全 文 ：苍耳草水溶性成分指纹图谱ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ研究
柏璐１，李伟东２＊，蔡宝昌２，雷雨２，徐圣秋１
（１．徐州市第一人民医院药剂科，江苏 徐州　２２１００２；２．南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，国家中医药管理局中药
炮制标准重点实验室，江苏 南京　２１００２９）
摘要：目的　研究苍耳草水溶性化学成分。方法　建立苍耳草水溶性成分的指纹图谱，通过ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ技术鉴定其化学成
分。结果　对苍耳草药材中的５种酚酸类成分的化学归属进行了指认，推测其结构为咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸。结论
　苍耳草中特征化学成分的识别可以显著增强其质量控制的准确性和专属性。化学成分的定性与定量相结合，可有效控制
苍耳草药材及其相关产品的质量。
关键词：苍耳草；指纹图谱；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ
中图号：Ｒ９２７．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－０４８２（２０１３）０６－０５７６－０３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｆｉｎｇｅｒ－ｐｒｉｎｔ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉ＇ｓ　Ｗａｔｅｒ－ｓｏｌｕｂｌｅ　Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｂｙ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ
ＢＡＩ　Ｌｕ１，ＬＩ　Ｗｅｉ－ｄｏｎｇ２＊ ，ＣＡＩ　Ｂａｏ－Ｃｈａｎｇ２，ＬＥＩ　Ｙｕ２，ＸＵ　Ｓｈｅｎｇ－ｑｉｕ１
（１．Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｘｕｚｈｏｕ　Ｆｉｒｓｔ　Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｕｚｈｏｕ，２２１００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｔｈｅ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈｅｒｂ－
ａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｓｔａｔｅ　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００２９，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ＇ｓ　ｗａｔｅｒ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　
Ｔｈｅ　ｆｉｎｇｅｒ－ｐｒｉｎｔｓ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ＇ｓ　ｗａｔｅｒ－ｓｏｌｕｂｌｅ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ＇ｓ　ｆｉｖｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ＇ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，
ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｐｅｃｕｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｙ　ａｒｅ　ｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌｑｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ　ｃａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｔｈｅ　ｑｕａｌｉ－
ｔａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｃａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｔ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ；ｆｉｎｇｅｒ－ｐｒｉｎｔ；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ
　　苍耳草为菊科植物苍耳 Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ
Ｐａｔｒ．的全草，入药部位为地上干燥部分，全国均有
分布，具有祛风散热，除湿解毒之功效。全草含挥发
油、倍半萜内酯、有机酸等。苍耳草中的有机酸类化
合物被证实具有良好的抗氧化、抗炎、抗微生物、酶
抑制作用、保护肝细胞、抑制血小板凝集等生物活
性［１－２］。本文应用液相色谱－离子阱质谱分析苍耳草
中化学成分，根据已知化合物的分子离子峰信息，参
考文献指认了５个有机酸类化合物，推测其可能的
结构。
１　材料
１．１　样品来源
苍耳草药材２０１０年５月采于江苏徐州，经南京
中医药大学药学院陈建伟教授鉴定为菊科植物苍耳
ＸａｎｔｈｉｕｒｎｓｉｈｉｒｉｃｕｍＰａｔｒ．的干燥地上部分。
１．２　仪器与试剂
美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司液相色谱－离子阱质谱联用仪
（Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００Ｓｅｒｉｅｓ　ＬＣ／ＭＳＤ　Ｔｒａｐ），包括：双高压
溶剂泵，在线真空脱气机，自动进样器，柱温箱，光电
二极管阵列检测器（ＤＡＤ），美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司化学
工作站 Ａ０９０１，质谱处理软件 ＬＣ－ＴＲＡＰ　４．２；
ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ　ＡＧ２８５十万分之一分析天
平；数显恒温水浴锅 ＨＨ－４（国华电器有限公司）；
Ａｎｋｅ　ＴＤＬ－８０－２Ｂ离心机（上海安亭科学仪器厂）。
绿原酸对照品购于中国药品生物制品检定所
（批号：１１０７５３－２００４１３），纯度≥９８％；色谱纯甲醇为
—６７５—
南京中医药大学学报２０１３年１１月第２９卷第６期
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦ　ＮＡＮＪＩＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＣＭ　Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．６　Ｎｏｖ．２０１３
收稿日期：２０１３－０８－１６；修稿日期：２０１３－０９－２６
基金项目：江苏省徐州市社会发展项目（ＸＺＺＤＹ１２０１）
作者简介：柏璐（１９７０－），女，江苏徐州人，徐州市第一人民医院副主任中药师。＊通信作者：ｌｉｗｅｉｄｏｎｇ０８０１＠１６３．ｃｏｍ
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2013.06.028
流动相（美国Ｔｅｄｉａ公司生产）；分析纯甲醇为提取
剂（南京化学试剂有限公司，批号：０９０２０３１００７９）；分
析纯冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：
Ｔ２００９０１０５）；水为屈臣氏纯净水。
２　方法与结果
２．１　色谱质谱条件
色谱条件：岛津ＣＬＣ－ＯＤＳ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，
５μｍ）色谱柱，流速：０．９ｍＬ／ｍｉｎ，柱温：２５℃，检测
波长：３２６ｎｍ，进样量：１０μＬ，采样时间６０ｍｉｎ，流动
相：Ａ为甲醇，Ｂ为０．１％乙酸水溶液，梯度洗脱：０
→１０ｍｉｎ，１０％Ａ→２０％Ａ；１０→３０ｍｉｎ，２０％Ａ→
４０％Ａ；３０→６０ｍｉｎ，４０％Ａ→４０％Ａ。
质谱条件：电喷雾电离（ＥＳＩ），探针温度３５０℃，
曲形脱溶剂装置（ＣＤＬ）温度２５０℃，加热模块温度
２００℃，探针电压４．５ｋＶ，检测器电压１．１ｋＶ，ＣＤＬ
电压５０Ｖ，Ｑ－ａｒｒａｙ电压：ＤＣ　５０Ｖ，ＲＦ　１２０Ｖ，干燥
气流速９．０Ｌ／ｍｉｎ，雾化器流速１．５Ｌ／ｍｉｎ。负离子
模式检测，全扫描质量范围ｍ／ｚ　５０～１　２００。
２．２　供试品溶液的制备
取苍耳草药材粉末（过１００目筛）１００ｍｇ，精密
称定，置２５０ｍＬ圆底烧瓶中，精密加入２５ｍＬ　５０％
甲醇，称定质量，８５℃加热回流１ｈ，放冷，再称定质
量，用５０％甲醇补足减失的质量。滤过，取续滤液，
即得。
２．３　对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品４．４３ｍｇ，加５０％甲醇
制成浓度为０．４４３ｍｇ／ｍＬ的溶液，精密吸取１ｍＬ，
置１０ｍＬ容量瓶中，加５０％甲醇定容，摇匀，作为对
照品溶液，浓度为４４．３μｇ／ｍＬ。
２．４　结果
通过ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ联用技术按上述条件对样本
进行分析，得到了苍耳草酚酸类成分的 ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－
ＭＳ／ＭＳ数据（表１），苍耳草的液相色谱图（Ａ）和负
（Ｂ）离子模式下的质谱总离子流图（图２），苍耳草中
酚酸类成分负离子模式下的质谱图（图３）。通过对
比质谱数据并与绿原酸作进一步对照，依据参考文
献［１］初步推测苍耳草药材中的５种酚酸类成分的
化学归属及结构（表１），化合物结构式（图１）。
表１　苍耳草酚酸类成分的 ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ数据及鉴定
编号 ｔＲ／ｍｉｎ ［Ｍ－Ｈ］－ ＭＳ／ＭＳ　ｍ／ｚ（ＥＳＩ－） 化合物推测
１　 ７．８　 ３５３　 １９１　 １－ＣＱＡ或３－ＣＱＡ或４－ＣＱＡ
２　 １６．０　 ３５３　 １９１　 １－ＣＱＡ或３－ＣＱＡ或４－ＣＱＡ
３　 １８．９　 ５１５　 ３５３；１９１
１，３－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或１，４－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或
１，５－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或４，５－Ｏ－ｄｉＣＱＡ
４　 ３２．２　 ５１５　 ３５３；１９１
１，３－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或１，４－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或
１，５－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或４，５－Ｏ－ｄｉＣＱＡ
５　 ３６．９　 ５１５　 ３５３
１，３－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或１，４－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或
１，５－Ｏ－ｄｉＣＱＡ或４，５－Ｏ－ｄｉＣＱＡ
图１　化合物结构式
图２　苍耳草的液相色谱图（Ａ）和负（Ｂ）离子模式下的
质谱总离子流图
—７７５—柏璐，等：苍耳草水溶性成分指纹图谱ＬＣ?ＭＳ／ＭＳ研究　第６期
图３　苍耳草中酚酸类成分的质谱图（负离子模式检测）
３　讨论
ＬＣ－ＭＳ等现代分析技术近年来已被广泛应用
于成分分析和鉴定，ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ联用技术能够
将色谱的强分离性能与质谱的强定性优势相结合，
尤其擅长在缺乏对照品的情况下对色谱峰进行鉴
定。离子阱质谱（Ｉｏｎ　ｔｒａｐ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔ　ｒｏｍｅｔｒｙ，ＩＴ－
ＭＳ）属于多级质谱，不仅可以给出化合物的相对分
子质量，还可以根据其多级质谱（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｔａｇｅ
ＭＳ，ＭＳｎ）的碎片信息来进一步推导化合物的结构，
离子阱亦属于时间串联质谱，偏重于定性，有助于对
未知结构化合物的解析。实验因而采用苍耳草水浴
回流提取物经液相色谱分离后电喷雾质谱在线检测
的方法，由分子离子峰确定可能的相对分子质量，通
过与文献报道的成分或部分对照品对照，成功推测
出苍耳草药材中的５种酚酸类成分的化学归属及结
构。
通过对水溶性指纹图谱研究，其成分主要为具
有一定酸性的酚酸类化合物，经过摸索比较，优化液
相分析条件，应用流动相甲醇－０．１％乙酸水溶液进
行梯度洗脱，大部分化合物得到较好分离。
通过对比质谱数据发现，５个化合物均出现［Ｍ－
Ｈ］－离子，化合物１和２的分子量相同为３５４，它们
高度相似的质谱信号，推断它们为单咖啡酰类成分，
目前自然界中存在４个化合物有此结构，１－Ｏ－咖啡
酰奎宁酸、３－Ｏ－咖啡酰奎宁酸、４－Ｏ－咖啡酰奎宁酸和
５－Ｏ－咖啡酰奎宁酸（绿原酸），利用绿原酸对照品进
一步对照，发现化合物１和２都不是绿原酸；化合物
３、４和５的分子量相同为５１６，３个化合物也均是丢
失１６２得到 ｍ／ｚ　３５３的碎片离子，推测它们存在
ｃａｆｆｏｙｌ　ｇｒｏｕｐ和ＣＱＡ，依据参考文献［２］初步推测其
成分的结构。
参考文献：
［１］韩婷，李慧梁，胡园，等．苍耳子中酚酸类化合物及不同品种和居
群苍耳子中总酚酸含量的测定［Ｊ］．中西医结合学报，２００６，４
（２）：１９４－１９８．
Ｈａｎ　Ｔ，Ｌｉ　ＨＬ，Ｈｕ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉｉ
ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｔｅｇｒｉｎｇ
Ｃｈｉｎ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｍｅｄ，２００６，４（２）：１９４－１９８．
［２］杨柳，苏芝军，许舜军，等．ＵＰＬＣ法同时测定苍耳子中４种酚酸
类成分的含量［Ｊ］．药学学报，２０１０，４５（１２）：１５３７－１５４０．
Ｙａｎｇ　Ｌ，Ｓｕ　ＺＪ，Ｘｕ　ＳＪ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｅａｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ
ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｏｆ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｘａｎｔｈｉ　ｔｏｇｅｔｈｅｒ　ｂｙ　ＵＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ
［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍ　Ｓｉｎ，２０１０，４５（１２）：１５３７－１５４０．
（编辑：董宇）
—８７５— 南京中医药大学学报２０１３年１１月第２９卷第６期