全 文 ：植物病理学报
A C T A P H Y T O P A T H O L O G IC A S IN I C A 3 5 ( 6 ) ( Z K )
: 1 5 1
一
152 ( 20() 5 )
一种引起香石竹黄化病植原体的初步鉴定
蔡 红 ` , 张华明` , 吴华英 ` , 孔 宝华` , 杨伴川 2 , 陈海如 ` ’
( ` 云南农业大学云南省植物病理重点实验室 , 昆明 65 02 0 1 ; “ 云南英茂花卉产业有限公司 , 昆明 6 50 2 2 8)
P r e lim i n a r y i d e n t if ie a t io n o n P h yt o P la s m a a s s o e i a t e d
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文章编号 : 0 4 1 2 刁9 1 4 ( 2 0() 5 ) 06 刁 1 51刁 2
植原体 ( p h y ot p l a s m a ) (原称类菌原体 M y e o -
p la s m a
一
11坛 。笔 an i s m , 简称 M L O )是一类无细胞
壁 ,存在于植物筛管细胞内的原核生物 。 迄今为
止 ,世界上报道的植物植原体病害多达 30 余种 ,
且有不断增加的趋势 。 其主要症状包括丛枝 、 黄
化 、 花变叶 、花器褪化等 。 由于植原体至今未能分
离培养成功 ,其培养性状 、生化特性 、营养需求等都
无从得知 ,所以长期以来对其检测及鉴定技术的发
展都没有突破性进展 。 近十多年来 , CP R 技术使植
原体检测 、 鉴定与分类取得了令人瞩 目的进展 ,对植
原体 16 5 r RN A 基因的分析使人们从遗传本质上认
识到了植原体与其它原核微生物间的差异 ,也使人
们对植原体的检测达到了单拷贝基因水平 。 目前 ,
根据植原体 16 5 r RN A 和核糖体蛋白 ( rp )基因的序
列分析形成了植原体分类和鉴定的基本框架 。
本文采用植原体 16 5 rR N A 基因通用引物 , 通
过 CP R 技术对表现黄化的香石竹植株进行植原体
分子检测 ,并对扩增到的植原体 16 5 rD N A 片段进
行序列分析 , 初步判定其分类地位 。 现将研究结果
报道如下 :
1 材料和方法
1
.
1 材料来源
自然显症表现典型黄化症的香石竹植株采自
云南呈贡斗南村花卉基地 。 感病植株从心叶变黄 ,
病株较健株矮小 ,且不开花 。
,
.
2 植株总 O N A提取
植株总 D N A 提取方法参照漆艳香等〔’ 〕的方
法进行 。
1
.
3 引物及 P C R条件
参照 eL e 等圈所报道的植原体 16 5 r RN A 基
因通用 引物对 R16 l n F I / R16 m RZ 及 R 16 ZF / 2R 序
列分别合成 引物并进行直接 cP R 及 巢式 CP R
扩增 。
,
.
4 P C R产物纯化 、克隆及序列测定
CP R 产物纯化 、 克隆均按照 常规方法进行 。
重组质粒 D N A 经 CP R 鉴定筛选出含有正确插人
片段的重组克隆后送上海博亚生物技术有限公司
进行序列测定 。
,
.
5 序列同源性 比较
根据 L e e 等 〔 3了重新修订的植原体新的分类体
系 ,通过软件 ( D N A M A N , V er is on 5 . 2 . 2 )分别与植
原体 16 rS 组中各个代表性植原体的 16 5 rR N A 基
因核酸序列进行比较 。
收稿日期 : 2 0 5狈 一12 ; 修回 日期 : 2 0 5 一 1 1一 14
基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 ( 302 。以兀滩 ) ; 云南省科技攻关项 目( Zo 3 N C幻 l
通讯作者 : 陈海如 ,教授 ,主要从事植物病毒病及类似病害研究 ; E一m ial : 城h en @ m ial ;)
云南省 自然科学基金资助项目 ( 2侧洲)。 刃 14 Q )
.
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.
e n 。
DOI : 10. 13926 /j . cnki . apps . 2005. s1. 040
植物病理学报 3 5卷
2 结果和分析
香石竹黄化植株总 N D A6 1 5rR N A基因巢式
C PR 扩增产物经电泳检测 ,得到约 1 . Z kb 的特异
片段 ,证明该植株中存在植原体 ,命名为香石竹黄
化植原体 ( C arn at io n y e l l o w s phy ot lp a sm a , C a r Y ) 。
对该株系的 16 s rR N A 基因扩增片段重组质粒序列
测定结果表明 : 其 16 5 rD N A 长 1 247 b p , G + C 含
量为 4 7 . 2% , ( eG n B a n k 登录号为 A 9Y 71 6 6 9 ) ,该
株系与植原体 16 5: I 组中的代表株系西方翠菊黄
化植原体 ( S A Y )同源率达到 9 . 0% ; 与辣椒僵化
植原体 ( S T O L , 16 rS Xl 组 )的同源率为 95 . 8 % , 而
与植原体其它 16 rS 组 的同源率却为 8B . 6 % -
91
.
8%
, 因此可确定该香石竹黄化植原体株系为
16 S
r l 组 (翠菊黄化组 )的成员之一 。
3 讨论
香石竹 , 又称康乃馨 (~
a
iot n)
, 是世界主要
切花品种之一 。 近年来 , 由于昆明花卉产业的发
展 , 各大花卉公司及花农都在大面积地种植香石
竹 。 但由于各类病害的发生 ,尤其是一些真菌及病
毒病害 ,使香石竹的生产受到严重影响 。
早期 ,由于人们认识水平的局限性 ,一些植物
黄化型病害被认为是生理性病害 ,后来又被认为是
由病毒引起的 ,直至 l% 7 年以后 ,这些黄化型病害
才逐渐被确认是由植原体引起的 。 据 B ert ac ic in[ `乡
报道 , 翠菊黄化组 ( 16 rS l )的植原体具有相当广
的寄主范围 ,主要侵染观赏及切花植物 、蔬菜 、果树
等 , 引起植株黄化 、 矮化 、花变叶 、花变绿等症状。
本实验通过 CP R 检测及序列 比较分析 , 证实表现
黄化的香石竹病株中存在翠菊黄化组 ( 16 rS l )的
植原体 。 此外 ,通过病株组织负染电镜观察 , 发现
有直径约 3 0 n m 的少许球状病毒粒子 ,说明在该黄
化植株中存在植原体与病毒两种不同病原复合侵
染的现象 ,从而可能加重病株的症状表现 。
参考文献
口了 漆艳香 , 谢艺贤 , 张辉强 ,等 . 植原体 D N A 提取方
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