全 文 ：火棘果实浸提液的抑菌活性研究
李 宇 ,古小婷 ,付鸣佳 ＊　(江西师范大学生命科学学院 ,江西南昌 330022)
摘要　[目的 ]为了获得更为安全有效的抗菌剂 ,并为开发利用火棘资源提供理论依据。 [方法] 分别以 70%乙醇和 1%盐酸+70%乙
醇浸提获得火棘果实浸提液 ,并研究其抗菌性。 [结果] 1%盐酸+70%乙醇浸提获得的火棘果实浸提液对大肠杆菌(Escherichiacoli)、
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和一种未知的革兰氏阳性细菌有较强的抑制作用 ,但对枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)无抑制作
用;对青霉(Peniciciliumspp.)有较好的抑制作用 ,但对根霉(Rhizopusstolonifer)、毛霉(Mucorspp.)、胶胞炭疽菌(Colletotrichumgloeospo-
rioides)和拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsisspp.)无抑制作用。 70%乙醇浸提获得的火棘果实浸提液对大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢
杆菌和一种未知细菌及根霉 、毛霉、青霉 、胶胞炭疽菌和拟盘多毛孢菌均无抑制作用。 [结论]火棘果实提取液中含有较多的花青素类
物质。
关键词　火棘果实;浸提液;抗菌
中图分类号　Q946.83　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)06-02559-02
AntimicrobialActivityoftheExtractedFluidfromFirethornFruit
LIYuetal　(ColegeofLifeScience, JiangxiNormalUniversity, Nanchang, Jiangxi330022)
Abstract　[ Objective] Theaimofthestudywastoobtainmoresafeandefectiveantimicrobialagentsandsupplytheoreticalfoundationfor
developingandutilizingfirethornresources.[ Method] Thefluidswereextractedwith70%ethanoland1%hydrochloricacid+70%ethanol
resp.fromfirethornfruitandtheirantimicrobialactivitieswerestudied.[ Result] Thefluidextractedwith1%hydrochloricacid+70%etha-
nolfromfirethornfruithadstrongerinhibitoryefectonEscherichiacoli, Staphylococcusaureusandanunknowngram-positivebacteria, butit
hadnoinhibitoryeffectonBacilussubtilis.IthadbetterinhibitoryefectonPeniciciliumspp., butithadnoinhibitoryefectonRhizopus
stolonifer, Mucorspp., ColletotrichumgloeosporioidesandPestalotiopsisspp..Thefluidextractedwith70%ethanolfromfirethornfruithadno
inhibitoryefectonE.coli, S.aureus, B.subtilis, theunknownbacteria, R.stolonifer, Mucorspp., Penicicilliumspp., C.gloeosporioides
andPestalotiopsisspp..[ Conclusion] Therewasquitemuchanthocyaninsintheextractedfluidfromfirethornfruit.
Keywords　Firethornfruit;Extractedfluid;Antimicrobial
基金项目　江西省教育厅科技项目(赣教技字 [ 2005] 85号)资助。
作者简介　李宇(1986-), 男 ,江西吉安人 ,硕士研究生 ,研究方向:生
物技术。 ＊通讯作者 ,硕士生导师 , 教授 , E-mail:mingjiafu@
yahoo.com.cn。
收稿日期　 2009-01-09
　　火棘(Pyracanthafortuneana)属蔷薇科火棘属常绿小灌
木 ,又名火把果 、救命粮 、赤阳子等 [ 1] ,主产于我国东南和西
南各省的广大地区 ,主要生长在海拔 500 ～ 2 800m的山地 、
丘陵地阳坡灌丛 、草地及河沟路旁 [ 2] 。火棘果为梨果 ,似扁
圆球 ,果皮呈鲜红色 ,少数品种呈金黄色 ,平均单果鲜重 0.08
～0.23g,挂果期从当年 6月持续至次年初 [ 3] 。我国火棘资
源极为丰富 ,且分布集中 ,便于采集利用。
研究表明 ,火棘果实具有很大的药用和食用开发价
值 [ 4-8] 。火棘果实总提取物具有消除自由基 、降血脂 、增强
免疫力 、增强体力和促进消化等作用 [ 9] ,其中含有多种营养
成分和药用成分 ,包括氨基酸 、可溶性糖 、维生素 、矿质元素
和脂肪酸等 [ 10] 。此外 ,对火棘中的黄酮类化合物 、色素等成
分也有研究 [ 11] 。笔者主要对火棘果实的醇提取物进行了相
关抗菌活性的研究 ,以期获得更为有效 、安全的抗菌剂 ,为火
棘资源的开发利用提供理论依据。同时 ,利用微乳薄层色谱
法对火棘果实的黄酮类化合物进行分离鉴定 ,为该黄酮类物
质的分离鉴定提供了准确 、简便 、有效的方法。
1　材料与方法
1.1　培养基与菌种
1.1.1　牛肉膏蛋白胨培养基。牛肉膏 3 g、蛋白胨 10g、NaCl
5 g、琼脂 15 ～ 20 g、水 1 000 ml、pH7.0 ～7.2。液体培养时不
加琼脂。
1.1.2　马铃薯培养基。马铃薯 200 g、蔗糖 20 g、琼脂 20 g、
水 1 000 ml、pH自然。液体培养时不加琼脂。
1.1.3　细菌 。大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌
(Staphylococusaureus)、枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)和一
种未知细菌(革兰氏阳性菌 ,江西师范大学生命科学学院实
验室分离)。
1.1.4　真菌 。根霉(Rhizopusstolonifer)、毛霉(Mucorspp.)、
青霉(Peniciciliumspp.)、胶胞炭疽菌(Coletotrichumgloeos-
porioides)和拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsisspp.)。
上述菌种为江西师范大学生命科学学院实验室保存 。
1.2　方法　
1.2.1　火棘果实抑菌成分的浸提与浓缩。采集新鲜的火棘
果实 , 45 ℃干燥箱中烘干 ,研碎。以 1/10的固液质量 /体积
比将火棘果实的粉末加入 70%乙醇和 1%盐酸 +70%乙醇
溶液中 。将混合物在常温下放置 3 d,然后将混合物在 3 500
r/min条件下离心 5min,分别取上清液。 45℃水浴浓缩至原
来的 1/2体积。
1.2.2　抑菌效果的测定 。将供试细菌和真菌分别在 37和
25 ℃恒温培养箱中固体培养基上培养活化。分别挑取已活
化好的细菌菌落置生理盐水中 ,使菌悬液在 600nm处 OD值
约为 0.1,取 0.1 ml菌悬液涂布在无菌的细菌培养基平板
上 , 37℃培养 1 h后备用 。真菌活化好以后用生理盐水 10
ml冲洗菌种平板 ,收集真菌菌液 ,取 0.1 ml涂布无菌的真菌
培养基平板上 , 25 ℃恒温培养 8h后备用。
由打孔器获得大小均匀的直径 6 mm的滤纸片 ,滤纸片
浸渍上述火棘果实提取液 , 45 ℃烘干 ,如此反复 5次后即得
有抑菌成分的滤纸片。同时用滤纸片按如此方法浸渍在无
火棘果实成分空白溶剂(按前述方法同时处理的 1%盐酸 +
70%乙醇)中 ,干燥后作为对照滤纸片备用。而后将含有抑
菌成分的滤纸片与对照滤纸片分别放入上述涂布有细菌和
真菌的平板上 , 24 h后观察对细菌的抑菌情况 , 5 d后观察对
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(6):2559-2560 责任编辑　罗芸　责任校对　傅真治
真菌的抑菌情况。
1.2.3　火棘果实抑菌成分的薄层层析分析。薄层层析和黄
酮类化合物染色测定参见徐任生等的方法 [ 12] ,用毛细管在
硅胶 GF254的 TLC薄板上点样 ,将火棘果实提取液点在硅胶
板上进行展层 ,展开剂为氯仿 -甲醇 -水 -乙酸溶液(体积
比 70∶30∶10∶1)。 254 nm紫外灯下观察以后 ,再用醋酸铅(饱
和溶液)试剂染色 , 365 nm紫外灯下观察颜色反应。
2　结果与分析
2.1　70%乙醇溶剂火棘提取物的抑菌效果　试验结果表
明 ,火棘果实 70%乙醇的提取物通过一定的浓缩以后 ,对大
肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌和一种未知细菌无
抑菌效果 ,对根霉 、毛霉 、青霉 、胶胞炭疽菌和拟盘多毛孢菌
检测也无抑菌效果。
2.2　1%盐酸 +70%乙醇火棘提取物对细菌的抑菌效果　
研究结果表明 ,火棘果实 1%盐酸 +70%乙醇提取物对金黄
色葡萄球菌 、大肠杆菌和一种未知细菌有抑菌作用 ,其中对
大肠杆菌和一种未知细菌的抑菌效果比较明显 ,对金黄色葡
萄球菌抑菌效果相对差一点 ,而对枯草芽孢杆菌几乎没有任
何作用。由表 1可知 ,火棘果实 1%盐酸 +70%乙醇提取物
对大肠杆菌和一种未知的革兰氏阳性菌的抑菌效果基本相
同 ,而且其抑菌圈直径远大于金黄色葡萄菌的 ,而对枯草芽
孢杆菌无抑菌作用。
表 1　火棘果实 1%盐酸 +70%乙醇浸提液的抑菌作用
Table1　TheinhibitingeffectofPyracanthafortuneanafruitextractin
1%Hydrochloricacid+70%ethanol
细菌
Bacteria
革兰氏反应
Gramreaction
抑菌圈相对直径∥mm
Relativediameter
ofinhibitoryzone
大肠杆菌E.coli 阴性 15.0
金黄色葡萄球菌S.aureus 阳性 10.0
一种未知细菌Unknownbacteria 阳性 15.0
枯草芽孢杆菌B.subtilis 阳性 无抑菌圈
2.3　1%盐酸 +70%乙醇火棘提取物对真菌的抑菌结果　
火棘果实 1%盐酸 +70%乙醇提取物同时对根霉 、毛霉 、青
霉 、胶胞炭疽菌和拟盘多毛孢菌 5种真菌进行抑菌效果研
究 ,结果表明 ,该火棘果实提取物只对青霉有一定的抑制作
用 ,相对抑菌圈直径约 10.0 mm,对另外 4种真菌无抑菌
作用。
2.4　薄层层析分析　在薄层层析板上 ,火棘果实 1%盐酸 +
70%乙醇提取物经氯仿 -甲醇 -水 -乙酸展层后 ,直接在
254 nm紫外灯下可见有明显有机物存在 ,而后再喷饱和醋酸
铅进行染色 ,在 365 nm紫外灯下观察可见有明显的斑点(图
1)。由图 1可见 ,有 2个主要的醋酸铅染色斑点 a和 b,表明
有两类主要的成分可以在此层析液中分离 ,根据现有的报
道 ,火棘果实经酸性乙醇溶液抽提以后主要可以得到矢车菊
素的苷和苷元 [ 13] 。此外 ,在起点部分还存在一定量的无法
展层的物质 ,表明除了可提取到矢车菊素外还有一些未知成
分存在。
图 1　火棘果实 1%盐酸 +70%乙醇提取物的薄层层析
Fig.1　Thinlayerchromatographyoftheextractoffirethorn
fruitin1%muriaticacid+70%ethanol
3　结论
(1)火棘果实 0.1%盐酸乙醇提取物对金黄色葡萄球
菌 、大肠杆菌和一种未知细菌有抑菌作用 ,而对枯草芽孢杆
菌几乎没有任何作用。
(2)检测还发现 ,该火棘提取物对真菌中的青霉菌有一
定的抑菌作用 ,而对根霉 、毛霉 、胶胞炭疽菌和拟盘多毛孢菌
的生长无任何抑制作用。
(3)薄层层析表明 ,提取液中含有较多的花青素类物质。
参考文献
[ 1] 蒋利华 ,熊远福 ,李霞,等.野生火棘果中红色素的提取研究 [ J] .中国
食品添加剂 , 2007(1):58-61.
[ 2] 蒋利华 ,熊远福 ,李霞,等.野生火棘果有效成分研究进展 [ J].中国野
生植物资源 , 2007(4):84-86.
[ 3] 刘芳,巢强 ,王磊.火棘的开发利用价值 [ J].河北林业科技, 2006(2):
51, 57[ 4] 侯建军 ,刘希林 ,魏文科,等.火棘消食健脾的动物试验 [ J].湖北农业
科学, 2003(4):84-86.
[ 5] 袁瑾,李风起,钟惠民.野生植物青刺尖和火棘果实的营养成分 [ J] .植
物资源与环境学报, 2002, 11(2):63-64.
[ 6] 王三根 ,邓如福.火棘果发育与贮藏期间营养成分和色素的变化研究
[ J].营养学报, 1996, 18(3):371-373.
[ 7] 梁淑芳 ,马绒利 ,马柏林.火棘黄酮类化合物的提取及微乳薄层色谱分
离鉴定 [ J] .西北林学院学报, 2003, 18(3):60-62.
[ 8]周先玉,陈渭萍.火棘果实中油、色素及果胶的联产工艺研究 [ J].食品
科学, 2004, 25(2):211-213.[ 9] 侯建军 ,刘希林 ,武模戈.野生植物火棘抗疲劳的功效研究[ J].武汉科
技学院学报 , 2002, 15(5):66-68.
[ 10] 程超 ,莫开菊 ,汪兴平.天然水溶性火棘色素在不同环境条件下的稳
定性研究 [ J].食品科学 , 2005, 26(3):72-74.
[ 11] 黄祖良,韦国锋,何有成 ,等.桂西火棘果实特性和营养成分的研究
[ J].食品研究与开发, 2004, 25(2):75-76.
[ 12] 徐任生,陈仲良.中草药有效成分提取与分离 [ M].2版.上海:上海科
学技术出版社 , 1983:319-329.
[ 13] 马柏林,梁淑芳,谢远芳.火棘中矢车菊素的分离及稳定性研究 [ J].
西北林学院学报, 2006, 21(6):162-165.
[ 14] QILY, LIULL, YUPR, etal.Preliminarystudiesonantifungalactivity
ofXanthiumsibiricumandtheendophyticfungi[J] .AgriculturalScience
＆Technology, 2008, 9(4):144-148.
[ 15] 文冰 ,吕巡贤 ,程路明 ,等.新疆两种野生葱浸提液对几种植物病原真
菌的抑制作用 [ J].中国生物防治 , 2001, 17(4):170-174.
[ 16] 胡乔木,王玮 ,仰晓莉 ,等.核桃楸和博落回粗提物对不同植物病原真
菌的抑制作用研究 [ J].湖北植保 , 2006(2):31.
[ 17] YINLG, WEIQ, ZHANGC, etal.AntifungalactivityofextractsfromClerodendrumbungeileavesagainsttwospeciesofphytopathogens[ J].
AgriculturalScience＆Technology, 2008, 9(1):143-145.
2560 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年