾小球系膜有增生 ,呈结节状玻璃样变 ,压迫毛细血管袢 ,
使毛细血管闭塞 、缺血 。肾小管有轻微颗粒变性和空泡状
变性。间质纤维结缔组织增生 ,有淋巴细胞 、浆细胞为主的
炎症细胞浸润 。大叶蛇葡萄总黄酮高剂量组的上述病理特
征有明显改善 。
3　讨　论
目前临床上动物实验均以 STZ诱导急性 1型 DM模型 ,
但临床上以 2型糖尿病居多(90%以上),且急性诱导方法
对动物损伤严重 ,死亡率较高 ,而单纯用高糖高脂饲料喂养
动物往往可以使动物血糖升高 ,但不足以达到糖尿病模型
要求水平。以高糖高脂饲料饲养家兔 3个月 ,可使其产生胰
岛素抵抗 ,再一次性小剂量腹腔注射 STZ,可选择性破坏家
兔的 β细胞制备慢性 2型 DM模型 [ 6, 7] ,更接近临床疾病的
实际发病情况 ,故而对药物作用研究更有意义。
NO是一种可溶于水的生物活性小分子物质 ,也是内
皮源性舒张因子(EDRF)[ 9] ,体内 NO对肾脏有两个生理
作用 ,即细胞间的信息传递和细胞毒作用。其是在 NOS作
用下将 L-精氨酸转变为 L-胍氨酸过程中的氧化产
物 [ 12] , NOS分为固有型(cNOS)和诱生型 (iNOS),其表达
增加提示 NO产生增加 , cNOS合成的 NO是一种信使分
子 ,它通过激活可溶性鸟苷酸环化酶 ,升高 cGMP水平发挥
生理效应 ,如舒张血管 、抑制血小板聚集 、抗平滑肌细胞增
殖 、调节神经递质等。而 iNOS合成的过量 NO主要发挥细
胞抑制和毒性效应 。Tolins等研究证实 [ 13] , NO参与了 DM
血流动力学异常的形成过程 ,但 NO含量与 NOS的活性在
DM血清和组织中的变化的报道各不相同 。已证实 [ 14] , NO
可增加肾血流量及防止肾小球硬化 ,从而减少尿蛋白的排
出 。在 DN早期 , iNOS活性增高 ,诱导出大量的 NO,而在
DN后期 ,由于持续的高糖和终末糖基化产物增加 ,可导致
肾脏内 NO合成不足。
研究显示 ,大叶蛇葡萄总黄酮能明显降低 DM兔的血
糖 ,用药早期能显著抑制 iNOS活性 ,以此减轻由 iNOS产
生的 NO对肾脏的影响 ,且大剂量组优于小剂量组。同时 ,
大叶蛇葡萄总黄酮也能明显抑制晚期 DM中 NO含量的下
降 ,其机制可能激活了 cNOS,还使其表达的 NO含量增高 ,
发挥舒张血管 、抗凝 、减轻 DM晚期中各种脏器的损伤的生
理效应 ,恢复肾脏毛细血管内皮功能 ,改善肾脏血流动力
学 ,防止晚期肾小球进一步硬化 ,改善肾脏功能 ,从而对
DM的治疗有一定的效果 。
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