全 文 ：第 22 卷 第 2 期
2 0 0 5 年 3 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical Univ ersity
Vol.22 　No.2
Mar.2005 p.81
收稿日期:2004-08-27
作者简介:胡杰(1975-),男(汉), 湖北通城人 ,在读硕士 ,主要从事药物制剂方面的研究工作;崔福德(1946-), 女
(朝鲜族),吉林延吉人 , 教授 ,博士生导师 , 主要从事药物新剂型与新技术研究 , Tel.024-23843711-3736 , E-mail
cuifudecui@vip.sina.com。
文章编号:1006-2858(2005)02-0145-04
当归 、川芎中藁本内酯含量测定及醇提工艺研究
胡　杰 , 冯丽莉 , 刘　延 , 崔福德
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
摘要:目的研究当归 、川芎中藁本内酯醇提的最佳工艺条件。方法 建立HPLC 法测定提取液中指
标成分藁本内酯的含量 , 并用正交设计优化醇提工艺条件。结果与结论 用甲醇-水-乙酸
(V∶V∶V=75.0∶24.8∶0.2)作流动相能使藁本内酯得到良好的分离;8 倍量 85%(φ)乙醇提取
3 次 , 每次 1.0 h 为醇提最佳工艺条件。
关键词:当归;川芎;藁本内酯;高效液相色谱;正交设计
中图分类号:R 944.9　　　文献标识码:A
　　当归和川芎是伞形科植物当归(Angel ica
sinensis (Oliv)Diels.)的根 , 川芎(Ligust icum
Chuanxiong Hort.)的干燥根茎。当归川芎伍用 ,
名佛手散 ,出自《普济本事方》 ,二者配伍 ,互补为
用 ,活血 、养血 、行气三者并举 ,有活血祛瘀 、养血
和血之功效 。藁本内酯(ligustilide)是当归和川芎
挥发油中共有的成分 ,现代药理学研究表明 ,藁本
内酯能抑制子宫平滑肌的收缩 、松弛气管平滑肌 、
镇静 、降血压 、降体温 、抑制胶原诱发和血小板聚
集活性等药理作用。作者建立了藁本内酯 HPLC
含量测定方法 ,并用正交试验对当归 、川芎中藁本
内酯的醇提工艺作了研究 。
1　仪器与试药
LC —10AT VP 高效液相色谱仪(日本岛津
公司),SPD—M10A VP 二极管阵列检测器(日本
岛津公司),CTO—10AS VP 柱温箱(日本岛津公
司),98—1 —B型电子调温电热套(天津市泰斯特
仪器有限公司),FW —100高速万能粉碎机(天津
市泰斯特仪器有限公司)。
藁本内酯对照品(本实验室自制 ,经面积归一
法分析 ,纯度 98%, w),当归 、川芎饮片(沈阳中
药饮片厂),甲醇(色谱纯 ,天津市康科德科技有限
公司),其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　分析方法的建立
2.1.1　色谱条件
分析柱:ODS C18柱 (4.6 mm ×200.0 mm ,
5μm 美国迪马公司),流动相:甲醇-水-乙酸(V∶
V∶V =75.0∶24.8∶0.2),检测波长:326 nm ,柱
温:30℃,流速:1.0 mL·min-1 。
2.1.2　检测波长的选择
称取藁本内酯对照品适量 ,用 50%(φ)乙醇
水溶液溶解并稀释成约 50 mg·L-1的溶液 ,用岛
津 SPD —M10A VP 二极管阵列检测器在 190 ～
370 nm 波长内进行扫描 , 结果藁本内酯在
326 nm 处有最大吸收 ,故选择 326 nm 作为藁本
内酯 HPLC含量测定波长 。扫描谱图见图 1。
　
Fig.1　The UV spectrum of ligustilide in 50%(φ)ethanol
solution
2.1.3　标准液制备及线性关系的考察
精密称取蒿本内酯对照品 0.010 3 g , 置于
100 mL 棕色量瓶中 ,用50%(φ)乙醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,作为标准贮备液 。分别精密吸取贮
备液 0.2 、1.0 、2.0 、2.5 、3.0 、4.0 、5.0 mL 于
10 mL 棕色量瓶中 ,用 50%(φ)乙醇稀释至刻度 ,
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2005.02.017
摇匀 ,作为标准液 。精密取各供试液 20μL ,进
样 ,按上述色谱条件测定 ,重复操作 3 次 ,以质量
浓度(ρ)对峰面积(A)进行线性回归 ,得标准曲线
方程 A = 4.995 8 ×104ρ-3.533 ×103 , r=
0.999 7 ,表明蒿本内酯在 41.2 ～ 1 030 ng内 ,峰
面积与质量浓度呈良好线性关系。
2.1.4　溶液稳定性考察
取配制好的一定质量浓度蒿本内酯对照品和
样品溶液 , 室温下放置不同时间后 ,取样 , 测得
24 h内对照品和样品质量浓度无明显变化(对照
品 RSD为 1.68%,样品 RSD为 1.97%),表明对
照品和样品溶液在 24 h 内稳定性良好 。
2.1.5　仪器精密度考察
取上述一定质量浓度的对照品溶液 ,连续进
样 5 次 ,记录主峰面积 , 计算相对标准偏差为
1.59%,表明仪器精密度良好 。
2.1.6　方法重现性考察
取同一批样品 6份 ,按“2.1.1”条进行测定 ,
结果 RSD为 1.54%。
2.1.7　回收率试验
取15只 10 mL量瓶 ,精密加入一定量的藁本
内酯含量已知的样品溶液 ,分成 3 组 ,分别加入
0.5、2.5 、4.5 mL 上述标准贮备液 ,按样品含量测
定项下方法制备样品溶液 ,测定含量 ,结果见表 1。
Table 1　The results of recovery tests
ρadded/(mg·L-1) ρfound/(mg·L-1) Recovery(w)/ % x RSD/ %
5.15 5.08 98.6
25.75 26.05 101.2 100.4 1.52
46.35 46.97 101.3
2.1.8　样品溶液的制备与测定
将当归 、川芎饮片粉碎过 20 目筛 , 各称取
40 g ,置 500 mL 圆底烧瓶中 , 加入 8 倍体积的
70%(φ)乙醇溶液 ,回流提取 2次 ,每次 2 h ,合并
两次提取滤液 ,得样品液。取样品液 0.5 mL ,置
100 mL 量瓶中 , 50%(φ)乙醇稀释至刻度 ,
0.45 μm 滤膜滤过 , 取续滤液 , 进样 20 μL , 于
326 nm 处测定其峰面积 ,代入标准方程 ,得样品
质量浓度 ,并将结果换算成单位饮片中所含藁本
内酯的含量 ,测得当归 、川芎饮片中藁本内酯的含
量分别为 3.506 mg·g-1 和 6.990 mg·g-1 。藁
本内酯对照和样品测定结果见图 2。
　
A —Standard;B—Sample;1—Ligustilide
Fig.2　The chromatogram of the standard and sample
2.2　当归 、川芎中藁本内酯的提取
2.2.1　实验设计
采用正交设计方法 ,以提取液中 LD含量作
为指标 ,乙醇体积分数 、溶剂加量 、提取次数和时
间为考察因素 ,各因素的水平设计见表 2 ,其中 D
因素用拟水平 ,用 L9(34)表安排实验 , 结果见
表 3。
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Table 2　Factors and levels of orthogonal design
Level
Facto r
A
(t/ h)
B
(w/ %)
C
Valcohol added/ L
D
(times)
1 1.0 50 0.24 2
2 1.5 70 0.24 2
3 2.0 85 0.30 3
Table 3　The results of orthogonal design
Experiment No A B C D D′ Results/(mg·g-1)
1 1 1 1 1 1 4.490
2 1 2 2 2 1 5.440
3 1 3 3 3 2 5.683
4 2 1 2 3 2 5.327
5 2 2 3 1 1 4.330
6 2 3 1 2 1 4.375
7 3 1 3 2 1 4.804
8 3 2 1 3 2 5.029
9 3 3 2 1 1 5.047
k 1j 5.204 4.874 4.631 4.622
9.495 T =44.525
k 2j 4.677 4.933 5.271 4.873 C=T 2/ 9=220.275
k 3j 4.960 5.035 4.939 5.346 5.346 SST =1.883
R j 0.527 0.161 0.640 0.724 f T =8
2.2.2　实验安排与结果
按处方取当归 、川芎饮片 9份 ,溶剂用量为
6倍时每份 40 g ,其余每份 30 g ,按表 3安排进行
提取 ,按“2.1.8”条制备各实验号样品液并进行测
定 ,实验结果见表 3 ,方差分析见表 4。
Table 4　The results and analysis of the orthogonal experiment
Resouce SS f MS F P
A 0.398 2 0.198 3.090 P>0.05
B 0.050 2 0.025 0.586 P>0.05
C 0.595 2 0.298 6.980 P>0.05
D 0.697 1 0.697 10.890 P<0.05
SSe2 0.193 3 0.064
　　查方差分析表 , F 0.05(1 ,3)=10.13。
2.2.3　结果分析与验证
从直观分析可以看出 ,4因素 A 、B 、C 和 D的
影响从大到小顺序为 D>C >A>B ,表 4中方差
分析可以看出 ,提取次数为最大影响因素 ,其他依
次为乙醇加量 、提取时间和乙醇体积分数 ,最佳组
合为 A1B3C2D3 ,即 8 倍量 85%(φ)乙醇提取 3
次 ,每次 1.0 h 为藁本内酯醇提最佳工艺条件。
按此配方提取 3次 ,提取液中藁本内酯含量依次
为 5.672 、 5.809 、 5.821 mg·g-1 , 平 均
5.767 mg·g-1 ,说明结果可靠。
3　讨论
a.由于藁本内酯是当归和川芎挥发油中主
要活性成分 ,极性较小 ,HPLC 法测定其含量时多
采用梯度洗脱[ 1] 。作者用等强度洗脱 HPLC 法
测定其含量 ,结果表明该法较梯度洗脱法更简单
实用 。
b.文献[ 2]用 70%～ 95%(φ)乙醇从川芎中
147第 2 期 胡　杰等:当归 、川芎中藁本内酯含量测定及醇提工艺研究　　　
提取藁本内酯 ,提出 80%(φ)的乙醇溶液 , 8 倍
量 ,提取 3 次 ,每次 1.5 h 为醇提最佳工艺条件 ,
其中提取次数影响最大 ,用 70%(φ)和 80%(φ)
的乙醇提取藁本内酯 ,结果无明显差别 。作者用
50%(φ)～ 85%(φ)的乙醇从复方当归川芎中提
取藁本内酯 ,结果表明提取次数影响最大 ,而乙醇
体积分数影响很小 ,这可能是藁本内酯在此分数
范围内的乙醇液中 ,溶解性能较好所致 。有文献
报道藁本内酯纯品极不稳定[ 3] ,溶剂的存在能大
大增加其稳定性 。通过实验作者发现 ,在提取液
中藁本内酯的稳定性较其纯品要稳定得多 ,将醇
提液在室温条件下避光放置 2 周 ,藁本内酯含量
无明显下降 。另外藁本内酯对热很不稳定 ,45 ℃
以上降解加快 ,而乙醇回流提取的温度在 80 ～
85 ℃间 ,使其降解大大加速 ,这与时间对醇提结
果的影响相一致 ,藁本内酯宜较短时间多次提取。
参考文献:
[ 1] 张金兰 , 何秀峰 ,周志华 , 等.藁本中五种成分的高效
液相色谱法测定 [ J] .药学学报 , 1996 , 31(8):622-
625.
[ 2] 白海波 , 王剑飞 , 宁子荣 , 等.川芎提取工艺的优化
[ J] .中国实验方剂学杂志 , 2003 , 9(4):8-10.
[ 3] 周长新 ,李新华.藁本内酯的稳定性及溶剂化效应的
关系 [ J] .药学学报 , 2001 , 36(10):793-795.
Study on the determination and extraction of
ligustilide in Radix Angelicae sinensis and Rhizoma
chuanxiong
HU Jie , FENG Li-li , LIU Yan , CU I Fu-de
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To optimize the ex traction process of ligust ilide in Radix Angelicae sinensis and Rhi-
zoma chuanxiong .Methods The HPLC assay method w as established to determine the content of ligustilide
(LD)in the solution ext racted , and the ex traction process of LD w ith alcohol w as studied and opt imized by
the orthogonal design.Results and Conclusion Ligust ilide was well isolated wi th a mobile phase of
methanol-H2O-HOAc(V∶V∶V =75.0∶24.8∶0.2);the optimum ex traction process w as adding 8 times
amount of 85%(φ)alcohol , refluxing and ext racting for 3 times ,1.0 h each time.
Key words:Radix Angelicae sinensis;Rhizoma chuanxiong ;ligustilide;HPLC;orthogonal design
(上接第 121页)
for component Ⅱ and 2.0 ～ 14.0 mg·L-1(r=0.999 9)for component Ⅲ , respectively.The average recov-
eries were 99.7%(RSD=0.4%), 100.0%(RSD=0.4%)and 100.2%(RSD=1.0%), respectively.Con-
clusions The method is reliable for the quality cont rol of guaifenesin , pseudoephedrine hydrochloride and
dex t rometho rphan hydrobromide capsules.
Key words:HPLC;pseudoephedrine hydrochlo ride;guaifenesin;dext romethorphan hydrobromide
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