全 文 ：为生地 10g/kg每日腹腔注射 , 连续 7或 30 d[ 5] 、生地注射液
760mg/kg(以固形物量计)静脉注射 [ 6] 。生地 RGOS的成分较为
单纯 , 其 LD50与上述注射剂量对比 ,还是有一定的安全阈的。雌
雄小鼠静脉注射生地 RGOS后 ,其体质量增长及食耗量受到明显
的抑制 , 表明静注 RGOS对小鼠的食欲有一定的抑制作用 , 并影
响小鼠的体质量增长。可见 , 静脉注射在一定的剂量范围内 ,是
较为安全的 , 但对有效剂量的要求较高 , 对体质量有一定影响 ,而
超声雾化吸入在最大给药量时亦无明显毒性反应 , 且给药方便 ,
对于治疗 COPD无疑是一个理想的给药途径。
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收稿日期:2009-08-05;　修订日期:2009-11-10
基金项目:国家自然科学基金 (No.30873364);
吉林省科技厅科研项目(No.20071102;200905109);
吉林省教育厅科研项目(2008-167;2008-170)
作者简介:刘质净(1983-),女(汉族),黑龙江齐齐哈尔人 ,现为黑龙江中
医药大学在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事天然产物化学研究工作.
＊通讯作者简介:刘春明(1964-), 女(汉族),吉林通化人 , 现任长春师范
学院教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物化学研究工作.
玄参中多酚类化合物的抗氧化活性研究
刘质净 2 , 李　丽1 ,王　晶 1 ,闫　静2 ,刘春明 1＊
(1.长春师范学院中心实验室 ,吉林 长春　130032;　2.黑龙江中医药大学 ,黑龙江哈尔滨　150040)
摘要:目的 采用超声法分别以不同提取时间 、不同浓度乙醇水溶液和不同极性提取溶剂对玄参中多酚类化合物进行提
取。方法 采用 Folin-Ciocalteu方法测定玄参不同提取物的总多酚含量 , 并通过 DPPH抗氧化活性体外评价体系测定玄
参不同提取物的抗氧化活性 、清除自由基的能力。结果 40%乙醇提取物的总多酚含量最高 , 而 20%乙醇提取物具有最
好的清除 DPPH自由基的能力。结论 玄参中多酚类化合物具有较好的体外抗氧化活性。
关键词:玄参;　抗氧化活性;　总多酚;　DPPH
中图分类号:R962　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)04-0796-03
AntioxidantActivitiesofPolyphenolfromScrophularianingpoensisHemsl
LIUZhi-jing2 , LILi1 , WANGJing1 ,YANJing2 , LIUChun-ming1＊
(1.TheCentralLaboratory, ChangchunNormalUniversity, Changchun130032, China;2.HeilongjiangUniver-
sityofTraditionalChineseMedicine, Harbin150040, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheantioxidantactivitiesofpolyphenolicsinScrophularianingpoensisHemsl.MethodsFolin-
Ciocaileumethodwasdevelopedforevaluationofthetotalphenoliccontent(TPCs)ofdiferentextracts, andthefreeradical2, 2
-diphenyl-1 - picrylhydrazyl(DPPH˙)assaywasusedtomeasuretheantioxidantactivityofdiferentextracts.
ResultsTheTPCsof40% ethanolextractshowedthehighestTPCs, andthe20% ethanolextracthadthestrongestactivityof
scavengingfreeradicals.ConclusionThepolyphenolextractsofScrophulariaehavegoodantioxidantactivity.
Keywords:Scrophulariae;　Antioxidantactivity;　Totalphenolic;　DPPH
　　玄参为玄参科植物玄参 ScrophularianingpoensisHemsl的干
燥根 , 别名元参 、黑参 、浙玄参 、乌元参等。 玄参中含有丰富的多
酚类化合物 [ 1 ～7] 。多酚类化合物的主要功能性质是作为许多酶
体系的抑制剂或激活剂 、金属螯合剂以及自由基清除剂 [ 8, 9] 。多
酚类化合物通过酚羟基的离解和自由基途径产生抗氧化作
用 [ 10 , 11] , 是医药 、食品 、化妆品中很有前景的一类天然抗氧化剂
和自由基清除剂。本实验对玄参药材中多酚类化合物的抗氧化
活性进行了系统的分析研究 ,采用 Folin-ciocalteu法测定不同提
取样品中总多酚的含量 ,并通过 DPPH抗氧化体外评价方法比较
不同提取样品清除 DPPH自由基的能力 , 为玄参作为天然抗氧化
剂的研究开发提供基础。
1　材料与仪器
玄参 ScrophularianingpoensisHemsl药材购于北京同仁堂长
春药店;Folin-Ciocalteu试剂 ,没食子酸标准品 , 2, 2-diphenyl-
1-picrylhydrazyl(DPPH˙)等购自 SigmaChemicalCo.公司
(St.Louis, Mo);实验所用试剂均为分析纯试剂购于北京北化精
细化学品有限责任公司;水为超纯水 18.2 ΨPa。
Beckman公司 DU800型紫外可见分光光度计;SHB-Ⅲ循环
水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);BS-124S电子天
平(SartoriusAG, Sartorius);加样枪(Germany);HS-Z11 -Ⅱ电
热蒸馏水器(上海跃进医疗器械厂);旋转蒸发仪(上海爱郎仪器
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有限公司)。
2　方法与结果
2.1　样品提取分离
2.1.1　常温下不同超声时间提取 精密称取干燥至恒重的同一
批药材粉末 5份 , 分别称取 1.997 7, 2.001 6, 1.996 4, 2.009 2,
2.000 9 g,置于具塞锥形瓶中 ,分别加入 80%乙醇 50ml, 常温下
超声提取 30, 60, 90, 120, 150 min, 静置 ,放冷 , 过滤 , 残渣用提取
溶剂洗涤 1次 , 合并滤液 , 置旋转蒸发仪减压回收溶剂至干 , 用
50%乙醇 3 ml溶解 ,得样品。
2.1.2　常温下不同浓度乙醇提取 精密称取干燥至恒重的同一
批药材粉末 5份 , 分别取 1.996 2, 2.007 2, 2.001 5, 1.997 7,
2.001 0 g,置具塞锥形瓶中 , 分别加入 20%, 40%, 60%, 80%,
100%乙醇水溶液 50 ml, 常温下超声提取 30 min, 静置 , 放冷 ,过
滤 , 残渣用提取溶剂洗涤 1次 ,合并滤液 , 置旋转蒸发仪减压回收
溶剂至干 , 用 50%乙醇 3 ml溶解 ,得样品。
2.1.3　常温下不同溶剂提取 精密称取干燥至恒重的同一批药
材粉末 3份 , 分别取 1.997 7, 2.000 2, 2.000 9 g, 置具塞锥形瓶
中 , 分别加入 80%乙醇 、正丁醇 、丙酮 50 ml, 常温下超声提取 30
min,静置 ,放冷 ,过滤 ,残渣用提取溶剂洗涤 1次 ,合并滤液 ,置旋
转蒸发仪减压回收溶剂至干 ,用 50%乙醇 3 ml溶解 ,得样品。
2.2　抗氧化活性体外分析实验
2.2.1　样品总多酚含量测定 样品总酚含量的测定采用 Folin-
Ciocalteu方法 [ 12] , 结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的
毫克数。吸取 0.2 ml一定浓度(使吸光度值落在标准曲线上)
的样品溶液 , 加入 1ml0.5 mol/L的 Folin-Ciocalteu试剂 , 再加
入 0.8 ml7.5%的碳酸钠溶液充分混合 ,室温下放置 0.5 h, 然
后在 765 nm下测吸光度。用没食子酸溶液(质量浓度范围为
0.02 ～ 0.2 mg/ml)制作标准曲线 , Y=9.562 3X-0.133 2(R2 =
0.999 9),如图 1所示。所有实验重复两次。
2.2.2　DPPH方法测定样品的抗氧化活性 DPPH自由基(二苯
代苦味肼基自由基 , 2-2-diphenyl-1 -picry-hydrazylradical)
是一种稳定的以氮为中心的质子自由基 , 其乙醇溶液呈紫色 ,并
在波长 515nm处有强烈吸收 。在有自由基清除剂存在时 , 自由
基清除剂提供 1个电子与 DPPH的孤对电子配对而使其褪色 ,褪
色程度与其接受的电子呈定量关系 , 在波长 515nm处的吸光度
变小 , 其变化程度与自由基清除程度呈线性关系 , 即自由基清除
剂的清除自由基能力越强 、吸光度越小 [ 13, 14] 。
准确称取 DPPH自由基 , 配置浓度为 0.040 76 mg/ml的
[ DPPH· ]乙醇溶液 , 得到 [ DPPH· ]标准曲线为:Y=18.032X-
0.001 6, R2 =0.999 3。 样品浓度范围为 0.000 815 -0.040 76
mg/ml, 如图 2所示。
图 1　没食子酸标准曲线
以乙醇为溶剂 , 配置不同浓度的玄参样品溶液 , 分别取 0.1
ml样液 ,加入 3.9ml质量浓度为 2.5 mg/100 ml[ DPPH· ]标准
液(现用现配), 以乙醇替代样液为空白。将混合溶液摇匀 , 用比
色皿 , 在 515nm波长处 , 测定其在不同时间的吸光度值 , 根据标
准曲线可以换算成 [ DPPH· ] 的质量浓度 , 从而计算出
[ DPPH· ]残留率。根据 [ DPPH· ]残留率和相应的玄参样品添
加量 , 可以绘制样品清除 [ DPPH· ]自由基的曲线。根据 [ DPPH
· ]的质量浓度与吸光度的关系曲线 ,可以将添加自由基清除剂
后侧的的吸光度换算为 [ DPPH· ]的质量浓度 , 从而计算出添加
自由基清除剂后的 [ DPPH· ]残留率 , 其计算公式如下:
[ DPPH· ] REM=[ DPPH· ] T/[ DPPH· ] T=0 ×100%
其中 [ DPPH· ] T为自由基清除过程中某一时刻 [ DPPH· ]
的质量体积分数 , [ DPPH· ] T=0为 [ DPPH· ]的原始质量体积分
数。
根据 [ DPPH· ]残留率与相应玄参提取物的添加量 , 制作二
者的关系曲线 , 通过线性回归分析可以得到回归方程 , 而根据回
归方程式可以计算出 [ DPPH· ]残留率为 50%时玄参样品的添
加量即半抑制量(EC50), EC50越小其清除自由基能力越强 ,引用
一个新的参数———自由基清除能力 AE(Antiradicaleficiency),
AE=1/EC50。根据 AE的大小判断抗氧化剂清除自由基的能力
的大小 , AE越大其清除自由基能力越强。
图 2　DPPH标准曲线(C:0.000 815～ 0.040 76mg· ml-1)
3　结果
3.1　Folin-ciocalteu法测定玄参不同提取物中总多酚含量的结
果
3.1.1　玄参不同提取时间样品中总多酚含量的测定 从表 1可
以看出 , 不同提取时间样品的总多酚含量:30 min>150 min>
120 min>60min>90min乙醇超声提取物;30 min乙醇超声提取
物中总多酚含量最高 , 达到 0.504 1 mg/g, 且明显比其他超声时
间提取物要高;150 min和 120 min其次;60 min和 90min超声提
取物中的总多酚含量较少。
表 1　不同提取时间样品的总酚含量及清除 DPPH自由基的能力
提取时间
t/min
总多酚含量α
C/mg· g-1
半抑制量 DPPH· EC50β
m/mg
清除能力 AE
(1/ EC50)
30 0.504 1 79 1.27×10-2
60 0.194 7 107 0.94×10-2
90 0.187 7 109 0.91×10-2
120 0.209 9 84 1.20×10-2
150 0.211 6 71 1.40×10-2
α:每克样品中含有相当没食子酸的毫克数;β:[ DPPH· ]的原始质量体积分数减少
至 50%时样品的添加量
3.1.2　玄参不同浓度乙醇水溶液提取样品中总多酚含量的测定
由表 2可知 , 玄参不同浓度乙醇超声提取物中的总多酚含量在
0.251 3 ～ 1.618 7 mg/g之间 , 其中 40%乙醇超声提取物的总多
酚含量最高 , 100%乙醇提取物中的总多酚含量最低 , 基本趋势是
随着乙醇浓度的升高 ,其提取物中总多酚的含量降低。分析原因
可能是因为多酚类化合物极性较强 , 易溶于水 , 所以其提取物中
总多酚的含量随着乙醇浓度的升高而减少。
表 2　不同浓度乙醇提取样品的总多酚含量及清除DPPH自由基的能力
乙醇浓度(%) 总多酚含量αC/mg· g-1
半抑制量 DPPH˙ EC50β
m/mg
清除能力 AE
(1/ EC50)
20 1.500 0 41 2.44×10-2
40 1.618 7 45 2.22×10-2
60 1.307 1 118 0.85×10-2
80 0.504 1 79 1.27×10-2
100 0.251 3 777 0.13×10-2
α:每克样品中含有相当没食子酸的毫克数;β:[ DPPH· ]的原始质量体积分数减少
至 50%时样品的添加量
3.1.3　玄参不同极性溶剂提取样品中总多酚含量的测定 玄参
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不同溶剂提取样品中的总多酚含量如表 3所示 , 正丁醇提取物
的总多酚含量最高 , 为 0.511 8 mg/g;其次是 80%乙醇提取物 ,为
0.504 1 mg/g;丙酮提取物的总多酚含量最少 , 为 0.155 6 mg/g。
得出玄参中多酚类化合物易溶于乙醇和正丁醇 , 而较难溶于丙
酮。
表 3　不同溶剂提取样品的总多酚含量及清除 DPPH自由基的能力
溶剂 总多酚含量αC/mg· g-1
半抑制量 DPPH˙ EC50β
m/mg
清除能力 AE
(1/ EC
50
)
80%乙醇 0.504 1 79 1.27×10-2
正丁醇 0.511 8 89 1.12×10-2
丙酮 0.155 6 646 0.16×10-2
α:每克样品中含有相当没食子酸的毫克数;β:[ DPPH· ]的原始质量体积分数减少
至 50%时样品的添加量
3.2　玄参中多酚类化合物清除 DPPH自由基的测定结果
3.2.1　玄参不同提取物中的多酚类化合物清除 DPPH自由基的
能力 玄参不同提取物中多酚类化合物清除 DPPH自由基的能力
如表 1 ～ 3。如 80%乙醇提取物清除 DPPH自由基的曲线(见图
1),在加入不同浓度玄参提取物以后 , [ DPPH· ]自由基残留率
随时间的变化而逐渐变小 , 随着样品添加量的增加 , [ DPPH· ]
自由基残留率迅速降低 , 在 50 min内 [ DPPH· ]自由基残留率
下降很快 , 一般在 100～ 300min该体系的 [ DPPH· ]自由基残留
率不再下降 , 达到平衡。
图 3　80%乙醇提取物清除 DPPH的曲线
在 DPPH实验中 ,根据 EC50的大小可以判断抗氧化剂清除自
由基的能力的大小 , EC50越小其清除自由基能力越强 , AE越大 ,
其清除自由基能力越强。
3.2.2　玄参不同提取时间样品中多酚类化合物清除 DPPH自由
基的能力 玄参不同提取时间样品清除 DPPH自由基的能力如表
1,其强弱顺序为超声 150 min乙醇提取物清除 DPPH自由基的
能力最强 , 其次为 30, 120 min乙醇提取物 , 60, 90 min乙醇提取
物清除 DPPH自由基的能力较弱。分析原因可能是随着超声时
间的延长 , 多酚类化合物有所分解 ,其清除 DPPH自由基的能力
随之减弱 , 在 90 min时其清除 DPPH自由基的能力最弱 , 达到平
衡后结合型多酚又游离出来 ,其清除 DPPH自由基的能力又随着
时间的延长而逐渐增强。
3.2.3　玄参不同浓度乙醇提取样品清除 DPPH自由基的能力
由表 2可知 , 玄参不同浓度乙醇超声提取物清除 DPPH自由基的
能力是 20%乙醇提取物 >40%乙醇提取物 >80%乙醇提取物 >
60%乙醇提取物 >100%乙醇提取物 ,大致趋势是随着乙醇浓度
的增高 , 其提取物清除 DPPH自由基的能力降低。玄参不同浓度
乙醇提取物清除 DPPH自由基的能力基本上与其所含多酚类化
合物的含量呈正比。
3.2.4　玄参不同极性溶剂提取样品清除 DPPH自由基的能力
由表 3可以看出 , 玄参不同溶剂提取样品清除 DPPH自由基能力
的强弱顺序为 80%乙醇提取物 , 正丁醇提取物 , 丙酮提取物 , 其
EC50依次为 79, 89, 646mg/ml。由此可看出 , 玄参丙酮提取物清
除 DPPH自由基的能力远远低于正丁醇和 80%乙醇提取物。
4　讨论
本论文采用 Folin-Ciocalteu方法测定玄参不同提取物中的
总多酚含量 ,并采用 DPPH抗氧化活性体外评价体系 ,对玄参不
同提取物的抗氧化活性进行了系统研究。由于多酚类化合物酚
羟基中的邻位酚羟基极易被氧化 ,且对活性氧等自由基有较强的
捕捉能力 , 使多酚类化合物具有很强的抗氧化性和清除自由基的
能力。而研究结果表明 ,玄参不同提取物中均含有一定量的多酚
类化合物且具有较好的清除 DPPH自由基的能力 , 说明玄参具有
较好的体外抗氧化活性 , 可开发为天然抗氧化剂。其中 40%乙
醇提取物中的总多酚含量最高 , 丙酮提取物中的总多酚含量最
低;而通过 DPPH抗氧化活性体外评价体系 , 得出 20%乙醇提取
物清除 DPPH自由基的能力最强 , 100%乙醇提取物清除 DPPH
自由基的能力最差。玄参不同提取物中总多酚含量与其中多酚
类化合物清除 DPPH自由基的能力基本一致 , 但不完全相同。
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