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刺山柑果实中还原糖及总糖含量的分析



全 文 :刺山柑果实中还原糖及总糖含量的分析
宋凤艳 (韩山师范学院生物系,广东潮州 521041)
摘要 [目的]分析刺山柑果实中还原糖及总糖的含量。[方法]采用 3. 5-二硝基水杨酸法对刺山柑果实中还原糖及总糖的含量进行测
定。[结果]应用水提法(100 ℃)提取的刺山柑果实中还原糖的含量在 11. 6%左右,提取温度对提取结果有明显影响;刺山柑果实中的
总糖含量在 24. 5%左右。[结论]刺山柑果实中还原糖和总糖含量相对较高,具有较好的开发前景。
关键词 刺山柑;还原糖;总糖;3. 5-二硝基水杨酸
中图分类号 O629. 1 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2012)09 -05183 -02
Analysis on the Content of Reducing Sugar and Total Sugar in the Fruits of Capparis spinosa L.
SONG Feng-yan (Biology Department of Hanshan Normal University,Chaozhou,Guangdong 521041)
Abstract [Objective]To analyze the content of reducing sugar and total sugar in the fruits of Capparis spinosa L. . [Method]3. 5-two nitro
salicylic acid method was chosen to test the content of reducing sugar and total sugar in the fruits of Capparis spinosa L. . [Result]Results
showed that the content of reducing sugar extracted by hot-water(100 ℃)was about 11. 6% and temperature of water had obvious effect to the
results. The content of total sugar was about 24. 5% . [Conclusion]The reducing sugar and the total sugar were all relatively higher in the
fruits of Capparis spinosa L.,which indicated that they would have a good development perspective.
Keyword Capparis spinosa L.;Reducing sugar;Total sugar;3,5-two nitro salicylic acid
作者简介 宋凤艳(1969 - ) ,女,河南濮阳人,讲师,在读博士,从事植
物活性成分的提取及功能研究,E-mail:fysongjj@ 126. com。
收稿日期 2011-12-15
刺山柑(Capparis spinosa L.)又名老鼠瓜、野西瓜,为山
柑科(Capparaceae)山柑属(Capparis)藤本植物,主要分布在
我国新疆、甘肃、内蒙古、西藏等省区,是一种极有栽培价值
的抗旱植物[1]。刺山柑的根茎、叶子、花和果实都具有一定
的药用价值,尤其是对风湿类疾病具有很好的疗效。近几
年,对于刺山柑的研究报道越来越多,但对刺山柑果实中多
糖的研究报道极少,为使刺山柑果实资源得到充分的利用,
发挥其独特的药用价值,试验对其还原糖及总糖含量进行测
定,以期为进一步的组分分析及机制研究奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 研究对象。刺山柑(Capparis spinosa L.)果实(干
果) ,于 2011年 10月购于新疆哈密。
1. 1. 2 主要仪器。FA2004 电子分析天平,购自上海精密科
学仪器有限公司;UV-2800 紫外光可见分光光度计,购自尤
尼柯仪器有限公司 -上海;恒温水浴锅,购自江苏省金坛市
宏华仪器厂。
1. 1. 3 主要试剂。3. 5-二硝基水杨酸溶液,自制;葡萄糖标
准品;2. 5 mol /L氢氧化钠溶液、2. 5 mol /L盐酸溶液、95%乙
醇、石油醚,上述试剂均为分析纯,均购自广州化学试剂厂。
1. 2 方法
1. 2. 1 3. 5 -二硝基水杨酸溶液的制备。取 3. 50 g 3. 5 -二
硝基水杨酸,溶于 262 ml 浓度为 2 mol /L 的氢氧化钠溶液
中,再取 195. 00 g酒石酸钾钠,溶于 500 ml蒸馏水,上述两种
溶液混合后再加入亚硫酸钠和结晶苯酚各 5. 000 g,搅拌溶
解后用蒸馏水定容到 1 000 ml,暗处保存备用。
1. 2. 2 线性关系的考察。准确称取 100. 0 mg在 105 ℃下干
燥至恒重的葡萄糖标准品,溶解于 100 ml 容量瓶中,并用蒸
馏水定容,即得 1 mg /ml 葡萄糖标准溶液。分别取 0. 00、
0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00 和 1. 20 ml 葡萄糖标准溶液,用
蒸馏水定容到 2. 00 ml,然后分别加入 2. 00 ml 3. 5 -二硝基
水杨酸溶液,各管混合均匀后,沸水浴 5 min,冷却后用蒸馏
水定容至 25 ml,混合均匀后,于 540 nm波长处测定并记录
吸光度值,平行 3份,取平均值。以葡萄糖的含量为纵坐标,
对应的吸光度值为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程[2]。
1. 2. 3 刺山柑果实的预处理。取刺山柑果实,于 80 ℃烘干
至恒重,粉碎过 40 目筛,准确称取刺山柑果实干粉 100. 00
g,按料液比 1∶5(g /ml)加入石油醚和浓度 95%乙醇,各自洗
涤 2次(室温,浸泡 24 h) ,以去除色素及脂溶性物质,过滤后
的残渣于室温下自行挥干,称重、记录、保存备用[3]。
1. 2. 4 刺山柑果实中还原糖的提取及测定。准确称量
0. 500 g预处理后的刺山柑果实干粉(共 15 份,3 份 /组) ,分
别加入 40 ml 蒸馏水,各组分别对应 40、50、60、70、80、90 和
100 ℃7个温度梯度,水浴提取 1 h后过滤,滤渣采用同法再
提取 1次,合并 2次滤液及洗涤液,转入 100 ml容量瓶,并用
蒸馏水定容,混匀过滤,取2. 0 ml滤液和2. 0 ml 3. 5 -二硝基
水杨酸溶液,沸水浴加热 5 min,冷却后用蒸馏水定容到 25
ml容量瓶中,混匀,于 540 nm波长处测定吸光度值。
1. 2. 5 刺山柑果实中总糖的提取及测定。准确称量0. 500 g
预处理后的刺山柑果实干粉(平行 3 份) ,加入 100 ml 蒸馏
水,在 100 ℃水浴提取 1 h,过滤,滤渣用同法重提 1次,合并
滤液。滤液真空蒸干后,加入 25 ml 浓度 2. 5 mol /L 的盐酸
溶液,再在沸水浴中加热 30 min,将多糖成分完全分解为具
有还原作用的单糖,水解完毕后,加入20 ml浓度2. 5 mmol /L
氢氧化钠溶液中和盐酸,然后用蒸馏水定容到 250 ml容量瓶
中,混匀。取 2. 0 ml上述溶液和 2. 0 ml 3. 5 -二硝基水杨酸
溶液,在沸水浴中加热 5 min,然后用蒸馏水定容到 25 ml,混
合均匀,在 540 nm波长处测定吸光度值[2]。
1. 2. 6 回收率分析。准确称取 0. 500 g 预处理过的刺山柑
果实粉末(平行 3份) ,加入 500 ml 蒸馏水沸水浴提取 2 次,
每次 2 h,以彻底洗脱水溶性的糖类物质。滤渣干燥后加入
安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2012,40(9):5183 - 5184 责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.09.120
已知量的葡萄糖及 40 ml蒸馏水,在 100 ℃水浴提取 2次,每
次 1 h,合并提取液、滤液及洗涤液,定容到 100 ml,按照
“1. 2. 5”方法测定吸光度值,计算回收率。
2 结果与分析
2. 1 线性关系的考察 计算得回归方程为 Y = 0. 014 4X,相
关系数 R2 为 0. 997,表明在 0 ~ 0. 048 mg /ml浓度范围内,葡
萄浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2. 2 刺山柑果实中还原糖含量的提取结果及温度对提取结
果的影响 由图 1 可知,采用水提法进行还原糖提取时,提
取时间相同的条件下,在 40 ~ 100 ℃范围内,随着提取温度
的升高,还原糖的提取量逐渐增加,幅度变化比较明显;其中
100 ℃对应的提取量最高,为 11. 60%。
图 1 温度对刺山柑果实中还原糖提取结果的影响
2. 3 刺山柑果实中总糖含量的测定结果 由表 1 可知,刺
山柑果实中总糖的含量高达 24. 5%,根据前面的分析可知,
100 ℃提取温度对应的还原糖含量的测定值为 11. 60 %,那
么,多糖的含量应该在 13%左右。
表 1 刺山柑果实中总糖含量的测定结果
吸光度值 总糖含量∥% 平均含量∥%
1 0. 59 25. 5
2 0. 54 23. 4 24. 5
3 0. 57 24. 7
2. 4 显色时间对检测结果的影响分析 取 1 mg /ml 葡萄糖
标准溶液及部分样品溶液按标准曲线及样品液测定方法,每
隔 10 min测定 1次吸光度值。结果表明,标准溶液及样品溶
液显色时间一致,且在 2 h内都非常稳定。
2. 5 回收率分析 由表 2 可知,应用上述提取方法进行回
收率分析试验,得到的平均回收率为 101. 5%,测定值略高于
实际值,其中的差值可能是由于样品前期处理不彻底所致。
表 2 回收率分析结果
测定值∥μg /ml 实际值∥μg /ml 平均回收率∥%
1 41. 0
2 40. 3 40. 0 101. 5
3 40. 5
3 结论与讨论
刺山柑果实中的色素含量相对较高,为消除色素类物质
对试验结果的影响,试验先用石油醚和乙醇进行脱色和脱脂
处理,尽量消除色素类物质对试验结果的影响。试验结果表
明,在提取时间相同的条件下,提高水浴温度,可以有效提高
还原糖及总糖的提取效率。
3. 5 -二硝基水杨酸法作为糖类测定的经典方法,具有
简单、稳定,灵敏度高等特点,试验结果具有较高的可信度,
该结果与文献中的检测结果也比较相近[4]。刺山柑果实中
糖类含量比较丰富,这可能与其生长的高原环境有关。高原
地区日照时间长,昼夜温差大,利于糖类等化合物的积累。
糖类化合物具有抗炎、抗氧化、抗癌、降血糖等多种生理活
性[5 -9]。作为一种具有独特功效的高原植物,刺山柑果实中
糖类等功效成分研究还有待进一步地拓展和深入。
参考文献
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148.
(上接第 5182页)
NaNO2 - Al(NO3)3 - NaOH 显色体系作为显色剂,用紫外分
光光度法测定总黄酮含量。结果表明,新疆不同产地沙枣果
实中总黄酮含量分别为 8. 75 ±0. 101 5 mg /g和 2. 15 ±0. 065 6
mg /g(n = 3)。
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