全 文 ：文章编号:1000-2286(2003)06-0805-06
濒危植物华木莲的遗传多样性研究
林新春1 ,俞志雄2＊ ,裘利洪2 ,肖国民3 ,刘 力1
　　(1.浙江林学院 森林培育重点实验室 ,浙江 临安 311300;2.江西农业大学 园林与艺术学院 , 江西 南昌 330045;
3.江西宜春市林科所 ,江西 宜春 336000)
摘要:利用 RAPD 分子标记对濒危植物华木莲(Sinomanglietia glauca Z.X.Yu et Q.Y.Zheng)的 19 个天
然群体进行遗传多样性分析 , 13条引物共扩增出 171个位点 ,平均每条引物 13.2 个 , 其中多态性位点 91 个 ,
占总位点数的 53.22%。分析结果表明:华木莲居群在遗传距离为 0.205 处可分为三大类 , 玉金山居群为一
类 ,模式标本树周围居群为一类 , 模式标本树对面山上的其余居群为一类。 19个居群之间的遗传相似性指数
介于 0.700 0 ～ 0.938 9 之间 ,遗传距离值介于 0.093 1 ～ 0.380 8 之间 , 平均观察等位基因数与平均有效等位
基因数分别为 1.544 4 和 1.313 4 , 平均基因多样度和平均 Shannon 信息指数分别为 0.184 7 和 0.278 2。华
木莲自然居群的遗传多样性水平低于一般物种 ,与其它濒危植物相比 , 低于观光木 、北美鹅掌楸及鹅掌楸 , 高
于版纳青梅 ,可能与水杉相当而高于银杉。其居群间的分化可能主要受环境因子选择和基因流阻隔的影响 ,
生境破坏严重与其自身的生物生态学特性可能是导致华木莲陷入濒危状态的主要原因。应对华木莲现有生
境进行保护 ,并通过人工促进天然更新 , 扩大现有居群 ,提高遗传多样性 ,并开展迁地保护。
关键词:华木莲;遗传多样性;RAPD
中图分类号:S718　　文献标识码:A
Studies on Genetic Diversity of Endangered Sinomanglietia
glauca (Magnoliaceae)
LIN Xin-chun1 , YU Zhi-xiong2 ,QIU Li-hong2 ,XIAO Guo-min3 , LIU Li1
　　(1 Key Labo ratory of Silviculture , Zhejiang Forestry College , Lin an 311300 , China;2.College of
Forest ry , JAU , Nanchang 330045 ,China;3 Institute of Forest ry , Yichun City , Yichun 336000 ,China)
　　Abstract:After analysis on genetic diversity of 19 populations of endangered Sinomanglietia glauca Z.
X .Yu et Q .Y.Zheng by Random Amplif ied Polymorphic DNA(RAPD), a total of 171 sites are detected
by 13 primers , 91 of w hich are polymo rphic(53.22%).The UPGMA analysis indicates that 19 popula-
tions of S .glauca can be divided into three g roups at the point of genetic distance 0.205:the populations
in Yujing M ountain , the populations around the type specimen tree , the populations in the mountain oppo-
site to the type specimen tree.And the similari ty indexes vary f rom 0.7000 to 0.9389 , the genetic dis-
tances range from 0.0931 to 0.3808 , the average value of observed number of alleles , effective number of
alleles , Nei s gene diversity , Shannon s info rmation index are 1.5444 , 1.3134 , 0.1847 and 0.2782 re-
spectively .The genet ic diversity of natural populat ion of S .glauca is low er than those of ordinary plants.
Compared with other endangered plants , the genet ic diversity of natural population of S .glauca is low er
收稿日期:2003-09-12
基金项目:国家自然科学基金项目“华木莲保护生物学研究”(30060073)
作者简介:林新春(1975-), 男 ,讲师 ,在职博士研究生 , 主要从事植物学研究。 ＊ 通讯作者 , E-mail:zxyu 2003@
tom.com。
第 25卷第 6期 江 西 农 业 大 学 学 报 Vol.25 ,No.6
2003年 12月 Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis Dec.,2003
DOI :10.13836/j.j jau.2003185
表 1　样品来源情况
序号 地点 海拔/ m 生境特点
1 铜锣坪至玉金山途中 720 毛竹林
2 唐家山至玉金山途中 880 毛竹林
3 玉金山小峰北坡 1 070 杂木林
4 玉金山小峰南坡 1 110 杉木人工林林缘
5 蝙蝠岩前 815 竹阔混交林
6 华木莲模式标本树 580 杂木林
7 华木莲二杈巨树 900 杂木林
8 大岩石右侧 765 毛竹林
9 滑牛坡 725 杂木林
10 崖下 560 方竹林
11 曲尺坑 717 杂木林林缘
12 华木莲三杈巨树 900 杂木林
13 穗花杉古树附近 700 竹阔混交林
14 篦蓬 665 毛竹林
15 牛轭窝 875 杂木林
16 樟树垅顶 810 杂木林
17 蝙蝠岩顶 850 杂木林
18 “ U”形谷顶 800 杂木林
19 蘑菇墩附近 710 竹阔混交林
than those of Tsoongiodendron odorum , Liriodendron tulipi fera and L .chinense , higher than those of
Vatica guangxiensis and Cathaya argyrophylla , and approximates to that of Metasequoia glyp-
tostroboides .The genetic differentiation may be mainly caused by envi ronmental choice and gene f low isola-
tion , and serious dest royed environment and its ow n bioecolog ic characteristics are probably the main rea-
sons for it s endangered posi tion.It is important to protect the existing environment , enlarge the existing
population and improve the genetic diversity through artificial measures promo ting regeneration , and carry
out ex-situ conservation.
Key words:S inomangliet ia glauca;genetic diversity;RAPD
华 木 莲
(Sinomangliet ia glauca Z.
X .Yu et Q .Y .Zheng)为
木兰科 Magnoliaceae中的我
国特有单种属植物[ 1] ,仅狭
域分布于江西宜春境内明月
山山地 ,国务院公布的“国家
重点保护野生植物名录”中
被列为国家Ⅰ级重点保护植
物的落叶木莲(Mangl ietia
decidua)即为华木莲的异名
(全文另发)。
遗传多样性是生物种内
表现在从 DNA 分子到形态
特征各个层次上可遗传的所
有变异的总称 ,是濒危植物
保护生物学研究的核心之
一[ 2] 。遗传多样性研究起
源于 DNA 分子水平 ,但可
以表现在遗传信息转录后的
各个层次上 ,因此 ,遗传多样性的检测也可以在形态学 、孢粉学 、细胞学 、生物化学等各个水平进行 ,但以
从分子水平进行检测最为客观和准确。随机扩增多态性 DNA(RAPD)以其简便 、快速 、易行 、价廉等优
点 ,成为从分子水平研究生物遗传多样性中应用最广和最具代表性的方法之一[ 3] 。
本文拟利用 RAPD分子标记对华木莲天然群体的遗传多样性作一探讨 ,为揭示华木莲植物的濒危
机制 ,更好地保护华木莲种群奠定良好的基础 。
1　材料与方法
1.1　供试材料
材料取自江西宜春境内华木莲天然群体 。采样时随机选取无病虫害的嫩叶 ,置于冰瓶内带回凭证
标本存江西农业大学林学院树木标本室(JXAU)。
1.2　基因组 DNA的提取 、纯化与检测
华木莲基因组 DNA 的提取与纯化采用改良 CTAB法[ 4] 。提取的 DNA用 GeneQuant pro 对浓度与
纯度进行检测。
1.3　引物筛选
引物 、Taq酶等药品均由上海生工提供 ,首先用 1个 DNA 样品对 600条引物进行筛选 ,初筛出引物
65条 。再选择生境差异较大的 3个 DNA 进行复筛 ,选出带型清楚 、多态性明显的引物 13条 。引物序
列见表 2。
·806· 　江 西 农 业 大 学 学 报 第 25卷
表 2　引物序列及扩增情况
序号 引物名称 引物序列
扩增总
位点数
多态性
位点数
1 S36 5 AGCCAGCGAA3 18 9
2 S37 5 GACCGCTTGT3 21 14
3 S43 5 GTCGCCGTCA3 17 9
4 S134 5 TGCTGCAGGT3 8 5
5 S147 5 AGATGCAGCC3 14 4
6 S387 5 AGGCGGGAAC3 11 6
7 S404 5 GGCGGCTGTC3 16 8
8 S405 5 GGGAACGTGT3 12 5
9 S414 5 AGGGTCGTTC3 13 9
10 S425 5 ACTGAACGCC3 7 4
11 S435 5 CAGCGACTGT3 11 8
12 S443 5 CTGTTGCTAC3 10 4
13 S444 5 AAGTCCGCTC3 13 6
总计 171 91
1.4　RAPD-PCR与产物分离
对反应体系与反应条件进行优化。
RAPD-PCR反应体系总体积为 20 μL ,包
括:10 ng 左右 DNA 模板 , 10 ×buf fer ,
2.5 mmol/L M g2+ , 0.2 mmol/L dNTP ,
0.05 μmol/L引物 , 1U Taq DNA 聚合酶 。最
后加 20 μL 左右石蜡油防止挥发。反应在
PE-9600扩增仪上进行 ,扩增程序为:94 ℃
预变性2 min 。94 ℃变性 30 s ,42 ℃退火30
s , 72 ℃延伸 90 s ,循环 38 次 。72 ℃延伸
7 min ,4 ℃保存 。扩增产物经 1%琼脂糖凝
胶(含 EB)在 1XTBE电泳缓冲液中电泳分离
后 ,在 VDS 成像系统下观察 、拍照。
1.5　数据处理
根据条带的有无统计数据 , 有带计为
“1” ,无带计为“0”。将数据文件用 Popgen32
软件计算等位基因数 、基因多样度 、shannon
信息指数 、遗传距离及相似性指数 ,并进行聚
类分析 ,构建分支系统树 。
2　结果分析
2.1　华木莲基因组 DNA的得率与质量
GeneQuant pro 测定结果表明 ,提取的华木莲基因组 DNA 得率在 121 ～ 323 ug/g 之间 , OD260/
OD280在 1.667 ～ 1.826之间 ,说明提取的 DNA 得率与质量符合 RAPD分析的要求。
2.2　华木莲 DNA扩增结果
13条引物对华木莲 19个样品均能扩增出比较清晰的条带 ,共扩增出 171个位点 ,平均每条引物
13.2个 ,其中多态性位点 91个 ,占总位点数的 53.22%,扩增结果见图 1。
图 1　RAPD扩增电泳图
　　注:上图为引物 S36 , 下图为引物 S414;1 ～ 19 为华木莲的 19 个样品;M 为 Marker ,从上至下依次为
3 000 、2 000、1 500 、1 200、1 031 、900 、800 、700 、600、500、400、300 、200 、100bp
·807·第 6 期 林新春等:濒危植物华木莲的遗传多样性研究
表 4　华木莲遗传多样性各度量平均值
种类 Na Ne H I
华木莲 1.544 4 1.313 4 0.184 7 0.278 2
　　　　注:Na:观察等位基因数;H:基因多样度;
Ne:有效等位基因数;I:Shannon 信息指数。
图 2　RAPD聚类树系图
2.3　遗传距离 、相似性指数与聚类分析
13条引物对华木莲 19 个居群扩增出的
171条带经 Popgen32软件分析 ,建立遗传距
离与相似性矩阵(见表 3),并构建分支系统
树(见图 2)。结果表明:华木莲 19个居群之
间的遗传相似性指数较高 ,介于 0.700 0 ～
0.938 9之间 ,遗传距离值较小 ,介于0.093 1
～ 0.380 8之间 ,说明华木莲居群之间具有
较大的相似性 ,但在长期的演化中也产生了
一定的遗传变异 。从聚类图可看出:在遗传
距离 0.205处 ,可将华木莲群体大致分为三
大类 ,玉金山的华木莲群体(1 ,2 ,3 ,4)为一类
(除 POP9较为独特);模式标本树周围居群
为一类(6 ,10);模式标本树对面山上的其余
居群为一类(5 , 7 , 8 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 ,
17 ,18 ,19)。
2.4　等位基因数 、基因多样度及多样性指数
分析
研究结果(见表 4)表明 ,华木莲的平均
等位基因数为 1.544 4 ,平均有效等位基因数为 1.313 4。华木莲的平均基因多样度和平均 Shannon信
息指数分别为 0.184 7和 0.278 2。
表 3　遗传相似性与遗传距离
PopID 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
1 ＊＊＊＊ 0.911 1 0.855 6 0.822 2 0.755 6 0.805 6 0.761 1 0.850 0 0.838 9 0.777 8 0.766 7 0.727 8 0.755 6 0.727 8 0.744 4 0.755 6 0.827 8 0.733 3 0.744 4
2 0.093 1 ＊＊＊＊ 0.844 4 0.855 6 0.766 7 0.816 7 0.794 4 0.816 7 0.838 9 0.800 0 0.777 8 0.705 6 0.733 3 0.716 7 0.722 2 0.755 6 0.816 7 0.733 3 0.733 3
3 0.156 0 0.169 1 ＊＊＊＊ 0.855 6 0.777 8 0.805 6 0.794 4 0.850 0 0.850 0 0.822 2 0.777 8 0.738 9 0.755 6 0.705 6 0.800 0 0.788 9 0.827 8 0.744 4 0.755 6
4 0.195 7 0.156 0 0.156 0 ＊＊＊＊ 0.755 6 0.805 6 0.783 3 0.805 6 0.805 6 0.822 2 0.744 4 0.716 7 0.744 4 0.705 6 0.733 3 0.755 6 0.794 4 0.700 0 0.722 2
5 0.280 3 0.265 7 0.251 3 0.280 3 ＊＊＊＊ 0.805 6 0.894 4 0.838 9 0.716 7 0.833 3 0.877 8 0.861 1 0.866 7 0.861 1 0.888 9 0.844 4 0.850 0 0.866 7 0.822 2
6 0.216 2 0.202 5 0.216 2 0.216 2 0.216 2 ＊＊＊＊ 0.822 2 0.800 0 0.788 9 0.816 7 0.838 9 0.766 7 0.827 8 0.811 1 0.816 7 0.827 8 0.811 1 0.761 1 0.794 4
7 0.273 0 0.230 1 0.230 1 0.244 2 0.111 6 0.195 7 ＊＊＊＊ 0.833 3 0.755 6 0.838 9 0.838 9 0.844 4 0.850 0 0.833 3 0.850 0 0.805 6 0.855 6 0.816 7 0.816 7
8 0.162 5 0.202 5 0.162 5 0.216 2 0.175 7 0.223 1 0.182 3 ＊＊＊＊ 0.844 4 0.838 9 0.805 6 0.855 6 0.816 7 0.788 9 0.827 8 0.794 4 0.877 8 0.761 1 0.772 2
9 0.175 7 0.175 7 0.162 5 0.216 2 0.333 1 0.237 1 0.280 3 0.169 1 ＊＊＊＊ 0.783 3 0.738 9 0.733 3 0.727 8 0.711 1 0.727 8 0.727 8 0.800 0 0.683 3 0.750 0
10 0.251 3 0.223 1 0.195 7 0.195 7 0.182 3 0.202 5 0.175 7 0.175 7 0.244 2 ＊＊＊＊ 0.844 4 0.783 3 0.811 1 0.805 6 0.822 2 0.822 2 0.827 8 0.766 7 0.788 9
11 0.265 7 0.251 3 0.251 3 0.295 1 0.130 4 0.175 7 0.175 7 0.216 2 0.302 6 0.169 1 ＊＊＊＊ 0.827 8 0.866 7 0.861 1 0.855 6 0.833 3 0.805 6 0.833 3 0.855 6
12 0.317 8 0.348 8 0.302 6 0.333 1 0.149 5 0.265 7 0.169 1 0.156 0 0.310 2 0.244 2 0.189 0 ＊＊＊＊ 0.850 0 0.833 3 0.894 4 0.805 6 0.844 4 0.827 8 0.794 4
13 0.280 3 0.310 2 0.280 3 0.295 1 0.143 1 0.189 0 0.162 5 0.202 5 0.317 8 0.209 4 0.143 1 0.162 5 ＊＊＊＊ 0.938 9 0.855 6 0.855 6 0.816 7 0.855 6 0.877 8
14 0.317 8 0.333 1 0.348 8 0.348 8 0.149 5 0.209 4 0.182 3 0.237 1 0.340 9 0.216 2 0.149 5 0.182 3 0.063 1 ＊＊＊＊ 0.838 9 0.850 0 0.788 9 0.861 1 0.872 2
15 0.295 1 0.325 4 0.223 1 0.310 2 0.117 8 0.202 5 0.162 5 0.189 0 0.317 8 0.195 7 0.156 0 0.111 6 0.156 0 0.175 7 ＊＊＊＊ 0.855 6 0.850 0 0.855 6 0.811 1
16 0.280 3 0.280 3 0.237 1 0.280 3 0.169 1 0.189 0 0.216 2 0.230 1 0.317 8 0.195 7 0.182 3 0.216 2 0.156 0 0.162 5 0.156 0 ＊＊＊＊ 0.838 9 0.855 6 0.833 3
17 0.189 0 0.202 5 0.189 0 0.230 1 0.162 5 0.209 4 0.156 0 0.130 4 0.223 1 0.189 0 0.216 2 0.169 1 0.202 5 0.237 1 0.162 5 0.175 7 ＊＊＊＊ 0.827 8 0.783 3
18 0.310 2 0.310 2 0.295 1 0.356 7 0.143 1 0.273 0 0.202 5 0.273 0 0.380 8 0.265 7 0.182 3 0.189 0 0.156 0 0.149 5 0.156 0 0.156 0 0.189 0 ＊＊＊＊ 0.833 3
19 0.295 1 0.310 2 0.280 3 0.325 4 0.195 7 0.230 1 0.202 5 0.258 5 0.287 7 0.237 1 0.156 0 0.230 1 0.130 4 0.136 7 0.209 4 0.182 3 0.244 2 0.182 3 ＊＊＊＊
3　讨　论
3.1　DNA质量
较高的 DNA质量是做好 PCR-　
RAPD分析的前提。在华木莲 DNA提
取与纯化过程中发现 ,用饱和酚∶氯仿∶异
戊醇(25∶24∶1)抽提 2 ～ 3次 ,有利于华木
·808· 　江 西 农 业 大 学 学 报 第 25卷
莲 DNA 纯度的提高 ,可能与木兰科植物叶片中含有一定量的酚类杂质有关。
3.2　华木莲居群分化探讨
华木莲居群间的分化可能主要受环境因子选择和基因流阻隔的影响 。由聚类图可知 ,可把华木莲
居群分为三大类:玉金山居群 ,模式标本树周围居群 ,模式标本树对面山上的其余居群。其中 ,玉金山居
群与其它居群相隔最远 ,与其它居群的基因交流也最少。模式标本树周围居群与其对面山上的居群因
分别分布在山沟的两边 ,也阻碍了两者之间的基因流 。模式标本树周围两居群 6与 10相隔较近 ,但遗
传距离却很大 ,可能与居群 10分布在沟边方竹林中和所处生境孑然不同有关。玉金山群体中 ,居群 1
与居群 2相隔较近 ,生境也相似 ,故遗传分化很小;而居群 3与居群 4虽然地理距离不远 ,但分布在山的
两坡 ,且居群 3分布在杂木林中 ,而居群 4分布在杉木人工林林缘 ,生境迥异 ,故遗传距离值较大;至于
居群 9与 1 、2 、3 、4相隔较远 ,却聚在一起 ,有待于进一步研究。模式标本树对面山上群体因相互间距离
并不遥远 ,基因交流较为容易 ,故聚为一大类 ,其中大岩石周围群体(5 , 7 , 12 , 15 , 8 ,17)又与穗花杉及第
三棵解析木周围群体(11 ,13 , 14 ,19 ,16 ,18)组成这一大类的两个分支 。
3.3　遗传多样性分析与致濒因素探讨
3.3.1　遗传多样性分析　RAPD多带性条带百分比(PPB)、遗传距离 、相似性指数 、观察等位基因数 、
有效等位基因数 、平均基因多样度与平均 Shannon信息指数都是度量遗传多样性水平的常用指标 。其
中 ,Shannon信息指数没有明确的生物学意义 ,但也正因如此 ,所以在一定程度上避免了对 RAPD位点
显隐性的讨论 ,使对遗传多样性结果的分析更为客观。
华木莲的 RAPD 多带性条带百分比为 53.22%,远低于台湾油杉 Keteleeria davidiana var.for-
mosana(85%)、辽东栎 Quercus liaotungensis(79%)、观光木 Tsoongiodendron odorum(84.62%、78.
13%)及蒙古栎 Quercus mongolica(71.22%), 与红松 Pinus coraiensis(57.68%)、版纳青梅 Vat ica
guangx iensis(53.68%)、白云杉 Picea glauca(55%)及水杉 Metasequoia glyptostroboides(53%)相当 ,而
高于银杉 Cathaya argyrophy lla(32%)和黑云杉 Picea mariana(44%)[ 5 ～ 12] 。
华木莲各居群的遗传距离值介于 0.093 1 ～ 0.380 8之间。而其它树种分别为:美国山核桃 Carya
il linoensis(0.100 0 ～ 0.550 0),板栗 Castanea mollissima(0.091 0 ～ 0.800 1), 鹅掌楸 Liriodendron
chinense(0.031 0 ～ 0.334 3),蒙古栎(0.083 6 ～ 0.143 0),海南粗榧 Cephalotaxus mannii(0.303 2 ～
0.379 4)[ 9 ,13～ 16] 。
华木莲的遗传相似性指数介于 0.700 0 ～ 0.938 9 之间 ,与红松(0.830 5 ～ 0.852 1)及观光木
(0.614 0 ～ 0.944 0)相当[ 7 ,10] 。
华木莲的观察等位基因数为 1.544 4 ,略高于板栗(1.526 0)和版纳青梅(1.536 8);其有效等位基
因数为 1.313 4 , 低于北美鹅掌楸 Liriodendron tulipi fera(1.808 2)和鹅掌楸(1.685 9)、板栗(1.
526 0),略高于版纳青梅(1.287 8)[ 11 , 14 ,17] 。
华木莲的平均基因多样度为 0.184 7 , 低于板栗(0.316 8)、北美鹅掌楸(0.433 1)和鹅掌楸
(0.395 5)[ 14 ,17] 。
华木莲平均 Shannon 信息指数为 0.278 2 ,低于板栗(0.483 2)、观光木(0.356 5)、北美鹅掌楸
(0.618 9)、鹅掌楸(0.580 6)、欧洲山杨 Populus tremuloides(0.650 0)及大青杨 P.ussuriensis
(0.310 0),而高于版纳青梅(0.168 6)[ 8 , 11 ,14 , 17 ～ 19] 。
由以上指标可知 ,华木莲自然居群的遗传多样性水平低于一般物种 ,与其它濒危植物相比 ,低于观
光木 、北美鹅掌楸及鹅掌楸 ,高于版纳青梅 ,可能与水杉相当而高于银杉。一般认为 ,濒危物种因种群缩
小而导致近亲繁殖和等位基因的随机固定 ,从而降低了其种群生存的能力 ,遗传多样性水平较低 ,如银
杉 、版纳青梅 、海南粗榧[ 11 ,12 , 16] 。但也有不少研究揭示 ,有些稀有或濒危种也保持着较高的遗传多样性
变异水平 ,如观光木 、鹅掌楸 、裂叶沙参[ 2 , 8 , 15 ,17] 。
3.3.2　致濒因素探讨　濒危植物的致濒机制是保护生物学的核心问题之一 。华木莲为木兰科中较为
原始的植物 ,分布区极为狭窄 。在野外调查中 ,我们发现华木莲原生境应为常绿或落叶阔叶林 ,但多数
已遭到严重破坏 ,尤其是该区域的入口处附近更甚 ,已多被毛竹林所代替。由于华木莲通常所处的阔叶
林郁闭度较大或毛竹林中毛竹根系发达 ,导致华木莲籽苗难于生存 ,华木莲在所处植物群落中个体间树
高 、胸径及年龄结构很不合理 ,断层明显 ,且大多数群落内更新幼苗稀少 ,已呈现明显的衰退现象[ 20] 。
此外 ,许多木兰科植物自身的繁殖障碍(如雌雄异熟)也是重要的致濒因素之一 。由此可见 ,生境破坏严
·809·第 6 期 林新春等:濒危植物华木莲的遗传多样性研究
重与其自身的生物生态学特性可能是导致华木莲陷入濒危状态的主要原因 。
遗传多样性是物种长期进化的产物 ,是种群生存和发展的前提。对华木莲现有的生境进行保护 ,并
进行人工促进天然更新 ,扩大现有种群 ,提高遗传多样性 ,具有非常重要的现实意义 ,迁地保护也是可以
采取的重要措施之一 。
3.4　RAPD分子标记用于华木莲遗传多样性分析的可靠性
遗传多样性是生物多样性的基础。RAPD分析不受器官和组织种类 、发育阶段和生境条件等因素
的影响 ,需要的 DNA模板量少 ,质量要求不高 ,且多态性丰富 ,克服了以往形态特征和同工酶分析易受
条件影响 、多态性低的缺陷 ,又较 RFLP 简化 、成本低 、不需同位素 ,因此成为目前遗传多样性分析中应
用最广的手段[ 21] 。当然 , RAPD技术也有明显的缺点 ,其所用引物较短 ,退火温度较低 ,扩增的特异性
和可重复性也相应降低 ,且反应结果易受 DNA模板纯度 、试剂浓度 、反应条件 、操作技术水平等因素的
影响 ,为显性标记[ 22] 。但是 ,研究结果表明 ,只要保证 DNA 质量 ,并通过预备实验对反应体系和反应条
件进行优化 ,并适当提高退火温度 ,即可获得较好的可重复性[ 21] 。此外 , RAPD分子标记用于属以下等
级特别是种内各居群或品种的研究具有很强的优越性[ 22] 。本实验的部分步骤做过重复实验 ,可重复性
较强 ,对华木莲各居群的分析结果也与野外情况基本一致 。可见 RAPD分子标记不失为遗传多样性研
究的一种较好的方法 ,如能与其它标记手段相结合 ,当能取得更为理想的结果。
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·810· 　江 西 农 业 大 学 学 报 第 25卷