全 文 ：反相高效液相色谱法分析镰形棘豆中球松素的含量
侯丰灏1 , 2 ,杨欢1, 2 ,许惠琴1 , 2 ,蔡宝昌1 , 2＊
(1南京中医药大学 , 江苏 南京　210029;2江苏省中药炮制重点实验室 ,江苏 南京　210029)
摘要:目的　建立测定藏药镰形棘豆中球松素含量的反相高效液相色谱法 ,从而为控制镰形棘豆的质量提供参考。方法
　使用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 液相色谱柱(5μm , 4.6 mm×150 mm);流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B), 梯
度洗脱程序为0 ～ 50 min , A 由 75%降至 50%, 50～ 60 min , A由 50%降至 40%, 60 ～ 65 min , A 由 40%升至 75%, 65 ～ 70
min , A保持 75%;流速为 1.0 mL/ min;检测波长为 280 nm;柱温为20 ℃;进样量为5μL。结果　样品中的球松素可以与各
干扰组分达到基线分离;用本法测定球松素的线性范围为 0.101 ～ 0.707 μg;重复性实验 RSD=1.27%(n =5);平均回收
率达到 98.2%(n=5), RSD=1.89%;试验中测得样品中球松素的含量为 0.16%。结论　本方法具有供试品溶液制备简
便 ,重复性好等优点。
关键词:镰形棘豆;球松素;含量测定;反相高效液相色谱法
中图号:R82.710.3　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2008)03-0171-02
　　藏药镰形棘豆为豆 科植物镰形棘豆
(Oxytropis falcata Bunge)的干燥全草 ,具有抗炎 、
镇痛和止血等功效[ 1] ,为藏药部颁标准收载。目
前认为 ,其活性成分为黄酮类化合物 ,但是作为一
味确有疗效的藏药 ,目前尚缺乏量化的质量控制
指标和相应的测定方法。本文在此前研究的基础
上[ 2-3] ,对从镰形棘豆中分离得到的一种二氢黄
酮(球松素 , pinostrobin)的含量进行测定 ,以期为
该药材的质量控制提供参考。
1　材料
KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);TU-1800S 紫外可见分光光度计(北京
普析通用仪器有限责任公司);AE240 电子天平
(0.01 mg ,METTLER-TOLEDO);Rotavapor R205旋
转蒸发器(Bǜchi);Agilent 1100 HPLC System , HP
Chemstation。
光谱纯甲醇和乙腈(Tedia);纯净水(娃哈
哈);冰醋酸 、无水甲酸 、无水甲醇和无水乙醇均为
分析纯(中国医药集团上海化学试剂公司);球松
素(经 HPLC测定其纯度为 99.2%,由本实验室分
离得到)。
镰形棘豆于2005年 7月采自青海省共和县 ,
由南京中医药大学药学院陈建伟教授鉴定。植物
原料阴干后 ,粉碎 ,过筛 ,收集 60 ～ 80目药材粉
末 ,放入密闭玻璃干燥器内保存。
2　方法与结果
2.1　方法
2.1.1　色谱条件
色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8(5 μm ,
4.6mm×150mm);流动相组成:乙腈-0.1%甲酸
水溶液;梯度洗脱程序为 0 ～ 50 min ,A 由 75%降
至50%,50 ～ 60 min ,A 由 50%降至 40%,60 ～ 65
min ,A 由 40%升至 75%, 65 ～ 70 min , A 保持
75%;流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:
20 ℃;进样量:5μL。
2.1.2　样品溶液的制备
取镰形棘豆细粉 1.0 g ,精密称定 ,置 50 mL
锥形瓶中 ,精密加入无水乙醇 20 mL ,称质量 ,超
声提取1 h ,冷却至室温 ,加无水乙醇补足重量 ,取
上清液 ,0.45μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液作为样
收稿日期:2008-01-08;修稿日期:2008-03-08
基金项目:教育部“春晖”计划(Z2006-1-81003);青海省科技厅项目(2007-N-534)-(中国药典)2010版一部标准研究(YS-130)
作者简介:侯丰灏(1978-),男 ,台湾台北人 ,南京中医药大学 2005级博士研究生。 ＊通讯作者:025-85811112
—171—南京中医药大学学报 2008 年 5月第 24 卷第 3期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.24 No.3 May.2008
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2008.03.009
品溶液 ,待测。
2.2　结果
2.2.1　线性关系考察
精密称取球松素5.05 mg ,加无水乙醇溶解并
定容至 50 mL ,配制成浓度为 0.101 mg/mL 的 B4
对照品溶液 , 0.45 μm 微孔滤膜滤过 。分别进样
各对照品溶液1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 、6.0 、7.0μL ,
依次进样 ,测定球松素的峰面积 。以进样量(X ,
μg)为横坐标 ,峰面积(Y)为纵坐标 ,绘制标准曲
线 ,计算得回归方程为:Y =1884.7X -22.086 , r
=0.999 6。
结果表面 ,线性关系良好 ,线性范围为 0.101
～ 0.707μg 。
2.2.2　精密度试验
分别吸取对照品溶液 5 μL ,连续进样 6 次。
结果显示色谱峰峰面积的 RSD =0.61%,表明精
密度良好 。
2.2.3　重复性试验
精密称取镰形棘豆细粉 5份 ,每份 1.0 g ,精
密称定后 ,制得样品溶液 ,分别进样 5 μL ,测定球
松素的峰面积 ,计算其 RSD=1.27%,表明该方法
的重复性良好。
2.2.4　回收率试验
取已经测定含量的镰形棘豆粉末 1.0 g ,精密
称定 ,精密加入球松素对照品溶液 1 mL(相当于
0.101 mg 球松素),制得样品溶液 ,平行制备 5份 ,
分别进样5μL ,测定峰面积。结果显示 ,该方法的
平均回收率为 98.2%, RSD=1.89%。
2.2.5　稳定性试验
取同一份样品溶液 ,分别于 0 、2 、4 、8 、16 、24 、
48 h进样 5μL ,测定球松素的峰面积 。结果显示
在 48 h内样品溶液性质稳定(RSD =1.76%)。
2.2.6　样品测定
制得镰形棘豆的样品溶液 1份 ,进样 5μL ,测
定球松素的峰面积 ,代入回归方程计算进样量并
折算成干药材的百分含量为 0.16%。
3　讨论
(1)实验中对比了 0.1%醋酸水溶液-甲醇 、
0.1%甲酸水溶液-甲醇 、0.1%醋酸水溶液-乙
腈 、0.1%甲酸水溶液-乙腈 4种溶剂系统 。结果
显示 ,以 0.1%甲酸水溶液 -乙腈为流动相进行
梯度 ,出峰数量较多 ,分离度较好。
(2)实验中对比了 Agilent Zorbax 80A Extend-
C18液相色谱柱(5μm ,4.6 mm×250 mm)和 Agilent
Zorbax Eclipse XDB-C8 液相色谱柱(5 μm ,4.6 mm
×150 mm),结果显示 Zorbax Eclipse XDB-C8 色谱
柱的分离效果更好。
参考文献:
[ 1]姜华 , 胡君茹 , 刘霞.镰形棘豆的研究进展[ J] .中草
药 , 2006 , 37(2):314.
[ 2] 杨欢 ,王栋 , 童丽 , 等.镰形棘豆的化学成分研究(Ⅰ)
[ J] .中国药学杂志 , 2008 , 43(5):18-20.
[ 3] 杨欢 ,王栋 , 童丽 , 等.镰形棘豆的化学成分研究(Ⅲ)
[ J] .南京中医药大学学报(自然科学版), 2008 , 24(1):
43-44.
(编辑:李伟东)
An Analysis on Content of Pinostrobin in Falcate Crazyweed with Reversed Phase High-performance Liquid Chromatography
HOU Feng-hao1 , 2 , YANG hUAN1 , 2 , XU Hui-qin 1, 2 , CAI Baochang1 , 2
(1Nanjing University of Chinese Medicine , Nanjing , Jiangsu , 210029 , China;2J iangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing ,
Nanjing , Jiangsu , 210029 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish the reversed phase high-performance liquid chromatography for determination of the content of
pinostrobin in the Tibetan drug falcate crazyweed , so as to provide evidence for the quality control of falcate crazyweed .METHOD　Agi-
lent Zorbax Eclipse XDB-C8 liquid chromatographic column(5μm , 4.6 mm×150 mm)was used , with mobile phase at 0.1%water so-
lution of formic acid(A)　acetonitrile(B), gradient elution at 0～ 50 min.Formic acid was reduced from 75% to 50%, 50～ 60 min;
it was reduced from 50% to 40%, 60～ 65 min;it was raised from 40% to 75%, 65 ～ 70 min;and it was maintained at 75%.The
flow rate was 1.0 mL/min , detection wavelength was 280 nm , the column temperature was 20℃, and sample size was 5μL.RESULT
　Pinostrobin in the sample can reach the baseline separation with the interference groups.With this determination method the linear
range of pinostrobin was 0.101 ～ 0.707μg , repetitive experimentRSD= 1.27%(n =5), average recovery rate was 98.2%(n=5),
RSD=1.89%, and the content of pinostrobin in the samplewas 16%.CONCLUSION　This method has the advantage of easy prepa-
ration of solution , with good repeatability.
KEY WORDS:falcate crazyweed;pinostrobin;content determination;reversed phase high-performance liquid chromatography
—172— 南京中医药大学学报 2008年 3 月第 24卷第 3 期