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第２３卷 第１期
２０１４年３月
淮海工学院学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｕａｉｈａｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．２３　Ｎｏ．１
Ｍａｒ．２０１４
　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－６６８５．２０１４．０１．０２０
浒苔和江蓠中抑藻活性物质提取初步研究
＊
孙颖颖１，沈　桥１，黄晓斌１，董晓柯１，李光成１，王长海２
（１．淮海工学院 海洋学院，江苏 连云港　２２２００５；２．南京农业大学 资源与环境科学学院，江苏 南京　２１００９５）
摘　要：以浒苔和江蓠干粉末为原料，采用乙醚浸泡和液液萃取分离，制备到８种组分，即浒苔分离
组分Ａ、组分Ｂ、组分Ｃ和组分 Ｄ以及江蓠分离组分 Ａ、组分Ｂ、组分Ｃ和组分 Ｄ，得率依次为
１８．４％，４２．６％，２７．０％，２．６０％以及８．２８％，１５．２％，４６．２％，４．９８％。经化合物鉴定试验，发现浒
苔分离组分Ａ含有酚酸，组分Ｂ含有内酯、香豆素，组分Ｃ含有生物碱；江蓠分离组分Ａ和Ｂ含有
内酯、香豆素，组分Ｃ含有生物碱、酚酸和内酯、香豆素。２种海藻分离组分Ｄ均未检测出生物碱、
酚酸和内酯、香豆素。抑藻活性检测结果表明，浒苔分离组分Ａ、组分Ｃ和组分Ｄ以及江蓠分离组
分Ｂ、组分Ｃ和组分Ｄ对中肋骨条藻表现出明显的抑制作用。第８ｄ，对中肋骨条藻的生长抑制率
超过５０％。然而，浒苔分离组分Ｂ明显促进了中肋骨条藻的生长。更进一步，采用硅胶ＧＦ２５４薄层
层析，对浒苔分离组分Ａ、组分Ｂ和组分Ｃ以及江蓠分离组分Ｂ和组分Ｃ进行初步分离，确定了适
宜展开剂，为后续进行分离纯化奠定了良好的实验基础。
关键词：中肋骨条藻；浒苔；江蓠；提取；抑制作用
中图分类号：Ｘ５５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７２－６６８５（２０１４）０１－００７６－０５
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉａｌｇａｌ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ
Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ　ａｎｄ　Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ
ＳＵＮ　Ｙｉｎｇ－ｙｉｎｇ１，ＳＨＥＮ　Ｑｉａｏ１，ＨＵＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｂｉｎ１，
ＤＯＮＧ　Ｘｉａｏ－ｋｅ１，ＬＩ　Ｇｕａｎｇ－ｃｈｅｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｈａｉ　２
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｕａｉｈａｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ　２２２００５，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００９５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｔｈｅｒ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉａｌｇａｌ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ
Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ　ａｎｄ　Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｄ　ｔｉｄｅ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ
Ｓｋｅｌｅｔｏｎｅｍａ　ｃｏｓｔａｔｕｍ．Ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ（Ａ，Ｂ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ）ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｄｒｙ
ｐｏｗｄｅｒｓ　ｏｆ　Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ （ｏｒ　Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ）ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．
Ｔｈｅｉｒ　ｙｉｅｌｄ　ｗａｓ　１８．４％，４２．６％，２７．０％ａｎｄ　２．６０％ （８．２８％，１５．２％，４６．２％ａｎｄ　４．９８％）ｒｅ－
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｅｉｇｈｔ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ，ａｎｄ　ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ｉ－
ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｔｏ　ｃｏｎｔａｉｎ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ａ　ｏｆ　Ｅ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａ，ｌａｃｔｏｎｅ　ａｎｄ　ｃｏｕｍａｒｉｎｓ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ
Ｂ　ｏｆ　Ｅ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａ，ａｎｄ　ａｌｋａｌｏｉｄ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ｏｆ　Ｅ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａ．Ａｌｓｏ，ｌａｃｔｏｎｅ　ａｎｄ　ｃｏｕｍａｒｉｎｓ　ｗｅｒｅ
ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ　ｏｆ　Ｇ．ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ，ａｎｄ　ａｌｋａｌｏｉｄ，ｌａｃｔｏｎｅ，ｃｏｕｍａｒｉｎｓ　ａｎｄ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ
＊ 收稿日期：２０１４－０１－２７；修订日期：２０１４－０２－２７
基金项目：江苏省高校自然科学研究项目（１３ＫＪＢ１７０００１）；连云港市科技计划工业攻关项目（ＣＧ１３１０）；淮海工学院江苏省海洋生物技术
重点实验室开放课题（２０１３ＨＳ０１０）；淮海工学院大学生实践创新项目（Ｚ２０１３１１６４１１０５００５）
作者简介：孙颖颖（１９７８－），女，黑龙江桦南人，淮海工学院海洋学院副教授，博士，主要从事海洋生化工程方面的研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｓｙｙ－
９９９＠１６３．ｃｏｍ。
通讯作者：王长海（１９６２－），男，山东烟台人，南京农业大学资源与环境科学学院教授，博士，主要从事海洋生化工程方面的研究，（Ｅ－
ｍａｉｌ）ｃｈｗａｎｇ２００１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
ａｃｉｄ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ｏｆ　Ｇ．ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｎｏ　ａｌｋａｌｏｉｄ，ｌａｃｔｏｎｅ，ｃｏｕｍａｒｉｎｓ　ｏｒ
ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｄ　ｏｆ　Ｅ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａ（ｏｒ　Ｇ．ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ）．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｌｇａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ，ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ（Ａ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ）ｏｆ　Ｅ．
ｐｒｏｌｉｆｅｒａａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ（Ｂ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ）ｏｆ　Ｇ．ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ａｃｔｉｏｎ．
Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓ．ｃｏｓｔａｔｕｍｂｙ　ｔｈｏｓｅ　ｓｉｘ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗａｓ　ｂｅｙｏｎｄ　５０％ｉｎ　ｄａｙ　８．Ｂｅｓｉｄｅｓ，
ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｂ　ｏｆ　Ｅ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｓ．ｃｏｓｔａｔｕｍ，ａｎｄ　ｔｈｅｓｅ　ｆｉｖｅ　ｆｒａｃ－
ｔｉｏｎｓ（ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ａ，Ｂ　ａｎｄ　Ｃ　ｏｆ　Ｅ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａ，ａｎｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｂ　ａｎｄ　Ｃ　ｏｆ　Ｇ．ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ）ｗｅｒｅ　ａｎａ－
ｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ＧＦ２５４ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｓｕｂ－
ｓｅｑｕｅｎｔ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｃａｎ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｓｏｌｉｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｋｅｌｅｔｏｎｅｍａ　ｃｏｓｔａｔｕｍ；Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ；Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ；ｅｘｔｒａｃｔ；
ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
０　引言
研究表明，海藻体内的某些次生代谢物是抑制
微藻生长的主要原因［１－２］，已经鉴定出某些海藻体内
的抑藻物质，例如墨角藻中的聚酚［３］、海头红体内的
单萜［４］、川蔓体内的二萜［５］、小珊瑚藻中的溴仿［６］和
孔石莼体内的不饱和脂肪酸［７］等，能显著抑制微藻
的生长。海藻通过渗滤、挥发和分泌等多种方式将
生物碱、酚酸、脂肪酸、硫化物、糖苷、萜类、内酯、鞣
酸、有机酸和糖类等物质释放到环境中［３－７］。
前期研究表明，浒苔（Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ）
和江蓠（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ）中含有能明显
抑制米氏凯伦藻和中肋骨条藻等赤潮微藻生长的物
质［８－９］，并采用甲醇浸泡制备到具有明显抑藻活性的
提取物［１０－１１］。然而，由于采用甲醇和丙酮浸泡制备
的海藻提取物含有较高含量的色素，在祛除色素过
程中致使活性组分损失较多。因此，本文采用乙醚
浸泡浒苔和江蓠粉末，经过滤、浓缩和液液萃取分
离，制备到海藻分离组分。在此基础上，利用化合物
鉴定试验（主要是生物碱、酚酸和内酯、香豆素检测）
对这些海藻组分进行定性，并采用抑藻活性检测方
法，确定活性组分。更进一步，采用硅胶ＧＦ２５４薄层
层析检测，确定上述活性组分的适宜展开剂，为后续
分离纯化２种海藻的抑藻活性物质奠定实验基础。
１　材料和方法
１．１　实验材料
中肋骨条藻无菌株由中国海洋大学提供，经进
一步分离纯化后由淮海工学院江苏省海洋生物技术
重点实验室保存，在ｆ／２培养基［１４］中培养，培养温
度（２０±０．１）℃，光照强度４０μｍｏｌ／（ｍ
２·ｓ１），光暗
比１２∶１２。
浒苔采集于青岛太平角，江蓠来自福建沿海，由
苏州大学沈颂东教授提供。经适当处理后，２种海
藻于４０℃下烘干，粉碎至０．３ｍｍ备用。
天然海水经过脱脂棉和３００目筛绢过滤，煮沸、
冷却，ｐＨ 和盐度分别调节至８．５和３０备用（实验
所用海水均作如上处理）。
１．２　２种海藻提取物的制备及其液液萃取分离
５００ｇ海藻干粉末，置于锥形瓶内，加入１　０００
ｍＬ乙醚，室温下浸泡提取２４ｈ。采用虹吸法，将乙
醚浸提液取出，剩余部分经２　５００ｇ下离心１０ｍｉｎ，
滤纸过滤。上述干粉末再次加入乙醚，反复浸泡提
取，直至干粉末变为白色。合并上述所有浸提液，４０
℃下减压蒸干，制备到海藻提取物。提取物加入乙
醚溶解后，用０．５ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＨＣＯ３ 溶液萃取３次。
下层减压蒸干，制备到组分 Ａ。上层加入０．１ｍｏｌ／
Ｌ　ＮａＯＨ溶液萃取３次，下层减压蒸干，制备到组分
Ｂ。上层待乙醚挥发完毕后，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ
溶液，充分振荡后，加入乙醚进行萃取，所获乙醚层
减压蒸干，制备到组分 Ｃ。下层加入０．１ｍｏｌ／Ｌ
ＨＣｌ溶液中和ｐＨ至中性后，加入乙醚萃取，乙醚层
减压蒸干，制备到组分Ｄ。称量质量后，上述４种提
取物用无水乙醇定容，４℃下保存备用。
１．３　化合物定性检测
１．３．１　酚酸鉴定试验　１ｍＬ提取物乙醇溶液加入
到质量分数为１％～５％的三氯化铁溶液中，观察颜
色，呈现蓝、暗绿或蓝紫色为酚酸类物质的阳性反应。
７７　第１期 孙颖颖等：浒苔和江蓠中抑藻活性物质提取初步研究
提取物乙醇溶液点样于硅胶 Ｇ板上，氯仿∶丙
酮∶甲酸为展开剂，三氯化铁溶液为显色剂，出现墨
绿色斑点，表明存在酚酸类物质。
１．３．２　香豆素、内酯鉴定试验　加入质量分数为
１％的氢氧化钠溶液１ｍＬ到１ｍＬ提取物乙醇溶液
中，沸水浴３～４ｍｉｎ，溶液比未加热时澄清。加入质
量分数为２％的盐酸溶液１ｍＬ酸化，静置，溶液变
浑浊，表明存在香豆素、内酯类物质。
提取物乙醇溶液点样于硅胶 Ｇ板上，石油醚∶
乙酸乙酯为展开剂，２５４ｎｍ下呈现蓝色荧光，表明
存在香豆素、内酯类物质。
１．３．３　生物碱鉴定试验　１ｍＬ提取物乙醇溶液加
入到碘化汞钾试剂中，充分混匀后，静置，出现白色
或浅黄色沉淀为阳性反应。
提取物乙醇溶液点样于硅胶 Ｇ板上，氯仿∶甲
醇为展开剂，碘化铋钾为显色剂，出现橘红色斑点，
表明含有生物碱类物质。
１．３．４　黄酮鉴定试验　加入适量浓氨水到１ｍＬ
提取物乙醇溶液中，出现亮黄或橙色颜色反应为阳
性反应。
提取物乙醇溶液点样于硅胶Ｇ板上，２５４ｎｍ下
呈现亮黄或黄绿色荧光，表明存在黄酮类物质。
１．４　抑藻活性检测
在ｆ／２培养基中，添加实验“１．２”制备的８种组
分。随后，接种中肋骨条藻，接种细胞数量均为２５
×１０４　ｍＬ－１，８种组分终质量浓度为１．４０ｇ／Ｌ，同时
设定添加相同体积无水甲醇的对照组，每个处理３
个重复。所有培养瓶置于ＧＸＺ－２６０Ｂ智能型光照培
养箱中培养１０ｄ，温度（２６±１）℃，光照强度４０μｍｏｌ
·（ｍ２·ｓ）－１，光暗比为１２∶１２。每天定时摇动培养
瓶３次，以防止微藻附壁生长。每隔１ｄ从培养瓶
中取１ｍＬ培养液，用Ｌｕｇｏｌ’ｓ试剂固定后，计数藻
细胞数量的变化。取样后向培养瓶中加入１ｍＬ浓
缩ｆ／２培养液，以维持培养液体积恒定。
１．５　硅胶ＧＦ２５４薄层层析检测
点样粗提物的乙醇溶液于硅胶 ＧＦ２５４上，以氯
仿∶甲醇（１６∶１）、氯仿∶甲醇（８∶１）、氯仿∶丙酮∶甲酸
（１５∶３∶２）和石油醚∶乙酸乙酯（１∶１）为展开剂，２５４
ｎｍ下观察各分离组分的展开情况，以确定上述组
分后续分离纯化的适宜展开剂。
１．６　数据处理
实验数据采用ＳＰＳＳ１１．５软件包进行独立样本
检验统计分析，ｐ＜０．０５为显著性差异，ｐ＜０．０１为
极显著性差异。
微藻生长抑制率Ｉ＝（１－Ｎ／Ｎ０）×１００％，
式中，Ｎ 为处理组藻细胞数量（１０４　ｍＬ－１）；Ｎ０ 为对
照组藻细胞数量（１０４　ｍＬ－１）。
２　结果和分析
２．１　２种海藻提取物的制备及其液液萃取分离
分别以５００ｇ浒苔干粉末和５００ｇ江蓠干粉末
为原料，制备到２．７５３ｇ墨绿色浒苔提取物和５．６２８
ｇ暗棕色江蓠提取物。上述２种提取物经液液萃取
分离后，分别制备到４种分离组分，质量和得率（质
量分数）如表１所示。
表１　２种海藻提取物的液液萃取分离
Ｔａｂｌｅ　１　Ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ
ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｗｏ　ｍａｃｒｏａｌｇａｅ
组分
浒苔 江蓠
质量／ｇ 得率／％ 质量／ｇ 得率／％
Ａ　 ０．２３　 ８．２８　 １．０４　 １８．４
Ｂ　 ０．４２　 １５．２　 ２．４０　 ４２．６
Ｃ　 １．２７　 ４６．２　 １．５２　 ２７．０
Ｄ　 ０．１４　 ４．９８　 ０．１５　 ２．６０
２．２　２种海藻分离组分的化合物鉴定试验
上述８种组分用无水甲醇定容，使其终质量浓
度均为４０ｇ／Ｌ。取适量溶液进行生物碱、酚酸和内
酯、香豆素检测，结果如表２所示。
表２　２种海藻分离组分的化合物鉴定试验结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｗｏ　ｍａｃｒｏａｌｇａｅ
ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
海藻 组分
化合物鉴定
生物碱 酚酸 内酯、香豆素
浒苔
Ａ —  —
Ｂ — — 
Ｃ  — —
Ｄ — — —
江蓠
Ａ — — 
Ｂ — — 
Ｃ   
Ｄ — — —
　　注：“—”表示未检测出。
由表２可以看出，浒苔分离组分 Ａ含有酚酸，
组分Ｂ含有内酯、香豆素，组分Ｃ含有生物碱，组分
８７ 淮海工学院学报（自然科学版） ２０１４年３月
Ｄ并未检测出生物碱、酚酸和内酯、香豆素等物质；
江蓠分离组分Ａ和组分Ｂ含有内酯、香豆素，组分
Ｃ含有生物碱、酚酸和内酯、香豆素，组分Ｄ同样未
检测出生物碱、酚酸和内酯、香豆素等物质。
２．３　２种海藻分离组分的抑藻活性
图１表明，浒苔４种分离组分中，组分Ａ、组分
Ｃ和组分Ｄ对中肋骨条藻表现出明显的（ｐ＜０．０５）
抑制作用。第８ｄ，对中肋骨条藻的生长抑制率超过
５８％。其中，组分Ａ致使中肋骨条藻细胞接近死亡
（第６ｄ）。组分Ｂ则明显（ｐ＜０．０５）促进了中肋骨
条藻的生长。从第４ｄ开始，使得添加组分Ｂ的实
验组藻细胞数量为对照组藻细胞数量的２．０倍，并
且，这种促进生长现象一直持续到实验结束。
江蓠４种分离组分中，组分Ｂ、组分Ｃ和组分Ｄ
对中肋骨条藻表现出明显的（ｐ＜０．０５）抑制作用。
第６ｄ，对中肋骨条藻的生长抑制率在７１％以上。
在实验设定的质量浓度下，组分Ａ未对中肋骨条藻
的生长产生明显（ｐ＞０．０５）影响（图１）。
对照组
组分 A
组分 B
组分 C
组分 D
对照组
组分 A
组分 B
组分 C
组分 D
300
240
180
120
60
0
160
120
80
40
0
0 2 4 6 8 10
培养时间/d
0 2 4 6 8 10
培养时间/d
细
胞
数
量
/(1
04
m
L-
1 )
浒苔 江蓠
细
胞
数
量
/(1
04
m
L-
1 )
图１　２种海藻分离组分对中肋骨条藻生长的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｗｏ　ｍａｃｒｏａｌｇａｅ　ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｓｋｅｌｅｔｏｎｅｍａ　ｃｏｓｔａｔｕｍ
２．４　２种海藻分离组分的硅胶ＧＦ２５４薄层层析分离
在上述实验基础上，选定浒苔分离组分Ａ、组分
Ｂ和组分Ｃ以及江蓠分离组分Ｂ和组分Ｃ，采用硅
胶ＧＦ２５４薄层层析进行检测，以确定后续分离纯化
的适宜展开剂。表３列出了２种海藻分离组分的硅
胶ＧＦ２５４薄层层析分离结果。
表３　２种海藻分离组分的硅胶ＧＦ２５４薄层层析分离
Ｔａｂｌｅ　３　Ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ＧＦ２５４ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｆｒｏｍ　ｔｗｏ　ｍａｃｒｏａｌｇａｅ　ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
海藻 组分
化合物鉴定
生物碱 酚酸 内酯、香豆素
Ａ 氯仿∶丙酮∶甲酸（１６∶２∶２）
浒苔 Ｂ 石油醚∶乙酸乙酯（１∶１）
Ｃ 氯仿∶甲醇（８∶１）
江蓠
Ｂ 石油醚∶乙酸乙酯（１∶８）
Ｃ 氯仿∶甲醇（１６∶１） 氯仿∶丙酮∶甲酸（１６∶２∶２） 石油醚∶乙酸乙酯（１∶２）
　　在表３中，浒苔分离组分 Ａ展开剂为氯仿∶丙
酮∶甲酸（１６∶２∶２），出现５个比较明显的斑点。浒苔
分离组分Ｂ和江蓠分离组分Ｂ展开剂为石油醚∶乙
酸乙酯（１∶１）和石油醚∶乙酸乙酯（１∶８），依次出现４
个斑点和５个斑点。浒苔分离组分Ｃ以氯仿∶甲醇
（８∶１）为展开剂，出现６个斑点。江蓠分离组分Ｃ
在氯仿∶甲醇（１６∶１）展开，出现６个斑点；在氯仿∶丙
酮∶甲酸（１６∶２∶２）展开下，出现４个斑点；以石油醚∶
乙酸乙酯（１∶２）为展开剂时，出现３个斑点。上述５
种组分经选定的展开剂展开后，在２５４ｎｍ下检测，
发现所出现斑点比较分散，展开效果较好，利于后续
的分离纯化。本文中，由于２种海藻的分离组分Ｄ
的化合物定性检测结果未知，因此，目前尚未进行硅
胶ＧＦ２５４薄层层析检测。
９７　第１期 孙颖颖等：浒苔和江蓠中抑藻活性物质提取初步研究
３　讨论
目前，已经证实海藻分泌的萜类［４－５］、不饱和脂
肪酸类［７］和酚酸类［１２－１６］物质具有明显的抑藻活性。
本文通过调节不同的酸碱性改变物质的解离状态，
进而实现浒苔和江蓠乙醚提取物的初步分离，依次
使浸提液弱碱化、强碱化、再酸化，制备到含有不同
物质的组分（表１和表２）。同时，抑藻活性检测表
明，浒苔分离组分Ａ、组分Ｃ、组分Ｄ和江蓠分离组
分Ｂ、组分Ｃ、组分Ｄ均显著抑制了中肋骨条藻的生
长（图１）。表２中，浒苔分离组分 Ａ和江蓠分离组
分Ｃ均含有酚酸类物质。这表明此２种海藻中的
酚酸类物质很可能是具有抑藻活性的物质。浒苔分
离组分Ｃ中存在生物碱类物质，江蓠分离组分Ｂ中
含有内酯、香豆素类物质，而此２种组分同样明显抑
制了中肋骨条藻的生长，表明生物碱和内酯、香豆素
很可能也具有抑藻活性。浒苔分离组分Ｄ和江蓠
分离组分Ｄ中均未检测出酚酸、生物碱和内酯、香
豆素等物质，因此，其抑藻成分还有待进一步研究。
此外，值得注意的是，浒苔分离组分Ｂ明显促
进了中肋骨条藻的生长（图１），而检测发现组分Ｂ
中含有内酯、香豆素（表２）。结果表明，此组分中很
可能具有促进生长的物质，或抑藻活性物质浓度较
低，在低浓度时对中肋骨条藻的生长表现出了促进
作用，具体原因还需要进一步研究。更进一步，采用
硅胶ＧＦ２５４薄层层析对浒苔分离组分 Ａ、组分Ｂ和
组分Ｃ以及江蓠分离组分Ｂ和组分Ｃ进行检测，确
定了此５种组分后续分离纯化的适宜展开剂，为后
续研究浒苔和江蓠抑藻活性物质的分离纯化奠定了
良好的实验基础。
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（责任编辑：褚金红）
０８ 淮海工学院学报（自然科学版） ２０１４年３月