全 文 ：中国雇 学 通报 , 一
重庆野生百合花蕾诱导再生植株技术研究
徐 茜 , 余鸿燕 , 徐 燕 , 黎 华 ,廖采琴
重庆三峡农业科学院 , 重庆万州 巧
摘 要 为 了重庆野生百合资源的有效保护和开发利用 , 以重庆地 区野生百合花蕾为试验材料 , 采用植物
组织诱导培养的方法对其再生植株技术进行了研究 。 结果表明 以即将开放的百合花蕾为外植体材料 ,
消毒容易 , 无污染 通过对花蕾各器官 花冠 、 花托 、 花丝 、 花药 、 花柱 、 柱头 、 花梗 的诱导培养 , 表明试验
所选的 号培养基 一 几 几 能诱导花冠 、 花托 、 花丝出芽 , 号培养基
几 几仅能诱导花冠 出芽 幼 芽增 殖以 一 几 几 的增
殖系数最高 , 为 , 增殖幼苗生长健壮 生根培养以 号培养基 几 诱导百合生根最
佳 , 生根率为 移栽 结果 以 号培养基 的生根培养苗成 活率较 高 , 达到 了
。
关键词 野生百合 花蕾 再生植株
中图分类号 文献标志码 论文编号 一
, , , ,
下。哪 哪 刀召习鳍,
,
, , 笔 , ,
, , , , ,
一 , , ,
一 一
, ,
,
,
引言
百合是百合科 百合属住 “艺二 所有种的
总称 , 百合多数种类具有很高的观赏价值和经济价值 ,
不仅是世界著名的切花 、 盆花和露地花卉 , 而且也是有
名的良药佳肴 , 具有养阴润肺 、 清心安神的功效 。 重庆
地区有着较为丰富的野生百合资源 , 其中不乏食用 、 药
用 、 观赏及育种价值高的野生资源 , 人们常挖其鳞茎食
用 , 采摘其花做庭院观赏栽培 , 由于人们无限的挖采 ,
一些分布地区窄或生态适应性弱的野生百合资源面临
生存威胁 , 野生百合资源更未得到合理的保护及开发
利用 〕。 目前 , 重庆市场上销售的百合切花 、 食用及药
用百合大多来自外地 , 本地区百合种植还很少 , 随着社
会经济发展 , 人们生活的日益丰富 , 人们对天然药物 、
绿色食品和观赏花卉的需求增加 , 百合市场需求量必
基金项目 重庆市攻关项目 ·
第一作者简介 徐茜 , 女 , 年出生 , 四川郸县人 , 高级农艺师 , 大学 , 从事植物组织培养和作物品质分析工作 。 通信地址 重庆市万州区厦
门路 号 重庆三峡农业科学院 , 孔 一 , 一 ￡ ·
收稿日期 一 一 , 修回日期 一 一 。
中国农学通报
将越来越大 。
传统的百合繁殖方法主要采用小鳞茎 、 珠芽和鳞
片扦插进行无性繁殖 , 其后代容易积累病毒 , 严重影响
其产量和 品质 用种子进行繁殖 , 其后代会出现分离 ,
不能保持原有母株的优 良特性 , 且幼龄期过长 , 现在生
产上很少采用 〕。 利用组织培养技术 , 能够迅速去除
病毒和更新品种 、 加快百合的快速繁殖速度 、缩短百合
的生育周期 。 有关百合器官的组培技术前人已做了不
少研究 , 自 年 首次发表了百合组织培养的
文章后 , 目前以鳞片 、 株芽 、 叶片等为外植体均已相继
诱导培养成功 , 品种总计有三四十种 , 如庸香百合 , 毛
百合等 〕 孙龙生等 〕利用新铁炮百合鳞片做为外植
体 , 成功进行了诱导分化 、 继代 、 生根及移栽试验 , 由组
培苗下地至开花仅需要 个月左右时间 黄敏玲等曰 以
亚洲百合顶芽为外植体 , 进行了离体诱导小鳞茎及小
鳞茎培育开花球研究 , 建立了快速有效的试管小鳞茎
繁殖体系 , 并利用福建省山区 自然气候条件 , 研究了试
管小鳞茎培育开花球的技术 陆春霞等 〕研究不 同激
素配比的培养基对兰州百合和台湾新铁炮百合的叶片
诱导与不定芽分化的影响 , 结果表明百合叶片经诱导
形成愈伤后 , 能进一步诱导形成小鳞茎 , 从而分化成不
定芽 , 并建立了 良好的繁殖体系 。 在利用花器官诱导
植株再生技术研究方面 , 关文灵等 〕以云南大百合的
花被片 、 子房 、 花丝 种花器官为外植体 , 进行了云南
大百合组织培养技术的研究 , 初步建立了云南大百合
花器官的离体培养和植株再 生体系 赖钟雄等 〕以庸
香百合花梗作外植体 , 建立了较好的再生体系 , 开辟了
庸香百合离体繁殖的新途径 。 上述研究对于不同品种
及外植体 , 其诱导技术各显差异 , 因此笔者利用重庆野
生百合花蕾 , 结合前人经验 , 开展诱导再生植株技术研
究 , 意在加快其繁殖进程 , 为保护和利用地方野生百合
资源提供技术支撑 。
材料与方法
试验时间 、 地点
年 月于重庆三峡农科院生物技术中心进行
室 内诱导 、 增殖研究 , 年开展生根试验和室外 田
间试验 , 室外 田间试验安排在院部大棚 。
试验材料
选用本地野生百合花蕾为试验材料 。
试验方法
诱导培养 上午选取野生百合即将开放花蕾 , 用
塑料袋封好 , 在 ℃的冰箱中冷藏 , 第 天先 用
洗衣粉浸泡 巧 , 流水冲洗 , 吸干水分 ,
超净工作台内备用 , 先用 酒精消毒 , 灭菌水清
洗 次 , 再用 浸泡消毒 , 灭菌水清洗
次 , 剥开花蕾 , 将花冠 与主脉平行 先剪成 宽的
条状 , 再横切成 大小 , 花丝剪成 长 、 花托十
字型纵切为 大小 、 柱头 、 花药分别接种至不同激素
配比的 、 号诱导培养基中 诱导培养基成分见表 ,
每处理接种 瓶 , 重复 次 , 暗培养 天后 , 转入光培
养 , 天时观察污染 、 外植体颜色及膨大情况 ,
天后调查诱导出芽等情况 。
增殖培养 将诱导培养 天后的小鳞茎芽苗接
种至 一 号增殖培养基中 增殖培养基成分见表 ,
每处理接种 瓶 , 重复 次 , 培养 天时调查增殖系
数 、 玻璃苗率 、 有无生根 、 苗高 、 幼苗生长情况 。
生根培养 设 种培养基 见表 , 将增殖培养
天的小鳞茎芽苗接种至 一 号生根培养基中 , 每处
理接种 瓶 , 重复 次 , 培养 天后调查苗高 、 生根
率 、 根长 、 根数 、 芽数 。
培养条件 以 为基本培养基 , 附加白糖 几 ,
琼脂 几 , 调为 , 培养温度 ℃ , 光照时间 ,
光照强度 一 。
表 诱导和增值培养基添加激素浓度 叭
诱导培养 增殖培养
名
︸一︸一一、︸细胞分裂素 一蔡乙酸 表 生根培养基添加激素浓度 叭口引睬丁酸
蔡乙酸
徐 茜等 重庆野生百合花蕾诱导再生植株技术研究
生根苗移栽
当气温稳定在 巧℃以上 , 生根苗长至 一 高 、
主根长 一 时 , 揭去无菌封 口膜 , 在防虫大棚内炼
苗 , 棚内温度控制在 ℃ , 湿度 , 散射光下炼苗
一 天后 , 小心洗去根部琼脂 , 用生根液蘸根 ,
移栽至 已用 消毒处理的园土 蛙石
中 , 移栽前用清水浇透 , 栽后用清水喷洒定根 , 保持苗
床湿润 , 巧天后新叶展开 , 天调查成活苗数 , 期间每
隔 周 用 营养液 不加琼脂和 白糖 稀释 倍
喷洒 。
结果与分析
污染情况
植物组织培养关键技术之一是外植体的污染控
制 , 以即将开放的百合花蕾为外植体 , 试验观察发现 ,
采用上述方法 , 经消毒剥离 , 所接种的各花器官均未污
染 , 且对材料无损伤 , 表明花蕾是百合组织培养理想的
外植体材料 。
诱导培养
激素种类和浓度影响百合花蕾各器官诱导成败 。
试验培养 天观察发现 , 花蕾各部分组成器官在 、
号诱导培养基中均开始膨大 , 天后 , 花冠在 种诱导
培养基中表现为花冠主脉由粉红色变为绿色 , 其余部
分 由粉红色变为褐色 , 并在靠近花托部位的花冠主脉
切 口处产生芽状突起 , 天后形成小鳞茎芽苗 , 其中 ,
号培养基平均出芽 个 , 基生叶片展开 , 叶片长
号培养基平均 出芽 个 , 基生叶片长 。
花托在 号中 , 天时材料膨大至直径 , 形成小鳞
茎状突起 , 诱导 出芽 , 叶片展开 , 天时 , 基生叶片长
, 平均出芽 个 。 花丝在 号培养基中表现为
天近花托切 口诱导出芽点 , 天 , 平均出芽 个 , 基
生叶片即将展开 而花丝在 号培养基中却未能诱导
出芽 。 种诱导培养基均未能诱导花药出芽 。 花柱 、
柱头及花梗在所研究的培养基中未能诱导出芽 。 表明
、 号培养基能诱导花冠出芽 , 号能诱导花托 、 花丝
出芽 , 以花冠最先出芽 , 但生长缓慢 花托次之 , 生长
快 , 出芽多 花丝最后 出芽 因此百合各花器官在本研
究条件下 , 诱导率以花托最高 , 花丝次之 ,
与关文灵 研究的诱导率高低一致 见表 。
增殖培养
花卉组织培养过程中经常出现玻璃化现象 。 激素
浓度增加尤其是细胞分裂素浓度提高 或细胞分裂素
与生长素比例过高 , 易导致玻璃花苗的产生 。 试验
中 , 细胞分裂素 一 在 留 以下时 , 幼苗生长健
壮 , 当 一 达到 几 以上时 , 幼苗出现玻璃化 , 长
势较差 , 较高的 一 号培养基 , 其幼苗生长均出现一
定 比例的玻璃苗 , 幼苗增殖系数 、 长势均低于 一 号 ,
与张晨等 日。〕的研究一致 。 细胞分裂数的主要作用是促
进芽的分化 , 打破顶端优势 , 促进腋芽发生 , 为了防止玻
璃苗的出现 , 应适当减少其用量或提高生长素比例 〕。
号培养基 一 一 几 几 细胞
表 不同花器官诱导培养结果
号培养基诱导情况 号培养基诱导情况
诱导率 诱导率
花冠 膨大 、粉红色
中脉绿色 , 近花托中脉部位的切
口形成芽状突起 , 出现芽点 , 逐渐长
出叶片 时 , 形成小鳞茎状芽苗 ,
平均出芽 个 , 基生叶片展开 , 叶片
长
材料膨大至直径 , 形成小鳞
茎状突起 , 诱导出芽 , 基生叶片展开 ,
叶片长 , 平均出芽 个
近花托切 口诱导出芽点 , 平
均出芽 个 , 基生叶片即将展开
月彭大 ,褐色 , 未见芽点
月彭大 ,绿色 , 未见芽点
材料膨大至直径 , 变褐色死亡
中脉绿色 , 近花托部位的
切 口 形成芽状突起 , 出现 一
膨大 、 粉红色 个芽点 , 时 , 形成小鳞茎
状芽 , 平均 出芽 个 , 基生叶
片长
花托 膨大 、绿色
花丝 膨大 、绿色 膨大 、 黄绿色 材料变褐色 , 未见芽点
花药
花柱
柱头
花梗
月彭大 、褐色
月彭大 、绿色
月彭大 、 褐色 月彭大 ,褐色 , 未见芽点
未膨大 、绿色
膨大 、 深绿色 切 口变褐色 , 未见芽点
注 诱导率 诱导出芽的外植体个数 接种数 , 出芽数 出芽总数 出芽的外植体数 。
12 4 中国农学通报
分裂素含量较低 , 生长素浓度较高 , 因此其增殖系数最
高 , 幼苗生长绿色健壮 , 无玻璃苗 , 因此是小鳞茎芽苗
增殖的最佳培养基 见表 。
表 小鳞茎芽苗增殖培养结果
培养基
编号
增殖
系数
苗高 玻璃苗率 生长情况
绿色健壮 , 有少量短根
绿色健壮 , 有少量短根
绿色健壮 , 无根
绿色健壮 , 无根
绿色中等 , 无根
黄绿 , 长势弱 、 无根
黄绿 , 长势中等 、 无根
黄绿 , 长势弱 、 无根
名石公伪,︸伪,伪,︸
注 增殖系数 可见小鳞茎状芽苗数 接种数 。 玻璃苗率 玻璃苗
接种数 。 苗高为鳞茎基部至叶片最高处 。 下同 。
生根培养
表 结果表明 , 生根培养中添加 对诱导百合
生根作用 明显 而添加 却对百合生根影响不一 。
试验所设的 种 能明显提高生根率 、 增加根数和
根长 , 幼苗长势强 低浓度的 对百合生根的根长无
作用 , 当培养基的 浓度达到 时 号培
养基 , 其诱导的根长 、 根数 、 生根率 、 幼苗长势均比
一 号优 综合试验结果 , 以 号培养基
几 诱导百合生根最佳 , 其诱导率达 , 诱导
苗长势强壮 , 根系长且粗 , 根数多 。 号培养基
几诱导百合生根次之 , 其诱导率达 ,
诱导苗长势较强壮 , 根系较长且粗 , 根数较多 。 与赵祥
云等日 〕的研究基本一致 。
移栽试验
百合属于球根花卉 , 在生根过程中 , 只要能生成
条以上 左右的根 , 就能保证较高的成活率 , 选择
一 号培养基 几和 一 号培养基
表 百合生根培养结果
培养基编号 根长 根数 条 个 生根率 苗高 芽数 个 幼苗长势 根系生长情况
︸、伪,…
伪,…伪,伪,…伪,一、︸伪,︸… 刀
刀
中
强
强
强
中
中
中
较强
根细短
根细 , 向上生长 , 上被白色绒毛
根粗 , 向上生长 , 上被白色绒毛
根粗 , 向上生长 , 上被白色绒毛
根短
根短
根短
根粗 , 上被白色绒毛
伪,一、
几 的培养苗移栽 , 结果 以 号培养基
几 的培养苗移栽成活率较高 , 成活率达到
了 而 号培养基 几 的培养苗
成活率为 , 可 能是 由于试验添加 , 使得根系
向上生长 , 对成活不利 也可能与移栽时根系长度短于
有关 与张晨等 、 赵祥云等日。〕的研究一致 。
结论
即将开放的重庆野生百合花蕾是百合组织培
养理想的外植体材料 , 消毒容易 , 无污染 。
试验所选的 号培养基 一 几
几 和 号培养基 一
几 能诱导花冠 出芽 , 出芽点在靠近花托处
的花冠主脉处 , 诱导接种 天出芽 , 出芽时间早 , 诱导
率分别为 和 , 平均出芽数为 个和 个 花
托也在 号培养基中诱导接种 天时出芽 , 诱导率达
, 生长最快 , 出芽数最多 , 平均出芽 个 花丝在
号培养基中诱导接种 天时出芽 , 出芽时间较花冠和
花托晚 天 , 诱导率达 , 平均出芽 个 。
增 殖 培 养 以 一 几
几培养基最好 , 幼苗增殖系数达 , 幼苗生长
健壮 , 无玻璃苗 。
生根试验的目的是为了保证较高的移栽成活率 ,
试验结果以 号培养基 留 诱导百合
生根最佳 , 根数达 条 , 诱导生根率达 , 诱导苗长
势强壮 , 根长较长 、 粗 移栽结果 以 号培养基
几 的生根培养苗成活率较高 , 达到了 。
讨论
用于百合离体快繁的外植体有鳞片 、 种子 、 珠芽 、
徐 茜等 重庆野生百合花蕾诱导再生植株技术研究
社 , 一
卢其能 龙芽百合的组织培养和快速繁殖研究 江西农业学报 ,
, 一
孙龙生 , 金丽丽 新铁炮百合的组培快繁研究 辽宁农业科学 ,
一
黄敏玲 ,陈诗林 百合顶芽离体诱导小鳞茎及开花球培育 吉林
农业大学学报 , , 一 ·
陆春霞 , 岑秀芬 ,黄燕芬 , 等 不同激素配比对百合叶片诱导与分化
的影响 广西农业生物科学, , 一
关文灵 , 李叶芳 ,杨德 , 等 云南大百合花器官的组织培养技术研究
西部林业科学, , 一
赖钟雄 ,郑香洪 ,张春镇 ,等 魔香百合花梗离体培养再生植株 福
建农林大学学报 自然科学版 , , 一 ·
程广有 名优花卉组织培养技术「 北京 科学技术文献出版社 ,
一
张晨, 张美恒 ,樊金萍 东方百合元帅 “ ” 的组织培养及快
繁体系的建立 作物杂志 , 一
赵祥云 ,程谦 ,邢尤美 , 等 百合珠芽组培及脱毒研究 园艺学报 ,
, 一
蒋细旺 , 司怀军 百合的组织培养技术综述 湖北农业科学 ,
一
阮瑶瑶 ,丁健 药用 、 食用 、观赏用百合组培快繁研究进展 深圳
职业技术学院学报 , 一 ·
茎段 、 花瓣 、 花丝 、 叶片 、 花药 、 子房 、 花梗等 , 其中以鳞
茎上鳞片的利用最为常见日 一 〕 , 但百合鳞茎种球不易获
得 , 特别在重庆山区 , 野生百合通常生长山坡草地 、 林
下灌丛 、 荒地崖壁 、林缘石隙 , 如果没有特别标记 , 收集
和采挖种球存在一定难度 , 而百合花花型硕大艳丽 , 开
放时非常显眼 , 采集花蕾非常容易 , 因此利用花蕾诱导
再生植株 , 对百合资源的采集和保护具有现实意义 。
试验选择的消毒方法对外植体消毒效果好 , 对材
料无杀伤力 , 与关文灵 〕研究的消毒方法和效果有一
定出入 , 可能与所选材料基因型 、 预处理及黑暗培养等
方式不同有关 , 是否与材料的冷藏处理及黑暗培养有
关 , 还有待进一步研究 。
试验中发现 , 延长生根培养至 天 , 将有利于根
系的进一步生长 , 根长增加明显 , 因此在生根培养方面
需对培养天数或培养基成分作进一步研究和调整 , 以
提高生根苗质量 , 保证移栽成活率 。
参考文献
周先容 ,杨利平 ,张薇 重庆地区野生百合资源调查与评价 植物
遗传资源学报 , 一
谭文澄 ,戴策刚 观赏植物组织培养技术「 北京 中国林业出版