全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2013，28(4)∶398 ～ 400
基金项目:国家十一五科技支撑计划项目(2007BAI40B02)
作者简介:卢晓琳(1985—) ，女，正攻读中药学专业的博士学位。Email:c8． lxl@ 163． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:ma － yuying@ 126． com
白芷提取物的 HPLC指纹图谱研究
卢晓琳，马逾英* ，郑光雅，米小琴，郭沛琳
(成都中医药大学药学院 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137)
摘要:目的 建立白芷提取物 HPLC指纹图谱分析方法。方法 采用 Diamonil C18色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相
为甲醇 －水 －四氢呋喃，梯度洗脱，流速 1． 0 mL·min －1，检测波长 320 nm。结果 10 批未熏硫白芷制备的提取物 HPLC指纹
图谱相似度均在 0． 9 以上，确定了 9 个峰作为特征峰组成其对照指纹图谱，并对其中的 8 个峰进行了指认，分别为异紫花前胡
内酯、8 －甲氧基补骨脂素、佛手内酯、白当归脑、氧化前胡素、欧前胡素、水合氧化前胡内酯、异欧前胡素。熏硫白芷制备的提
取物与对照 HPLC指纹图谱比较，有色谱峰的大幅度降低或缺失。结论 建立的指纹图谱较全面地反映了白芷提取物中香豆
素类成分的特征，分析方法简便、重复性好，为有效地控制白芷提取物的质量提供了新的评价方法和依据。
关键词:白芷提取物;指纹图谱;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2013)04 － 0398 － 03
Study on HPLC fingerprint of Angelicae dahuricae extract
LU Xiao － lin，MA Yu － ying* ，ZHENG Guang － ya，MI Xiao － qin，GUO Pei － lin
(State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research，Development and Utilization of Chinese Medicine Resources，School of
Pharmacy，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，611137，P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC fingerprint analysis method for Angelicae dahuricae extracts． METHODS HPLC
fingerprint was performed on Diamonil C18 column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)with mixture of methanol － water － THF as mobil phase in
a gradient mode at a flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． The detection wavelength was 320 nm． RESULTS 10 batch of extracts prepared by
non － sulfur － fumigated Angelica dahurica HPLC fingerprint had 9 characteristic common peaks and their similarity was above 0． 9．
8 peaks were identified，they were marmesin，xanthotoxin，bergapten，byakangelicol，oxypeucedanin，imperatorin，oxypeucedanin hydrate
and isoimperatorin． Peaks from extracts prepared by sulfur － fumigated Angelica dahurica HPLC fingerprint are greatly reduced or ab-
sent． CONCLUSION The fingerprints can comprehensively reflect the characteristics of coumarins in Angelicae dahuricae extracts．
The method is convenient，reproducible which provided a new evaluation method and basis for the effective control of the quality of An-
gelicae dahuricae extracts．
Key words:Angelicae dahuricae extracts;Fingerprints;HPLC
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2013)04 － 0398 － 03
白芷 Angelicae dahuricae Radix 具祛风止痛、消
肿排脓之功效，含香豆素、挥发油、植物甾醇、生物
碱、无机元素等。其中，含 0． 211% ～ 1． 221%香豆
素，主要包含欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、异
氧化前胡内酯、佛手柑内酯、蛇床子素等［1］。白芷
提取物为白芷药材经提取、浓缩、并加一定量的辅料
制成的粉末，具广泛用途。为有效地体现白芷提取
物活性成分的整体性和综合性，现采用 HPLC 研究
白芷提取物中香豆素类成分的指纹图谱。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
2695 高效液相色谱系统(美国 Waters) ;UV －
VIS 8500 型分光光度计(无锡科达仪器厂)。欧前
胡素、异欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定
所，批号为:110826 － 200712、110827 － 200407) ;氧
化前胡素对照品(自制，HPLC 测定纯度 99． 5%) ;
白芷提取物由课题组提供 11 批中试样品，其中 10
批以未熏硫白芷药材为原料，1 批以熏硫白芷为原
料;甲醇、四氢呋喃为色谱纯;水为重蒸水;其余试剂
为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 采用 Diamonil C18色谱柱(250
mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相 A为水、B为甲醇 －四
氢呋喃(4∶ 1) ，梯度洗脱:60% A 保持 5 min、
60% ～20%A 保持 50 min、20% A 保持 5 min，流速
1． 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 320 nm，检测
时间 60 min，进样量 20 μL。
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2013.04.015
1． 2． 2 对照品色谱峰的选择 欧前胡素为川白芷
香豆素类重要活性成分之一，较为稳定，常作为含量
测定的指标;氧化前胡素在白芷熏硫前后变化明显，
因此，选择氧化前胡素和欧前胡素色谱峰为白芷提
取物香豆素类成分指纹图谱的参照色谱峰。
1． 2． 3 溶液的制备 取适量氧化前胡素和欧前胡
素对照品，精密称定，加甲醇制成 0． 1mg·mL －1对照
品溶液。取 0． 5 g 白芷提取物，置量瓶中，加 45 mL
甲醇，超声处理(功率 250 W，频率 50 kHz)1 h，取
出，放冷，用甲醇定容，过滤，取续滤液作为供试品溶
液，避光保存。对照品色谱见图 1。
0 10 20 30 40 50 60
im
pe
ra
to
rin
ox
yp
eu
ce
da
ni
n
t/min
图 1 氧化前胡素、欧前胡素对照品色谱图
Fig 1 HPLC chromatogram of reference substance
1． 2． 4 精密度试验 取白芷提取物，按“1． 2． 3”项
下方法提取供试品溶液，精密吸取 20 μL样品溶液，
连续进样 5 次，测得样品保留时间与峰面积。结果
表明:各峰相对保留时间 RSD ＜ 1%、相对主要峰面
积 RSD ＜ 5%，符合要求，方法精密度良好。
1． 2． 5 稳定性试验 取白芷提取物，按“1． 2． 3”项
下方法提取供试品溶液，避光保存。在 0、2、4、6、8、
24 h，精密吸取 20 μL 样品溶液，进样，测得样品保
留时间与峰面积。结果表明:各色谱峰相对保留时
间的 RSD ＜ 1%，相对主要峰面积的 RSD ＜ 5%，样品
在 24 h内的稳定性较好。
1． 2． 6 重复性实验 取白芷提取物 5 份，按
“1. 2. 3”项下方法提取供试品溶液。分别精密吸取
20 μL样品溶液进样，测得样品保留时间与峰面积。
结果表明:各峰相对保留时间的 RSD ＜ 1%，主要相
对峰面积的 RSD ＜ 5%，表明方法重复性良好。
1． 2． 7 HPLC 指纹图谱共有峰的寻找及确认 对
10 批次白芷提取物香豆素类成分指纹图谱的色谱
峰进行校正(图 2)。分别对以上 10 批中试样品的
指纹图谱进行比较编号，去除部分色谱分离度较差
的色谱峰，确定 9 个峰作为特征峰组成其对照指纹
图谱。取适量课题组前期分离得到的化合物，加甲
醇制成对照品溶液。吸取以上对照品溶液 10 μL，
进样，对比保留时间和紫外吸收图，确定白芷提取物
指纹图谱其中 8 个主要色谱峰的归属(图 3)。以峰
7(欧前胡素)为对照峰，10 批白芷提取物的 tR 和相
对峰面积见表 1、2。测定结果表明:各峰 tR 的
RSD ＜ 1%，主要相对峰面积 RSD ＜ 5%。
R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
0 10 20 30 40 50 60
t/min
图 2 10 批白芷提取物的高效液相指纹图谱
Fig 2 HPLC fingerprint of Angelica dahurica extract
1.oxypeucedanin hydrate
3. xanthotoxin
4. bergapten
5. byakangelicol
6. oxypeucedanin
7. imperatorin
8. phellopterin
9. isoimperatorin
1 2
3
4
5
6 7
8 9
0 9.42 18.84 28.26 37.68 47.10 56.52 65
t/min
图 3 白芷提取物的高效液相指纹对照图谱
Fig 3 Typical HPLC fingerprint of Angelica dahurica extract
表 1 10 批白芷提取物的相对保留时间值(min)
Table 1 The relative retention time of Angelica dahurica extract(min)
峰号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 RSD /%
1 0． 306 0． 305 0． 305 0． 305 0． 305 0． 306 0． 305 0． 305 0． 304 0． 305 0． 19
2 0． 391 0． 391 0． 392 0． 392 0． 392 0． 393 0． 391 0． 391 0． 391 0． 391 0． 18
3 0． 427 0． 426 0． 427 0． 427 0． 427 0． 428 0． 426 0． 426 0． 426 0． 426 0． 16
4 0． 578 0． 578 0． 578 0． 578 0． 578 0． 578 0． 577 0． 577 0． 577 0． 578 0． 08
5 0． 628 0． 628 0． 628 0． 628 0． 628 0． 628 0． 627 0． 627 0． 627 0． 627 0． 08
6 0． 723 0． 723 0． 722 0． 723 0． 722 0． 723 0． 722 0． 722 0． 722 0． 722 0． 07
7 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 0． 00
8 1． 083 1． 083 1． 084 1． 083 1． 082 1． 083 1． 083 1． 083 1． 083 1． 083 0． 04
9 1． 261 1． 262 1． 262 1． 262 1． 261 1． 261 1． 262 1． 262 1． 263 1． 262 0． 05
993第 4 期 卢晓琳，等。白芷提取物的 HPLC指纹图谱研究
表 2 10 批白芷提取物的相对峰面积值
Table 2 Relative peak area of Angelica dahurica extract
峰号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 RSD /%
1 0． 137 0． 126 0． 123 0． 126 0． 132 0． 133 0． 131 0． 133 0． 137 0． 138 3． 93
2 0． 065 0． 065 0． 069 0． 065 0． 066 0． 066 0． 064 0． 064 0． 072 0． 066 3． 76
3 0． 508 0． 500 0． 511 0． 481 0． 493 0． 519 0． 497 0． 501 0． 501 0． 513 2． 18
4 0． 170 0． 169 0． 172 0． 167 0． 169 0． 163 0． 167 0． 164 0． 168 0． 167 1． 60
5 0． 343 0． 332 0． 348 0． 324 0． 334 0． 344 0． 341 0． 329 0． 343 0． 334 2． 28
6 1． 020 1． 031 1． 010 1． 093 1． 023 1． 035 0． 989 1． 013 1． 012 0． 999 2． 77
7 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 0． 00
8 0． 675 0． 664 0． 674 0． 659 0． 664 0． 664 0． 665 0． 664 0． 666 0． 671 0． 76
9 0． 596 0． 565 0． 591 0． 612 0． 600 0． 562 0． 592 0． 594 0． 590 0． 598 2． 60
1． 2． 8 香豆素类成分指纹图谱相似度的计算 应
用“中药指纹图谱相似度评价系统 2004A 版”计算
各批次白芷提取物中香豆素类成分指纹图谱间的相
似性。以相关系数(中位数)进行评价，白芷提取物
各批次样品的相似度均大于 0． 971。总体来说，样
品的相似度较高，说明各批次白芷提取物样品的香
豆素类成分基本一致，工艺稳定可靠。
1． 2． 9 不同原料药材的白芷提取物指纹图谱的比
较 比较未熏硫与熏硫白芷原料制备的提取物的
HPLC指纹图谱，结果表明:后者的色谱峰的峰面积
较前者普遍降低，尤其在方框区域内有色谱峰的缺
失以及峰面积的急剧下降，这种差异可作为判断白
芷提取物所用原料药材是否熏硫的依据(图 4)。未
熏硫白芷提取物 HPLC指纹图谱与对照品色谱图进
行对照，结合光谱分析，确定白芷提取物原料药为熏
硫前后变化较大的几个化合物为:氧化前胡素、白当
归脑、佛手内酯、白当归素(图 5)。
A
B
0 10 20 30 40 50 60
t/min
0 10 20 30 40 50 60
图 4 未熏硫(A)与熏硫(B)的白芷提取物 HPLC指纹图谱对比
Fig 4 HPLC fingerprint comparison between extract by sulfur －
fumigated(A)and non － sulfur － fumigated(B)Angelica
dahurica
2 讨论
白芷药材的指纹图谱已有研究，色谱条件不尽
ox
yp
eu
ce
da
ni
n
hy
dr
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rg
ap
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ak
an
ge
lic
ol
ox
yp
eu
ce
da
ni
n
0 10 20 30 40 50 60
图 5 对照品色谱图
Fig 5 HPLC chromatogram of reference substance
相同［2］。在白芷提取物指纹图谱的研究中，参照文
献，经过筛选，最终确立的条件能直观的反映白芷提
取物所用原料药是否熏硫。根据二极管阵列检测器
检测结果，大部分成分在 254、320 nm 时吸收值最
大，254 nm下干扰强，基线不平稳;320 nm下各色谱
峰分离好、基线平稳，故采用 320 nm 为检测波长。
文中考察了超声、回流、索氏提取等不同的提取方法
制备供试品。超声提取的样品指纹图谱的总峰面积
较大，提取效率较高，因此，选用超声提取作为白芷
提取物指纹图谱的提取方式。白芷药材加工中是否
熏硫是影响白芷质量的关键因素［3］，白芷熏硫后有
效成分及药理作用明显降低。文中所建方法稳定、
可靠、重复性好，可用于白芷提取物的质量控制，同
时，也可用指纹图谱方法直接鉴别白芷提取物所用
原料药白芷在采收加工过程中是否熏硫，从总体上
评价其质量的优劣。
参考文献:
［1］ 张富强，聂红，韦艺，等．白芷化学与药理研究进展［J］． 南京
中医药大学学报:自然科学版，2002，18(3) :190 － 193．
［2］ 王婷婷，陈晓辉，胡庆庆，等． 白芷质量的 HPLC 指纹图谱评
价方法［J］．药学学报，2006，41(8) :747 － 751．
［3］ 马逾英，高颖，邹文莉，等． 熏硫川白芷药材对小鼠镇痛作用
的影响［J］．华西药学杂志，2006，21(6) :616 － 617．
收稿日期:2012 － 11 － 12
004 华 西 药 学 杂 志 第 28 卷