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异质生境的新疆野扁桃组培快繁体系比较研究



全 文 :·生物技术· 北方园艺2015(17):88~94
第一作者简介:刘楠楠(1989-),女,河南南阳人,硕士研究生,研究
方向为园艺生物技术。E-mail:1064758898@qq.com.
责任作者:曾斌(1970-),男,博士,副教授,硕士生导师,现主要从
事果树种质资源及生物技术等教学与科研工作。E-mail:zbxnd@
163.com.
基金项目:国家自然科学基金资助项目(31260465);林业公益性行
业科研专项资助项目(201304701-1);新疆维吾尔自治区果树学重
点学科资助项目(201007)。
收稿日期:2015-03-19
DOI:10.11937/bfyy.201517023
异质生境的新疆野扁桃组培快繁体系比较研究
刘 楠 楠,曾   斌,李 伟 阳,夏 江 宏,刘 梦 雯,阿 卜 都 赛 麦 提 · 艾 则 孜
(新疆农业大学 林学与园艺学院,新疆 乌鲁木齐830052)
  摘 要:以分布在新疆5个异质生境的野扁桃一年生初展叶茎尖为试材,采用组织培养快速
繁殖的方法,研究不同生境对野扁桃居群再生体系的影响。将外植体接种于MS+6-BA 0.5mg/L+
NAA 0.3mg/L的初代诱导培养基上,将初代诱导的无菌茎尖接种于MS基本培养基上并附加不
同种类的激素及浓度的配比、不同浓度的蔗糖,比较研究5个异质生境新疆野扁桃茎尖的组培快
繁体系。结果表明:芽苗增殖的最适培养基分别是“哈巴河”:MS+6-BA 1.5mg/L+IBA
0.1mg/L+GA30.5mg/L,“布尔津”:MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L,
“托里”:MS+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L,“裕民”:MS+6-BA 0.6mg/L+
IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L,“塔城”:MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L。
对增殖情况较好的“哈巴河”野扁桃芽苗进行了进一步的最佳生根培养基的筛选,“哈巴河”野
扁桃芽苗最适生根培养基为1/2MS+6-BA 0.04mg/L+IBA 1.5mg/L。
关键词:新疆野扁桃;异质生境;快速繁殖;芽苗;生根
中图分类号:S 662.903.6 文献标识码:A 文章编号:1001-0009(2015)17-0088-07
  新疆野扁桃(Prunus tenela)属蔷薇科 (Rosacae)李
亚科(Pyunoideae)扁桃亚属(Prunus)植物[1]。该树种是
一种十分珍贵而古老的树种,属新生代第三纪孑遗物
种,在当今世界上已十分稀少,被誉为“活化石”[2]。现如
今,世界上只有在我国新疆与哈萨克斯坦有残遗分
布[3]。我国其主要分布于中哈边境新疆塔城地区裕民
县境内巴尔鲁克山的山地草原上,成片集中分布[4]。在
塔城境内分布于塔城北山和托里县,另外在阿勒泰地区
的布尔津和哈巴河境内也有分布[5],分布高度为海拔
900~1 200m,以阴坡为主,阳坡为辅[6]。新疆野扁桃是
新疆独有的物种资源,是城市、庭园绿化的优良树种[4],
具有很大的保护价值和发展潜力。该试验对新疆5个
异质生境分布居群的野扁桃组织培养快速繁殖及植株
再生进行了系统的研究,建立了高效而稳定的快速繁殖
体系,对于科学保存保护新疆野扁桃这一种群优异基因
库具有重要意义,也为新疆野扁桃及其近缘栽培种遗传
图谱的构建和功能基因研究奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
2014年4月分别从塔城、布尔津、哈巴河、裕民、托
里5个不同野扁桃居群中取已展叶的1年生幼嫩茎尖
作为试材。
1.2 试验方法
1.2.1 5个居群野扁桃茎尖的初代诱导分化 将采回
的茎尖在超洁净工作台上进行灭菌处理,先用70%酒精
处理30s,再用0.1%HgCl2 溶液消毒5min,随后用无
菌水冲洗5~8次[7],切下茎尖已接触升汞溶液的伤口部
分,接种于MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L的初
代诱导培养基上,每个居群接种10瓶,每瓶接种3个外
植体,重复3次。21d后统计芽苗分化情况。MS培养
基中含琼脂5.0g/L,蔗糖30.0g/L,pH 5.6~5.8,培养室
温度25±2℃,光照强度27~54μmol·m
-2·s-1,光照时
间16h/d。
1.2.2 5个居群芽苗增殖最佳培养基和最佳激素配比
的筛选 在初代培养基上培养21d后,芽尖长度约1.5~
2.0cm时将其转接在不同激素配比的增殖培养基中,如
表1所示。培养基中加琼脂5.0g/L、白糖30.0g/L、pH
5.6~5.8。培养室温度25±2℃,光照强度27~
54μmol· m
-2·s-1,光照时间16h/d。每个处理接种
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北方园艺2015(17):88~94 ·生物技术·
30个外植体。30d后调查外植体生长分化情况。最
佳蔗糖浓度的筛选:在不同居群对应的最佳激素配比
的培养基中,设蔗糖浓度25、30、35g/L 3个梯度进行
筛选,每个处理接种10瓶,每瓶接种3个外植体,重复
3次。培 养 室 温 度 25±2℃,光 照 强 度 27~
54μmol· m
-2·s-1,光照时间16h/d。30d后调查外
植体生长分化情况。
表1 茎尖芽苗培养基配方
  Table 1  Stem tip bud seedling culture medium formulas
组合号
Combination No.
培养基配方
Medium formulation
1 MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
2 MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
3 MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
4 MS+6-BA 0.8mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
5 MS+6-BA 0.6mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
6 MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
7 MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
8 MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
9 MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
10 MS+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
11 MS+6-BA 0.6mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
12 MS+6-BA 0.4mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L
13 MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L
14 MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L
15 MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L
16 MS+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L
17 MS+6-BA 0.6mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L
18 MS+6-BA 0.4mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L
1.2.3 5个居群野扁桃芽苗在最适培养基中增殖情况
比较 结合最佳激素配比和最佳蔗糖浓度,将5个不同
居群野扁桃芽苗在分别对应的最适培养基中进行培养,
每个居群对应接种30个,重复3次。培养室温度25±
2℃,光照强度27~54μmol· m
-2·s-1,光照时间
16h/d。30d后调查芽苗增殖系数及其生长情况。
1.2.4 “哈巴河”野扁桃芽苗最佳生根基本培养基的筛
选和最佳激素配比的筛选 剪取5个不同居群野扁桃
中增殖生长状况最优、来自“哈巴河”已长有5片真叶的
增殖芽苗,将其分别接种于 MS、1/2MS、1/4MS培养基
中,其中含IBA 1.5mg/L,琼脂5.0g/L,白糖30.0g/L;
pH 5.6~5.8,每个处理接种16个外植体,重复3次。
暗培养7d后移到光照下进行培养,培养室温度25±
2℃,光照强度27~54μmol· m
-2·s-1,光照时间
12h/d。21d后观察芽苗在不同培养基中的生长情况。
最佳激素配比的筛选:剪取来自“哈巴河”的长有5片真
叶的增殖芽苗,将其分别接种于18种不同激素配比的生
根培养基中,每个处理接种30个外植体。暗培养7d后
移到光照下进行培养,培养室温度25±2℃,光照强度
27~54μmol· m
-2·s-1,光照时间16h/d。28d后观
察芽苗在不同激素配比中的生长情况。
1.3 项目测定
增殖系数=有效苗(高度在1.5cm及以上的健壮
芽苗)数/接种茎尖(芽苗)数;平均芽数=分化芽总数/
接种茎尖(芽苗)数;生根率(%)=生根芽苗数/接种芽苗
数×100;平均生根数=生根总数/接种芽苗数。
1.4 数据分析
用Excel和SPSS软件进行数据分析。
2 结果与分析
2.1 5个居群野扁桃茎尖的初代诱导分化
由表2可知,P=0.05时,5个居群平均芽数均有显
著性差异,增殖系数“托里”和“塔城”分别为3.59和
3.74,它们之间无显著差异,但与其他3个地区有显著差
异,平均苗高“裕民”和“托里”分别为3.63cm 和
3.70cm,它们之间无显著差异,但与其他3个地区均有
显著差异。“哈巴河”茎尖在接种的第3天伤口开始形
成愈伤,7d后茎尖的腋芽开始萌动,生长迅速,14d后
分化芽呈倍数增长,芽苗叶片呈黄绿色,21d后每个外
植体能分化出4~6株小苗。来自“布尔津”地区的茎尖
分化芽数比其它4个居群高,但芽苗矮化增殖系数较低
为2.46,经过一个增殖周期,每个外植体能分化2~3株
小苗。“裕民”地区茎块较其它4个居群,增殖系数最低,
茎尖叶片淡黄色,再生芽苗细弱。“托里”地区茎尖较其它
居群平均芽数和增殖系数稳定,芽苗节间短叶片多,生长
迅速。“塔城”地区茎尖的增殖能力一般,再生芽苗平均苗
高为4.46cm,芽苗粗壮,叶片深绿色,部分卷曲。当P=
0.05时,5个居群平均芽数、增殖系数、平均苗高有很大的
差异性,5个不同居群野扁桃的茎尖诱导和分化情况存在
差异,可能与它们分布的生境(表3)有关,从而对温度、
光照、激素等条件有了独特的要求。
  表2  5个居群野扁桃茎尖初代诱导和分化的比较
  Table 2 The comparison of bud seedling initial induction and diferentiation of Prunus tenellain five groups
茎尖来源
Stem apex source
接种数
Inoculation number/个
平均芽数
Average bud number/个
增殖系数
Multiplication factor
平均苗高
Average seedling height/cm
生长状态
Growth state
“哈巴河”‘Habahe’ 90  5.10±0.15cB  4.68±0.14aA  3.16±0.10cC 增殖系数大,芽苗生长良好
“布尔津”‘Buerjin’ 90  6.21±0.40aA  2.46±0.35cC  2.57±0.11dD 有效芽苗数少,芽苗矮化,叶片淡黄绿色
“裕民”‘Yumin’ 90  1.56±0.22eD  1.47±0.12dD  3.63±0.17bB 芽苗细弱,茎尖叶片部分变黄
“托里”‘Tuoli’ 90  5.78±0.14bA  3.59±0.15bB  3.70±0.03bB 节间短,叶片较多
“塔城”‘Tacheng’ 90  3.88±0.11dC  3.74±0.05bB  4.46±0.23aA 芽苗粗壮,叶片深绿色部分卷曲
  注:小写字母表示0.05水平差异显著,大写字母表示0.01水平差异极其显著。
Note:The lowercase letters show the significant diference at 0.05level,capital letters show highly significant diference at 0.01level.
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·生物技术· 北方园艺2015(17):88~94
  表3  5个地区地理环境调查
  Table 3 Geographical environment survey of five areas
地区
Area
气候
Climate
年降雨量
Annual rainfal/mm
年蒸发量
Annual evaporation/mm
最低温度
Lowest temperature/℃
最高温度
Highest temperature/℃
海拔
Altitude/m
经纬度
Latitude and longitude
哈巴河Habahe 大陆性北温带寒冷气候 170.0  1 754 -34.0  39.0  532  86°41′E;48°5′N
布尔津Buerjin 大陆性北温带寒冷气候 139.3  3 389 -41.2  38.0  1 390  86°25′E;47°7′N
塔城Tacheng 中温带大陆性干旱和半干气候 290.0  1 800 -40.0  40.0  548  82°96′E;46°74′N
裕民Yumin 中温带大陆性干旱气候 304.0  1 834 -31.4  40.5  630  82°94′E;45°92′N
托里Tuoli 中温带大陆性半干旱气候 253.0  1 600 -36.6  37.9  1 500  83°59′E;45°92′N
2.2 5个群落芽苗增殖最佳培养基的筛选
2.2.1 激素配比对5个群芽苗的增殖影响 将5个居
群的芽苗分别接种于不同激素配比的培养基中,培养30d
后进行增殖情况调查(图1)。在6-BA与IBA组合的培
养基中,随着6-BA浓度(0.6~1.5mg/L)的增加平均芽
数和增殖系数均有增加;当6-BA浓度为2.0mg/L时,
芽苗的平均芽数有增加,但是芽苗玻璃化严重,增殖系
数显著下降。在6-BA与NAA组合的培养基中也出现
相似情况,当6-BA浓度为2.0mg/L时,芽苗增殖系数显
著下降,由此可知6-BA 最适增殖浓度为0.6~
1.5mg/L。“布尔津”芽苗在2号培养基中平均出芽数
为6.5,但是大部分芽苗较纤细、叶片细长且呈淡黄色长
势不良;在3号培养基中表现良好,平均有效芽数最高,
且芽苗长势好,叶片大且厚呈淡绿色。“塔城”芽苗在8号
培养基中平均芽数和有效苗数均较高,但是部分叶片卷
曲,生长状态不良;在9号培养基中芽苗节间适宜,茎部粗
图1 5个不同居群野扁桃在不同激素配比培养基中的出芽情况
Fig.1 Budding situation of five diferent groups of Prunus tenellain diferent ratio of hormone medium
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北方园艺2015(17):88~94 ·生物技术·
壮,增殖周期较短,18d即有增殖苗。“哈巴河”芽苗在8
号培养基中增殖率较高,芽苗较高。“托里”芽苗在9号
培养基中平均芽数最高,但是茎尖芽苗叶片部分发黄,
长势较弱;在16号培养基中有效苗数最高为5.5株,增
殖能力强。“裕民”芽苗在8号培养基中平均芽数为
6.1,芽点数高,但芽苗玻璃化情况严重,有效苗数较低,
而在17号培养基中综合表现较好。综上,5个居群最佳
激素配比:“布尔津”的最佳激素配比为 MS+6-BA
1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L;“塔城”的
最佳激素配比为9号 MS+6-BA 1.0mg/L+IBA
0.1mg/L+GA30.5mg/L;“哈巴河”的最佳激素配比为
8号 MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA3
0.5mg/L;“托里”的最佳激素配比为16号 MS+6-BA
0.8mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L;“裕民”的
最佳激素配比为17号 MS+6-BA 0.6mg/L+IBA
0.2mg/L+GA31.0mg/L。 
2.2.2 最佳蔗糖浓度的筛选 由表4可知,当P=0.01和
P=0.05时5个居群的最佳蔗糖浓度差异显著,“布尔津”、
“塔城”、“哈巴河”最佳蔗糖浓度为30g/L,“裕民”、“托里”
为35g/L。
  表4  5个居群芽苗增殖最佳蔗糖浓度的筛选
  Table 4 The optimal sucrose concentration screening of five communities'bud seedling proliferation
蔗糖浓度Sucrose
concentration/(g·L-1)
 
“哈巴河”‘Habahe’
 
“布尔津”‘Buerjin’
增殖系数 Multiplication factor
“裕民”‘Yumin’
 
“托里”‘Tuoli’
 
“塔城”‘Tacheng’
25  1.91±0.17bB  2.46±0.18cC  3.55±0.30bB  4.83±0.2cB  5.19±0.29aA
30  5.07±0.15aA  5.40±0.12aA  5.27±0.21aA  5.58±0.29bA  5.22±0.33aA
35  5.04±0.15aA  3.86±0.62bB  5.70±0.17aA  6.09±0.20aA  2.69±0.35bB
2.2.3 5个居群野扁桃芽苗在最佳培养基中增殖情况比
较 结合最佳蔗糖浓度和最佳激素配比,将5个群落芽苗
在最佳培养基中培养30d,观察其生长状况。在P=0.01
和P=0.05水平上表现出显著性的差异(表5),进一步证
明了5个群落之间的差异性,“托里”增殖系数最高,芽苗
长势一般;“布尔津”的芽苗长势茁壮;“塔城”地区的芽苗
则表现为节间较短;“哈巴河”平均芽数、增殖系数较为稳
定,该居群芽苗长势好,较适宜做生根培养(图2)。杨宁
等[8]对扁桃不同品种在 MS培养基中茎尖培养报道的扁
桃品种的增殖倍数大部分为4~6,该试验结果与其一致。
  表5  5个居群在最佳培养基中芽苗的增殖情况
  Table 5 Shoot proliferation of five population in the best medium
品种
Variety
接种数
Inoculation number/个
平均芽数
Average bud number/个
增殖系数
Multiplication factor
生长状况
Growth status
“哈巴河”‘Habahe’ 90  5.44±0.19dC  5.07±0.10dC 苗长势较强,叶片呈淡绿色
“布尔津”‘Buerjin’ 90  5.86±0.15cBC  5.44±0.14bcBC 芽苗节间适宜,茎秆粗壮
“裕民”‘Yumin’ 90  6.21±0.16bB  5.72±0.13bAB 芽苗较高,叶片较厚呈深绿色
“托里”‘Tuoli’ 90  6.77±0.14aA  6.06±0.22aA 增殖系数高,有效苗数高
“塔城”‘Tacheng’ 90  5.75±0.17cC  5.19±0.25cdC 节间较短
注:从左到右依次为“裕民”、“托里”、“布尔津”、“塔城”、“哈巴河”。
Note:From left to right:‘Yumin’,‘Tuoli’,‘Buerjin’,‘Tacheng’,‘Habahe’.
图2 5个不同居群野扁桃在最佳培养基中的生长情况
Fig.2 Growth situation of five diferent groups of
Prunus tenellain best medium
2.2.4 最佳生根基本培养基的筛选 如表6所示,在
0.05水平“哈巴河”再生苗在3种培养基中平均生根数
有有显著差异,MS与1/2MS生根率无显著差异,但与
1/4MS有显著差异。最佳培养基为1/2MS,第13天有
根生出,芽苗生根率高,根细长;1/4MS培养基芽苗长势
极其弱,茎尖叶片枯萎死亡,缺素症表现严重,伤口处被
大量愈伤包围,偶生有畸形根;MS培养基生根率较高,生
根周期长。但是每株芽苗多为生1根,且根白而粗短,无
根毛(图3)。
2.3 不同激素配比对“哈巴河”增殖苗生根的影响
以1/2MS培养基为基本培养基,附加不同浓度的
生长素及细胞分裂素配比,观察芽苗的生根状况(表
7)。生长素NAA与IBA相比,IBA的生根效果明显
好于NAA,NAA生成的根多为畸形根,而IBA生的根
较多且长;只添加IBA激素与6-BA+IBA相比较,添
加6-BA的生根效果要明显好于未添加6-BA,生根
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·生物技术· 北方园艺2015(17):88~94
  表6 “哈巴河”居群最佳生根基本培养基的筛选
  Table 6 Screening of‘Habahe’best rooting basic medium
培养基
Medium
接种数
Inoculation number/个
生根率
Rooting rate/%
平均生根数
Average rooting number/根
根生长状况
Root growth status
MS+IBA 1.5mg/L  48  70.67±0.13aA  0.916 7±0.10bB 根粗短、无根毛
1/2MS+IBA 1.5mg/L  48  77.33±0.10aA  3.645 8±0.24aA 根细长有根毛
1/4MS+IBA 1.5mg/L  48  8.33±0.10bB  0.125 0±0.17cC 根较短,多畸形,愈伤较多
图3 最佳基本培养基中生长状况
Fig.3 Growth situation in the best rooting basic medium
  表7 不同激素配比对“哈巴河”居群增殖芽苗生根的影响
  Table 7 Efect of diferent hormone combinations on rooting of‘Habahe’proliferation bud seedling
接种数
Inoculation number/个
萘乙酸
NAA/(mg·L-1)
吲哚丁酸
IBA/(mg·L-1)
6-苄氨基嘌呤
6-BA/(mg·L-1)
生根率
Rooting rate/%
生根数
Rooting number/根
根生长状态
Root growth status
30  0.6  0  0  0  0 无
30  0.9  0  0  16.67  0.20 根白,粗短
30  1.2  0  0  26.67  0.40 畸形根
30  1.5  0  0  6.67  0.10 畸形根,愈伤多
30  1.2  0  0.04  60.00  1.20 根较粗,无根毛
30  1.5  0  0.04  73.33  0.93 多为2根
30  0  0.6  0.04  36.67  0.80 根粗,多1根
30  0  0.9  0.04  53.33  1.40 根长且粗
30  0  1.2  0.04  73.33  1.72 有少量根毛
30  0  1.5  0.04  80.00  2.90 根细长,有根毛
30  0  0.6  0  33.33  1.06 根粗
30  0  0.9  0  43.33  1.80 正常生长
30  0  1.2  0  63.33  1.43 无根毛
30  0  1.5  0  70.00  0.53 根粗短
30  0.4  0.4  0.04  3.33  1.17 根粗短
30  0.5  0.5  0.04  6.67  1.13 畸形根较多
30  0.6  0.6  0.04  0  0 无
30  0.5  1.0  0.04  0  0 无
数和生根率都较高,其中6-BA 0.04mg/L+IBA
1.5mg/L表现最好(图4),生根率80%,生根数为2.90。
因此,生根阶段“哈巴河”最适培养基为1/2MS+6-BA
0.04mg/L+IBA 1.5mg/L,这与刘进平等[9]试验结
果一致。
3 讨论与结论
“布尔津”居群与“哈巴河”居群年降雨量较少,年
蒸发量大,但是境内水资源极其丰富,地表水年径流量
达74.72亿m3。其丰富的水资源、温差大、大陆性北温
带寒冷气候为该地区野扁桃的生长提供了独特的地理
环境(表3)。在试验过程中,光照温度高于26℃时这2
个地区的芽苗就会出现不生长甚至停止生长现象,这可
能与其寒冷的生存环境有关。
图4 “哈巴河”最适生根培养基中生根状况
(1/2MS+6-BA 0.04mg/L+IBA 1.5mg/L)
Fig.4 Rooting situation in‘Habahe’optimal rooting medium
(1/2MS+6-BA 0.04mg/L+IBA 1.5mg/L)
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北方园艺2015(17):88~94 ·生物技术·
塔城地区属于中温带大陆性干旱和半干气候,年均
温度为5.88℃,年极端最高气温40℃,极端最低气温零
下40℃,其生长环境恶劣,塔城盆地降水量稍多,年均
290mm,蒸发量1 600mm。导致该地区芽苗增殖培养
基要硬,如水分过多芽苗就会出现玻璃化现象,这可能
与其生长在干旱环境有关。
裕民居群处于干旱半干旱荒漠化地区,属中温带大
陆性干旱气候,空气干燥,年均气温7.6℃,年均降水
304mm;从表3得出5个居群的自然环境有很明显的差
异,这与试验结果表现出的显著性差异相一致。
不同激素对野扁桃增殖与生根有重要影响。赤霉
素能够诱导茎的细胞伸长,具有促进芽增殖和伸长的作
用,增殖培养基中赤霉素的加入使芽苗生长强壮,生长
状态良好。该试验与周春娜[10]试验结论一致。李康
等[11]在加入不同激素的 MS培养基上对6种扁桃幼枝
进行增殖研究发现0.8~1.0mg/L IBA能诱导各个品
种幼枝产生丛生芽;司马义·巴拉提等[12]以1/2MS+
0.1mg/L NAA对扁桃再生苗进行增殖培养表明繁殖
系数最高为210.27%;陈芳等[13]对Camel品种生根培养
发现MS培养基加入1.5~2.0mg/L IBA有利于扁桃组
培生根。该试验对野扁桃增殖研究发现0.1~0.2mg/L
IBA能诱导产生丛生芽,这与李康等[11]研究结果不一
致,这可能与扁桃品种和自身携带的内源性激素有关,
有待进一步研究。
近年来外界对野扁桃抗寒性、抗旱性、花原基、遗传
多样性等[14-17]进行多方面的研究,但对野扁桃快繁再生
体系的研究鲜少报道,该试验对野扁桃5个群落快速繁
殖进行大量系统研究并初步建立快速繁殖体系,弥补了
这方面研究的不足,为今后新疆野扁桃培育优良品种、
基因研究及大量快速繁殖无毒苗木奠定了基础。
5个不同居群增殖的最适培养基分别是:“哈巴河”
MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L;
“布尔津”MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA3
0.5mg/L;“托里”MS+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.2mg/L+
GA31.0mg/L;“裕民”MS+6-BA 0.6mg/L+IBA
0.2mg/L+GA31.0mg/L;“塔城”MS+6-BA 1.0mg/L+
IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L。其中,5个居群的最佳
蔗糖浓度有所不同,“布尔津”、“塔城”、“哈巴河”最佳蔗
糖浓度为30g/L,“裕民”、“托里”为35g/L。“哈巴河”
芽苗最适生根培养基为1/2MS+6-BA 0.04mg/L+IBA
1.5mg/L。
参考文献
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Comparative Study on Establishment of Regenertation System of Tissue Rapid
Propagation System of Heterogeneous Habitats Prunus tenelain Xinjiang
LIU Nannan,ZENG Bin,LI Weiyang,XIA Jianghong,LIU Mengwen,Abdusaimaiti·AIZAIZ
(Colage of Forestry and Horticulture,Xinjiang Agricultural University,Urumqi,Xinjiang 830052)
Abstract:The test materials were annual exhibition of the stem tips of Prunus tenelain five heterogeneous habitat of
Xinjiang,by adopting the method of tissue culture of rapid propagation,the efect of populations in diferent habitats of
Prunus tenela regeneration system was studied,and the primary explants were inoculated on the induction medium,
which was composed of MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L,then inoculated in MS basic medium and diferent
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·生物技术· 北方园艺2015(17):94~98
        
第一作者简介:黄琼林(1986-),男,博士,讲师,研究方向为分子生
物学。E-mail:perfecthql@163.com.
责任作者:陈蔚文(1950-),男,教授,博士生导师,研究方向为创新
中药研究与开发。E-mail:chenww@gzucm.edu.cn.
基金项目:广东省高等院校学科与专业建设专项资金资助项目
(2013CXZDA011);2014年国家工信部中药材生产建设资助项目
(工信厅消费函[2014]737号);广东医学院博士学位人员科研启
动资助项目(B2013017)。
收稿日期:2015-05-28
DOI:10.11937/bfyy.201517024
鸡血藤及其混伪品matK
基因分析和分子鉴定
黄 琼 林1,马 新 业2,3,詹 若 挺2,3,陈 蔚 文2,3
(1.广东医学院,广东 湛江524023;2.广州中医药大学 中药资源科学与工程研究中心,广东 广州510006;
3.岭南中药资源教育部重点实验室,广东 广州510006)
  摘 要:以鸡血藤及其4种常见混伪品为试材,采用植物基因组DNA提取试剂盒提取鸡血
藤样品总DNA,并采用matK基因通用引物扩增和测序,从GenBank获取鸡血藤4种混伪品的
matK基因序列,采用DNAMAN、MEGA等生物软件比对分析序列差异,计算遗传距离并构建聚
类树,研究matK基因对鸡血藤及其混伪品的鉴别效果。结果表明:获得的鸡血藤及其混伪品
matK序列长度为690bp,平均GC含量为31.1%,共发现236个差异位点,占总碱基数的34.2%。
8个鸡血藤样品matK序列在41bp处存在A-G碱基差异。鸡血藤与混伪品之间的种间变异大
于鸡血藤样品内的变异。基于matK基因序列建立的聚类树能够明显地鉴别鸡血藤及其混伪品。
matK基因可作为鉴别鸡血藤及其混伪品的标准DNA序列。
关键词:鸡血藤;matK基因;序列分析;分子鉴别;混伪品
中图分类号:R 282.71 文献标识码:A 文章编号:1001-0009(2015)17-0094-05
  DNA条形码技术是利用一段短的标准DNA序列
来实现物种的快速、准确鉴定的技术[1]。与性状鉴别、
显微鉴别和理化鉴别等传统的对中药鉴定方法相比,
DNA条形码技术以DNA遗传信息为鉴别标准,不受药
    
材的形态特征、发育阶段、生长环境和炮制状态等因素
所限制,具有很好的特异性、可重复性和稳定性,而且不
需要鉴定人员长期经验积累。因此,DNA条形码技术
具有强大的中药材鉴别能力,特别是在鉴别外观形状极
其相似的近缘种药材上,能够弥补传统鉴别方法的不
足。应用于中药材鉴别的DNA条形码片段主要位于叶
绿体DNA和核糖体DNA转录间隔区[2]。matK基因是
叶绿体基因蛋白编码区中进化最快的基因之一,其进化
速率在ITS2与rbcL之间并且是rbcL基因的3~4倍,
具有易扩增、测序成功率高、序列容易比对和聚类结果
可靠等优点,已被公认为植物的核心DNA条形码[3-4]。
目前,matK基因也已广泛应用于阳春砂[5]、青天葵[6]、
  
hormone,additional diferent concentration,diferent sucrose concentration.It was discussed that shoot spex proliferation
ability on five heterogeneous habitat distribution populations of wild almonds.The results showed that the most suitable
medium seedling proliferations were‘Habahe’:MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA30.5mg/L,‘Buerjin’:MS+
6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L,‘Tuoli’:MS+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L,
‘Yumin’:MS+6-BA 0.6mg/L+IBA 0.2mg/L+GA31.0mg/L,‘Tacheng’:MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L+
GA30.5mg/L.The optimum rooting culture medium of‘Habahe’whose proliferation was better was screened.The
optimal rooting medium of‘Habahe’materials was 1/2MS+6-BA 0.04mg/L+IBA 1.5mg/L.
Keywords:Prunus tenela;heterogeneous habitat;rapid propagation;bud seedling;root
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