全 文 ：尖叶提灯藓抑菌作用的初步研究
陈锡雄 , 叶祖云 , 丁建发
(宁德师范高等专科学校生物系 , 福建 宁德　352100)
　　摘要:尖叶提灯藓抑菌作用的研究结果表明:每 0.5g鲜草 1ml纯水浸提液对 4ml培养液的供试菌株均有
抑制作用;随着浸提液稀释倍数的增加其抑菌能力减弱 , 16倍稀释液仅对枯草杆菌和金黄色葡萄球菌有部分
抑制作用;抑菌能力强弱存在菌间差异 , 依次为枯草芽孢杆菌>沙门氏菌>蜡状芽孢杆菌>金黄色葡萄球菌
>大肠杆菌.此外 , 尖叶提灯藓浸提物具有较好的热稳定性 , 其抑菌因子尚待进一步研究.
关键词:尖叶提灯藓;浸提液;抑菌作用
中图分类号:Q 949.35+2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1004-2911(2005)04-0353-03
　　食品防腐剂是防止食品腐败变质的有效物质.目前 ,食品加工和保鲜采用的防腐剂绝大多数是化学
合成物质 ,均具有一定毒性 ,使用不当时则危害人体健康.寻找安全有效的天然防腐剂是近年来国内外
食品防腐的研究重点之一[ 1-2] ,从植物中寻找具有杀菌或抑菌性物质成为开发天然防腐剂的重要途
径[ 3-4] .尖叶提灯藓(Mnium cuspidaum Hedw)为提灯藓科提灯藓属苔藓植物 ,提灯藓科植物世界已报道
的先后有 12属 ,约 100余种 ,主要分布在北半球温带地区 ,尤以东亚种类最多 ,在我国南北各地都很常
见 ,分布广泛 、资源丰富 ,据报道苔藓植物被认为普遍含有抑菌活性因子.本项研究选择资源丰富的野生
药用植物尖叶提灯藓为材料 ,试图了解尖叶提灯藓的抑菌性质 ,以期为相关研究提供基础资料.
1　材料和方法
1.1　试验材料
尖叶提灯藓采自宁德市蕉城区城南乡后山及宁德师专校园内.
1.2　菌种
供试细菌:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphy-
lococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmomella sp),均由宁德师专微生物实验室提供.
1.3　培养基
牛肉膏蛋白胨液体 、固体培养基 ,按常规配方配制.
1.4　试验方法
1.4.1　植物浸提液的制备　采集新鲜野生尖叶提灯藓 ,洗尽后用无菌水冲洗 ,置滤纸上吸干水份.称取
50g先剪切成碎片 ,再放入研钵中 ,加无菌水少许 ,磨成浆状 ,移入 250ml烧杯加无菌水至 100ml ,置 50℃
恒温水浴锅中保温 12h ,抽滤后取滤液.本试验把每 g鲜草 2ml纯水浸提液浓度确定为 100%.
1.4.2　菌悬液制备　首先用试管斜面培养基活化各供试菌株 ,无菌操作移取菌苔放入 5ml无菌生理盐
水中 ,充分振荡 ,制成菌体密度为 106个/ml的菌悬液.
1.4.3　不同稀释度浸提液的抑菌率测定　常规配制牛肉膏蛋白胨液体培养基[ 5] ,准确量取 4ml分装于
试管中 ,121℃湿热灭菌20min.采用 2倍稀释法将尖叶提灯藓浸提原液分别稀释成 50%、25%、12.5%、
6.25%(即 2 ～ 16倍),移取浸提液原液及各稀释度浸提液 1ml ,加入灭菌的液体培养基中 ,配制成每管
5ml的浸提液系列浓度培养基.每一系列接入一种细菌 ,接菌量为 0.1ml菌悬液.设空白对照 ,再取一系
第17卷第4期　　　　　　　　　　　宁德师专学报(自然科学版)
2005年1 1月　　　　　　　Journal of Ningde Teachers College(Natural Science) Vol.17　No.4　Nov.2005
收稿日期:2005-06-10
作者简介:陈锡雄(1963-),男 , 副教授 ,福建古田人 , 现从事微生物学教学与研究.
＊基金项目:宁德师专科研基金资助项目.
列分别加入1ml无菌生理盐水 ,接入各供试菌株悬液 0.1ml作参比对照.每一系列做 3个重复 ,置 37℃
振荡培养 14h.用 722型分光光度计进行比色测定 ,吸收波长 580nm.
1.4.4　不同温度处理浸提液后的抑菌率测定　取 20ml浸提液原液 ,分别置室温 、60℃、80℃、100℃恒温
水浴中加热处理 20min ,过滤后取滤液.配制成 4个系列的培养液及空白对照与参比对照液 ,每一系列 3
个重复 ,置 37℃下振荡培养 14h ,测定其光吸收值.
1.4.5　抑菌圈测定　将固体培养基加热融解 ,冷却至 55-60℃后倒平板 ,移取 0.1ml菌悬液 ,用玻璃涂
布器涂布.选择吸水性强的新华 Ⅰ号滤纸 ,用打孔器制成直径为 6mm 的小滤纸片 ,干热灭菌后分别放常
温 、60℃、80℃、100℃处理的尖叶提灯藓浸提液以及无菌生理盐水中 ,经紫外线灭菌 ,浸泡6h备用.在无菌条件
下 ,将含有尖叶提灯藓浸提物的滤纸片贴于含菌平板上 ,每皿 3片 ,并设空白对照 ,置 37℃下培养 20h ,用游标
卡尺测量抑菌圈大小 ,结果取平均值.
表1　不同稀释度浸提液的抗菌活性比较
菌种 项目 浸提液浓度
100%　50%　25%　12.5%　6.25%
参比
对照
枯草杆菌 光密度抑菌率/ %
-
100
0.086
80.6
0.238
46.3
0.294
33.6
0.309
30.2 0.443
蜡状芽孢杆菌 光密度抑菌率/ %
-
100
0.130
70.0
0.312
28.1
0.333
23.3
0.435
- 0.434
金黄色葡萄球菌 光密度抑菌率/ %
-
100
0.134
60.9
0.211
38.5
0.312
9.0
0.318
7.3 0.343
大肠杆菌 光密度抑菌率/ %
0.021
95.3
0.159
64.7
0.365
19.1
0.412
8.6
0.455
- 0.451
沙门氏菌 光密度抑菌率/ %
0.007
98.6
0.135
72.7
0.189
61.7
0.311
37.0
0.378
23.5 0.494
表2　不同温度处理的浸提液的抑菌性比较
系列处理 项目 枯草芽孢杆菌
蜡状芽
孢杆菌
金黄色
葡萄球菌
大肠
杆菌 沙门氏菌
对照 光密度 0.443 0.434 0.343 0.451 0.494
常温处理 光密度抑菌率/ %
-
100
0.008
98.2
0.026
92.4
0.209
53.7
-
100
60℃处理 光密度抑菌率/ %
0.002
99.55
0.019
95.6
0.030
91.3
0.225
50.1
0.007
98.6
80℃处理 光密度抑菌率/ %
-
100
0.025
94.2
0.001
93.9
0.217
51.9
0.011
97.8
100℃处理 光密度抑菌率/ %
0.01
97.74
0.023
94.7
0.039
88.6
0.219
51.4
0.020
96.0
2　结果与分析
2.1　不同稀释度抑菌率
在空白对照排除感染的情
况下 ,测定尖叶提灯藓浸提液的
5个不同浓度及一个参比对照 ,
共6个系列样品 ,测定光密度值
并取平均值.从表 1可以看出:
浓度为 100%的尖叶提灯藓.浸
提液对 5种供试菌株都有较强
的抑制作用 ,其抑制能力的强弱
存在菌间差异 ,强者抑菌率达到
100%,而对大肠杆菌抑制能力最
弱.随着浸提液稀释倍数的增加
其抑菌力减弱 ,在 16倍稀释度
下对枯草芽孢杆菌和沙门氏菌
仍具相对较强的抑制能力.
2.2　提取物的热稳定性
表2的数据说明 ,不论是哪
个温度处理尖叶提灯藓浸提原
液对 5种细菌均有影响 ,它们对
枯草芽孢杆菌 、蜡状芽孢杆菌 、
沙门氏球的抑菌率都达到或接
近100%,而对金黄色葡萄球菌的抑菌率在88%～ 94.5%,对大肠杆菌的抑菌率在50%～ 54%范围内.而且对5
种细菌的抑制作用与原液的抑菌率相比没有明显的差异 ,由此可见 ,温度对尖叶提灯藓提取物的抑菌因子没
有影响 ,表明其热稳定性较好.
2.3　抑菌能力的菌间差异
测定 4种温度处理的抑菌圈大小见表3.表3表明 ,不同温度处理的尖叶提灯藓浸提液 ,都没有改变其抑
菌性 ,进一步说明尖叶提灯藓提取物中的抑菌因子具有较强的稳定性.从抑菌圈大小可以得出尖叶提灯藓浸
提液抑菌因子对5种供试菌株的抑制能力由大到小依次为枯草芽孢杆菌>沙门氏菌>蜡状芽孢杆菌>金黄
色葡萄球>大肠杆菌 ,此结论与上述研究完全吻合.
·354· 　　　　　　　　　　　　　　　　宁德师专学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　2005年 11月
表3　抑菌能力的菌间差异﹡
枯草芽
孢杆菌
蜡状芽
孢杆菌
金黄色
葡萄球菌
大肠
杆菌
沙门
氏菌
对照
常温
60℃处理
80℃处理
100℃处理
-
+++
++
+++
++
-
++
++
++
++
-
+
++
+
++
-
+
+
+
+
-
++
+++
+++
++
　　注　“-”无抑菌圈 ,“ +”抑菌圈直径 6-8mm ,“ ++”抑菌
圈直径9-11mm ,“ +++”抑菌圈直径 12mm 以上.
3　讨论
尖叶提灯藓水浸提物的抑菌能力具有广谱
性 ,但抑菌能力的强弱与供试菌株和提取物浓
度密切相关 ,显然提取液在较高浓度下有理想
的抑菌能力 ,而随着提取物浓度逐次下降表现
为抑菌能力递减 ,在原液 16倍稀释度下的浸提
液 ,对蜡状芽孢杆菌和大肠杆菌没有抑制能力.
尖叶提灯藓分布广泛 、资源丰富 ,既可直接
作为中草药 ,又是著名的中药五倍子蚜虫的宿
主 ,具可食性和安全性 ,若作为食品防腐剂原植物符合绿色食品的要求.提灯藓属植物很可能普遍含有抑菌因
子 ,可在该属植物中筛选出具有强抑菌力的种类.然而 ,目前已知具抗菌活性的植物有效成份结构类型较多 ,
几乎涉及各类植物成分[6] ,尖叶提灯藓等苔藓植物究竟含有哪种抑菌有效成份尚待进一步研究.
参考文献:
[ 1] 陈锡雄.薤白抑菌作用的初步研究[ J] .杭州师范学院学报 , 2004(4):337-340.
[ 2] 李惠珍 ,陈朝洋,许旭萍 ,等.天然食品防腐剂———竹叶的研究.1.福桔 、苹果及果蔬汁的防腐试验[ J] .福建师范大学学报 ,
1995, 11(3):89-93.
[ 3] 韩建华 ,祝木金,冯俊涛.27种植物抑菌活性初步筛选[ J] .西北农林科技大学学报 ,2002 , 30(6):134-137.
[ 4] 冯俊涛冯,祝木金 ,于平儒,等.西北地区植物源杀菌剂初步筛选[ J] .西北农林科技大学学报 , 2002 , 30(1):129-137.
[ 5] 蔡信之 ,黄君红.微生物学[ M] .北京:高等教育出版社.2002.333-335.
[ 6] 范青山 ,肖小年,余世望.我国抑菌植物资源研究与开发利用[ J] .自然资源, 1995(11):20-24.
An initial research of an effect of
Mnium cuspidaum Hedw on restricting bacteria
CHEN　Xi-xiong , YE　Zu-yun , DING　Jian-fa
(Department of Biology , Ningde Teachers College , Ningde Fujian　352100 , China)
Abstract:　The result of researching an effect of Mnium cuspidaum Hedw on restricting bacteriashows that lml purified
soaking abstracted liquidmade from per 0.5g of Mnium cuspidaumHedwhas an effect on bacterium plant provided for the
experiment in 4mi training liquid;with theincrease of multiple of dilution of the liquid , its bacteria-restricting capacity
decreases , and16-time amount of the dilution only has a partial restricting effect on Bacillus subtilis andStaphylococcus
aureus;strength and weakness of the bacteria-restricting capacity lie indifferences among bacteria , in turn Bacillus sub-
tilis>Salmomella sp>Bacillus cereus>Staphylococcus aureus>Escherichia coli.Furthermore , soaking abstracted object
from Mniumcuspidaum Hedw has relatively good hot stability , whose bacteria-restricting thctor will expect tobe further
studied.
Key words:　Mnium cuspidaum Hedw;soaking abstracted liquid;bacteria-restricting effect
·355·第 4期　 　　　　　　　　　　　陈锡雄等:尖叶提灯藓抑菌作用的初步研究