全 文 ：　2009 , 35(5):125-127 Plant P rotection
收稿日期:　2008-12-25　　　修订日期:　2009-02-17基金项目:　国家科技部微生物平台项目(2005DKA21201-18)＊通讯作者 E-m ail:zhangrongyi2002@yah oo.com .cn
马拉巴栗茎基腐烂病病原菌鉴定
谭志琼 , 　范红岩 , 　张荣意＊
(海南大学环境与植物保护学院 , 儋州　571737)
摘要　马拉巴栗茎基腐烂病是一种严重危害海南省马拉巴栗生产的病害。 通过对病原菌培养性状和形态特征观
察 , 分离株被鉴定为华丽腐霉(Py thium splendens Braun),是海南省马拉巴栗茎基腐烂病的致病菌。
关键词　马拉巴栗;　茎基腐烂病;　病原菌鉴定
中图分类号:　S 436.8　　文献标识码:　A　　DOI:　10.3969/ j.issn.0529-1542.2009.05.028
Identification of the pathogen causing the foot rot on Pachira macrocarpa
Tan Zhiqiong , 　Fan Hongyan , 　Zhang Rongy i
(College of Env ironmental and Plant P rotection , Hainan University , Danzhou　571737 , China)
Abstract　The foo t ro t on Pachira macrocarpa is a se rious disease in Hainan Province.The symptoms we re de-
scribed and its pa thogen w as identified as Py thium splendens Braun based on cultural and mo rpho lo gical char acte ris-
tics.This is the fir st repo rt in China.
Key words　Pachira macrocarpa;　foo t ro t;　pathogen identification
　　马拉巴栗俗称瓜栗 、发财树 ,原产热带美洲 ,是
一种室内绿化观赏树木 ,属木棉科瓜栗属常绿乔木;
掌状复叶有 5 ～ 9小叶 ,独立成伞 ,茎干基部膨大 ,极
富观赏价值 ,很受市场欢迎。随着需求量的增加 ,在
我国的种植面积迅速扩大。
马拉巴栗茎基腐烂病对马拉巴栗的生产造成极
大的危害 ,国内外对此病都有一些报道。章桂明[ 1]
在国内首次报道此病。习平根和戚佩坤[ 2] 、李一农
和陈雪娇[ 3] 及冯家望[ 4] 陆续对此病进行了研究 ,病
原鉴定结果与章桂明报道相同 ,即引起马拉巴栗茎
基腐烂的病原菌为可可毛色二孢(Lasiod ip lodia
theobromee);此外 ,尚巧霞等[ 5] 研究报道 ,引起马拉
巴栗茎基腐烂病的病原菌为 Fusarium ud um 、F .
solani。近几年海南省某花木种植基地马拉巴栗茎
基腐烂病的发病率高达 43%,且该病害在海南省尚
未见报道 ,故有必要对病原菌进行鉴定 ,为深入研究
该病的发病规律以及指导生产上合理防治提供理论
依据。
1　材料与方法
1.1　供试材料和培养基
马拉巴栗典型病株和健株由海南省某花木种植
基地提供 。
马铃薯葡萄糖琼胶培养基(PDA)、玉米粉琼胶
培养基(CMA)、燕麦培养基分别按文献[ 6-8] 的方
法配制。
1.2　病原菌的分离和纯化
按文献[ 6]的方法:从典型病株茎基部病健交界
部位切取 5 mm ×5 mm 大小的组织 ,用 70%乙醇消
毒数秒后 ,浸入 0.1%升汞进行表面消毒 1 min ,然
后用灭菌水冲洗 4次 。置于 PDA 平板上 ,恒温培
养 ,采用稀释纯化法纯化菌种 ,保存备用。
1.3　致病性测定
采用茎基刺伤法进行接种[ 6] ,以 70%乙醇表面
消毒 ,无菌水冲洗 ,从培养基的菌落边缘挑取菌丝块
贴在刺伤的植株茎基表面 ,用蘸无菌水的脱脂棉贴
在接种点上保湿;同时设置接种 PDA培养基和接种
2009
无菌水的对照 ,每个处理 3次重复 ,观察并记录发病
情况。
1.4　孢子囊的诱导产生
将 PDA平板上的菌落切成 5 mm×5 mm 的小
块 ,分别置于无菌水 、池塘水 、土壤上清液(取农田表
土 500 g ,加入去离子水 500 mL ,充分搅拌后静置数
小时 ,用滤纸过滤制得)中 , 以刺激孢子囊的产
生[ 6-8] ,待孢子囊大量产生后制片观察。描述孢子囊
形态 ,测量孢子囊大小及主菌丝直径并拍照 。
1.5　有性器官的诱导产生
挑取在 PDA平板上的菌块 ,分别置于燕麦培养
基 、玉米粉琼胶培养基上 ,用湿热灭菌的马唐草 、胡
萝卜等作诱饵 ,诱导其产生有性器官[ 7-9] 。对产生的
有性器官制片 ,镜检藏卵器 、雄器 、卵孢子 ,记录其形
态特征 、测量其大小并拍照 。
2　结果与分析
2.1　病害症状
发病初期地上部症状不明显 ,初期茎基部先呈
浅褐色 ,而后颜色逐渐变为褐色至黑色 。随着病害
的发展 ,植株茎基部发病部位开始软化 ,用手轻压可
产生凹陷;在高温高湿的条件下 ,皮层易分离 ,拨开
外表皮 ,可见内部组织腐烂 ,病部下陷失水 ,随着病
斑扩大 ,内部组织成纤维状 ,严重时地上部叶片黄
化 ,似水渍害 ,后期整株死亡 ,地上部易从基部腐烂
处弯折(封面图 a)。
2.2　病原菌的分离 、纯化
在 PDA平板上共获得 18个分离株 ,且它们的
菌落特征完全一致:菌落边缘整齐 ,呈棉絮状 ,白色;
气生菌丝较丰富 、分支 ,菌丝多数无隔 ,少数有隔 ,无
色 ,112 h可长满 9 cm 的 PDA 平板 。随机选取 1个
分离株 ,进行了孢子囊的诱导和纯化 ,共获得 10个
纯化株 ,且它们的菌落特征完全一致同时又与分离
株的菌落特征完全一致 。
2.3　致病性测定
健康马拉巴栗苗茎基部人工接种纯化的菌株 4
d后开始显症 ,发病初期地上症状不明显 ,茎基刺伤
处颜色变暗 ,病部开始变软;接种 7 d 后 ,病部下陷
失水 ,与水渍害相似 ,随着病斑的扩大 ,地上部叶片
黄化 ,最后导致整株死亡 。接种症状与田间出现症
状完全相同 ,从接种发病组织中分离出菌落特征与
纯化株完全相同的菌株 ,证明分离到的菌株为马拉
巴栗茎基腐烂病的病原菌。接 PDA 培养基和无菌
水的对照都无任何症状表现 。
2.4　病原菌的形态
在 PDA平板上 ,主菌丝直径 4.56 ～ 9.60 μm ,
平均直径 5.53 μm 。用池塘水培养 24 h ,产生大量
的孢子囊 ,无色光滑 ,无乳突 ,多圆球形 、少亚球形 ,
大多顶生 、少数间生 , 球形孢子囊直径 16.68 ～
33.36 μm ,平均直径 27.11μm(封面图 b 、c)。经湿
热灭菌的马唐草作诱饵 ,在燕麦琼脂培养基上产生
有性器官(封面图 d ～ i)。藏卵器顶生或间生 ,球形 ,
表面光滑 , 直径 25.02 ～ 37.95 μm , 平均直径
32.19 μm(封面图 d ～ h);卵孢子球形 ,黄色 ,不满
器 ,直径 25.08 ～ 35.76μm ,平均直径 26.34 μm(封
面图 i);雄器同丝生 ,较大 ,袋状或弯棍棒状(封面图
d 、e 、g 、h),每个藏卵器有一到多个雄器 ,形成多个雄
器围绕一个藏卵器的现象(封面图 e)。对照相关文
献[ 7-12] ,将分离株鉴定为华丽腐霉(Py thium sp len-
dens Braun)。
3　结论与讨论
马拉巴栗茎基腐烂病是海南省马拉巴栗生产中
的一种重要病害 ,通过致病性测定 ,证明分离株为本
病的病原菌。通过诱导病原菌产生无性态和有性
态 ,且对其进行形态观察 , 其形态特征与相关文
献[ 7-12]报道的华丽腐霉(Pythium splendens Braun)
相一致 ,因此将此分离株鉴定为华丽腐霉 ,该菌为海
南省马拉巴栗茎基腐烂病的病原菌。
国内先后有多人对该病进行了研究 ,但结果并
不一致 。可可毛色二孢(Lasiodip lodia theobro-
mae)[ 1-4] 及 F.udum 、F.solani[ 5] 都可诱发马拉巴
栗茎基腐烂病 。本研究结果与前人研究结果不同 ,
产生这种现象的原因可能是该病的致病菌有多种 ,
在不同环境条件下优势病原菌不同 ,并且本文分离
株 4 d就显症 ,而文献[ 5]的 F.udum 、F .solani分
别在接种后 21 、18 d才显症。
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35 卷第 5 期 谭志琼等:马拉巴栗茎基腐烂病病原菌鉴定
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封面说明 马拉巴栗茎基腐烂病症状及病原菌形态特征
a:病害后期症状;b:顶生孢子囊(池塘水诱导);c:游离孢子囊(池塘水诱导);d、e:雄器围绕藏卵器(马唐草诱导);f 、g 、h:
同丝生雄器缠绕藏卵器(马唐草诱导);i:卵孢子(马唐草诱导)。(比例尺:20 μm)。
征订启事
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