全 文 ：· 药理 ·
毛 冬 青 乙 素 的 致 突 变 实 验
广州医药工业研究所( 广州 5 10 0 4 2)
孙 秀莲 谢 军 付红燕份 陈俭芳二 曹志君料
摘要 采用A e s m实验和微核实验 , 检测毛冬青乙素有无潜在的诱变性 . 结果 : 毛冬青乙素不同剂
量组与溶剂对照组相一致 , 为阴性结果 , 已知化学致癌物 2 氨基茹 、 丝裂霉 索 C 和环磷酞胺呈 阳性结
果 。
关键词 毛冬青乙素 A m es 实验 微核实验 诱变性
毛冬青乙素 (1 le x o in n B )是从毛冬青 (I 乙ex 动物 : 本所动物室提供健 康 乙性 N I H 小
p u b e s c e s H o o k e t A m ) 中 提 取 的有效单体经 鼠 , 体重 2 2 士 2 9 。
半合成而得的一种水溶性药物 , 药效学研究表 2 实验方法
明本品对胃及十二指肠溃疡有较好的疗效 。 本 A m se 实验 采用 T A 97 、 T A 98 、 T A 1 0 0 、
研究按新药审批管理法要求对其致突变性进行 T A 1 0 2 , 按照 A m 留实验平板掺 入 法 (I con r
-
检测 , 为安全用药提供遗传毒理方面的依据 。 p or at in n as s ay ) 〔` ’ 进行 , 实验设毛冬青乙素 5
1 实验材料 个剂量组 , 并设阳性对照和阴性对照组 , 在加
材料 和不加代谢活化剂 (S 9) 各做三个平 行 皿 , 若
受检药物 : 毛冬青 乙素 , 本所 合成 室 提 诱变菌数 ) 自发回变数 2 倍 , 并有菌胎背景 ,
供 , 批号 : 8 5 0 8 1。 。 同时有剂量反应关系判为阳性结果 。
阳性 对 照 剂 : 2氨 基 药 ( 2一 A )F , 美 国 微核实验 (将 30 只小鼠随机分为 5 组 ,
A ld ir c h 化学公司生产 , 批号 : 5 3 2 3 3 , 丝裂霉 阳性对照环磷酞胺 1 0 m g / k g一次灌服 ; 毛 冬
素 。 (M M C ) , 上海第 12 制药厂生产 , 批号 : 青 乙素各剂见组依次 为 : 1 7 5( 1 / 2 L D 。。 ) 、 1 2 5 、
8 5 0 3 2 1 ; 环磷瞥讨按 (cP )是上海第 12 制 药厂生 75 m g / k g一次灌服 ; 阴性对照给予与药物同体
产 , 批号 : 5 6 0 6 1 1 。 积的水 , 于给药 2 4 h 颈椎离断处 死小 鼠 , 取
溶剂对照 : 蒸馏水 。 股骨骨髓 , 按常规制片 , 每只鼠 观 察 1 0 0 0 个
测试菌株 : 鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型 嗜多染红细胞 , 以千分率表示带有微核嗜多染
突变 菌 株 : T A 97 、 T A 98 、 T A 10 。 、 T A 1 0 2 。 红细胞出现率 。
5 9 全昆悬液 ( 5 9) : 按 A m eS 实验方 法制备 。 3 实验结果
表 11 毛 今 霄 ` 索 八 m se 头 延 拍 朱
剂 量
( 协g /皿 )
T A 9 7 T A 9 3 T A 1 0 0 T A 1 0 2
受试物 一 5 9 + 5 9 一 5 9 + 5 9 一 5 9 + 5 9 一 5 9 + 5 9
168259134蒸 馏 水
2一 A F
毛冬青 乙素
1 0 0卜l
2 0
2O
1 0 0
5 0 0
2 5 0 0
5 0 0 0
1 6 9 5 1
1 7 4 0 5 6
1 4 4 3 9
1 5 7 4 9
1 5 5 5 8
1 7 1 吐7
1 5 7 4 5
5 9
2 6 0 0
5 4
5 9
5 4
4 7
6 1
1 2 3 1 3 0
1 2 8 1 6 0 1
1 2 5 1 2 0
1 2 4 1 3 0
1 2 5 1 3 0
1 2 8 1 3 8
1 2 7 1 3 3
2 8 7 2 9 4
1 0 8 4茶 一
2 5 7 2 7 3
2 7 5 2 7 4
2 6 7 2 9 9
2 5 0 2 4 9
2沙1 2 9 4
. T A 1 0 2 受试物为 MM C
中药材第 17 卷第 5 期 1 9 9 4 年亏月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 1994. 05. 020
毛冬青 乙素 Am e s实验结果见 表 1。
上述实验结果表明: 毛冬青乙素在外来活
化系统存在与不存在的情况下 , 其回变菌数与
溶剂对照组接近 , 为 阴性结果 ; 而阳性对照药
卜 A F 在 5 9存 在 情 况 下 , T A 97 、 T A 98 、
T A 10 。 三种菌株发生回 复 突 变 , 其 诱 变 菌
数 ) 阴性对照组 自发回 变数 2 倍 , M M C在不
加 5 9 的情况下 , 可致 T A 10 2菌株发生 回 复
突变 , 其诱变菌数 ) 阴性对照组 自发回变数 2
倍 。
毛冬青 乙素微核实验结果见表 2 。
实验结果表明 , 阳性环磷酞胺组与阴性对
表 2
组 别
毛 冬 青 乙 素 微 核 实 验 结 果
剂 量
( m g /k g )
受 试小鼠数 嗜多染红细胞数 微核(个 )
微核率
(夕百。 )
阴性对照 6
毛冬青乙素
6 0 0 0
6 0 0 0
1 2
1 3
2
。
0 0 士 1 . 1 0
2
。
1 7 士 1 。 3 3
八匕5,土ó才
;
6 0 0 0 1 3
1 7
2
。
1 7 士 1
6 0 0 0
6
八O
八u
5
工a八U
行叮山了一n甘
,上,土
环磷酞胺 6 0 0 0 3 4 。 8士 7 。 3 9签苦 开
粉 ` 苦 P簇0 。 0 0 1。
照组比较有非常显著性差异 (P 李 。 . 0 0 1 ) , 毛冬
青乙素三个剂量组分别与阴性对照组 比较无显
著性差异 ( p ) 0 . 0 5 ) 。
4 小结与讨论
A双比 , 实验和微核实验是 目前评价药 物 安
全性最为广泛使用的致突变性快速检测方法 .
本实验就是按照我国卫生部新药管理法毒理实
验规定要求进行的 。
回复突变是某些特定基因坐位的突变 , 所
以一些具有诱变性的化合物 , 如果没有作用到
该特定坐位上也不会出现阳性结果 , 因此需要
带不同突变基因的一套菌株做回复突变实验 ,
我们 采 用 T A 97 、 T A 98 、 T A 10 0 和 T A 10 2
四株组成的标准敏感的一套测试菌株 , 这些菌
株在组氨酸操纵子的不同基因坐位分别具有移
码型突变 、 碱基置换型突变 , 毛冬青乙素在本
验中为阴性结果 , 提示该药在上述四个菌株不
实引起移码型或碱基置换型突变 。
2一 F A 是一种常见 的 阳 性 诱变 剂 , 在 加
(S 9 的情 况下 , 可 使 T A 97 、 T A 98 、 T A 10
三种菌株发生回复突变 , 其诱变菌数 ) 溶剂对
照组自发回变数 2 倍 , M M C 也是一种常见 的
阳性诱变剂 , 在不加 5 9 的情况下 , 可 T A 1 02
菌株产生回复突变 , 其诱变菌数 ) 溶剂对照组
自发回变数 2 倍 . 即在本实验条件下 , 阳性诱
变剂显示诱变性 . 而毛冬青乙素在加 9S 和 不
加 P g 外来活化系统情况下 , 其回变菌数与溶
剂对照组接近 , 均为阴性结果 。
微核实验 〔” ” 是应用小鼠骨髓嗜多染红细
胞微核 出现频率来评价毛冬青 乙素对体细胞遗
传物质的致突变作用 , 实验结果表明 , 阳性对
照环磷酸胺能明显的诱发小鼠骨髓嗜多染红细
胞染色体的损伤 , 而微核的产生与染色体损伤
断裂有关 , 可反映染色体畸变情况 , 本次实验
阳性组微核检冬车互显著升高达 3 4 . 8编 , 表明环
磷酞胺致突变性 呈 阳性 反应 ; 阴性组微核率
为 2 . 0编 , 与文献相一致 , 毛冬青 乙素各剂量组
依次为 2 . 17 、 2 . 17 、 2 . 83 编 , 与阴性对照组比
较无显著 差 异 ( P 》 0 . 05 ) 。 提示毛冬青乙素
在试验剂量范围内 , 不增加小鼠骨髓嗜多染红
细胞微核率 , 即对哺乳动物的遗传物质无损伤
作用 。
从 A m留 实验和微核实验阴性结果表明 ,
毛冬青乙素在基因 突变和染色体畸变水平 , 不
具有潜在的诱变性 。
中药材第17 卷第 5 期 工乡 9 荟午 5 月
参 考 文 献
1 M r ao
n
DM
,
A m e s B N
. 沙门氏菌诱变
性实验 方法 . 浙江医大农药毒理研究室译 .
浙江医大 , 1 9 8 3
2 S e h m id W
.
T h e M i e or n u e l e u s t e s t
.
M u t a t
R e s
.
1 9 7 5 , 3 1 : 9一 1 5
3 -cI d e b u r M
.
V
,
S e h m i d W
.
T h e M i e r o n u e l
e u s te s t m e t ho d o lo g i e a l
a s p e e t s
.
M u t
a t R e s
-
1 9 7 3
,
1 9 : 1 0 9一 1 1 7
. 广东医 药学院匀O届实习 生 芳苦 广州 医药中专 90 届实习 生
( 19 9 3一 0 7一 2 2收稿
红毛五加多糖对机体免疫功能的影响
中国中医研究院基础所 ( 北京 1 0 0 7 0。 ) 张拄峡 胡庆和 刘 私 谢锦玉
摘要 本文研究红毛五加多糖成分对机体免狡功能的影响 ,实验结果表明红毛五加多糖可 激发 T 、
B
一琳巴细胞的生物学效益 。
关健词 红毛五加多糖 免疫功能 T 、 B 一淋 巴细胞
红毛五加 ( A e a n t儿o p a 件 a x g i ar Zd i i H a rm s )
是地道传统中药 , 临床实践证实有 “ 益气 、 疗
壁 ” 的功效 , 主治心腹 庙气 、 腹痛 、 疽创 、 阴
蚀 。 目前国内实验研究刚刚起步 , 药效学实验
研究证明有镇静 、 抗炎 、 抗缺氧 、 抗疲劳 、 中
枢抑制 、 增强学习记忆及促进肝脾组织核酸代
谢等作用 〔` 一 ` ’ 。 我们在筛选红毛五加 活性部位
实验中发现其水溶性部分的免疫调节作用 , 进
一步对红毛五加多糖进行药效学研究 , 证明有
明显增强机体免疫功能作用 。 有关红毛五加多
糖对机体免疫功能 的影响尚未见报道 , 本文作
了初探 , 以了解其对免疫细胞的作用特点 。
1 材料和方法
动物 B A L B / C 小鼠 1 9 士 lg , 雌雄对半 ,
分 3组 ; 6 1 5小 鼠 1芝g , 雄性 , 10只 。
人血 标本 取恶性肿瘤病人静脉血 , 肝素
抗凝备用 。
药品和试剂 红 毛 五 加 多 糖 ( A G SP -
92 曰 : 本所制备 。 按 」m g / o . Zm l/ 只 /日和 4m g /
o
. Zm l/ 只 / 日用生理盐水配制 , 8 磅 10 分钟高
压灭菌 , 冻结保存 。
P H A
: 上海生物制品研 究 所 产 品 , 以含
20 %小牛血清的 1 6 4 0培养液稀 释 成 25 0件g /m l
抽滤灭菌 , 一 20 ℃保存供体外小鼠淋巴细胞增
殖反应用 。 取干黄豆 1 09 研成粉 末 , 加生理盐
水 1 0 m l 4 ℃放置 , 不时振摇 , 24 h 后 吸上清
液 , 于 一 20 ℃冻结 , 供 巨大玫瑰花试验用。
L P s : U s A
, S i g m a 公司产品 , 以 含 2 0%
小牛血清的 16 4 0 培养液稀释 成 25 恤 g m/ 1 , 抽
滤灭菌 , 一 20 ℃保存备用 。
实验分组
红毛五加多糖 ( l m g) 组 : 红毛五 加 多 糖
l m g / o
·
Zm l/ 只 / 口腹腔注 射 , 1 6只小 鼠 。
红毛五加多糖 (4 m g) 组 : 红 毛 五 加多糖
4企唱阳 . 2 m l/ 只 / 日腹腔注射 , 23 只小鼠 。
盐水对照组 : 无菌生 理盐 水 0 . 2m l/ 只 /
日 , 腹胜注射 。
观察指标
对体外小鼠淋 巴细胞增殖反应的影响 : 无
菌取 6 15 小鼠脾脏 , 握 2 0 目铜 网 , 研磨出脾细
胞 , 静止后吸取上部混悬液 。 i5 , 。。。 rP m 、离心
7 m in
,沉淀用 0 . 07 6M K CI 低渗溶解红细胞 ,再用
1 6 4 0堵养液洗两次后制成 8 x 1 0 6 /m l 脾细胞悬
液 。 实验分对照组和实验组 , 4 个样品 /组 , 于
无菌 4 0孔板上进行 。 每孔分别依次 加 P H A 和
L p S S。协l , 实验组加红毛五力{1多糖 l m g 和 4m g
溶液各 i OC卜l , 对照组加 1 6 4 0 液 1 0 C卜1 , 脾 细
胞悬 液 S C时 , 置 5 % C o Z 倍莽 箱中 , 37 ℃ 、
7 2h
, 终止前 1 6 h 每孔力11’体 T d R o . 5林 e i , 培养
结束 , e . 07 5M K C I 溶解细胞 , 49 型玻璃纤维膜
过滤 , 滤膜干后加 s m l 闪烁液 , 用 液 体 闪烁
计数器 ( 西安产 F一 3 53 型 ) 测每组 ( 共 4 个样
,
1
“ 药材第 1 7卷第 5 期 1 9 9 4年 导月