全 文 ：第 1 7 卷
V ol
.
17
第 2 期
No
.
2
西 昌农业 高等专科学校学报
Jo u m滋 of Xi e hn a gA ri ge贝tu 耐 C o l e e g
2 003年 6月
Jun
.
2 0 3
山葵叶片愈伤组织诱导分析
王安虎 何天祥 邓建平 胡德智 苏光灿
(西 昌农业高等专科学校 四川西昌 615 1 0) 3
摘 要 : M S基本培养基中加入 A B与 2一D 和 BA 与 NA人的 比 例均为 1 : 3时的培养基配方叶片成愈率分别为 4 6.8% 和
45 . 6%
,在M S+ B A O. 5十 .2 4一D l . 5和M S十 B A I十N 人户己的培养基中成愈率分别达 87 .5 %和 71 % 。
关键词 : 山 葵幼叶 ;禽伤组织诱导 ; 培养基配方
中圈分类号 : Q叫 3 . 1 文献标识码 : B 文章编号 : 10 8- 4 16 9 ( 2 0 3冷冬刁07 3 刁 3
山葵 (召` 咫ma )又名山裔菜 , 系十字花科辣根属
的宿根性草本植物 , 其根茎肉质肥大 , 有浓烈的辣
味和特殊的香气 ,是菜肴和食品的重要调味品 。 据
研究 ,根中含有的特殊成分具有消毒 、杀菌 、 增进食
欲和帮助消化等功能 。
在山葵生长过程中 , 感染黑心病等病毒病 , 严
重影响了山葵的产量 、 品质和经济效益 。 因此 ,脱去
山葵植株中带有的病毒是提高产量和品质的重要
途径 。 利用山葵幼叶作为外植体 ,形成愈伤组织 ,再
分化形成完整植株是脱去病毒的主要途径 。 同时 ,
研究对山葵叶片愈伤组织的诱导培养也能为山葵
茎尖分生组织的培养提供理论依据 。 本实验通过组
配不同的培养基配方 , 以筛选出有利于山葵幼叶形
成愈伤组织的培养基 。
1 材料 、 药品与方法
1
.
1 材料与药品
山 葵 幼 叶 , N H如 0 3 、 KN o 3 、 M朗O 一 7H 20 、
C a C h
、
K H尹 0 4 、 N a Z一 E D T A 、 H尹 0 4 、 Z n SO 4 . 7 H ZO 、
N 习M o .O4 2日 20
、
C o C巧 2H 20 、 V B , 、 VB 6 、 6 一 B A 、 N A A 、
.2 4一 D 、肌醉 、 烟酸 、 甘氨酸 、蔗糖 、琼脂等 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 培养基配方
以M S培养基为基本培养基 , 添加不同种类
(B A
、
2一D 、 N A A )和不 同浓度的植物激素 , 获得不
同种类的多种培养基配方 (表 1 ) 。
表 1 不同种类的培养甚配方 单位 : m留飞
植物激素比例
B A : .2 4一D 二 1 : 2
B A : 2 .4 一 D = 1 : 3
B A : 2 .4 一 D = 3:1
B A : 2 .4 一 D = 2:1
B A : 2
.
4一 D = 1 : 1
培养基种类
M S+ B A I + 2
.
4一D Z
M S+ B A O
.
5+ 2
.
4一D l . 5
M S+ B A I
.
5+ 2
.
4一D 0 . 5
M S+ B A I + 2
.
4一D 0 . 5
入人S+ B A O . 5+ 2 . 4一D 0 . 5
M S+ B A I+ 2
.
4一D l
M S十B A I + N A A I
M S + B AO
.
5 + N A A I
M S + B AO
.
5 + N A A I
.
5
M S+ B A I + N A A 3
M S + B A I
.
5 + N A A O
.
5
M S + B A I + N 人A 0 . 5
M S + B AZ + N AA I
M S+ B A I
.
5+ 2
.
4一D 4 . 5
M S+ B A 3 + 2
.
4一D l
M S+ B乃2 + 2
.
4一 D l
M S+ B A I
.
5+ 2
.
4一D l . 5
M S+ B A Z + 2
.
4一 D Z
M S + B A I
.
5 + N A A I
.
5
M S+ B A I + N A户2
入八S+ B A I . 5 + N六 A 4 . 5
入入S+ B A Z + N A A 6
M S+ B A 4
.
5 + N人 A l . 5
M S + B A 3+ N A A I
.
5
M S + B A 4+ N A A Z
M S+ B八2 + 2 . 4一D 6
M S+ B A 4 + 2
.
4一D Z
B A : N AA = 1:1
B A : N A A = 1:2
B A : N A A二 1:3
B A
B A
N A A = :3 1
N A A = :2 1
M S + B A 6+ N九心
收稿 日期 : 2X() 3一04 一28
本文得到我校蔡光泽副教授悉心指 导 , 农学系学生程晓 、 杨梅 、何振兴 、 倪小兵四位 同学参加 了部分 工作 ,在此致谢 !
7 4
西 昌 农 业 高 等 专 科 学 校 学 报 20 0 3 年
1
.
. 2 2材料灭菌
山葵幼 叶叶清水冲洗 (吸干 )斗7 5% 乙醇 ( 8秒 )
一卜0 . 1%升汞 ( 3分钟 )斗无菌水冲洗 ( 7一 8次 )升切割
( 2
.
5 cm 2 )
。
1. . 3 2接种
将切割为 . 2 5cm 2的山葵 幼叶平放 于培养基表
面 。
1
.
. 4 2培养条件
温度 : 20 士 2℃ , 光 照 : 1 0一 1 2 h / d , 光照 强度 :
2
,
0 0 0一 3 , 以刃 Lux 。
2 实验结果
将 .2 c5 时大小的山葵幼叶在上述培养基和培养
条件下进行培养 , 经过约 60 天左右 ,已形成叶片愈伤
组织 (表 2 ) 。 实验结果表明 ,用山葵幼叶作为外植体 ,
以M S培养基为基本培养基 , 在添加不同种类 ( B A 、
2
.
4一D 、 N A A )和不同浓度 ( 1 : 1 、 1 : 2 、 1 :3 、 2 : 1 、 3 : 1 )的植
物激素条件下 ,均能诱导产生山葵叶片愈伤组织 ,但
是诱导产生愈伤组织的百分率不同 ,其中加人 B A与
.2 4一D 的比例为 :1 3和 B A与 N A A的 比例 为 1 :3 时 ,诱
导产生愈伤组织的百分率最高 , 分别为 46 .8 % 和
4 5
.
5% ;其次加人 B A与2 . 4一D 比例为 1 : 3 , l : 2 , z : 1 , 2 : l ,
表 2 山葵幼叶愈伤组织形成情况
植物激素比例 培养基种类 接种瓶数 污染瓶数 愈伤组织情况愈伤组织瓶数 愈伤组织百分率 平均百分率
41勺750384 1231751233971062452015616巧3B A :2 .4 一D = 1 : 2
B A :2 .4 一 D = 1 : 3
B A :2 .4 一D 二 3 :l
B A :2 .4 一D = 1 :1
内j3
4317250.34537
B A :2
.
4一D 二2 :1
B A : N A A = 1:1
B A : N A A = 1:2
B A : N A A 二 1:3
B A : N A A = :3 1
B A :N A A = :2 1
M S+ B A I + 2
.
4一D Z
M S + B A O
.
5+ 2
.
4一D 1 5
M S+ B A I
.
5+ 2
.
4一D 4 . 5
M S+ B A Z + 2
.
4一 D 6
M S+ B A I
.
5+ 2
.
4一D 0 . 5
M S+ B A 3+ 2
.
4一 D l
M S+ B A I + 2
.
4一D 0 . 5
M S + B A Z + 2
.
4一D l
M S+ B A 4+ 2
.
4一D Z
M S+ B A O
.
5 + 2
.
4一D 0 . 5
M S+ B A I + 2
.
4一D l
M S + B A I
.
5+ 2
.
4一D l . 5
M S+ B八2 + 2
.
4一D Z
M S + B A I + N AA I
M S+ B A I
.
5 + N A A I
.
5
M S+ B A O
.
5 + N A A I
入八S十B A I + N A户2L
M S+ B AO
.
5 + N A A I
.
5
M S+ B A I + N A A 3
五江S+ B A I . 5+ N AA 4 . 5
M S + B A Z+ N A A 6
M S + B A I
.
5 + N A A O
.
5
M S+ B A 4
.
5+ N A A I
.
5
M S + B A 6 + N AA Z
M S + B A I + N A A O
.
5
M S+ B A Z+ N A A I
M S+ B A 3+ N A A I
.
5
M S+ B A 4 + N A A Z
4 5
.
4
4 6
.
8
2 1
2 8
3 1
3 3
.
3
3 6
4 5
.
6
2 9
.
8
3 0
.
3
第 2 期 王安虎 、 何天祥 、 邓建平 、 胡德智 、 苏光灿 : 山葵叶片愈伤组 织诱导分析
:3 1时 , 诱导产生愈伤组织 的百分率大小关系为 52 %
> 45
.
%4
> 31 % > 2%8
> 21 % ; 当加人 B A与N A A的 比例
为 1:3 , :1 2 , :1 1 , :2 1 , :3 1时 ,诱导产生愈伤组织 的百分
率大小关系为 46 .%6 > 3%6 > 3 .3 % > 30 . 3% > 29 .%8 ;在
加人 B A与.2 4一D的比例为 1 : 3和 B A与N A A的 比例为
1:3 的培养基中 , M S + B OA .5 + .2 4一D l . 5和M S + B IA +
N A户己最有利于山葵叶片愈伤组织的形成 , 其成愈
率分别达 87 . 5%和 71 % 。
这与生长素能诱导外植体脱分化形成愈伤组织的作
用相关 ,且当生长素浓度较高时 ,所形成的愈伤组织
较松脆 。 同时 , 山葵幼叶脱分化形成愈伤组织时 ,在
叶面不同区域有形成黑色病斑 ,并逐渐扩大 , 最后导
致叶片和所形成的愈伤组织黑变而死亡 的现象 ,这
可能与山葵叶片所含病毒有关 。 因此 , 必须不定期对
叶片边沿已形成的少量愈伤组织进行继代培养 , 才
能获取含有少量病毒或不含病毒的愈伤组织 。
3 结果讨论
以山葵叶片作为外植体进行愈伤组织诱导时 ,
山葵叶片成愈率与加人的生长素浓度有较大关系 ,
M S基本培养基中加人 B A与 .2 4一D 和B A与N A A的比
例均为 1:3 时的培养基配方成愈率分别达 46 .%8 和
4 5
.
%6
, 且山葵幼叶在M S+ BOA
.
5 + 2
.
4一D l . 5和M S +
B A I+ N九心的培养基中成愈率分别为87 . 5%和 71 % ,
今考文献 :
〔门王安虎 , 熊梅 .山葵叶片愈伤组织诱寻试脸O〕.西 肠农业高
等专科学校学报 , 2 0() 2( 3) 37 一38 .
〔幻李浚 明编译 .桂物组 织培养教程 (M ) . 中国农业大 学出版
社 . 1 9 96 .
〔3 )王清连主编 .桂物组织培养〔M〕. 中国农业 出版社 . 2的2 .
(4 〕崔欲 ,桂雄林主编 .经济植物的培养与快速繁挂〔M 〕. 19 8 .5
A n nI d u c e d A n a l y s i s o n ht e H e ia i n g T i s sues
i n
E U tr e m s B l a d e S
VVa n g nA
一h u , He 下a n一 x ia n g , De n g J ia n一 Pin g , H u D e 一 z h i a n d S u Gua n g 一ca n
即 c坛m g 内护司 tU司 C o Ue参 , iX e h ar 唱 . is c h au n , 61 50 13)
A忱赶a Ct :
M A bas i e
D l
.
5 an d
I f we P
u t
hte su b
s比 tu m of rm u h o f B A an d 2 . 4一D , B A an d N A A in a 以 d o n Of 1 ot 3 in
ide h
e习i n g ar et of b al d e s 15 4 6 . 8%
M S+ B A I + N A乃己 , ht e h e公in g ar et 15 87 . 5% an d
an d 45
.
%6 er sP ec
it v e ly
,
bu
t in M S+ B人.0 . 5 + .2 4一
71
.
&0 er sP ce ivt vel
.
(责任编样 :蔡光泽 )