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火炬姜种子无菌快速繁殖技术研究



全 文 :黑龙江农业科学2016(9):19~23
Heilongjiang Agricultural Sciences
火炬姜种子无菌快速繁殖技术研究
吕德任,黄 赛,戚华沙,王景飞,符瑞侃,潘 梅
(海南省农业科学院 热带园艺研究所,海南 海口571100)
摘要:为了加速火炬姜无菌培养,以火炬姜成熟种子作为外植体,通过比较 MS无机盐浓度和植物生长调节剂
种类及浓度配比、以及生根苗的移栽基质,建立火炬姜的组培快繁技术。结果表明:种子在培养基 MS+6-BA
2.0mg·L-1中萌发;培养基 MS+6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1有利于丛生芽的生长发育,30d增殖系
数为5.75;3/4MS+ NAA 1.0mg·L-1适宜诱导生根获得再生植株,生根率100%;生根苗移栽于椰糠中成活
率98%,运用该组培快繁技术,可以高效繁殖火炬姜种苗。
关键词:火炬姜;种子;丛生芽;组织培养;快速繁殖
中图分类号:S685.15 文献标识码:A 文章编号:1002-2767(2016)09-0019-05 DOI:10.11942/j.issn1002-2767.2016.09.0019
收稿日期:2016-07-20
基金项目:海南省科研院所技术开发研究专项资助项目(KYYS-
2015-14)
第一作者简介:吕德任(1980-),男,海南省澄迈县人,助理园
艺师,从 事 植 物 组 织 培 养 研 究。E-mail:644615466@
qq.com。
通讯作者:潘梅(1962-),女,广西壮族自治区隆安县人,农学
学士,高级园艺师,从事植物组织培养研究与开发利用工作。
E-mail:panmei200@sina.com。
  火炬姜(Phaeomeria magnifica(Roscoe)
K.Shum)别名菲律宾蜡姜花,为姜科火炬姜属植
物,分布于印度尼西亚、马来西亚、印度一带[1]。
火炬姜喜欢阳光充足的环境,种植1a后就可开
花、采摘,花序从地下茎抽出,高可达1~2m,花
径10~15cm,花瓣肥厚、重瓣,呈瓷质或蜡质,花
为鲜红色或褐红色,花朵宛如一朵火红的莲花,极
为漂亮。火炬姜常年可看到花朵,盛花期为5-10
月,是一种极好的切花品种,还可做大型盆栽供室
内观赏,亦适于庭院栽培。在生产上,火炬姜主要
是通过地下茎进行繁殖,繁殖系数低,速度慢,目
前已有火炬姜组织培养的相关报道[2-4],多以花
芽、笋芽作为外植体进行研究、但未见有用种子作
为外植体进行无菌培养的报道。本研究通过火炬
姜种子无菌发芽的组织培养途径,为其应用提供
大量整齐一致的种苗。
1 材料与方法
1.1 材料
供试材料为火炬姜成熟种子。
1.2 方法
1.2.1 外植体消毒 火炬姜种子在自来水中清
洗干净后移入超净工作台,先用75%酒精浸泡
10s,无菌水冲洗3次,再用0.1%HgCl2溶液浸
泡10min,无菌水冲洗5次,将种子种皮破损后接
入诱导培养基上。
1.2.2 培养基配制 以 MS为基本培养基,根据
实验目的添加不同浓度的植物生长调节剂
6-BA(6-苄氨基嘌呤)和 NAA(萘乙酸),加白糖
30g·L-1,卡拉胶6g·L-1,pH6.0,配制分装后,于
温度 121 ℃、压力 0.14 MPa高温高压灭菌
20min。
1.2.3 培养条件 各培养阶段中,培养物均置于
光照强度为1 500lx日光灯照明条件下,培养温
度为(26±2)℃,每天光照9h。
1.2.4 丛生芽的增殖 (1)不同 MS无机盐浓度
对火炬姜丛生芽增殖的影响。设置不同浓度的无
机盐:1/4MS、2/4MS、3/4MS、MS和3/2MS,添
加6-BA 2.0mg·L-1,共5种处理,每种处理接种
10袋,每袋3个单芽,3次重复,30d后统计芽增
殖系数。(2)生长调节剂组合对丛生芽增殖的影
响。6-BA、KT、TDZ分别设1.0、2.0、3.0mg·L-1
3个浓度水平,分别与NAA 0.2、0.5mg·L-1 2个
浓度水平配比,共18种处理,每种处理接种10
袋,每袋3个单芽,3次重复,30d后统计芽增殖
系数。
1.2.5生根培养 (1)不同 MS无机盐浓度对火
炬姜生根的影响。取株高3cm的无根苗作为材
料,设置不同浓度的无机盐分别为 1/4MS、
2/4MS、3/4MS、MS,添加NAA 0.5mg·L-1,共4
种处理,每种处理接种10袋,每袋3株,3次重
复,30d后统计生根情况。(2)不同 NAA浓度
对火炬姜根诱导的影响。以3/4MS为基本培养
基,设置NAA 0.2、0.5、0.8、1.0、1.5mg·L-1,以
不添加任何生长素的3/4MS培养基作为对照,共
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     黑 龙 江 农 业 科 学 9期
6种处理,每种处理接种10袋,每袋3株,3次重
复,30d后统计生根情况。
1.2.6 生根苗的炼苗与移栽 将培养30d根系
发达的火炬姜组培苗移入荫棚,炼苗7d后,取出
小苗洗净根部附着的培养基,移栽到5种基质处
理中:椰糠、椰糠∶河沙(V1∶V1)、椰糠∶河沙∶表
土(V1∶V1∶V1)、河沙∶表土(V1∶V1)和营养土。
其中营养土由盛泰园艺科技有限公司配制,内含
泥炭土、蛭石、谷壳粉和珍珠岩成分。每种处理栽
种50株,浇水淋透,适当遮荫保湿,30d后统计植
株的成活率。
1.2.7 数据统计与分析 采用 Microsoft Excel
整理数据,SPSS 17.0软件进行方差分析和多重
比较。
2 结果与分析
2.1 外植体萌动和丛生芽的诱导
种子接入培养基10d后开始膨大,20d左右
萌发(见图1A),以后再抽长长出叶子(见图1B),
待苗高约1.5cm将其转入增殖培养基中,30d左
右基部可分化出2~3个小芽,用解剖刀切分后转
入相同的培养基中进行增殖培养。
图1 外植体萌动和芽的诱导
Fig.1 Explant germination and bud induction
2.2 丛生芽的增殖继代
2.2.1 不同 MS无机盐浓度对火炬姜芽增殖的
影响 从表1可知,不同的 MS无机盐浓度对火
炬姜芽增殖影响较大,在1/4MS到 MS的无机盐
浓度范围内,芽增殖系数随着浓度的增加而增大。
低浓度无机盐1/4MS不利于芽的生长发育,其芽
增殖系数最小,只有3.03,而且芽的生长势差,芽
细小,少数的叶片出现枯黄。2/4MS无机盐芽增
殖系数为3.47,叶绿色,芽也较为细小,芽基部有
较多的根;无机盐浓度上升到3/4MS时,增殖系
数达到4.00,芽长势好,芽体粗;无机盐浓度达到
全量时,芽的增殖系数达到最大值4.31,芽体粗
壮,整齐;无机盐浓度继续加大,分化出的芽也整
齐粗壮,但增殖系数下降到3.20。从方差分析结
果看,3/4MS与 MS间的增殖系数表现差异不显
著,而 MS与1/4MS、2/4MS、3/2MS间的增殖系
数差异则达到显著性水平。从增殖系数和芽生长
势考虑,3/4MS和 MS为适宜火炬姜丛生芽增殖
的无机盐浓度,其中以全量的 MS为最佳。
表1 不同 MS无机盐浓度对火炬姜芽
增殖的影响
Table 1 Effects of different MS inorganic
salt concentrations on buds propagation
of Phaeomeria magnifica
MS无机盐浓度
MS inorganic
salt concentrations
增殖系数
Propagation
coefficient
生长情况
Growth
situation
1/4MS  3.03±0.18b 出现枯叶,芽细,有根
2/4MS  3.47±0.15b 叶绿,芽较细,有根
3/4MS  4.00±0.21ab 叶绿,芽壮
MS  4.31±0.43a 叶绿、芽壮、整齐
3/2MS  3.20±0.15b 叶绿、芽壮、整齐
2.2.2 不同植物生长调节剂组合对火炬姜芽增
殖的影响 从表2可以看出,在18种培养基中芽
的增殖生长差异很大,增殖系数最高的达到5.75,
最低 的 只 有 1.85。在 细 胞 分 裂 素 浓 度 为
1.0mg·L-1时,TDZ与 NAA组合的增殖系数均
达到3以上,KT与NAA的组合,其增殖系数为
2.53~2.89,增殖系数最小的是6-BA与NAA的
02
9期   吕德任等:火炬姜种子无菌快速繁殖技术研究
组合,只有1.86~2.75;在细胞分裂素浓度为
2.0mg·L-1时,6-BA、KT、TDZ与 NAA 各组合
的差异较小;当细胞分裂素浓度为3.0mg·L-1
时,6-BA和 NAA的组合明显优于 KT和 TDZ
与NAA的各组合,TDZ与NAA的组合次之,最
差的是KT与NAA组合,其中6-BA 3.0mg·L-1
与NAA 0.5mg·L-1配合时,丛生芽的增殖效果
最好,增殖系数达到最大值5.75,显著高于其它
组合配比。从芽的生长状况看,6-BA 3.0mg·L-1
与NAA 0.5mg·L-1组合的丛生芽生长状况好,
芽苗健壮浓绿,且较整齐(见图2)。因此,火炬姜
丛生芽增殖培养的最优植物生长调节剂组合为
6-BA3.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1。
表2 植物生长调节剂组合对火炬姜芽增殖的影响
Table 2 Effects of different plant growth regulators on buds propagation of Phaeomeria magnifica
生长调节剂/(mg·L-1)Growth regulators
6-BA  KT  TDZ  NAA
增殖系数
Propagation coefficient
生长情况
Growth situation
1  0.2  2.75±0.27fg 芽苗高,较细,少根
1  0.5  1.86±0.03h 芽苗高,较细,少根
2  0.2  3.03±0.03defg 芽苗较细,无根
2  0.5  2.52±0.14g 芽短,较壮,无根
3  0.2  4.97±0.15b 芽苗不整齐,壮,无根
3  0.5  5.75±0.10a 芽苗高而整齐,壮,根较多
1  0.2  2.89±0.31efg 芽苗不整齐,较壮
1  0.5  2.53±0.27g 芽矮小,多为0.5~1.0cm,根多
2  0.2  2.91±0.25efg 芽苗高、较壮,根多而长
2  0.5  3.02±0.19defg 芽苗较高、壮
3  0.2  2.97±0.22defg 芽苗高、壮,根多
3  0.5  2.50±0.14g 芽苗不整齐,较弱,根少
1  0.2  3.86±0.37c 芽短,多呈团状,无平展叶
1  0.5  3.22±0.19def 芽短,多呈团状,无平展叶
2  0.2  2.97±0.19defg 芽苗较矮,平展叶少,根少
2  0.5  4.00±0.17c 芽苗不整齐,根较多
3  0.2  3.58±0.09cd 芽苗较矮小,叶片小,根少
3  0.5  3.44±0.15cde 芽苗矮小,叶片小,根较多
图2 芽的增殖
Fig.2 Buds propagation
2.3 不同浓度的无机盐对火炬姜生根的影响
由表3可知,不同无机盐浓度培养基对火炬
姜的生根发育有一定影响,从株高来看,各处理均
在5cm 以 上,1/4MS 的 株 高 值 最 小,只 有
5.14cm,2/4MS、3/4MS、MS处理间差异不显
著;就生根数来看,2/4MS和3/4MS发生的根数
多,分别为6.00和6.16条,二者差异不显著,但
均显著优于1/4MS和 MS处理;从最长根来看,4
种处理的最长根长为1.63~1.94cm,其差异不
显著;从生根率来看,1/4MS的生根率最低,仅有
91.11%,3/4MS的生根率最高,达到97.78%,两
处理间差异显著。综合分析,低浓度的无机盐1/4
MS不利于火炬姜组培苗的生根,其植株较矮小,
根数少,生根率低;全量的 MS无机盐对小苗的株
高生长有利,但不利于根系的发生,平均根数少,
生根率也较低;2/4MS和3/4MS对小苗的生根
效果好,其株高适中,生根数量多,生根率高,因
此,2/4MS和3/4MS浓度适宜火炬姜的生根培
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     黑 龙 江 农 业 科 学 9期
养,而以3/4MS浓度为最优。
表3 不同无机盐浓度对生根的影响
Table 3 Effects of different MS inorganic salt concentrations on rooting
MS无机盐浓度
MS inorganic salt concentration
株高/cm
Plant height
根数/条
Root number
最长根/cm
Longest root
生根率/%
Rooting rate
1/4MS  5.14±0.071b 5.46±0.11b 1.79±0.26a 91.11±1.11b
2/4MS  6.23±0.20ab  6.00±0.15a 1.94±0.30a 95.56±1.11ab
3/4MS  6.73±0.05a 6.16±0.08a 1.63±0.23a 97.78±1.11a
MS  6.81±0.24a 4.79±0.13c 1.83±0.49a 93.33±1.93ab
2.4 不同NAA浓度对火炬姜生根的影响
单芽接种到不同的生根培养基中,含有NAA
的各处理培养基7d后基部开始长根,不含NAA
的对照处理则在14d后长出根。由表4可知,培
养30d后,不含NAA的培养基其植株矮小,株高
只有5.53cm,诱发的根数最少,平均每株生根
1.98条,而且根短。0.2mg·L-1浓度的 NAA诱
导的生根数偏少,形成的根系细长;NAA 浓度
0.5mg·L-1 时,其株高值较小,生根数量较少,生
根率也较低;NAA 0.8~1.5mg·L-1的浓度下,植
株生长良好(见图3),植株生长高度较接近,生根
率均达到100%,但NAA 0.8mg·L-1诱发的根数
较少,为5.95条,NAA 1.0和1.5mg·L-1的生根
数分别达到了7.24条和7.21条。方差分析显
示,不含NAA的对照处理在株高、生根数、最长
根和生根率上与含NAA各处理间存在显著性差
异;NAA 0.2与0.5mg·L-1的处理,在株高、生根
数量和生根率上均有显著差异;NAA 1.0与
1.5mg·L-1处理的各项指标间的差异均不显著,但二
者与NAA 0.8mg·L-1处理在生根数量上差异显著。
综合分析,在培养效果差异不大的情况下,宜选择
NAA 1.0mg·L-1作为火炬姜生根的最适浓度。
图3 小苗生根
Fig.3 Seedings rooting
表4 不同NAA浓度对生根的影响
Table 4 Effects of different NAA concentrations on rooting
NAA浓度/(mg·L-1)
NAA concentration
株高/cm
Plant height
根数/条
Root number
最长根/cm
Longest root
生根率/%
Rooting rate
0  5.53±0.06d 1.98±0.12e 0.74±0.06c 38.89±2.94c
0.2  6.02±0.05c 3.06±0.08d 1.50±0.15b 87.77±2.22b
0.5  6.73±0.04b 5.01±0.06c 1.73±0.12ab  96.67±3.34a
0.8  6.98±0.09a 5.95±0.17b 1.83±0.08ab  100±0.00a
1.0  7.08±0.08a 7.24±014a 1.99±0.18a 100±0.00a
1.5  7.10±0.11a 7.21±0.11a 1.87±0.13ab  100±0.00a
2.5 移栽基质的选择
由表5可知,火炬姜组培苗在椰糠基质中的
成活率最高,达到98%,其次是椰糠和河沙(1∶1)
的混合基质,成活率为94%,第三为椰糠∶河沙∶
表土(1∶1∶1)基质,成活率90%,而河沙与表
土(1∶1)基质的成活率最低,只有76%,这可能是
由于河沙与表土混合基质浇水后较易板结,通透
气差,不利于根系发育的缘故。营养土基质的成
活率也较低,可能是其保水性能过好,湿度太大,
影响了根系的发育。因此,火炬姜组培苗的移栽
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9期   吕德任等:火炬姜种子无菌快速繁殖技术研究
以椰糠为最佳基质。
表5 不同基质对组培苗生长的影响
Table 5 Effects of different substrates
on growth of plantlets
基质
Substrates
移栽株数
Transplanting
number
成活株数
Survival
number
成活率/%
Survival
rate
椰糠 Coconut chaff  50  49  98
椰糠∶河沙(1∶1)
Coconut chaff∶river
sand(1∶1)
50  47  94
椰糠∶河沙∶表土(1∶1∶1)
Coconut chaff∶river sand∶
surface soil(1∶1∶1)
50  45  90
河沙∶表土(1∶1)
River sand∶surface soil
50  38  76
营养土 Nutrient soil  50  44  88
3 结论与讨论
无机盐浓度决定培养基的水分渗透压,其对
培养物的生长发育影响很大,适宜的无机盐浓度
是培养中的细胞所必需的。MS培养基含有较高
量的硝酸盐、钾盐和铵盐[5],适合于多种植物的生
长发育要求,然而不同植物对无机盐浓度的要求
不一致,即使是同一植物,不同的培养阶段对无机
盐浓度的要求也有所不同。药用植物华泽兰以全
量的 MS无机盐利于形成丛生芽,1/2MS则适宜
诱导生根获得再生植株[6]。MS则是姜黄丛生芽
增殖和诱根的最佳无机盐浓度[7]。在火炬姜的离
体培养研究中,潘学峰、莫饶和文慧婷均用 MS培
养丛生芽,1/2MS诱导小苗生根。本研究考察了
不同的 MS无机盐浓度对火炬姜种子无菌播种繁
殖的影响,试验结果表明,3/4MS和 MS为适宜
火炬姜丛生芽增殖的无机盐浓度,而以 MS为最
佳浓度;2/4MS和3/4MS适宜火炬姜的生根培
养,而3/4MS的效果最好。
植物生长调节剂的浓度配比对火炬姜丛生芽
的增殖和生长状况影响很大,在火炬姜已有的研
究报道中,丛生芽的增殖培养均采用6-BA 与
NAA的组合,但配比浓度有所不同,其中潘学
峰[2]等的试验结果以6-BA 2.0mg·L-1+NAA
0.1mg·L-1为最佳组合,添加CW10%增殖系数
可以达到4.3;莫饶[3]等认为6-BA 3.0mg·L-1+
NAA 0.01mg·L-1的配比最适宜丛生芽的增殖生
长,增加Ad 2mg·L-1,增殖系数达到4~5;而文
慧婷[4]等用6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.3mg·L-1
配比的增殖率最高。本试验结果表明,在火炬姜
丛生芽的增殖培养中,6-BA 与 NAA 组合优于
KT或TDZ与NAA的组合,其最佳浓度配比为
6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1,丛生芽增
殖系数达到5.75,芽苗整齐健壮。在小苗的生根
培养中,潘学峰[2]等在1/2MS培养基中添加
0.15%活性炭得到了好的生根效果;莫饶[3]等认
为NAA 0.01mg·L-1的生根效果理想,文慧婷[4]
等则采用较高的生长素浓度,在NAA 2mg·L-1+
IBA 0.5mg·L-1配比下生根最佳。本研究结果表
明,火炬姜小苗在3/4MS+NAA 1.0mg·L-1的
培养条件下,生根效果最好。试验结果出现的偏
差,可能与火炬姜的品种以及试验材料或代数
有关。
基质是影响移栽成活率的主要因子,普遍认
为,保水、保肥、通透性良好的基质有利于试管苗
的成活和生长[8]。火炬姜组培苗移栽在所试的5
种基质中成活率差异较大,以椰糠基质的成活率
最高,达到98%,椰糠由于有良好的孔隙结构,透
气性能好,可以防止植物的根系腐蚀,促进植物根
系生长,而其保水保肥能力也好,可以充分保持水
分和养份,减少水分及养分的流失,有利于植物根
系的再生长,从而促进植物的生长。
参考文献:
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技术出版社,1999.
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32
黑龙江农业科学2016(9):24~29
Heilongjiang Agricultural Sciences
近五十年云南5月降水特性分析
梁家昌,沈才明
(云南师范大学 旅游与地理科学学院/高原湖泊生态与全球变化重点实验室/高原地理过程与
环境云南省重点实验室,云南 呈贡650500)
摘要:基于云南36站逐日降水资料,运用趋势分析和 Mann-Kendal气候突变检验等方法,研究了近50年云
南5月降水及其降水特性的长期趋势和年代际特征。结果表明:5月降水量出现大范围不显著增加趋势,西
北部降水增加趋势显著,雨强空间变化是影响5月降水量空间变化的主要原因;5月降水量呈线性增加趋势,
增加速率为4mm·(10a)-1,雨日和雨强变化均对5月降水量有重要贡献;5月降水量及雨日序列未发生年代
际突变,但雨强在1999年前后发生了年代际突变,突变后雨强迅速增强。
关键词:降水特性;M-K突变检验;5月;雨日
中图分类号:P467 文献标识码:A 文章编号:1002-2767(2016)09-0024-06 DOI:10.11942/j.issn1002-2767.2016.09.0024
  受全球气候变暖影响,中国各地降水特性发
生了显著变化,雨日、雨强、降水频率和极端降水
事件等降水特性变化引起了人们的关注和研
究[1-3]。在云南地区,雨日、雨强等降水特性亦出
现变化[4-5]。针对云南雨日时空变化特征的研究
显示,云南年雨日、夏—冬季雨日呈减少趋势,且
年雨日和夏秋两季雨日减少趋势显著[4]。而对云
南中雨到大暴雨雨日的探讨表明云南小雨和中雨
收稿日期:2016-07-19
基金项 目:云 南 省 高 端 科 技 人 才 引 进 资 助 项 目(2013
HA024);国家自然科学基金资助项目(41372191);云南省科
技计划重点资助项目(2014FA005)
第一作者简介:梁家昌(1991-),男,江西省赣州市人,在读硕
士,从 事 极 端 气 候 变 化 研 究。E-mail:Leongjiachang@
yahoo.com。
通讯作者:沈才明(1963-),男,江苏省苏州市人,博士,教授,
博士生导师,从事古生态与古气候研究。E-mail:cmshen@
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日减少趋势明显,大雨到大暴雨雨日略微增加,年
雨日呈减少趋势[5]。强度和频数是决定降水总量
的关键要素,是降水特性研究中的重要指标。雨
日和降水强度的变化,势必引起各地降水时空特
征出现新的变化。因此,对地区降水及其雨日和
雨强的研究探讨,对于降水变化甚至是降水异常
事件的预测具有重要作用,尤其是对特殊时期的
预测有其特别重要的意义。
云南地处我国西南低纬高原地区,受东亚季
风、南亚季风和青藏高原的综合影响,气候复杂,
其中尤以5月降水变化最显著。5月是冬季环流
型向夏季环流型转换的过渡季节,气候上表现为
夏季风来临,干季转雨季[6]。另一方面,5月也是
云南小春作物产量形成期和大春作物播种关键
期。一旦5月大气环流出现异变,当年雨季开始
较晚或过早,云南易发生降水异常事件,导致严重
旱涝灾害。
Study on Seeds Sterile Rapid Propagation of Phaeomeria
magnifica(Roscoe)K.Shum
LYU De-ren,HUANG Sai,QI Hua-sha,WANG Jing-fei,FU Rui-kan,PAN Mei
(Tropical Horticuture Research Institute of Hainan Academy of Agricultural Sciences,Haik-
ou,Hainan 571100)
Abstract:In order to accelerate the sterile culture of Phaeomeria magnifica,using the seeds as explants,the
techniques of tissue culture and rapid propagation were studied by comparing with different MS inorganic salt
concentrations,plant growth regulator types,concentration ratio and transplanting substrates.The results
showed that seeds sprouted buds in the medium MS+6-BA 2.0mg·L-1;MS+6-BA 3.0mg·L-1+NAA
0.5mg·L-1 could effectively induce fasciculate buds,the propagation coefficient was 5.75every 30days;the
most optimum rooting medium was 3/4MS+ NAA 1.0mg·L-1,and the rooting rate was 100%.The rooting
seedlings were effectively transplanted in coconut chaff,the survival rate was 98%.Using the technology of tis-
sue culture and rapid propagation of Phaeomeria magnifica could efficiently breeded seedlings.
Keywords:Phaeomeria magnifica;seed;fasciculate buds;tissue culture;rapid propagation
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