全 文 ：Research & Information on Traditional Chinese Medicine
第7卷 第12期
2005年12月
Vol.7,NO.12
Dec. 2005
R & I on TCM / 13
高速逆流色谱法分离纯化浙贝母
中贝母素甲，贝母素乙*
金艳1，沈平孃2，张继全2，卓超1，徐超1，俞雁1
（1.华东理工大学，上海　200237；2.国家中药制药工程研究中心，上海　201203）
[摘要 ] 目的：采用高速逆流色谱技术分离提纯浙贝母中的活性成分贝母素甲，贝母素乙。方法：采用氯仿-
无水乙醇-0.2mol·L -1盐酸(4∶3∶2)系统，上相为固定相，下相为流动相。主机转速为 800r·min -1，流动相流速
为 1 . 2m L· mi n -1。结果：一次进样分离得到贝母素甲、贝母素乙，经高效液相（HPL C）分析纯度，经M S，
1HN MR 鉴定结构。结论：利用本实验条件可从浙贝母中分离制备贝母素甲，贝母素乙，两者纯度分别达到：
97.5%，94.5%。
[关键词 ] 高速逆流色谱；浙贝母；贝母素甲；贝母素乙
浙贝母（Bulbus Fritillariae Thunbergii）为百合
科植物浙贝母 Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎，
味苦，性寒，能清热散结，化痰止咳，可用于风
热犯肺，痰火咳嗽，肺痈，乳痈，瘰疬，疮毒。
浙贝母主要活性成分为生物碱及苷，其中贝母素
甲、贝母素乙为 2005年版《中国药典》中浙贝母
的质量控制成分，贝母素甲的盐酸盐在一定浓度
下，对耐药金黄色葡萄球菌具有较强的逆转作用，
主要通过抑制细菌细胞膜上的主动外排泵来发挥作用
[1] ；且近年来研究表明，贝母素乙具有逆转肿瘤细
胞多药耐药活性[2]。浙贝母的单体生物碱的分离主
要采用柱层析和高效液相色谱。这些方法吸附损耗
大，收率较低。
高速逆流色谱技术（High Speed Countercurrentt
Chromatography，HSCCC）是 20世纪 90年代发展
起来的一种新型液－液色谱分离方法。与传统液相
色谱法相比，HSCCC方法不使用固相载体，因此
避免了有效成分被固相载体不可逆吸附和峰形拖尾等
缺点；样品粗提物可直接进样分离，可以高效、快
速和大量制备分离，分离纯化与制备可同步完成，
同时具有有机溶剂消耗少、无损失、无污染等优
点。目前已经越来越多用于天然产物的有效成分分
离纯化[3]。我们在研究从浙贝母中分离纯化贝母素
甲和贝母素乙的实验过程中采用了高速逆流色谱技
术，贝母素甲和贝母素乙的化学结构见图 1。
1　材料与方法
1.1 原料与试剂 浙贝母由上海市康桥饮片公司提
供，产地：浙江磐安批号：040911-1。对照品贝
母素甲(批号：110750-200305)，贝母素乙（批号：
110751-200303）购于中国药品与生物制品检定所。
高速逆流色谱中所采用的氯仿、无水乙醇、盐
酸均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），高
效液相色谱所采用的乙腈为色谱纯（M E RC K 公
司），三乙胺为分析纯（国药集团化学试剂有限公
司），水为超纯水（自备）。
1.2 仪器设备 HSCCC-TBE300A（深圳同田生化技
术有限公司），恒温循环器（HX-1 05 0，北京博
医康实验仪器有限公司），AKTA purifier系统（GE
healthcare 公司），蒸发光散射检测器（Alltech
ELSD 2000ES），高效液相色谱（Agilen t 1100
s e r i e s），蒸发光散射检测器（A l l t e c h E L S D
2 0 0 0 E S）。
2 方法
2.1 样品预处理 取浙贝母粉（过 60目筛）20g，
加入 20mL氨水浸润 1h后，加入氯仿-甲醇（4:1）
混合溶液 100mL，置于 80℃水浴加热 2h，过滤，
贝母素甲 贝母素乙
图1　贝母素甲、贝母素乙的化学结构
*上海市科委基金项目(03DZ19536)
DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2005.12.006
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将滤液蒸干，粗提物备用。
2.2 HSCCC-ELSD法分离 配制氯仿-无水乙醇-
0.2 mol·L-1盐酸（4:3:2）的溶剂系统，充分振摇，
静置过夜分层。分离上相（作固定相）和下相（作
流动相）。
确定HSCCC参数：主机转速为 800r·min-1，流
动相流速为 1.2mL·min-1，固定相保留值为 0.58。取
上述粗提物 100mg，以 20mL下相混合溶液充分溶
解，进样 10mL。利用 ELSD检测被分离组分，采
用 TLC技术确定目标组分。
2.3 HPLC-ELSD测定纯度 确定HPLC-ELSD条件为色
谱柱：Aglient Exlipse XBD C
18
柱（4.6mm×150mm，
5ìm），流动相：乙腈-水-三乙胺（70:30:0.3），
流速：1.0mL·min-1，柱温 30℃，进样量 10ìL，ELSD
参数：漂移管温度 90℃，压缩空气流速 2.4L·min-1。
分别对分离得到的贝母素甲和贝母素乙进行纯度鉴定。
3 结果与讨论
3.1 HSCCC-ELSD图谱 由于贝母素甲及贝母素乙在
紫外下没有吸收或是吸收很弱，故本实验采用ELSD
作为检测器。浙贝母粗提物的HSCCC-ELSD图谱如
图 2所示。经 HSCCC洗脱，得到5个洗脱峰，洗
脱总时间为 240min。
采用TLC做初步鉴定[展开剂：乙酸乙酯-甲醇-
水（17:2:1），显色条件：碘熏。]组分 3 与贝母素
乙标准品在相同位置显示相同斑点，组分 5与贝母
素甲标准品相同位置显示相同斑点。
3.2 HPLC分析 组分 3及组分 5分别蒸干后，取适
量，甲醇溶解定容。
3.2.1 贝母素甲纯度测定 按照HPLC的色谱条件，分
图2 浙贝母粗提物HSCCC-ELSD图谱
别进 10ìL贝母素甲对照品和供试品溶液。根据峰面
积采用外标法定量，HPLC结果如图 3所示。根据
外标两点法对数方程计算得贝母素甲的纯度为 97.5%。
3.2.2 贝母素乙纯度测定 按照HPLC的色谱条件，分
3 .3 .1 E I-MS 鉴定 贝母素甲：MS m/ z：43 1
（M +），4 1 2，3 8 6，1 5 4，1 2 1（1 0 0 %），见
图 5。贝母素乙：M S m / z：4 2 9（M +），4 1 4，
38 4，3 72，15 4，12 4，11 2（10 0%），见图 6。
图4 HSCCC所得贝母素乙的HPLC色谱图
图5 HSCCC所得贝母素甲的MS图谱
图6 HSCCC所得贝母素甲的MS图谱
图3 HSCCC所得贝母素甲的HPLC色谱图
别进10ìL贝母素乙对照品和供试品溶液。根据峰面积
采用外标法定量。HPLC结果如图 4所示。根据外标
两点法对数方程计算得贝母素甲的纯度为 94.5%。
3.3 结构鉴定
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3.3.2 1HNRM鉴定 贝母素甲： 1HNRM（CDCl
3
）ä
（ppm）：0.82（3H，s ，19-CH
3
），1.05（3H，
s，21-CH
3
），1 . 10（3H，d，27-CH
3
），3 .4 4
（1 H，m，6-C H），3 . 6 0（1 H，m，3-C H），
见图 7。
贝母素乙： 1HNRM（CDCl
3
）ä（ppm）：0.78
（3H，s，19-CH
3
），1 .0 2（3H，s，21-CH
3
），
1 . 0 8（3 H，d，2 7-C H
3
），3 . 5 8（1 H，m，3-
C H），见图 8。
以上贝母素甲和贝母素乙的MS，1HNRM数据
同文献[4 ]、[5 ]报道数据一致。
4 结论
高速逆流色谱是在20世纪90年代发展起来的一
个新型的色谱分离方法，用高速逆流色谱方法分离
提纯浙贝母中贝母素甲和贝母素乙未见文献报道，
本文采用此技术，一次进柱过程即可将分离纯化和
制备完成，得到有效成分贝母素甲和贝母素乙，且
纯度均高于 94％，此方法可以用于浙贝母单体生物
碱的分离制备。
参考文献
[1] 李仝，胡凯文，陈信义，等.浙贝母对呼吸系统耐药金黄
色葡萄球菌逆转作用的临床研究[J].北京中医药大学学
报，2001，24(5) ：51-52.
[2] 胡凯文，陈信义．中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外筛
选研究[J]．中国医药学报，1998，13(2) ：10-11．
[3] 袁黎明，傅若农，张天佑.高速逆流色谱在植物有效成分
分离中的应用[J].药物分析杂志，1998，18(1) ：60-65.
[4] 张建兴，马广恩，劳爱娜，等.浙贝母化学成分研究[J].
药学学报，1991，26(3) ：231-233.
[5] K.Kanwko, M.Tanaka, K.Haruki,et al.Isobaimonidine,
a new Fritillaria Alkaloid from the Aerial Part of
Fritillaria verticillata[J].Chem. Pharm. Bull.,
1980, 28(4) :1345-1346.
(收稿日期 2005-10-24)
Separation and Purification of peimine and peiminine from Bulbus Fritillariae Thunbergi by High Speed
Countercurrent Chromatography
Jin Yan 1, Pingniang Shen2, Jiquan Zhang2,Zhuo Chao1, Xu Chao 1,Yu Yan1
(1.East China University of Science and Technology, Shanghai,200237,China;
2. National Engineering Research Center for Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China)
[Abstract] Object: High Speed Countercurrent chromatography was applied to separation and purification of peimine
and peiminine from Bulbus Fritillariae Thunbergi. Method: The solvent system used for HSCCC was chloroform-
ethanol-0.2mol·L-1 hydrochloric acid(V/V, 4∶3∶2),the organic layer was used as stationary phase,the aqueous
phase was used as mobile phase .The rotational speed of main engine was 800 r·min-1, the flow of mobile phase was
1.2 mL·min-1. Result: The purified peimine and peiminine were dentified and analyzed by HPLC,1HNRM,MS.
Coclusion: Under this condition peimine and peiminine can be separated and purified from Bulbus Fritillariae Thunbergi.
purities were respectively 97.5% and 94.5%.
[Key words] HSCCC; Bulbus Fritillariae Thunbergi; peimine; peiminine
图7 HSCCC所得贝母素甲的1HNRM图
图8 HSCCC所得贝母素乙的1HNRM图