全 文 ：第３８卷 第１１期
２０１０年１１月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．３８ Ｎｏ．１１
Ｎｏｖ．２０１０
甘肃棘豆生物碱对小鼠Ｓ１８０肉瘤生长及
ｐ５３蛋白表达的影响
＊?
吴 达１，３，龙 玲２，师彦平４，张彦明１
（１西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌７１２１００；２西北民族大学 生命科学院，甘肃 兰州７３００００；
３甘肃出入境检验检疫局，甘肃 兰州７３００２０；４中国科学院 兰州化学物理研究所，甘肃 兰州７３００００）
［摘 要］ 【目的】探讨甘肃棘豆生物碱对小鼠Ｓ１８０肉瘤的作用及机制。【方法】将带有Ｓ１８０肉瘤的小鼠分为５
组：生理盐水阴性对照组，甘肃棘豆生物碱低（０．２５ｇ／ｋｇ）、中（０．５ｇ／ｋｇ）、高（１．０ｇ／ｋｇ）剂量组及环磷酰胺阳性对照
组，给药１０ｄ后，剖取瘤块、胸腺、脾脏、肝脏和肾脏，计算抑瘤率及胸腺、脾脏系数增长率和体质量增长率；采用 ＨＥ
染色对肿瘤、肝脏、肾脏进行病理观察；免疫组化ＳＰ法计ｐ５３阳性细胞数。【结果】以阴性对照组为基数，生物碱低、
中、高各剂量组及环磷酰胺阳性对照组对肿瘤均有不同程度的抑制作用，抑瘤率分别为３５．８５％，４５．２８％，５１．８９％和
６６．０４％ （Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；生物碱各剂量组和环磷酰胺组ｐ５３阳性细胞数也明显低于阴性对照组（Ｐ＜０．０５）；
胸腺和脾脏系数增长率及体质量增长率结果显示，甘肃棘豆生物碱对小鼠胸腺、脾脏和体质量增长无明显影响（Ｐ＞
０．０５）。【结论】甘肃棘豆生物碱对小鼠Ｓ１８０肉瘤的生长具有一定抑制作用，其机制可能与抑制突变型ｐ５３蛋白的表
达有关。
［关键词］ 甘肃棘豆；生物碱；Ｓ１８０肉瘤；ｐ５３
［中图分类号］ Ｒ２８５．５；Ｒ７３０．５２ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １６７１－９３８７（２０１０）１１－００１９－０５
Ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ
ｏｆ Ｓ１８０ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３
ＷＵ Ｄａ１，３，ＬＯＮＧ Ｌｉｎｇ２，ＳＨＩ Ｙａｎ－ｐｉｎｇ４，ＺＨＡＮＧ Ｙａｎ－ｍｉｎｇ１
（１ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，
Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ７３００００，Ｃｈｉｎａ；３ Ｇａｎｓｕ Ｅｎｔｒｙ－ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ
Ｂｕｒｅａｕ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ７３００２０，Ｃｈｉｎａ；４ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｃｓ，ＣＡＳ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ７３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯｘｙｔｒｏｐｉｓ ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ
ｏｎ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ１８０ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅ Ｓ１８０ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ
５ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｅｎ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ，ｔｈｙｍｕｓ，ｓｐｌｅｅｎ，ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ ｗｅｒｅ ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ，ｔｈｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ａｎｄ ｔｈｅ ｇａｉｎｉｎｇ ｉｎ ｗｅｉｇｈｔ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ
ｐ５３ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌ ｎｕｍｂｅｒ ｃｏｕｎｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏ－ｃｈｅｍｉｃａｌ ＳＰ ｍｅｔｈｏｄ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｉｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ，ａｌｋａｌｏｉｄ ａｎｄ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗｅｄ ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ３５．８５％，４５．２８％，５１．８９％ａｎｄ
６６．０４％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０５ｏｒ Ｐ＜０．０１），ａｎｄ ａｌｓｏ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｐ５３ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌ ｎｕｍｂｅｒｓ（Ｐ＜
０．０５）．Ｔｈｅ ｇｒｏｗｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｙｍｕｓ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｓｐｌｅｅｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎｉｎｇ ｒｅｆｌｅｃｔｅｄ
＊ ［收稿日期］ ２０１０－０５－１１
［基金项目］ 中国科学院“百人计划”资助项目
［作者简介］ 吴 达（１９７６－），男，甘肃白银人，在读博士，主要从事进出境动物及其产品检验检疫技术研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｉｑｇｓｗｄ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
［通信作者］ 张彦明（１９５６－），男，陕西南郑人，教授，博士，博士生导师，主要从事分子病原学与免疫学研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｌｚｈａｎｇｙｍ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2010.11.029
ｔｈｅ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｈａｄ ｎｏｔ ｔｈｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ，ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｇａｉｎｉｎｇ ｉｎ ｗｅｉｇｈｔ
（Ｐ＞０．０５）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ａｎ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａ－
ｎｉｓｍ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｕｔａｔｅｄ ｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ；ａｌｋａｌｏｉｄ；ｓａｒｃｏｍａ１８０；ｐ５３
甘肃棘豆（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ Ｂｕｎｇｅ）是豆科
棘豆属多年生草本植物，毒性很强，分布在我国西
北、西南地区的大片牧区，严重威胁着草原畜牧业的
发展。目前对其的研究热点是防除和综合利用［１－３］。
据报道，甘肃棘豆醇提物对小鼠Ｓ３７肉瘤、Ｈ２２肝癌腹
水瘤有明显的抑制作用［４］，其生物碱也有较强的抗
肿瘤活性［５－７］。为了进一步探讨其抑制肿瘤生长的
机理，本试验按照体内抗肿瘤活性筛选规程，首选
Ｓ１８０肉瘤，进一步证实了甘肃棘豆生物碱抗肿瘤的活
性作用，并从分子生物学水平观察了在生物碱干预
下，与恶性肿瘤发生发展过程密切相关的突变型
ｐ５３蛋白的表达，以期为甘肃棘豆生物碱抗肿瘤的
作用机理研究提供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 材 料
１．１．１ 动物及瘤细胞株 ６～８周龄昆明种小鼠，
体质量（２０±２．０）ｇ，雄性，由甘肃省医学科学研究
院实验动物中心提供，合格证号：医动字第１４－００９
号；饲养环境：温度２０～２２℃，空气相对湿度４５％～
５０％，环境设施合格证：医动字第１４－０１９号。Ｓ１８０肉
瘤细胞株，购于中国医学科学院药物研究所。
１．１．２ 药 物 甘肃棘豆生物碱，由中国科学院兰
州化学物理研究所分离分析室提取，参照预试验及
活性筛选给药量，设置低（０．２５ｇ／ｋｇ）、中（０．５
ｇ／ｋｇ）、高（１．０ｇ／ｋｇ）３ 种剂量备用；环磷酰胺
（ＣＴＸ），由中美合资山西泰盛制药有限公司提供，批
号０１１１２１。
１．２ 方 法
１．２．１ 接 种 选择接种Ｓ１８０后７～１０ｄ的健康小
鼠，按常规方法，无菌抽吸腹水，用生理盐水按体积
比１∶４稀释后，显微镜下计活细胞数，调整细胞密
度为１．４６×１０６ ｍＬ－１，于小鼠右前腋下接种０．２
ｍＬ／只。
１．２．２ 分 组 接种次日，随机将小鼠分为５组，
即生物碱３个剂量组、环磷酰胺阳性对照组和生理
盐水阴性对照组，其中阴性对照组小鼠数量为１２
只，其他各组均为１０只。
１．２．３ 给药及术后检查 接种２４ｈ后开始给药，
生物碱３个剂量组均灌胃相应质量浓度的生物碱溶
液０．４ｍＬ／只，剂量分别为０．２５ｇ／ｋｇ（低）、０．５
ｇ／ｋｇ（中）和１．０ｇ／ｋｇ（高）；阴性对照组灌胃生理盐
水０．４ｍＬ／只；环磷酰胺阳性组腹腔注射ＣＴＸ溶液
０．２ｍＬ／只，剂量为２５ｍｇ／ｋｇ。所有动物每天给药
１次，连续１０ｄ，并隔日称体质量１次。停药次日脱
颈处死小鼠，剖取瘤块、胸腺、脾脏、肝脏和肾脏，瘤
块、胸腺、脾脏称质量，计算抑瘤率、胸腺（脾脏）系数
增长率及体质量增长率。对剖取的肿瘤、肝脏、肾脏
进行病理检查（ＨＥ染色）。生物碱中剂量组及环磷
酰胺阳性对照组、阴性对照组瘤体用免疫组化ＳＰ
法检测ｐ５３蛋白的表达水平。鼠抗ｐ５３单克隆抗体
购自福州迈新生物制剂公司。免疫组化ＳＰ法的具
体操作步骤按试剂说明书进行。
１．３ 试验结果的判定及数据处理
１．３．１ 抑瘤率 抑瘤率＝（１－给药组平均瘤质量／
对照组平均瘤质量）×１００％［８］。
１．３．２ 胸腺（脾脏）系数及增长率 胸腺（脾脏）系
数＝胸腺（脾脏）质量（ｍｇ）／去瘤质量（ｇ）×１０；胸腺
（脾脏）系数增长率＝（给药组胸腺（脾脏）系数／对照
组胸腺（脾脏）系数）×１００％。
１．３．３ 动物体质量增长率 动物体质量增加量＝
去瘤体质量－起始体质量。
动物体质量增长率＝（给药组体质量增加量－对
照组体质量增加量）／对照组体质量增加量×１００％。
１．３．４ ｐ５３蛋白的阳性判定标准 以细胞核呈现
明确的棕褐色颗粒状染色为阳性反应，并以此为目
标进行真彩色图像分析处理（德国 ＫＯＮＴＲＯＮ
ＩＢＡＳ ２．５版全自动图像分析系统），获得定量数
据［９］。随机观察１０个高倍镜视野，计每个高倍镜视
野１００个肿瘤细胞中的阳性细胞数，取其平均值作
为ｐ５３的阳性细胞数［１０］。
１．３．５ 数据处理 所有数据用ＳＰＳＳ １０．０统计软
件中的单因素方差分析方法进行统计处理。
２ 结果与分析
２．１ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０的抑
制作用
由表１可以看出，甘肃棘豆生物碱低、中、高３个
０２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷
剂量组，对小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０均有明显的抑制作用，
重复性较好，与阴性对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５），
抑瘤率分别为３５．８５％，４５．２８％和５１．８９％。试验结
果还表明，甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０的
抑制具有一定的剂量依赖性，即随剂量的增大其抑制
作用相应加强，但其对小鼠的毒性也在增大。
表１ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０生长的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｓ１８０
组别
Ｇｒｏｕｐ
剂量／
（ｇ·ｋｇ－１）
Ｄｏｓｅ
动物数量
（始／末）
Ａｎｉｍａｌ ａｍｏｕｎｔ
（Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ／ｅｎｄ）
瘤质量／ｇ Ｔｕｍｏｒ ｗｅｉｇｈｔ
给药组
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ
阴性对照组
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
抑瘤率／％
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｒａｔｅ
Ｐ值
生物碱低剂量组Ｌｏｗ ｇｒｏｕｐ ０．２５ １０／１０ ０．６８±０．３０ １．０６±０．４４ ３５．８５ ０．０３４
生物碱中剂量组 Ｍｅｄｉａ ｇｒｏｕｐ ０．５ １０／１０ ０．５８±０．２２ １．０６±０．４４ ４５．２８ ０．００４
生物碱高剂量组 Ｈｉｇｈ ｇｒｏｕｐ １．０ １０／７ ０．５１±０．２５ １．０６±０．４４ ５１．８９ ０．００１
ＣＴＸ ０．０２５ １０／１０ ０．３６±０．１１ １．０６±０．４４ ６６．０４ ０．０００
２．２ 甘肃棘豆生物碱对荷Ｓ１８０肉瘤小鼠免疫器官及
体质量的影响
表２、３结果显示，与阴性对照组相比，甘肃棘豆
生物碱３个剂量对小鼠胸腺、脾脏没有明显影响
（Ｐ＞０．０５）；除大剂量组外，对小鼠体质量的增加也
无明显的抑制作用（Ｐ＞０．０５）（表４）。
表２ 甘肃棘豆生物碱对荷Ｓ１８０小鼠胸腺的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｔ ｔｏ ｔｈｙｍｕｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ Ｓ１８０
组别
Ｇｒｏｕｐ
剂量／
（ｇ·ｋｇ－１）
Ｄｏｓｅ
动物数量
（始／末）
Ａｎｉｍａｌ ａｍｏｕｎｔ
（Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ／ｅｎｄ）
胸腺系数 Ｔｈｙｍｕｓ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
给药组
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ
阴性对照组
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
增长率／％
Ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ Ｐ
值
生物碱低剂量组Ｌｏｗ ｇｒｏｕｐ ０．２５ １０／１０ ２２．４８±８．０６ ２６．０３±５．７７ －１３．７４ ０．５１６
生物碱中剂量组 Ｍｅｄｉａ ｇｒｏｕｐ ０．５ １０／１０ ２４．９１±４．５８ ２６．０３±５．７７ －４．４１ ０．９９１
生物碱高剂量组 Ｈｉｇｈ ｇｒｏｕｐ １．０ １０／７ ２１．４２±４．６１ ２６．０３±５．７７ －１７．８１ ０．２９６
ＣＴＸ ０．０２５ １０／１０ １０．６５±２．４７ ２６．０３±５．７７ －５９．１３ ０．０００
表３ 甘肃棘豆生物碱对荷Ｓ１８０小鼠脾脏的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｔｏ ｓｐｌｅｅｎ ｏｆ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ Ｓ１８０
组别
Ｇｒｏｕｐ
剂量／
（ｇ·ｋｇ－１）
Ｄｏｓｅ
动物数量
（始／末）
Ａｎｉｍａｌ ａｍｏｕｎｔ
（Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ／ｅｎｄ）
脾脏系数Ｓｐｌｅｅｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
给药组
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ
阴性对照组
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
增长率／％
Ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ Ｐ
值
生物碱低剂量组Ｌｏｗ ｇｒｏｕｐ ０．２５ １０／１０ ９３．３０±４４．００ ８３．０６±１５．０７ １２．３３ ０．８１４
生物碱中剂量组 Ｍｅｄｉａ ｇｒｏｕｐ ０．５ １０／１０ ８７．９８±１７．１０ ８３．０６±１５．０７ ５．９２ ０．９８９
生物碱高剂量组 Ｈｉｇｈ ｇｒｏｕｐ １．０ １０／７ ８３．６４±２２．５４ ８３．０６±１５．０７ ０．７０ １．０００
ＣＴＸ ０．０２５ １０／１０ ４８．７２±１５．２６ ８３．０６±１５．０７ －４１．３４ ０．０１２
表４ 甘肃棘豆生物碱对荷Ｓ１８０小鼠体质量的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ ｔｏ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ Ｓ１８０
组别
Ｇｒｏｕｐ
剂量／
（ｇ·ｋｇ－１）
Ｄｏｓｅ
动物数量
（始／末）
Ａｎｉｍａｌ ａｍｏｕｎｔ
（Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ／ｅｎｄ）
体质量增加量／ｇ Ｇａｉｎｉｎｇ ｉｎ ｗｅｉｇｈｔ
给药组
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ
阴性对照组
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
增长率／％
Ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ
生物碱低剂量组Ｌｏｗ ｇｒｏｕｐ ０．２５ １０／１０ ６．９２±２．２７ ６．７３±２．５７ ２．８２
生物碱中剂量组 Ｍｅｄｉａ ｇｒｏｕｐ ０．５ １０／１０ ６．７１±１．９２ ６．７３±２．５７ －０．３０
生物碱高剂量组 Ｈｉｇｈ ｇｒｏｕｐ １．０ １０／７ ６．２９±１．９０ ６．７３±２．５７ －６．５４
ＣＴＸ ０．０２５ １０／１０ ２．１０±２．５０ ６．７３±２．５７ －６８．８０
２．３ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性Ｓ１８０肿瘤细胞
形态和数量的影响
瘤体组织切片染色观察结果（图１）表明，生物
碱组、环磷酰胺组与阴性对照组相比，Ｓ１８０细胞数量
明显减少，呈零散单层分布，细胞出现核深染固缩、
核溶解等坏死现象，周围有大片无结构的红染坏死
物质［１１］。阴性对照组的Ｓ１８０细胞大小、形状不一，数
量明显较多，细胞核异形性，胞核浓染；核浆比很大，
细胞排列整齐、紧密。
２．４ 甘肃棘豆生物碱对荷Ｓ１８０肉瘤小鼠肝、肾毒性
的影响
试验末剖取参试小鼠的肝脏、肾脏，眼观色泽质
地正常，无病变；肝脏病理切片镜检可见明显的中央
静脉及肝小叶，肝细胞排列紧凑、整齐；肾脏肾小球、
肾小管亦明显，未见明显病理性变化（图２）。
１２第１１期 吴 达，等：甘肃棘豆生物碱对小鼠Ｓ１８０肉瘤生长及ｐ５３蛋白表达的影响
图１ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性Ｓ１８０肿瘤细胞形态和数量的影响（ＨＥ，２０×）
Ｆｉｇ．１ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ（ＨＥ，２０×）
图２ 甘肃棘豆生物碱对荷Ｓ１８０肉瘤小鼠肝、肾毒性的镜检切片（ＨＥ，２００×）
Ｆｉｇ．２ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ ｏｆ ｍｉｃｅ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ（ＨＥ，２００×）
２．５ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性Ｓ１８０肿瘤ｐ５３
表达的影响
将所制切片在光学显微镜高倍镜下观察，ｐ５３
阳性细胞细胞核呈现明显的棕褐色颗粒状染色，而
阴性细胞细胞核蓝染。免疫组化试验结果（图３）表
明，生物碱组和环磷酰胺阳性对照组的ｐ５３蛋白阳
性表达水平明显降低；由表５可以看出，其ｐ５３阳性
细胞数也不同程度地低于阴性对照组（Ｐ＜０．０５）。
图３ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性Ｓ１８０肿瘤ｐ５３表达影响的染色观察
Ｆｉｇ．３ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ｏｎ Ｓ１８０ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ
２２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷
表５ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性Ｓ１８０肿瘤ｐ５３表达的影响
Ｔａｂｌｅ ５ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ｏｎ Ｓ１８０ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｌｋａｌｏｉｄ ｆｒｏｍＯ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ
组别
Ｇｒｏｕｐ
动物数量
Ａｎｉｍａｌ ａｍｏｕｎｔ
ｐ５３阳性细胞数
ｐ５３ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌ ｆｉｇｕｒｅ Ｐ
值
环磷酰胺组ＣＴＸ ｇｒｏｕｐ １０ ３０．２０±４．５９ ０．０００
生物碱组Ｏｌｋａｌｏｉｄ ｇｒｏｕｐ １０ ４６．００±９．８８ ０．００１
阴性对照组Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １２ ７６．３０±５．１５
３ 讨 论
３．１ 甘肃棘豆生物碱对小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０的抑
制作用
本试验以Ｓ１８０肉瘤小鼠为动物模型，观察了甘
肃棘豆生物碱的抑瘤作用，结果表明，甘肃棘豆生物
碱对小鼠移植性Ｓ１８０肉瘤的生长具有明显抑制作
用，０．２５和０．５ｇ／ｋｇ剂量组抑瘤率分别为３５．８５％
和４５．２８％，这与前人的研究结果相似，进一步证实
了甘肃棘豆生物碱的抗肿瘤作用。
３．２ 甘肃棘豆生物碱干预ｐ５３蛋白表达的意义
免疫组化试验结果表明，经甘肃棘豆生物碱处
理荷Ｓ１８０小鼠后，ｐ５３蛋白表达水平明显降低。ｐ５３
是５３ｋｕ的核内磷酸蛋白［１２］，免疫组化法可检测到
其阳性表达［１３］。ｐ５３是促进肿瘤发生、发展及导致
增殖异常活跃的一个重要因素［１４－１６］。本研究中，阴
性对照组ｐ５３蛋白呈现高表达，生物碱给药组和环
磷酰胺组肿瘤组织ｐ５３蛋白呈现较低表达，说明它
们能较好地防止肿瘤细胞中ｐ５３蛋白成为被激活的
突变型ｐ５３癌基因，从而减缓肿瘤的生长和恶变。
３．３ 甘肃棘豆生物碱抑制Ｓ１８０肉瘤生长的机理探讨
本试验首次对甘肃棘豆生物碱抑制肿瘤的机理
进行了探讨。组织学检查结果表明，其对Ｓ１８０肿瘤
细胞具有直接作用，可使肿瘤细胞出现核固缩、核碎
裂及核溶解等坏死现象；免疫组化结果表明，甘肃棘
豆生物碱抑制小鼠Ｓ１８０肉瘤生长的机理与降低突变
型ｐ５３蛋白的表达有关；对小鼠胸腺、脾脏质量的分
析结果表明，甘肃棘豆生物碱对荷瘤小鼠胸腺、脾
脏、体质量的增加没有明显影响。
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３２第１１期 吴 达，等：甘肃棘豆生物碱对小鼠Ｓ１８０肉瘤生长及ｐ５３蛋白表达的影响
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０３ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷