全 文 ：0 引言
大花蕙兰(Cymbidium hybridum)为兰属附生兰的
杂交种，大部分品种叶片长且披散，花无香味，花大、多
而色艳，花期2~4月。国兰色淡、清香、高雅，集色、香、
形、韵于一体。近年美国、日本、新西兰等的兰花育种
者将大花蕙兰与建兰、纹瓣兰等杂交，已培育出一些早
花、微香、短叶型或垂花型大花蕙兰品种，很受消费者
的喜爱 [1]。春剑（Cymbidium longibracteatum Y.S.Wu et
S.C.Chen）适应性强，易栽培，而且花品质、色彩、姿态、
神韵、香味上都超过大多传统及流行品种。春剑是一
个十分有活力的新秀，它的前途会更加光辉灿烂[2-3]。
因此利用人工杂交的方法，有目的的将两者的优良特
性传给后代，培育出既具大花蕙兰花大色艳又具春剑
姿态优美香气宜人的新品种，对新品种的选育十分重
要。朱根发等 2004年报道了大花蕙兰与蕙兰原球茎
的萌发与诱导进行了研究；梁芳等2008年对大花蕙兰
与蕙兰杂交原球茎进行了研究。但大花蕙兰与春剑的
杂交尚未见报道。笔者2006年至2009年，开展了大花
蕙兰与国兰春剑杂交试验得到大量杂交果实，并通过
种子的非共生萌发或大量杂交原球茎。作者通过对大
基金项目：泰安市大学生科技创新项目（2008D2012）。
第一作者简介：王丰妍，女，1985年出生，山东烟台人，硕士研究生，研究方向：园林植物遗传育种。通信地址：271018山东农业大学林学院2008研，
E-mail：wangfengyan163@163.com。
通讯作者：王长宪，男，1959年出生，山东平阴人，研究生导师，研究员。E-mail：changxianwang@163.com。
收稿日期：2009-08-31，修回日期：2009-09-03。
大花蕙兰与春剑杂交原球茎增殖及分化研究
王丰妍 1，李承秀 2，王长宪 2，张东旭 1，潘银萍 1
（1山东农业大学林学院，山东泰安 271018；2泰山林业科学院，山东泰安 271000）
摘 要：【研究目的】对大花蕙兰品种‘绿宝石’与春剑杂交原球茎增殖与分化进行研究。【方法】设置不同培
养基、6-BA和NAA以及不同添加物对杂交兰原球茎增殖分化的进行探讨。【结果】KC培养基为最佳培养
基；6-BA对原球茎的增殖影响不大，NAA对增殖影响较明显当浓度为 0.2 mg/L原球茎增殖效果最好；
KC+6-BA2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L对原球茎的分化效果最好；【结论】在培养基中加15 ml/L香蕉汁最有
利于杂交兰原球茎的增殖。
关键词：杂交兰；原球茎；增殖；分化
中图分类号：S311 文献标识码：A 论文编号：2009-1750
Study on Propagation and Differentiation of PLB of Cymbidium hybridum×
Cymbidium Longibracteatum
Wang Fengyan1, Li Chengxiu2, Wang Changxian2, Zhang Dongxu1, Pan Yinping1
(1College of Forestry, Shandong Agriculture University, Tai’an Shandong 271018;
2Taishan Forestry Academe, Tai’an Shandong 271000)
Abstract:【OBJECTIVE】The research aimed to study the propagation and differentiation of PLB of Cymbidium
hybridum‘Queen Emeraldus’and C. longibracteatum.【METHOD】Four factors of medium, 6-BA, NAA, and ad⁃
ditive were designed to study the effects on differentiation and differentiation of PLB of Cymbidium hybridum ×
C. longibracteatum.【RESULTS】KC medium was more effective than others. There was no difference with differ⁃
ent concentrations of 6-BA. NAA influenced the propagation of PLB directly. NAA0.2 mg/L was most favorable
to the propagation of PLB. The best differentiation medium was KC+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L.【CONCLU⁃
SION】the medium supplemented with 15 ml/L banana was most beneficial to the Propagation of PLB.
Key words: Cymbidium hybridum×C. longibracteatum, protocorm like-body, propagation, differentiation
中国农学通报 2009,25(23):327-330
Chinese Agricultural Science Bulletin
中国农学通报 http://www.casb.org.cn
花蕙兰与春剑杂交种子萌发获得的原球茎的增殖分化
进行研究，筛选出最适培养条件，以期望培育出株型
好，花大，有香味能在春节前后开花的新品种。
1 材料与方法
1.1 试验时间、地点
试验于 2009年在泰山林科院花卉研究所组培室
进行。
1.2 试验材料
供试材料为泰山林科院花卉研究所提供的以为春
剑母本与‘绿宝石’杂交获得的原球茎。
1.3 试验方法
1.3.1 不同培养基的筛选 以杂交原球茎为外植体，对
培养基种类W培养基、KC培养基、MS培养基以及
VW四种培养基，均添加 2%蔗糖，0.8%琼脂，pH值为
5.4±0.1，进行筛选找出最适合杂交兰增殖的培养基。
取生长健壮、大小均匀的杂交兰原球茎，将变褐的部分
轻轻刮去，接种于四种增殖培养基中，每处理接 4瓶，
每瓶接种6个，置于(26±2)℃，光照14 h/d，光强2000 lx
下培养，45天后调查其增殖情况。
1.3.2 不同激素配比对增殖及分化的影响 取生长健
壮、大小均匀的原球茎接种到ＫＣ基本培养基，添加
2%蔗糖，0.8%琼脂，pH值为5.4±0.1。为了探讨原球茎
的增殖分化情况，设计了9种激素处理：
A1，6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;
A2，6-BA1.0 mg/L+NAA 0.１mg/L;
A3，6-BA2.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L;
A4，6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.2 mg/L;
A5，6-BA1.0 mg/L+NAA0.2mg/L;
A6，6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L;
A7，6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L;
A8，6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L;
A9，6-BA2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L。
每个处理接4瓶，每瓶接种5个原球茎。
1.3.3 不同添加物及其浓度对增殖的影响 试验采用
MS为基本培养基，添加 2%蔗糖，0.8%琼脂，pH值为
5.4~5.6。培养基中分别添加不同浓度的椰汁与香蕉
计，每个处理三瓶，每瓶接种 5个长势良好，大小均匀
的原球茎。置于(26±2)℃，光照14 h/d，光强2000 lx下
培养。60天后调查其增殖分化情况。
1.3.4 结果统计
原球茎增殖倍数=新长出原球茎数/接种原球茎
数 …………………………………………………… (1)
原球茎分化率=分化外植体数/接种外植体数×
100% ………………………………………………… (2)
每个原球茎分化数=分化芽总数/接种外植体数
……………………………………………………… (3)
表1 接种45天后原球茎的增殖情况统计表
不同培养基
W培养基
KC培养基
MS培养基
VW培养基
接种原球茎数/个
24
24
24
24
增殖原球茎数/个
32
95
29
83
增值倍数
1.33
3.96
1.21
3.46
死亡率/﹪
—
0.42
—
—
2 结果与分析
2.1 不同培养基对原球茎增殖的影响
4种培养基中原球茎增殖结果见表1。
由表 1可明显看出，培养基种类对杂交兰原球茎
影响较为明显，其中KC培养基效果最好，增殖倍数高
达3.96，其次是VW培养基，而W与MS培养基对增殖
影响效果不明显。
2.2 不同激素配比对原球茎增殖与分化的影响
外植体接种到不同处理的培养基中 20d后，可
见外植体增多变大，有许多小芽出现。45天后，各
培养基均出现丛生芽。统计新增殖原球茎总数，并
计算增值倍数见表 2和表 3；分化出芽总数和分化率
见表 4。
9种培养基中原球茎增殖结果分析见表 3。F值
检验表明F检验表明，6-BA浓度对杂交兰原球茎增殖
的影响不大，而NAA浓度对原球茎增殖的影响都极显
著(P<0.01)。NAA浓度为0.2 mg/L时原球茎增殖效果
为最佳；采用最小显著差数法(LSD法)对9种培养基进
行多重比较，发现原球茎增殖效果最好的处理为A4
号，其次为A5号，再次为A9号、A6号。
9种培养基中原球茎分化情况经方差分析表明，
单因素间对分化影响不明显，而两者之间的配比对分
化影响较为明显P值为0.0031。在各处理中：A9和A1
的芽分化率显著高于其他试验组，即 6-BA和NAA的
浓度配比为4~5∶1时，分化效果最好。但A9处理平均
每外植体分化数最高为 1.8，显著高于A1，故A9处理
为最佳芽分化培养基，即ＫＣ+6-BA2.0 mg/L+ NAA
0.5 mg/L最适于杂交兰原球茎的分化。
·· 328
2.3不同添加物及其浓度对增殖的影响
接种60天后对增殖情况进行统计，不同添加物处
理对原球茎增殖的结果见表5。
经方差分析，添加物的种类对原球茎增殖影响不
表2 接种45天后原球茎的增殖情况统计表
处理
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
因素/（mg/L）
NAA
0.1
0.1
0.1
0.2
0.2
0.2
0.5
0.5
0.5
6-BA
0.5
1
2
0.5
1
2
0.5
1
2
接种原球茎数/个
20
20
20
20
20
20
20
20
20
新增殖原球茎数/个
79
81
95
159
118
102
99
101
104
增值倍数
3.95B
4.05B
4.75B
7.95A
5.90AB
5.10B
4.95B
5.05B
5.20B
变异来源
A因素间
B因素间
AxB
误差
总变异
平方和
32.1898
3.7206
19.1132
38.1267
95.1842
自由度
2
2
4
29
37
均方
15.7589
1.8424
4.8333
1.3969
-
F值
11.7035
1.4007
3.4221
-
-
p值
0.0003
0.3000
0.0255
-
-
表3 原球茎增殖方差分析表
处理
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
出芽原球茎数/个
17
12
13
15
11
9
15
10
18
出芽总数/个
26
16
22
24
13
10
23
21
36
平均每个原球茎分化数/个
1.30
0.80
1.10
1.20
0.60
0.45
1.15
1.05
1.80
分化率
0.85b
0.60d
0.65d
0.75c
0.55d
0.45e
0.75f
0.50c
0.90a
表4 原球茎分化情况统计表
注：不同小写字母表示差异在0.0５水平上显著。
处理
B1
B2
B3
B4
B5
B6
培养基成分
MS+椰汁15mL/L
MS+椰汁30mL/L
MS+椰汁45mL/L
MS+香蕉汁15mL/L
MS+香蕉汁30mL/L
MS+香蕉汁45mL/L
接种原球茎个数/个
15
15
15
15
15
15
新增殖原球茎总数/个
35
26
15
43
27
17
增殖倍数
2.33ab
1.67bc
1.00c
2.87a
1.93bc
1.13c
表5 不同添加物及浓度对增殖的影响
注：不同小写字母表示差异在0.05水平显著。
注：不同大写字母表示差异在0.01水平上显著。
王丰妍等：大花蕙兰与春剑杂交原球茎增殖及分化研究 ·· 329
中国农学通报 http://www.casb.org.cn
大，香蕉汁对增殖的影响稍好于香蕉汁。而相比之下，
添加物的浓度对原球茎的增殖影响却尤为显著(P<
0.01)，随添加物浓度的增加，原球茎增殖倍数下降。
添加物浓度为 15 ml/L时增殖效果最为明显，故B4处
理为增殖最佳培养基，即MS+香蕉汁 15 ml/L最适宜
杂交兰原球茎的增殖。
3 讨论
（1）杂交是兰科植物育种最重要的方式，国外对
兰属附生兰种间杂交的研究已有上百年的历史，培育
出了数千个新品种，但对附生兰与国兰种间杂交的研
究甚少[4-6]。近年来报道了中国兰花远缘杂交及杂交种
子萌发的研究[7]；朱根发等对墨兰与大花蕙兰种间杂
种原球茎的诱导及增殖也进行了研究，发现NH4NO3、
KH2PO4和 6-BA对杂交种原球茎增殖的影响明显 [8]。
但对大花蕙兰与春剑原球茎研究的报道甚少。
（2）在广泛开展兰花育种工作中，我们应对兰花
的生物学特性及遗传规律进行深入研究，相信在不久
的将来，中国必将培育出更多经国际品种登陆的、具有
自主知识产权的兰花新品种[9-10]。
4 结论
（1）该试验以杂交兰种子诱导的原球茎为外植
体，对杂交兰原球茎的增殖及其分化进行了研究。试
验结果表明，杂交兰原球茎增殖培养基选用KC+糖
20 g/L+琼脂 6 g/L，培养一个月，增殖倍数可达 3.96以
上；6-BA浓度对原球茎增殖的影响不大，而NAA浓度
对原球茎增殖的影响极为显著；6-BA和NAA的浓度
配比为4~5∶1时，分化率高达0.85以上；在培养基中添
加5 mL/L香蕉汁最有利于杂交兰原球茎的增殖。
（2）通过对杂交原球茎增值与分化进行基础性研
究，为以后新品种的选育和优化研究及工厂化生产奠
定了理论基础。
参考文献
[1] 朱根发.红花系大花蕙兰的杂交亲本及育种进展[J].中国花卉园
艺,2003(8):20-22.
[2] 徐公明.春剑[J].花木盆景(花卉园艺版),2004,(03).
[3] 陈心启,吉占和.中国兰花全书[M].北京:中国林业出版社,2003:1.
[4] 李枝林,王玉英,王卜琼,等.兰花远缘杂交育种技术研究[J].中国野
生植物资源,2007,(04).
[5] 杨玉珍,孙天洲,孙廷,雷呈.大花蕙兰组织培养和快速繁殖技术研
究[J]北京林业大学学报,2002,(02).
[6] 梁芳,崔波,马杰,等.杂交兰原球茎增殖及分化研究[J].安徽农业科
学,2008,(13).
[7] 张志胜,何琼英,傅雪琳,等.中国兰花远缘杂交及杂交种子萌发的
研究[J],华南农业大学学报,2001(2):63-65.
[8] 朱根发,陈明莉,罗智伟,等.墨兰与大花蕙兰种间杂种原球茎的诱
导及增殖研究[J].园艺学报,2004,31(5):688-690.
[9] 翔实.兰花欣赏的趋势[J].生命世界,1988,(06).
[10] 张孟锦,杨志娟,许大熊等.兰花育种途径与进展[J].广东农业科学,
2008,(2):120-123.
·· 330