全 文 ：收稿日期:2014-10-02
基金项目:江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ13601);江西中医药大学校级课题(2012ZＲ034) ;江西省研究生创新专项资金(YC2013-
S239) ;江西中医药大学校级研究生创新专项资金(JZYC12B12)
作者简介:叶耀辉(1973-)，男，硕士，副教授，主要从事中药资源与品质评价研究;Tel:0791-87118716，E-mail:Yeyaohui791@ 139. com。
* 通讯作者:陈丽华，Tel:0791-87118614，E-mail:chlly98@ 163. com。
不同生长年限野生和移栽彭泽贝母中 3 个生物碱含量的比较
叶耀辉1，应亚宾1，陈丽华2* ，温思菁2，张恩慧1，王 婷1
(江西中医药大学 1. 药学院;2. 现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004)
摘要 目的:建立 HPLC-ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛 3 个生物碱类成分含量的方
法，并测定不同生长年限野生和移栽品种 3 个化合物的含量，观察其动态变化规律。方法:采用 Hypersil ODS2 色谱
柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈(A)-0. 03%二乙胺(B)梯度洗脱，流速:1. 0 mL /min，漂移管温度:99. 5
℃，载气流速:2. 2 L /min。结果:建立了 HPLC-ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛 3 个生物碱
类成分含量的方法，3 个成分均达到基线分离，线性关系良好(r ＞ 0. 9991);平均加样回收率(n = 6)分别为 96. 6%、
98. 9%、96. 2%。野生彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛的含量较移栽的略高，在一定年限内，随着生长年限
的增加，这 3 个生物碱的含量逐渐增大。结论:该方法操作简单、快速、重复性好，为彭泽贝母药材的质量控制奠定
了基础。3 个生物碱总含量随生长年限的不同而异，野生 4 ～ 5 年生达到最高。
关键词 彭泽贝母;贝母素甲;贝母素乙;贝母辛;HPLC-ELSD;质量控制
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)06-1161-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 06. 012
彭泽贝母为百合科植物天目贝母 Fritillaria mo-
nantha Migo. 的干燥鳞茎，主产于江西省彭泽、湖口
等县，作为川贝母使用已有多年历史，是贝母属植物
在江西的新分布〔1〕。彭泽贝母具有清热润肺、化痰
止咳的功效，用于治疗痰热咳嗽、痰多胸闷、气管炎
和慢性支气管炎等常见呼吸道疾病。已从彭泽贝母
中分离并确定结构的有生物碱类、萜类和甾类等化
合物〔2〕。现代药理研究表明，贝母生物碱部分具有
镇喘、祛痰、平喘之药效。贝母素甲、贝母素乙和贝
母辛是从彭泽贝母中分离出来的 3 个含量较高的生
物碱类有效成分〔3，4〕。彭泽贝母中贝母素甲通过阻
断气管平滑肌的 M受体和拮抗内钙释放，从而抑制
乙酰胆碱引起的平滑肌收缩，达到舒张气管平滑肌，
实现平喘的作用〔5〕。贝母素乙及其衍生物具有较
好的镇咳、祛痰、平喘作用〔6〕。贝母辛通过作用于
M受体、兴奋 β受体和拮抗内钙释放，促进生成和释
放一氧化氮从而舒张气管平滑肌，实现平喘的作
用〔7〕。《江西省中药饮片炮制规范》(2008 年版)已
收录彭泽贝母的来源、性味归经、功能主治、用法用
量等〔8〕，《江西省中药材标准》(1996 年版)并未收
载彭泽贝母中药材质量标准。本文建立 HPLC-
ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝
母辛 3 个生物碱类成分含量的方法，为全面合理的
控制彭泽贝母药材质量奠定了基础，并比较不同生
长年限野生和移栽的彭泽贝母中这 3 个生物碱的含
量，以利于该药材的合理采收和利用。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Waters 2695 高效液相色谱仪(美国
Waters公司);Alltech 2000 ELSD 检测器;Empower
色谱工作站。Sartorious BT 255 型十万分之一电子
分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司);
KQ-5200B超声波清洗器(昆山超声仪器有限公
司)。
1. 2 材料 不同生长年限野生和移栽的彭泽贝母
药材样品采自江西省彭泽县浩山乡，经江西中医药
大学药学院曹岚副教授鉴定为天目贝母 Fritillaria
monantha Migo. 的鳞茎。
贝母素甲(批号:110750-201110，质量分数为
98. 3%)、贝母素乙(批号:110751-201110，质量分数
为 99. 9%)对照品购自中国食品药品检定研究院;
贝母辛对照品为本实验室自制，质量分数为 98. 0%。
乙腈为色谱纯(TEDIA公司)，水为杭州娃哈哈
纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取贝母素甲对照
品 9. 30 mg、贝母素乙对照品 10. 20 mg、贝母辛对照
品 11. 40 mg分别置 10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定
容，摇匀，得对照品储备液。精密量取对照品储备液
各 1 mL置于同一 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释并定
容，摇匀，配成贝母素甲、贝母素乙、贝母辛浓度分别
为 0. 093、0. 102、0. 114 mg /mL的混合对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备 取彭泽贝母粉末(过四
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号筛)约 1. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入 2
mL氨水浸润 1 h，精密加入三氯甲烷-甲醇(4∶ 1)溶
液 20 mL，超声(300 W，25 kHz)提取 45 min，放至室
温后，滤过，滤渣用甲醇洗涤，合并滤液及洗涤液于
60 ℃水浴上蒸干，残渣以甲醇溶解，定容至 5 mL，摇
匀，即得。
2. 3 色谱条件 采用 Alite Hypersil ODS2 色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);柱温:30 ℃;流动相:乙
腈(A)-0. 03%二乙胺(B)，梯度洗脱(0 ～ 15 min，
30% ～ 45% A;15 ～ 30 min，45% ～ 60% A;30 ～ 45
min，60% ～ 75% A);流速:1. 0 mL /min;漂移管温
度:99. 5 ℃;载气流速:2. 2 L /min;对照品进样量:
10 μL，样品进样量:20 μL。理论板数按贝母素甲计
算应不低于 3 000。在此条件下，3 个生物碱类成分
分离度良好，见图 1。
2. 4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液 5、
8、10、15、20 μL注入高效液相色谱仪测定。分别对
测得的峰面积与被测物质浓度取自然对数进行线性
回归，得到各成分的回归方程及线性范围。结果表
明，各对照品浓度在一定范围内与峰面积取自然对
图 1 混合对照品(A)和彭泽贝母药材(B)HPLC-ELSD图
1. 贝母辛 2. 贝母素甲 3. 贝母素乙
数后线性关系良好。结果见表 1。
2. 5 检测限和定量限测定 取混合对照品溶液，
用甲醇稀释至不同浓度进样，以 S /N = 3 和 10 分别
计算检测限和定量限，结果见表 1。
2. 6 精密度试验 取同一份彭泽贝母供试品溶
液，连续进样 6 次，测定贝母素甲、贝母素乙和贝母
辛的峰面积，并计算各成分峰面积的ＲSD值。结果
表 1 彭泽贝母中 3 个生物碱的线性关系考察及检测限、定量限
成分 回归方程 r 线性范围 /(mg /mL) LOD/(μg /mL) LOQ/(μg /mL)
贝母素甲 Y = 1. 1528X + 8. 7903 0. 9994 0. 0465 ～ 0. 1860 0. 1860 0. 3721
贝母素乙 Y = 1. 2006X + 8. 7094 0. 9992 0. 0510 ～ 0. 2040 0. 2041 0. 4082
贝母素辛 Y = 1. 1982X + 9. 4026 0. 9991 0. 0228 ～ 0. 1140 0. 1142 0. 2284
贝母素甲、贝母素乙和贝母辛的 ＲSD 分别为
1. 80%、1. 57%、1. 35%，表明仪器精密度较好。
2. 7 重复性试验 取同一批彭泽贝母药材粉末
(过四号筛)约 1. 0 g，精密称定，按“2. 2”项下方法
平行制备 6 份供试品溶液，分别进样，测定峰面积，
计算各成分含量及其 ＲSD。结果贝母素甲、贝母素
乙和贝母辛平均含量分别为 0. 043%、0. 095%、
0. 022%，ＲSD分别为 0. 54%、1. 6%、1. 7%，表明方
法重复性较好。
2. 8 稳定性试验 取同一份彭泽贝母供试品溶
液，分别于溶液制备后的 0、4、8、12、18、24 h 进样，
测定各成分峰面积的 ＲSD值。结果贝母素甲、贝母
素乙和贝母辛峰面积的 ＲSD 分别为 1. 24%、
1. 38%、1. 87%，表明 24 h 内供试品溶液稳定性良
好。
2. 9 加样回收率试验 取已知含量的彭泽贝母粉
末(过四号筛)约 1. 0 g，精密称定，平行 6 份，加入
一定量的贝母素甲、贝母素乙和贝母辛对照品溶液，
挥干后，按“2. 2”项下方法制备供试品溶液，按
“2. 3”项下色谱条件进样测定并计算各成分的平均
加样回收率及 ＲSD 值。得贝母素甲平均加样回收
率为 96. 6%，ＲSD 为 3. 01%;贝母素乙平均加样回
收率为 98. 9%，ＲSD 为 2. 03%;贝母素辛平均加样
回收率为 96. 2%，ＲSD为 4. 03%。
2. 10 样品测定 取不同采收期的彭泽贝母药材
粉末(过四号筛)约 1. 0 g，精密称定，按“2. 2”项下
方法制备供试品溶液。在“2. 3”项色谱条件下进样
测定，并计算不同生长年限野生和移栽的彭泽贝母
样品中 3 个生物碱的含量。结果见表 2、3。
表 2 不同生长年限野生彭泽贝母样品中
3 个生物碱的含量(%，n =3)
生长年限 贝母素甲 贝母素乙 贝母素辛 总含量
2 年 0. 0270 0. 0399 0. 0134 0. 0803
3 年 0. 0323 0. 0483 0. 0163 0. 0969
4 年 0. 0616 0. 1041 0. 0240 0. 1897
5 年 0. 0488 0. 0766 0. 0351 0. 1605
6 年 0. 0423 0. 0747 0. 0212 0. 1382
3 讨论
3. 1 生物碱类化合物易溶于氯仿等极性较弱的溶
剂，2010年版中国药典浙贝母含量测定项下也采用
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表 3 不同生长年限移栽彭泽贝母样品中
3 个生物碱的含量(%，n =3)
生长年限 贝母素甲 贝母素乙 贝母素辛 总含量
2 年 0. 0156 0. 0350 0. 0171 0. 0677
3 年 0. 0292 0. 0385 0. 0180 0. 0857
4 年 0. 0364 0. 0405 0. 0189 0. 0958
5 年 0. 0452 0. 0583 0. 0349 0. 1384
6 年 0. 0418 0. 0487 0. 0204 0. 1109
了氯仿-甲醇作为提取溶剂。氯仿可以减少水溶性
杂质的溶出，而甲醇穿透性强，故在氯仿中加入醇类
作为穿透剂有利于生物碱类成分的溶出。本次实验
比较了不同提取溶剂系统、不同提取方法和提取时
间等因素对 3 个生物碱成分提取效果的影响，结果
氯仿-甲醇(4∶ 1)＞甲醇 ＞氯仿;回流法略高于超声
法，考虑到超声法简单，耗能低，对环境污染程度小，
故选用了用了超声法;确定提取时间以 45 min 最
好。最终确定提取方法为精密称取 1. 0 g 药材粉
末，加入氨水 2 mL浸润 1 h，加入氯仿-甲醇(4∶ 1)溶
剂 20 mL，超声提取 45 min。
3. 2 在分析方法的确定研究中发现流动相是否调
整 pH值对样品色谱行为影响较大。研究结果表
明，在流动相中加入 0. 03%二乙胺可使峰形明显改
善，且二乙胺更容易在雾化室雾化，减少了流动相在
雾化室的残留，有效的降低了检测器带来的噪音。3
种生物碱成分保留时间合理，与邻近物质色谱峰分
离效果好(Ｒ≥1. 5)。
3. 3 在所测的 3 个生物碱成分中，贝母素乙在彭
泽贝母药材中含量最高，贝母素甲次之，其含量均在
野生品种 4 年生中达最大值。贝母辛含量最低，其
含量最大值出现在野生品种 5 年生。就 3 个生物碱
总量而言，其最大值出现在野生品种 4 年生。从整
体变化趋势分析，野生彭泽贝母中贝母素甲、贝母素
乙、贝母辛的含量较移栽的略高;随着生长年限的增
加，这 3 个生物碱的含量逐渐增大，生长年限达到 4
～ 5 年时出现最大值，之后生物碱的含量稍微降低
并趋于稳定。由上述结果可知，若以 3 个生物碱总
含量为指标确定彭泽贝母药材采收时间，则生长 4
～ 5 年较为适宜。
贝母止咳平喘作用效果明显，3 个生物碱成分
均为其药理活性成分。从野生和移栽品种 3 个生物
碱总含量来看，移栽品种与野生品种相差不大。近
年来由于药农销售渠道的问题导致彭泽贝母移栽品
种的规模一直较小。彭泽贝母已被江西道地药材库
收录，所以合理引导移栽品种的规模化种植与销售
渠道的扩展，显得尤为重要。
参 考 文 献
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