全 文 ：第 39 卷 第 10 期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol． 39 No． 10
2011 年 10 月 JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY Oct． 2011
1)林业公益性行业科研专项(201004060)，黑龙江省森林工业总局科
技计划项目(sgzjY2010012)，黑龙江省科技计划项目(GA09B202－02)。
第一作者简介:李春明，男，1978 年 2 月生，林木育种国家工程实
验室(北京林业大学) ，博士研究生;现工作于黑龙江省林业科学研究
所，助理研究员。
通信作者:于文喜，黑龙江省林业科学院，研究员。E－mail:lkykjc
@ 126． com。
收稿日期:2011 年 7 月 1 日。
责任编辑:潘 华。
低温驯化过程中大青杨叶片差异蛋白质分析1)
李春明 白 卉 于文喜
(林木育种国家工程实验室(北京林业大学) ，北京，10083) (黑龙江省林业科学研究所) (黑龙江省林业科学院)
摘 要 为探索大青杨秋季自然降温下的低温适应机制，分别于 9 月 8 日、9 月 21 日、10 月 6 日 3 个时期对
大青杨叶片总蛋白质进行提取，经双向电泳及质谱鉴定，成功鉴定 45 个差异表达蛋白，其中 40 个蛋白表达量上调
2倍以上，5 个蛋白表达量下调 2 倍以上。功能分类表明，22 个蛋白与胁迫响应相关，12 个与呼吸作用相关，9 个
与光合作用相关，5 个参与其它生命过程，另有 4 个属于功能未知蛋白。生物信息学分析推测，所鉴定的差异蛋白
参与大青杨秋季自然降温及短光周期诱导下完成的低温驯化过程。
关键词 大青杨;自然降温;低温驯化;差异蛋白
分类号 S79211;Q946． 84
Differential Protein in Populus ussuriensis Leaves During Natural Low-Temperature Acclimation by Proteomic Analy-
sis /Li Chunming(National Engineering Laboratory for Tree Breeding (Beijing Forestry University) ，Beijing 100083，P．
R． China) ;Bai Hui(Forestry Research Institute of Heilongjiang Province);Yu Wenxi(Heilongjiang Academy of Forestry)/ /
Journal of Northeast Forestry University． －2011，39(10)． －45 ～ 49
Two-dimensional gel electrophoresis (2-DE)coupled with mass spectrometry was adopted to determine the protein ex-
pression patterns of Populus ussuriensis leaves during three growth stages in order to explore the acclimation mechanism of
P． ussuriensis at natural low temperature． A total of 45 differentially expressed proteins were identified，among which 40
proteins were up-regulated expression，and 5 proteins were down-regulated． Gene ontology analysis indicates that 22 pro-
teins related to stress response，12 to respiration，9 to photosynthesis，5 are involved in other metabolism processes，and 4
are unknown proteins． Bioinformatics analysis indicates that the identified differential proteins are involved in low-tempera-
ture acclimation of P． ussuriensis at natural low temperature or under short photoperiod induction in spring．
Keywords Populus ussuriensis;Natural low-temperature;Acclimation;Differential proteins
温度是重要的环境因子之一，主要影响植物分布以及生
长、发育等多个生命过程［1］。温带木本植物通过休眠可以避
开冬季极端低温，但早春与晚秋季节仍面临低温胁迫风险。
通过低温驯化增强抗寒能力是木本植物应对秋季低温胁迫的
重要方式之一。该过程主要表现为生长减缓或停止，伴随大
量活性氧的生成［2］，含水量降低［3］等。另外低温驯化过程会
改变基因表达［4－7］，主要表现蛋白表达上调，如抗冻蛋白［8］，
热激蛋白(HSP)［9］，稳定蛋白［10］，晚期胚胎富集蛋白
(LEA)［11］等。
大青杨(P． ussuriensis Kom) ，又称憨大杨、哈达杨。自然
分布于我国东北的长白山、小兴安岭林区，材质优良，抗寒性
强，是东北三省东部山区森林更新的主要树种之一［12］。在长
期进化过程中，大青杨形成了特有的低温适应机制，但对其低
温适应机制研究不够深入，暂未见有关大青杨低温分子适应
机制方面的研究。蛋白质是生命活动的执行者，直接影响植
物的生长发育，通过对大青杨休眠前低温驯化过程中蛋白质
差异表达的研究，寻找其低温驯化过程中起作用的重要蛋白
质，能够从蛋白质水平研究其低温适应机制，对全面研究大青
杨抗寒机理具有重要的理论及实践意义。
1 材料与方法
1． 1 植物材料
大青杨为同一无性系，通过硬枝扦插繁殖，于 2010 年 5
月初定植于规格为 20 cm×16 cm×20 cm 的塑料花盆中，置于
黑龙江省林业科学研究所温室外，培养基质为 V(腐殖土)∶ V
(河沙)= 3 ∶ 1，每周浇水 2 次，10 ～ 15 d喷施 1 次 10% MS溶
液，培养 4 个月后开始试验。2010 年 9 月 8 日、9 月 21 日、10
月 6 日，于上午 9:00 时至 10:00 时，选择 3 株长势一致幼苗，
每株取功能叶 5 ～ 8 片，混合后放于冰箱中－80 ℃保存，用于
蛋白质分析。
1． 2 实验仪器
Ettan IPGphor II等电聚焦系统、Ettan DALT twelve垂直电
泳系统、SE600 电泳仪扫描仪、自动染胶仪(美国通用)、高速
冷冻离心机(德国 Sigma 公司)、紫外分光光度计、Powerlook
2100XL UMAX扫描仪(台湾)。
1． 3 主要试剂
固相 pH值 4． 0 ～ 7． 0，24 cm梯度干胶条、2D－Quant试剂
盒、丙烯酰胺(Acrylamide)、甲叉双丙烯酰胺(Bis－Acrylam-
ide) ，均购自 Amersham Biosciences 公司。苯甲基磺酰氟
(PMSF)、碘乙酰胺、二硫苏糖醇(DTT)、NNNN－四甲基乙
二胺(TEMED)购自 Sigma 公司;Trizol 购自 Invitrogen 公司，
Tris－base、溴酚蓝、蛋白 Marker、三氯乙酸(TCA)、聚乙烯吡咯
烷酮(PVPP)、牛血清白蛋白(BSA)、考马斯亮蓝 R－350、低熔
点琼脂糖、β－巯基乙醇(β－ME)购自 BBI(Bio Basic Inc，Cana-
da)。胰蛋白酶、酶抑制剂购自德国 Roche公司。其它试剂为
国产分析纯。所有溶液均用 Milli－Q制备的纯水配制。
1． 4 实验方法
样品制备:蛋白质提取方法采用三氯醋酸 /丙酮沉淀
法［13］。
蛋白质样本的定量:应用 Amersham Biosciences 公司的
2D－Quant试剂盒，进行蛋白质样本的定量。具体操作步骤见
Amersham Biosciences公司提供的双向电泳原理和方法。
双向电泳:①第一向等电聚焦(IEF)。初始 IEF:100 V 1
h，200 V 1 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，1 000 ～ 8 000 V 1 h;IEF到
稳定状态:8 000 V 10 h。② IPG 胶条平衡和第二向 SDS －
PAGE电泳。IPG胶条平衡参照 Amersham Biosciences公司提
供的双向电泳原理和方法，平衡后进行聚丙烯酰胺凝胶，将平
衡好的 IPG胶条用电泳缓冲液冲洗后胶面朝外小心置于第二
向 PAGE胶上，在胶的上面加入低熔点琼脂糖封闭液(0． 5%
琼脂糖，0． 002%溴酚蓝溶于 SDS 电泳缓冲液中) ，待琼脂糖
凝固后即可进行第二向 SDS凝胶电泳。电泳条件见表 1。
表 1 第二向 Ettan DALT twelve系统电泳参数
阶段 功率 /W 持续时间 /h
1 2 1
2 15 5 ～ 6
过夜运行 2 14 ～ 16
染色:采用考马斯亮蓝染色法［14］。
凝胶扫描:凝胶显色后用 UMAX 2100XL 扫描仪进行图
像扫描，图像扫描仪经强度矫正后，透射扫描 2－DE 凝胶(光
学分辨率 300 像素，象素深度 8bite)。
图像分析:所得 2－DE图谱利用 PDQuest V 8． 0 图像分析
软件进行分析处理。
蛋白质的胶内酶解:方法参见毕影东方法［15］，略有改动，
加入酶液后，改水浴为 37 ℃空气浴倒置酶解 12 ～ 14 h。
蛋白质的质谱分析:Ultraflex TM MALDI－TOF－MS 质谱
仪检测，获得蛋白点的肽指纹图谱(PMF)信息。
数据分析及 Mascot 数据库搜索:应用本地服务器上的
Matrix server 2． 0 模块选择毛果杨蛋白库(网站 http:/ /www．
ncbi． nlm． nih． gov)对 PMF 信息进行检索。蛋白选择胰蛋白
酶(Trypsin) ，可变修饰选择(Oxidation) ，固定修饰选择(Car-
bamidomethyl) ，肽段质量标准偏差:±10－4。
蛋白质的生物信息学分析:使用本地 Perl 程序根据蛋白
GI号从毛果杨蛋白数据库(http:/ /genome． jgipsf /poptrl _1 /
poptrl_1． home． html)中抽提目的序列。应用 Blast2Go 程序进
行 Go(gene ontology)分类。
2 结果与分析
2． 1 双向电泳图谱
大青杨在 9 月 8 日、9 月 21 日、10 月 6 日叶片中蛋白质
的双向电泳图谱见图 1，在 pH 值 4． 0 ～ 7． 0 的范围内 3 个样
品经 R－350 染色后分别得到了 853、988、1192 个清晰可分辨
的蛋白点。用分析软件 PDQuest 8． 0 对蛋白点进行比较，共
获得 538 个匹配的蛋白点，蛋白点多分布在胶的中上部。
图 1 低温胁迫下杨树叶片中蛋白质的双向电泳图谱
A．大青杨 9 月 8 日;B．大青杨 9 月 21 日;C．大青杨 10 月 6 日。
2． 2 差异蛋白点的选择
使用 PDQuest8． 0 软件，对大青杨 3 个时期蛋白质点的表
达丰度(由软件根据蛋白质点的灰度生成的数量值)进行差
异检测，选择相对表达丰度大于 200%的蛋白质点作为差异
蛋白点，共 94 个(见图 2)。
2． 3 差异表达蛋白点质谱鉴定结果
对 94 个差异蛋白点从胶上回收、酶解后进行质谱鉴定，
78 个蛋白点得到了完整的肽指纹图谱，在毛果杨与植物蛋白
库中进行搜索，其中 45 个蛋白质得到了鉴定，结果见表 2。
已鉴定的 45 个蛋白中有 40 个蛋白表达量上调 2 倍以
上，其中有 4 个蛋白点(19、37、58、90)第 1 个时期未见表达，
后两个时期表达量大增;只有 5 个蛋白点(53、60、67、72、92)
表达量下调 2 倍以上，蛋白点 67 在最后 1 个时期未见表达。
另外，出现同一蛋白质出现在蛋白图谱不同位置的现象，蛋白
点 4、5、6、7，蛋白点 23、25，蛋白点 39、41，蛋白点 9、67 4 组蛋
白肽指纹图谱信息相同，但蛋白点可以通过双向电泳分开
(见表 2) ，蛋白点 39、41 相对分子质量与等电点均有较大差
异，其它 3 组蛋白相对分子质量几乎相同，由于等电点差异而
被分开(见图 2)。
2． 4 蛋白功能分类
植物低温驯化是一个复杂的生理过程，众多蛋白参与这
一过程，一个蛋白可能执行多个功能。对已鉴定的 45 个蛋白
进行功能分类，结果表明 22 个(42%)是胁迫响应蛋白，12 个
(23%)与呼吸作用相关，9 个(17%)与光合作用相关，5 个
(10%)参与其它生理过程，还有 4 个(8%)功能未知。
3 讨论
3． 1 利用肽指纹图谱鉴定蛋白质
PMF是利用测量酶解肽段相对分子质量并与现有数据
库进行比对，进行蛋白质鉴定的一项技术。蛋白点 4、5、6、7
64 东 北 林 业 大 学 学 报 第 39 卷
的 PMF信息相同，相对分子质量基本相同，等电点不同，推测
这 4 个蛋白点可能为同一蛋白经翻译后修饰(磷酸化、甲基
化、糖基化等)而造成的等电点差异。由于 PMF 提供的信息
有限，不能对翻译后修饰进行鉴定，所以这 4 个蛋白被鉴定为
同一蛋白。类似情况还蛋白点 23、25，蛋白点 9、67。蛋白点
39、41 的 PMF 信息相同，相对分子质量、等电点均不同，推测
这两个蛋白可能是由同一基因家族控制的旁系同源基因产
物，或者为同一蛋白携带不同信号分子或目标靶序列而形成
异构体［16］。
图 2 差异蛋白点在胶图上的分布(以大青杨 9 月 8 日胶图为例)
3． 2 与胁迫相关蛋白
热激蛋白(HSPs)是一类在生物体遭受高温胁迫时合成
的保守多肽序列蛋白质［17］，又被称为胁迫相关分子伴侣［18］。
大量研究表明，低温［19－21］、干旱、盐渍、水淹等多种逆境胁迫
也能诱导热激蛋白的积累［22］。热激蛋白参与变性蛋白的重
新折叠，防止变性蛋白聚合，参与稳定膜系统等多个生命过
程［23－24］。本研究所鉴定的 45 个蛋白中 13 个属于热激蛋白 /
分子伴侣类，10 个属于热激蛋白 70 家族(点 4、5、6、7、9、10、
16、39、41、67) ，1 个属于热激蛋白 90 家族(点 8) ，2 个属于伴
侣蛋白前体(点 1、45)。除点 67 表达量下调外，其它 12 个蛋
白在自然低温驯化过程中表达量均显著上调。表明热激蛋
白 /分子伴侣蛋白在大青杨低温驯化过程中起到重要作用。
其它与胁迫响应蛋白 9 个(11、12、13、21、22、46、58、90、
92) ，在大青杨自然低温驯过程中，除抗病蛋白(点 92)表达量
下调外，其余表达量均上调，与前人研究结论基本一致。其中
蛋白点 21(磷酸甘油酸变位酶)［1］与蛋白点 90(ATP合酶)是
三羧酸循环关键酶［25］，低温驯化过程中，三羧酸循环关键酶
表达量上调，会促进下游产物及 ATP 生成，为大青杨应对低
温胁迫提供必需的物质及能量。蛋白点 46(抗坏血酸过氧化
物酶)与蛋白点 58(过氧化还原酶)等抗氧化酶表达量上调，
有助于清除大青杨低温胁迫下产生的过量活性氧，该结果与
Renaut研究相似［20］。
3． 3 与呼吸作用相关蛋白
呼吸作用是植物细胞最基本的生命活动，环境胁迫下，能
量代谢加强是植物抵御逆境的基本特征。本研究中，低温胁
迫条件下共鉴定出 12 个与呼吸作用相关蛋白，包括温度敏感
74第 10 期 李春明等:低温驯化过程中大青杨叶片差异蛋白质分析
丝状胁迫响应蛋白(点 11) ，细胞分裂蛋白(点 12) ，Rubisco β
亚基(点 13、14) ，翻译延伸因子 G(点 17) ，磷酸甘油酸变位酶
(点 21) ，羧化酶前体(点 23、25) ，苹果酸脱氢酶(36) ，脱氢酶
亚基(37) ，酯酶 D(点 62) ，ATP合酶(点 90)等在低温胁迫下
表达量都显著上调。
表 2 低温胁迫下杨树叶片蛋白点质谱鉴定
点号 蛋白质名称 注册号 等电点 /理论相对分子质量
1 ubiquitin carboxyl－terminal hydrolase－related［Arabidopsis thaliana］ AAD26868 6． 66 /134． 330
4 heat shock protein 70［P． trichocarpa］ XP_002331133 5． 24 /75． 343
5 heat shock protein 70［P． trichocarpa］ XP_002331133 5． 24 /75． 344
6 heat shock protein 70［P． trichocarpa］ XP_002331133 5． 24 /75． 344
7 heat shock protein 70［P． trichocarpa］ XP_002331133 5． 24 /75． 344
8 heat shock protein［P． trichocarpa］ EEF02168 4． 96 /90． 151
9 heat shock protein 70［P． trichocarpa］ EEE89457 5． 14 /71． 116
10 heat shock protein 70［P． trichocarpa］ EEE88528 5． 14 /71． 266
11 filamentation temperature－sensitive h 2b［P． trichocarpa］ EEE98711 6． 06 /73． 324
12 cell division protein［P． trichocarpa］ EEE82098 8． 88 /51． 879
13 rubisco subunit binding－protein beta［P． trichocarpa］ EEE78962 5． 73 /64． 544
14 rubisco subunit binding－protein beta［P． trichocarpa］ EEE82422 5． 62 /64． 245
16 heat shock 70 protein［P． trichocarpa］ EEE87910 5． 56 /73． 261
17 translation elongation factor G，putative［P． trichocarpa］ EEE79409 4． 99 /75． 079
19 ARABIDOPSIS THALIANA PRESEQUENCE PROTEASE 1［P． trichocarpa］ XP_002330286 5． 07 /112． 796
21 bisphosphoglycerate－independent phosphoglycerate mutase［P． trichocarpa］ XP_002326261 5． 37 /61． 013
22 chloroplast protease［P． trichocarpa］ EEE81200 6． 00 /75． 559
23 p－protein［P． trichocarpa］ EEE92085 6． 51 /115． 089
25 p－protein［P． trichocarpa］ EEE92085 6． 51 /115． 089
34 Centromeric protein E，putative［P． trichocarpa］ EEE78610 4． 78 /146． 938
35 aldo keto［P． trichocarpa］ EEE99412 6． 25 /37． 661
36 malate dehydrogenase［P． trichocarpa］ EEE89950 6． 11 /35． 716
37 pyruvate dehydrogenase e1 alpha subunit［P． trichocarpa］ EEE89155 8． 06 /43． 420
38 putative aminocyclopropane carboxylate oxidase［Musa acuminata］ CAD44265 5． 02 /35． 643
39 heat shock protein，putative［P． trichocarpa］ XP_002331133 5． 24 /75． 344
40 OSJNBa0070D17． 5 EAZ29574 8． 11 /47． 862
41 heat shock protein，putative［P． trichocarpa］ XP_002331133 5． 24 /75． 344
44 cytoplasmic dynein heavy chain 1b［Chlamydomonas reinhardtii］ CAB56748 6． 13 /481． 651
45 chaperonin 21 precursor［P． trichocarpa］ EEF02703 7． 77 /27． 115
46 ascorbate peroxidase［P． trichocarpa］ EEE87461 5． 53 /27． 319
51 hypothetical protein［Oryza sativa Japonica Group］ BAD28324 12． 40 /10． 407
52 ribulose－1，5－bisphosphate carboxylase /oxygenase large ubunit［Ceratolobus pseudoconcolor］ CAH25666 6． 14 /51． 869
53 ATP synthase delta chain［P． trichocarpa］ EEE99949 9． 02 /26． 955
57 chloroplast copper zinc－superoxide dismutase［P． trichocarpa］ XP_002331456 6． 39 /21． 621
58 type ii peroxiredoxin［P． trichocarpa］ EEF03570 5． 55 /17． 416
60 ARALYDRAFT_483433［P． trichocarpa］ XP_002336040 9． 18 /69． 177
61 ribulose 1，5－bisphosphate carboxylase large subunit［Polygonum cuspidatum］ BAA76612 6． 26 /52． 731
62 esterase d［P． trichocarpa］ EEE91536 6． 17 /31． 883
67 Heat shock protein［P． trichocarpa］ EEE89457 5． 14 /71． 116
70 pentatricopeptide repeat－containing protein［P． trichocarpa］ EEE83476 8． 39 /68． 607
71 oxygen－evolving enhancer protein chloroplast［P． trichocarpa］ EEE90638 5． 85 /35． 206
72 oxygen－evolving enhancer protein chloroplast［P． trichocarpa］ EEE94230 5． 89 /35． 141
90 ATP synthase d mitochondrial［P． trichocarpa］ EEF01451 5． 20 /19． 659
92 NBS－LRR disease resistance－like protein［(Populus tomentosa×P． bolleana)×P． tomentosa var． truncata］ ABC59498 6． 61 /19． 879
能量代谢是各种生命活动的基础代谢，不仅为各种生命
活动提供必需的 ATP，还为众多代谢过程提供中间代谢产物。
蛋白点 36 为苹果酸脱氢酶是三羧酸循环中起重要作用的
酶［26］，其表达丰度上调会促进能量生成及下游物质的合成，
为大青杨低温驯化及抵御低温胁迫提供必要的能量及物质。
3． 4 与光合作用相关蛋白
光合作用是绿色植物将光能固定及物质合成的过程，也
是各种生命活动的起点。叶绿体是进行光合作用的细胞器，
由于低温等逆境胁迫会对叶绿体类囊体膜造成伤害，因此，必
将影响植物的光合代谢，从而影响植物的正常生长发育［19］。
本研究从大青杨叶片中鉴定与光合作用相关的蛋白包括温度
敏感丝状胁迫响应蛋白(点 11) ，细胞分裂蛋白(点 12) ，叶绿
体蛋白酶(点 22) ，Rubisco大亚基(点 52、61) ，叶绿体铜锌超
氧化物歧化酶(点 57) ，叶绿体放氧蛋白(点 71)等 7 个蛋白
在自然低温驯化过程中蛋白表达量显著上调;ATP合酶 δ 链
(点 53)，叶绿体放氧蛋白(点 72)等 2个蛋白表达量显著下调。
84 东 北 林 业 大 学 学 报 第 39 卷
Xiao等［27］研究表明，抗旱能力差的杨树叶片中 Rubisco
大亚基在干旱胁迫下表达量下调。Zhao Yan 等［25］发现狗牙
根叶片在干旱胁迫下，叶绿素结合蛋白、叶绿体放氧蛋白、
ATP合酶与 Rubisco 大亚基表达均下调，直接影响光合作用
捕光过程、电子传递及碳同化 3 个主要过程。本研究中，只有
ATP合酶 δ链、叶绿体放氧蛋白 2 个蛋白表达量下调，表明大
青杨在自然低温驯化过程中光反应的光合放氧及光合磷酸化
过程受到影响。
3． 5 其它蛋白及功能未知蛋白
除以上 3 类主要蛋白外，本研究还鉴定了翻译延伸因子
G(点 17) ，前序列蛋白酶(点 19)、细胞质动力蛋白重链(点
44)、酯酶 D(点 62)、抗病蛋白(点 92)以及 4 个未知功能蛋
白(34、51、60、70)。这些蛋白质在自然低温驯化过程中表达
量变化明显，可能执行某种生物学功能。由于目前对这些蛋
白功能信息了解有限，它们在大青杨自然低温驯化中的表达
变化与其在适应低温胁迫的调节机制和功能还需要进一步的
研究。
3． 6 蛋白质在大青杨低温驯化过程中的作用
大青杨是黑龙江省乡土树种，在长期进化过程中形成了
特有低温适应机制。通过本研究可以推测，蛋白质表达量变
化与大青杨低温驯化关系密切。大青杨在低温及短光周期的
诱导下，热激蛋白表达量显著上调。热激蛋白一方面作为功
能蛋白参与变性蛋白的重新折叠，防止变性蛋白聚合，稳定新
生成蛋白质结构等;另外热激蛋白也起到转导胁迫信号并激
活相关基因表达的作用。在热激蛋白调节下，大青杨叶片中
呼吸作用相关蛋白、抗氧化酶表达量上调，而参与光反应的蛋
白表达量则显著下调，进而调整生理状态，逐步完成低温驯化
过程，为抵御低温胁迫做好准备，见图 3。
图 3 蛋白质丰度变化与大青杨低温驯化关系
参 考 文 献
［1］ J Renaut． Proteomics and low-temperature studies:bridging the gap
between gene expression and metabolism［J］． Physiologia Planta-
rum，2005，126:97－109．
［2］ Prasad T K，Anderson M D，Martin B A，et al． Evidence for chill-
ing-induced oxidative stress in maize seedlings and a regulatory role
for hydrogen peroxide［J］． Plant Cell，1994，6:65－74．
［3］ Imanishi H T，Suzuki T，Masuda K，et al． Accumulation of raffi-
nose and stachyose in shoot apices of Lonicera caerulea L． during
cold acclimation［J］． Sci Hort，1998，72:255－263．
［4］ Chen jing，Dennis Doucet． Expression profile matrix of Arabidopsis
transcription factor genes suggests their putative functions in re-
sponse to environmental stresses［J］． Plant Cell，2002，14:559 －
574．
［5］ Guy C． Cold acclimation and freezing stress tolerance:role of pro-
tein metabolism［J］． Ann Rev Plant Physiol Plant Mol Biol，1990，
41:187－223．
［6］ Pearce R S． Molecular analysis of acclimation to cold［J］． Plant
Growth Regul，1999，29:47－76．
［7］ Seki M，Narusaka M，Abe H，et al． Monitoring the expression pat-
tern of 1300 Arabidopsis genes under drought and cold stresses by
using a full-length cDNA microarray［J］． Plant Cell，2001，13:61－
72．
［8］ Hon W C，Griffith M，Mlynarz A，et al． Antifreeze proteins in win-
ter rye［J］． Physiol Plant，1997，100:327－332．
［9］ Wisniewski M E． Seasonal patterns of dehydrins and 70-kDa heat-
shock proteins in bark tissues of eight species of woody plants［J］．
Physiol Plant，1996，99:496－505．
［10］ Wang W． Characterization of SP1，a stress-responsive，boiling sol-
uble，homo-oligomeric protein from aspen［J］． Plant Physiol，
2002，130:865－875．
［11］ Antikainen M，Griffith M． Antifreeze protein accumulation in
freezing-tolerant cereals［J］． Physiol Plant，1997，100:423－432．
［12］ 王冰，王建光，姜秀煜，等． 阔叶红松林的伴生乡土杨树－大青
杨［J］．林业科技，2003，28(6) :12－15．
［13］ Damerval C，de Vienne D，Zivy M，et al． Technical improvments
in two-dimensional electrophoresis increase the level of genetic var-
iation detected in wheat-seedling proteins［J］． Electrophoresis，
1986，7:52－54．
［14］ Rabilloud T． Detecting Proteins separated by 2-D gel electrophore-
sis［J］． Anal Chem，2000，72:48A－55A．
［15］ 毕影东．樟子松顶芽休眠与萌发转换的蛋白质组学研究［D］．
哈尔滨:东北林业大学林学院，2010．
［16］ Christophe． Mapping the proteome of poplar and application to the
discovery of drought-stress responsive proteins［J］． Proteomics，
2006(24) :6509－6527．
［17］ Vierling E． The role of heat shock proteins in plants［J］． Ann Rev
Plant Physiol Plant Mol Biol，1991，42:579－620．
［18］ Miernyk J A． The 70 kDa stress-related proteins as molecular
chaperones［J］． Trends Plant Sci，1997，2:180－187．
［19］ Lopez Matas M A． Protein cryoprotective activity of a cytosolic
small heat shock protein that accumulates constitutively in chestnut
stems and is up－regulated by low and high temperatures［J］． Plant
Physiol，2004，132:1708－1717．
［20］ Renaut J． Responses of Poplar to Chilling Temperatures:Pro-
teomic and Physiological Aspects［J］． Plant Biology，2004，6:81－
90．
［21］ Taylor N L，Heazlewood J L，Day D A，et al． Differential impact
of environmental stresses on the pea mitochondrial proteome［J］．
Mol Cell Proteomics，2005，4:1122－1133．
［22］ Sabehat A，Lurie S，Weiss D． Expression of small heat shock pro-
teins at low temperatures-A possible role in protecting against chill-
ing injuries［J］． Plant Physiol，1998，117:651－658．
［23］ Sung D Y，Vierling E，Guy C L． Comprehensive expression pro-
file analysis of the Arabidopsis Hsp70 gene family［J］． Plant Phys-
iol，2001，129:789－800．
［24］ Tsvetkova N． Small heat-shock proteins regulate membrane lipid
polymorphism［J］． Proc Natl Acad Sci，2002，99:13504－13509．
［25］ Yan Zhao． Identification of proteins associated with water-deficit
tolerance in C4 perennial grass species，Cynodon dactylon × Cyn-
odon transvaalensis and Cynodon dactylon［J］． Physiologia Planta-
rum，2010，141:40－55．
［26］ Jiang Yuanqing． Comparative proteomic analysis of NaCl stress-re-
sponsive proteins in Arabidopsis roots［J］． Journal of Experimental
Botany，2007，58:3591－3607．
［27］ Xiao X，Yang F，Zhang S，et al． Physiological and proteomic re-
sponses of two contrasting Populus cathayana populations to
drought stress［J］． Physiol Plant，2009，136:150－168．
94第 10 期 李春明等:低温驯化过程中大青杨叶片差异蛋白质分析