全 文 ：2015，Vol．18 No．3Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
耳草提取物的抑菌作用及急性毒性研究
朱智德，罗宇东，刘源焕，李 娜
（广西中医药大学制药厂，广西 南宁 530023）
摘 要：［目的］研究耳草提取物的抑菌作用及急性毒性。［方法］运用琼脂平板结合试管二倍稀释法观察耳草提取物（石油
醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、乙醇、水提取物）对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等的抑制作用；急性
毒性试验采用小鼠灌胃法，测定耳草水提取物、乙醇提取物的最大给药量。［结果］体外抑菌试验表明，耳草水、乙醇提取物对金
黄色葡萄球菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌均有不同程度的抑制作用；系统溶剂提取物中，乙酸乙酯、正丁醇、甲醇提取
物具有抑制大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌的作用，而氯仿、石油醚提取物抑菌作用不明显。急性毒性试
验表明耳草水提取物、乙醇提取物的最大给药量为 252.4 g/kg、336.6 g/kg。［结论］耳草提取物具有抑菌作用，水提取物及乙醇提
取物的急性毒性很小。
关键词：耳草；提取物；抑菌作用；急性毒性
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：2095-4441（2015）03-0052-03
收稿日期：2015-08-01
基金项目：广西卫生厅中医药科技专项课题（编号：GZZY13-14）
作者简介：朱智德，博士研究生，副教授，研究方向：药品、食品研究开发
通信作者：罗宇东，E-mail：1097201466@qq.com
耳草为茜草科植物耳草 Hedyotis hedyotidea （Dc.）Merr.
的全草，别名较剪草、鲫鱼胆草、细叶亚婆巢、节节花等，具有
散瘀消肿、清热解毒之效，对感冒发热、咽喉痛、咳嗽、肠炎、痢
疾、疮疖和蛇咬伤均有较好的疗效。耳草产于我国南部和西
南部各省区，为广西少数民族（壮瑶）地区民间广泛使用的
药材。文献报道耳草具有抗炎、镇痛等作用［1-5］。本文对其抑
菌作用及急性毒性进行研究，为耳草的进一步开发提供理论
指导。
1 实验材料
1.1 动物 昆明系小鼠，雌雄各半，体重 18～22 g，购自广西
医科大学实验动物中心，清洁级，合格证号：SCXK桂 2014－
0002。
1.2 菌株、菌液 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）由
南宁市第四人民医院微生物室提供，金黄色葡萄球菌（Staphy
lococcus aureus）、大肠埃希菌（Escherichia coli）、沙门菌
（Salmonella）均购自中国药品生物制品检定研究院，菌种批号
分别为：26003-5a23-2、44102-3a14、50094-1a5。营养肉汤培
养基（北京陆桥技术有限责任公司生产，批号：140819）；营养
琼脂培养基（北京三药科技开发公司生产，批号：140806）。菌
液制备：挑取以上菌株的菌落，接种于肉汤培养管中，37 ℃培
养24 h后，用生理盐水稀释为 106 CFU/ml的试验菌液备用。
1.3 试药 耳草采自广西上林县，经广西中医药大学中药鉴
定教研室鉴定为茜草科耳草属植物耳草 Hedyotis hedyotidea
（DC.）Merr. 的干燥藤茎。
1．4 主要试剂及仪器 JY501电子天平（上海浦春计量仪器
有限公司）；101-1恒温电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器
有限公司）；RE501旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限公司）；
HH-6数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）；XFS-280
压力蒸汽灭菌器（浙江新丰医疗器械有限公司）；LRH-250生
化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；SW-CJ-2D超净工
作台（上海新苗医疗器械制造有限公司）。
2 方法与结果
2.1 耳草提取物的制备
2.1.1 耳草水提物（A） 药材粉碎，加水煎煮 3次，每次 1 h，
过滤，滤液浓缩至浸膏（A），每克浸膏相当于药材量 2.5 g，批
号：20131201。
2.1.2 耳草乙醇提取物（B） 耳草粉碎成细粉（100目），加入
75%乙醇回流提取 2次（每次 8倍量，2 h），提取液抽滤，挥去
乙醇，蒸干得浸膏（B），每克浸膏相当于原药材 2.0 g，批号：
20131202。
2.1.3 耳草系统溶剂提取物（C～G） 药材粉碎（100 目），按
系统溶剂提取法分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇
回流提取，提取液滤过，蒸干得稠膏。石油醚（G）、氯仿（F）、乙
酸乙酯（E）、正丁醇（D）、甲醇（C）提取物相当的药材量分别为
750，210，350，70，15 g/g（稠膏/药材）。
上述提取物均由广西中医药大学制药厂制备，实验时配
制成所需浓度。
2.2 抑菌作用试验［6-9］ 取 1 ml小试管若干支，将耳草不同
溶剂提取物（A～G）分别按试管稀释法等倍稀释（1/2，1/4，
1/8，1/16，1/32，1/64，1/128），制备得系列浓度为 90，45，22.5，
11.3，5.6，2.8，1.4 mg/ml的供试液，每支试管中接种相应的试
验菌液各 50 μl，混合均匀，置 37 ℃培养 24 h，然后再从每一
52· ·
2015年 第 18卷 第 3期 广西中医药大学学报
表 2 耳草系统溶剂提取物对各菌株的 MIC测定结果 （mg/ml）
编号 提取物
菌株
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 沙门菌
1 甲醇 5.6 2.8 11.3 11.3
2 正丁醇 5.6 11.3 45 22.5
3 乙酸乙酯 11.3 11.3 45 22.5
4 氯仿 >90 >90 >90 >90
5 石油醚 >90 >90 >90 >90
支试管中取 10 μl培养物转种于营养琼脂平板上，均匀涂布，
培养 24 h（37 ℃），观察各平板上细菌的生长情况，以此计算
药物的最小抑菌浓度（MIC）。药物的最小抑菌浓度指不生长
菌落的最高药物稀释度。平行试验 3次，以 2次或者 3次结
果相同为有效。结果见表 1、表 2。
生理
盐水
水提物 乙醇提取物
90 45 22．5 11.3 5.6 2.8 1.4 90 45 22．5 11.3 5.6 2.8 1.4
+ － － － － － － + － － － － － + +
+ － － － － － + + － － － － － － +
+ － － + + + + + － － + + + + +
+ － － + + + + + － － + + + + +
表 1 耳草水、乙醇提取物对各菌株的 MIC测定结果 （mg/ml）
菌株
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
沙门菌
注：“+”表示观察到细菌生长，“－”表示未观察到细菌生长
由表 1可见，耳草水提物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞
菌、大肠埃希菌、沙门菌的 MIC分别为 2.8，5.6，45，45 mg/ml；
耳草乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希
菌、沙门菌的 MIC分别为 5.6，2.8，45，45 mg/ml。可见耳草乙
醇、水提取物对上述受试细菌有一定的抑制作用。
由表 2可见，耳草不同极性溶剂的提取物中，甲醇提取物
对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌的
MIC分别为 5.6，2.8，11.3，11.3 mg/ml；正丁醇提取物对金黄色
葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌的 MIC分别为
5.6，11.3，45，22.5 mg/ml；乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、
铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌的 MIC分别为 11.3，11.3，
45，22.5 mg/ml；可见耳草的甲醇、正丁醇、乙酸乙酯提取物对
上述受试细菌均有抑制作用。石油醚、氯仿提取物则对上述
受试细菌无抑制效果。
2.3 耳草急性毒性试验［10-11］ 取 60只小鼠，体质量 18～22 g，
雌雄各半，随机分为 3组，即空白对照组、耳草水提组、耳草醇
提组，每组 20只小鼠。小鼠禁饲（供水）20 h后，以耳草水提
物最大浓度（2.5 g/ml）、醇提物最大浓度（3.7 g/ml）分别灌胃
给予受试药液，一天灌胃 2次（上午 8时和下午 3时，给药体
积均为 40 ml/kg，空白对照组灌胃等量饮用水，观察给药后
14天内小鼠的体重、外观、行为、呼吸、四肢活动、进食、排泄、
死亡等情况。14天后解剖小鼠，观察组织脏器有无异常改变。
结果显示，给药后 14天内小鼠的外观、行为、呼吸、四肢
活动、进食、排泄等均未见明显异常，无死亡现象；给药组与空
白对照组小鼠体质量比较无显著性差异。14天后解剖小鼠，观察
主要组织脏器，给药组与空白对照组比较，动物均无异常现象。
测定耳草水提取物、乙醇提取物的最大给药量为 252.4 g/kg、
336.6 g/kg，提示耳草的急性毒性很小。结果见表 3。
3 讨 论
3.1 耳草在两广地区广泛应用，是岭南著名的抗炎镇痛和伤
科用药。国内对耳草的药理研究已经取得了一定的进展，表
明其具有抗炎镇痛等作用，但对其抑菌作用及急性毒性研究
方面的报道却很少，为此本文开展了耳草抑菌作用及急性毒
表 3 耳草对小鼠急性毒性试验体质量的影响 （x±s）
组 别 n 给药浓度（g/ml） 给药量（ml/kg） 给药前体质量（g） 给药 14天体质量（g） 增长率（%）
空白对照组 20 — 40 20.15±1.12 28.60±1.70 41.93
耳草水提组 20 2.5 40 20.21±1.08 29.15±1.80 44.24
耳草醇提组 20 3.7 40 20.05±1.06 29.50±2.05 47.13
53· ·
2015，Vol．18 No．3Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
收稿日期：2015-05-28
黄金甲跌打生肌膏也称裕隆药膏，为广西兴安县谢裕隆
医师治疗跌打损伤、软组织损伤、烧烫伤、风湿肿痛及各种开
放性伤口的临床验方。该方是由龙血竭、当归、川芎、麻油等
药经过油炸加工及高压消毒精制而成的黑色糊状膏，具有清
热解毒、凉血活血、消肿止痛、祛腐生肌等功效。本文应用
HPLC法测定黄金甲跌打生肌膏中龙血素 B的含量，方法可
靠，可作为黄金甲跌打生肌膏的质量控制方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱（美国赛默飞，型号：U3000）；电热
恒温水浴锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂，型号：HHS-
21-6）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司，型
号：SHB-ⅢA）；电子天平（瑞士梅特勒，型号：AJ150）。
1.2 试药 黄金甲跌打生肌膏由广西中医药大学附属瑞康
医院中药民族药研发基地提供（批号：20140325，20140425，
性试验研究。体外抑菌试验表明，耳草水、乙醇提取物对金黄
色葡萄球菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌均有不同程
度的抑制作用；系统溶剂提取物中，乙酸乙酯、正丁醇、甲醇提
取物具有抑制大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球
菌、沙门菌的作用，而氯仿、石油醚提取物抑菌作用不明显。
急性毒性试验结果表明，耳草水提取物、乙醇提取物的最大给
药量为 252.4 g/kg、336.6 g/kg，提示耳草的毒性很低。
3.2 国内报道耳草含有 β-谷甾醇、莨菪亭、表白桦脂酸、
羽扁豆醇、齐墩果酸、咖啡酸、挥发油等成分［1-5］。本研究表明
耳草提取物体外试验具有一定的抑菌效果，但考虑到中药材
的体内及体外抑菌作用差别较大，耳草是否具有体内抑菌作
用还有待进一步的研究。
参考文献
［1］陶曙红，陈艳芬，李钟，等.耳草抗炎活性化学成分的研究
［J］. 广东药学院学报，2011，27（4）：364-366.
［2］陈艳芬，陶曙，余结贞，等.耳草抗炎镇痛作用有效部位的
筛选［J］. 中药新药与临床药理，2012，23（1）：17-19.
［3］陶曙红，张少逵，袁旭江.耳草叶挥发油化学成分的 GC-
MS分析［J］. 中成药，2010，32（3）：511-512.
［4］禹建春，霍敏，方贺斌，等.耳草的鉴别研究［J］.海峡药学，
2012，24（11）：55-56.
［5］梁洁莹，李书渊.耳草的生药学研究［J］.广东药学院学报，
2008，24（5）：447-448.
［6］陈奇.中药药理研究方法学［M］. 2版.北京：人民卫生出版
社，2006：244.
［7］秦海宏，贾琳钰，阎建义，等.凤仙花水提物体外和体内的
抑菌活性［J］.吉林大学学报：医学版，2013，39（1）：60-63.
［8］武新华，马秀敏，丁剑冰，等.新疆赤芍抑菌实验研究［J］.
中国民族医药杂志，2005，11（5）：30-31.
［9］张宏，甘雨，乔敏，等.射干提取物抑菌实验研究［J］.实验
动物科学，2012，29（2）：5-7.
［10］农毅清，蒋林，吴玉强，等. 常春卫矛与爬行卫矛的镇痛
抗炎作用及急性毒性研究［J］. 时珍国医国药，2012，23
（6）：1384-1385.
［11］周智，韦奇志，吴植强，等.扶芳藤一般药理及急性毒性
研究［J］.中国药师，2011，14（8）：1115-1117.
（编辑 陈明伟）
HPLC法测定黄金甲跌打生肌膏中龙血素 B的含量
李春红 1，蒋明廉 2
（1. 广西中医药大学 2012级硕士研究生，广西 南宁 530001；
2. 广西壮族自治区食品药品审评查验中心，广西 南宁 530022）
摘 要：［目的］建立黄金甲跌打生肌膏中龙血素 B的含量测定方法。［方法］采用 HPLC法，色谱柱：Thermo C18柱（5 μm，
4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈-冰醋酸（1→900）（40∶60），流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；检测波长：260 nm；进样量：20 μl。［结
果］龙血素 B在浓度 42.88～857.6 μg间呈良好线性关系（r=0.999），平均加样回收率为 100.32%，RSD为 1.55%（n=6）。［结论］该
方法重现性好，结果准确，可作为黄金甲跌打生肌膏的质量控制手段。
关键词：黄金甲跌打生肌膏；龙血素 B；HPLC
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：2095-4441（2015）03-0054-04
54· ·