全 文 ：第 28卷 第 9期
2 0 1 0年 9月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 9
Sep. 2 0 1 0
中华中医药
1995
学刊
HPLC法测定不同产地南葶苈子中芥子碱硫氰酸盐的含量
马梅芳 1,李 芳2
( 1枣庄市药品检验所,山东 枣庄 277102; 2. 陕西省中医药研究院, 陕西 西安 710003)
摘 要:目的: 采用 HPLC法测定不同产地南葶苈子中芥子碱硫氰酸盐的含量。方法: 色谱柱: Phenom enex -
C18 ( 4. 6mm @ 250mm, 5Lm ); 流动相:乙腈 - 0. 08mo l /L KH2PO 4溶液 ( 11B89); 检测波长: 326nm; 流速: 1m L /m in;
柱温: 30e 。结果: 芥子碱硫氰酸盐在 0. 944~ 4. 720Lg之间, 线性关系良好,加样回收率 99. 08% , RSD= 01 61%
( n = 6)。结论 :该方法操作简便、准确,具有很好的重现性和稳定性。产地对南葶苈子中芥子碱硫氰酸盐的含量
有明显影响。
关键词: HPLC;南葶苈子;产地; 芥子碱硫氰酸盐;含量测定
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2010) 09 -1995 - 03
Determ inat ion of S inap ine Thiocyanate inDescu ra in ia S oph ia ( L. )
Webb ex Prantl from D ifferentRegions by HPLC
MA M ei-fang1, L I Fang2
( 1. Zaozhuang In stitu te ofD rug C ont ro,l Zaozhuang 277102, Sh andong, Ch ina;
2. Shaanxi ProvincialA cadem y of T rad itionalCh ineseM ed icine, Xi. an 710003, Shaanx,i C h ina)
Abstrac t: Objective: To determ ine the S inapine th iocyana te inD escura in ia Sophia ( L. ) W ebb ex P ran tl from D iffer-
ent Reg ions by HPLC.Method: The co lumn em ployed was Phenom enex -C18Co lum n ( 4. 6mm @ 250mm, 5Lm ); The m o-
bile phase w as ace tonitrile - 0. 08mo l /L KH2 PO4 ( 11: 89). The flow ra te was 1. 0m l /m in and detec tion w as effected at
326nm. Resu lts: The linea r range o f S inapine th iocyana te wa s 0. 944~ 4. 720Lg ( r= 0. 99997) , the m ean recove ry w as
99. 08% , RSD= 0. 61% ( n = 6 ). Conclusion: This me thod is simp le, rapid and accura te w ith good reproducibility. It is
suitab le for the qua lity contro l o fD escurain ia Sophia ( L. ) W ebb ex P rant.l D ifferen t Reg ions has a sign ificant influence
on the concentra tion o f S inap ine thiocyana te inD escura inia Sophia ( L. ) W ebb ex P rant.l
Keywords: HPLC; D escurain ia Soph ia ( L. ) W ebb ex P rant;l D ifferent Reg ions; S inap ine thiocyanate; Determ ina-
tion
收稿日期: 2010 - 04 - 29
作者简介:马梅芳 ( 1973 - ) ,女, 山东枣庄人,主管中药师, 研究方
向:中药质量控制。
南葶苈子为十字花科植物播娘蒿 [D escura inia Soph ia
( L. ) W ebb ex P ran tl]的干燥成熟种子, 具有止咳平喘、消
肿利尿、强心之功效。南葶苈子中主要含有挥发油、脂肪
油、强心苷、黄酮、芥子碱、谷甾醇等 [1 - 3]。其中,芥子碱具
有降压、消炎的活性 [4 -5 ]。实验表明,南葶苈子中芥子碱多
以芥子碱硫氰酸盐的形式存在, 测定芥子碱硫氰酸盐的含
量对于科学评价南葶苈子药材的质量具有重要意义。
1 仪器与试药
W ate rs A lliance 2695高效液相色谱仪; W ate rs二极管
阵列检测器 ( PDA 2996); W a te rs Em powe r色谱工作站; UV
-2401PC紫外分光光度计 (日本岛津 )。KH2PO4、、甲醇为
分析纯;乙腈为色谱纯;水为纯净水。芥子碱硫氰酸盐对照
品由山东中医药大学吕文海教授提供, 经 IR、13C - NMR、1
H -NM R、MS、元素分析鉴定为芥子碱硫氰酸盐, 分子式
C16H24NO 5 SCN,纯度大于 98% (H PLC)。山东、河北、江苏、
陕西、河南、安徽、湖北、内蒙古 8个省 (自治区 )的 2009年
的南葶苈子样品,经山东中医药大学石俊英教授鉴定为十
字花科植物播娘蒿 D escura inia soph ia ( L. ) W ebb ex P ran t.l
的种子。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱: Phenomenex - C
18
( 4. 6mm @
250mm, 5Lm );流动相: 乙腈 - 0. 08m o l /L KH2PO4溶液 ( 11B
89) ;检测波长: 326nm; PDA色谱峰光谱采集范围: 200~
400nm; 流速: 1. 0m L /m in;柱温: 30e ; 进样量: 20LL; 理论塔
板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算应不低于 3000。
2. 2 检测波长的选择 取芥子碱硫氰酸盐对照品适量, 用
0. 08mo l /L磷酸二氢钾溶液溶解, 照紫外 ) 可见分光光度
法,在 200~ 450nm之间扫描, 芥子碱硫氰酸盐的最大吸收
波长为 326nm,故确定检测波长为 326nm。
2. 3 供试品溶液色谱峰纯度检查 由于中药材无法制备
阴性对照溶液,故选用二极管阵列检测器对供试品溶液色
谱峰纯度进行检查。实验结果显示: 供试品溶液与对照品
1995
DOI：10.13193/j.archtcm.2010.09.205.mamf.060
第 28卷 第 9期
2 0 1 0年 9月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 9
Sep. 2 0 1 0
中华中医药
1996
学刊
溶液在芥子碱硫氰酸盐保留时间处的光谱图完全一致,表
明供试品溶液在芥子碱硫氰酸盐保留时间处无其它干扰杂
质。
2. 4 线性关系考察 精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品
(五氧化二磷干燥器中减压干燥 48h) 11. 8m g, 用 0. 08m ol /
L KH2PO4溶液溶解并定容至 50mL, 作为芥子碱硫氰酸盐
对照品贮备液 (浓度为 0. 236mg /m L)。分别精密量取芥子
碱硫氰酸盐对照品贮备液 1, 2, 3, 4, 5mL用 0. 08mo l /L KH2
PO4溶液溶解并定容至 5m L, 作为 5个浓度的芥子碱硫氰酸
盐对照品溶液,分别精密吸取 20LL, 注入高效液相色谱仪,
按上述色谱条件测定, 以芥子碱硫氰酸盐进样量 C为横坐
标,吸收峰面积 A为纵坐标, 绘制标准曲线, 求得回归方程
为 A= 22319. 4 + 3555232. 415C ( r = 0. 99997)。表明芥子
碱硫氰酸盐在 0. 944~ 4. 720Lg之间, 与吸收峰面积之间呈
良好的线性关系。
2. 5 精密度实验 取同一芥子碱硫氰酸盐对照品溶液
(浓度为 0. 1416mg /m L) , 在上述色谱条件下, 连续进样 5
次, 测 定, 吸 收峰 面 积 分 别为: 10145054, 10186725,
10135533, 10179136, 10092322,平均值 10147754, RSD (% )
= 0. 37。表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性实验 取同一供试品溶液, 分别于制备 0, 1,
2, 4, 6h后测定, 吸收峰面积分别为: 8671303, 8673503,
8669350, 8659812, 8566345, 平均值 8648063, RSD (% ) =
0153。表明供试品溶液在制备后 6h内基本稳定。
2. 7 重复性实验 取同一样品, 平行制备 5份供试品溶
液,按上述色谱条件测定, 计算含量, 结果分别为 0. 619% ,
0. 624% , 0. 625% , 0. 626% , 0. 619% , 平均值 0. 623% , RSD
(% ) = 0. 54。表明方法的重现性良好。
2. 8 加样回收率实验 精密称取已知含量 ( 0. 623% )的
样品 6份,分别精密加入一定量芥子碱硫氰酸盐对照品,按
样品测定方法处理, 测定, 计算加样回收率, 结果见表 1。
芥子碱硫氰酸盐的平均加样回收率 99. 08% , RSD (% ) =
0. 61。表明测定方法准确、可靠。
表 1 芥子碱硫氰酸盐含量测定加样回收率实验结果 ( n= 6)
编号 取样量
( g)
样品含量
( mg)
加入量
( mg)
实测量
( mg)
回收率
(% )
平均回收
率 (% )
RSD
(% )
1 1. 0012 5. 79 5. 80 11. 52 98. 76
2 1. 0025 5. 80 5. 80 11. 59 99. 83
3 1. 0046 5. 81 5. 80 11. 57 99. 28
4 1. 0034 5. 80 5. 80 11. 51 98. 36
5 1. 0023 5. 80 5. 80 11. 58 99. 68
6 1. 0011 5. 79 5. 80 11. 51 98. 59
99. 08 0. 61
2. 9 样品测定 取样品粉末 1g, 精密称定, 精密加入甲醇
50m L,称定重量 ,超声提取 30m in, 放冷,用甲醇补足损失的
重量,滤过, 精密量取续滤液 25m L, 蒸干, 残渣用 0. 08m ol /
L KH2PO4溶液溶解并定容至 25mL,用 0. 45Lm的微孔滤膜
滤过,续滤液作为供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液
和对照品溶液各 20LL, 注入高效液相色谱仪, 按上述色谱
条件测定,结果见图 1, 表 2。
B南葶苈子供试品
图 1 芥子碱硫氰酸盐含量测定高效液相色谱图
表 2 南葶苈子样品芥子碱硫氰酸盐含量测定结果 ( n= 3)
样品编号 产地 芥子碱硫氰酸盐含量 (% ) RSD(% )
1 山东临沂 0. 770 0. 38
2 河北保定 0. 623 0. 48
3 河北安国 0. 653 0. 38
4 江苏南通 0. 681 0. 37
5 内蒙古赤峰 0. 608 0. 54
6 陕西商洛 0. 616 0. 27
7 湖北宜昌 0. 649 0. 63
8 安徽亳州 0. 689 0. 51
9 河南南阳 0. 654 0. 39
3 讨论与小结
样品提取方法的选择: 考虑到南葶苈子中含有较多的
脂肪油, 笔者对样品的提取方法进行了多种比较: ¹ 直接用
甲醇超声提取; º先脱脂再用甲醇超声提取; »直接用甲醇
回流提取; ¼ 先脱脂再用甲醇回流提取。结果 4种提取方
法所测得色谱图基本一致,以方法¹ 操作最为简便, 脂肪油
不影响芥子碱硫氰酸盐的测定,故选用甲醇直接超声提取。
提取时间,笔者比较了 20、30、40m in, 所得结果显示, 30m in
芥子碱硫氰酸盐溶出即达到平衡,延长超声提取时间, 测得
芥子碱硫氰酸盐含量不再增加, 故采用甲醇超声处理
30m in提取样品。
测定条件的选择: 参照文献 [ 6], 选择 C18色谱柱, 实验
结果显示, 采用文献中的流动相: 乙腈 - 0. 08mo l /L KH2
PO 4溶液 ( 15: 85) ,样品色谱图中芥子碱硫氰酸盐与其它杂
质峰不能完全分离,调整比例至乙腈 - 0. 08m o l /L KH2PO 4
溶液 ( 11B89), 样品色谱图中芥子碱硫氰酸盐与其它杂质
1996
收稿日期: 2010 - 04 - 26
作者简介:蔡永青 ( 1983 - ) ,男, 山东枣庄人, 药师,硕士,研究方
向:中药新药研究与开发。
峰可以完全分离, 故采用乙腈 - 0. 08mo l /L KH
2
PO
4
溶液
( 11B89)为流动相。
实验结果表明, 不同产地的南葶苈子样品中芥子碱硫
氰酸盐含量有一定差异。其中山东临沂产的南葶苈子芥子
碱硫氰酸盐含量最高, 达 0. 770% , 内蒙古赤峰产的南葶苈
子芥子碱硫氰酸盐含量最低, 为 0. 608% , 前者高出后者接
近 30% ; 葶苈子喜欢温暖、湿润、阳光充足、土壤肥沃、疏
松、排水良好的环境和条件, 山东地处北纬 34. 25b ~
381 23b、东经 114. 36b~ 122. 43b,属暖温带半湿润季风气候
类型,气候温和、四季分明,阳光充足、雨量充沛, 土壤肥沃,
是我国重要的农业大省, 历史上曾经是葶苈子的道地产区
之一,现在仍是南葶苈子的主产区之一,山东产的南葶苈子
芥子碱硫氰酸盐含量有高于其他产区的趋势, 提示山东的
南葶苈子资源值得深入开发。
HPLC法测定南葶苈子中芥子碱硫氰酸盐的含量, 操
作简便、准确, 重现性好,加样回收率高, 可以用于南葶苈子
的质量控制,填补5中国药典6葶苈子项下无含量测定的空
白。
参考文献
[ 1 ] 孙凯,李铣.葶苈子化学成分和药理作用的研究进展 [ J ].中
草药, 2002, 33( 7 ):附 3 - 5.
[ 2 ] 孙凯,李铣.南葶苈子的化学成分 [ J ]. 沈阳药科大学学报,
2003, 20( 6 ) : 419 - 421.
[ 3 ] 王爱琴,王秀坤,李军林,等. 南葶苈子化学成分的分离与结
构鉴定 [ J ].药学学报, 2004, 39( 1 ): 46 - 51.
[ 4 ] 李晶,石卓,赵丽娟,等.芥子碱硫酸氢盐对自发性高血压大
鼠血压和心律的影响 [ J ].吉林中医药, 2002, 22( 6 ): 55 - 56.
[ 5 ] 张明发,沈雅琴.芥子碱的抗炎和抗腹泻作用 [ J ].中药药理
与临床, 1996, 12( 1 ): 29 - 31.
[ 6 ] 刘丽芳, 王宇新,张新勇,等. 莱菔子中芥子碱的含量测定
[ J ].中成药, 2002, 24 ( 1) : 52 - 54.
第 28卷 第 9期
2 0 1 0年 9月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 9
Sep. 2 0 1 0
中华中医药
1997
学刊
复方茵栀颗粒质量标准的研究
蔡永青,张 成,陈青竹,戴 青,陈勇川
(第三军医大学西南医院药剂科, 重庆 400038)
摘 要:目的: 建立复方茵栀颗粒的质量控制标准。方法: 采用 TLC法对处方中茵陈、黄芩进行定性鉴别; 采
用 HPLC法测定绿原酸含量。结果: 薄层色谱鉴别方法专属性强; 绿原酸在 0. 0125 ~ 0. 4000Lg范围内呈良好的
线性关系 ( r= 0. 9999), 平均回收率为 97. 99% , RSD为 4. 44%。结论:该方法简单、准确、可靠、重现性好, 能有效
控制该制剂的质量。
关键词:复方茵栀颗粒;绿原酸; TLC; HPLC
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2010) 09 -1997 - 03
Quality standard forCompound Y inzh iG ranules
CAI Yong-qing, ZHANG Cheng, CHEN Q ing-zhu, DA IQ ing, CHEN Yong-chuan
( Ph arm acy, Sou thw estern H osp ita,l The Th irdM i litary M edica lUniversity, Ch ongq ing 400038, PR, C hina)
Abstrac t: Objective: To estab lish the quality standa rd for Compound Y inzhi G ranu les. Methods: Herba A rtem isiae
Scopariae and Scu te llaria ba icalensis Georgi we re iden tified by Thin laye r ch rom a tog raphy, and the conten t o f Ch lo rogeni-
cacid w as dete rm ined by H PLC. Results: Identifica tion of H erba A rtem isiae Scopa riae and Scute llaria baica lensis Georgi
by TLC w as spec ia.l Chlorogenicacid showed a good linea r re la tionsh ip w ithin the range of 0. 0125 ~ 0. 4000 Lg( r= 0.
9999). The ave rage recovery w as 97. 99% , and RSD w as 4. 44% . Conclus ion: Them e thod is simp le, accurate and reliab le
w ith a good reproducibility, and can con tro l the quality of Com pound Y inzhi g ranu le.
Keyw ords: C om pound Y inzhi G ranu le; Chlorogenicacid; TLC; H PLC
复方茵栀颗粒由茵陈、栀子、大黄和金钱草等中药制成
的复方医院制剂,具有解毒清热、除湿利胆、活血化瘀、退黄
的功效,在临床上用于急慢性肝炎重症黄疸者、淤胆型肝炎
等,疗效确切, 治愈率高, 获得病员好评。为进一步保证该
制剂的临床疗效,有效控制其质量, 本实验对复方茵栀颗粒
质量控制进行研究。
1 仪器与试药
Ag ilent 1200系列高效液相色谱仪; Chem S tation色谱
1997