全 文 ：巾 国 药 科 大 学 学 报
1 2 0 J o t : r n a l o f C l i n a P h . r m a
·
e u t i o a l U n i v e r : i t y 2 95 7 , 1 8 ( 2 ) : 12 0~ 1 2 3
万
中 药 贝 母 类 研 究
皿 .八种贝母属植物新鲜鳞茎同工酶谱分析
何执中 赵刘欧 ’ 李 萍“ 余国奠. 徐国钧 .
生物化学教研室 . * 生药学教研室
近年来 , 同工酶分析己广泛用于作物品种资源调查 , 育种亲本的选择 , 杂交子代的测定
及植物阶段发育研究等各个领域 , 在指导生产方面发挥了很大的作用 。 此外同工酶分析对研
究不同种类植物的亲缘关系也有重要意义 ` 一 “ ’ 。
本文试图从对贝母属植物的同工酶谱的研究中 , 探讨该属植物种间生理生化特征的相关
性和差异性 , 分析基源植物之间的亲缘关系 , 为新药用植物资源的药材商品归类和品质评价
提供依据 。 本文中八种贝母属植物 , 按传统销售习惯 , 太白贝母 ( F . t ia P盯 en 石 : P . Y . L i)
属“ 川贝” 类 , 浙 贝一母 ( F . t h朋 ber ig i M iq . ) (其中包括江苏产 “ 苏贝母 ” )和东阳贝母 ( F 。
th “ n b e r 夕` 1 v a r . 。 h e左` a n g e n s` 5 H s i a o e t K . C . H s i a ) 属 “ 浙 贝 ” 类 。 其它五种为近年来
人工栽培发展的或近期发表的新种 : 湖北贝母 ( F . h o P e n e n s ` 5 H s i a o e t K . C . H s i a ) , 蒲
沂贝母 ( F . p “ q i e n s i s G . D . Y e t G . Y . C h e n ) , 鄂北贝母 ( F . e b e i e n s i s G . D . Y u e t G . Q .
J i )
, 紫花鄂北贝母 ( F . e b e f e n s f s v a r . P o r P u r e a G . D . Y u e t P . L i )和漳县贝母 ( F . P r之 -
e 田 a l s k i` M a x im . e x B a t a l . e v . Z h a n g x i a n ) [ 4 { 。
游
材料和方法 附裹 供试贝母月植 . 断鲜峭鉴标本
编号} 植物名称
.
|…|1.|||.|1.1 ||1Zc。745689102一 、 材料 见附表 。二 、 样品制备 取健康无病的新鲜鳞茎
一至数个 , 称重 , 于 4 “ C冰簌冷藏固定 Z h后 ,
在预冷过的乳钵中加 4 倍水充分研磨 , 制成
匀浆 。 o “ C下离心 3 o m i n ( 4 0 0 o r加 i n ) , 取
上清液加 40 %蔗糖溶掖等体积混匀 , 4 “ C冰
箱中保存 , 当天完成实验 。
三 、 架丙始睡胺凝胶板制备 按李清铣
法 “ ,先配制下列溶液 : 三经甲基氨基甲烷一柠
糠酸缓冲液 , 丙烯酞胺单体溶液 , 甲叉双丙
烯酞胺溶液 , 乙二胺四乙酸二钠溶液 , N ,
N
,
N 产 , N 尸一四甲基乙二胺原液与过 硫 酸
钱溶液 。 制备凝胶板时取以上六种溶液依次
湖北贝母
蒲沂贝母
蒲沂贝母
浙贝母
苏贝母
东阳贝母
鄂北贝母
紫花鄂北贝母
太白贝母
漳县贝母
湖北贝母
蒲沂贝母
湖北建始
湖北蒲沂
湖北蒲沂
湖北蒲折
江苏傈阳
浙江东阳
湖北节州
湖北陡州
陕西太白石沟山
甘肃漳县
湖北利川
湖北蒲沂
源
(栽培 )
(野生 )
(栽培 ) 薄
(栽培 )
(野生 )
(栽培 )
(栽培 )
(栽培 )
吸野生 )
(栽培 )
(栽培 )
(栽培 )
, 此鳞茎为开花期所采 , 其余为倒苗后的休眠期所采
1 9 8 6年 6 月 1 4日收稿 . 2 98 6届 毕业生 李
.忽期 中 卜谊 药 科 大 孕 学 报 1 21
以 9 . 8 : 7 . 5 : 6 。 7 : 0 . 7 5 : 0 . 50 : 0 . 5 2的比例混合 , 抽气 3 m in , 立即灌制垂直凝胶板 , 用注射器
轻轻注水封顶 , 置 2 5℃温箱中聚合 30 m in 。 凝胶聚合后用吸水纸吸去胶面上的水 。
四 、 电泳 每份样品中各取 50 川 点样 , 并加入少量嗅酚兰溶液作前沿指示剂 。 控制每份
样品的电泳电流为 Z rn A , 并按先小后大原则加以调节 。 佼电泳前缘行至凝胶下端 1~ Z c m处 ,
切断电源 , 立即出胶进行染色显示 。
五 、 集色
1
。 过氧化物酶显色 将联苯胺 2 9 溶于冰酷酸 18 m l , }, , 11于加水 7 2 m l , 存于暗处 。 11笛用
前将上述联苯胺溶液稀释 20 倍 , 并加少量过氧化氢溶液即可川 一 J“ 凝胶中的过氧化物酶区带显
色 。
2
。醋酶显色 取醋酸 a 一茶醋 0 . 2 9 , 溶于 3 m l 丙酮 中 , 加八 。 . l m ol / L , p H 6 . 4 的磷酸缓
冲液 2 0 m l , 再加坚牢兰 ( F a s t b l u e ) B盐 0 . 2 9 , 完全溶解后便 ,:丁使川 ! 二凝胶 , 1西旨酶区带的 键
色 。 凝胶呈色后用水充分冲洗可保存数月 。
3
。 可溶性蛋白质显色 电泳后的凝胶在 。 . 1沁考马斯兰 ( C 。 。 m a s s i e b l u e ) G盐溶液染色
15 nI in 。 用水洗去染料液 , 再用 7 %乙酸脱色至背景无色为止 。
舞
、 结 ` ’ 果
吞
一 、 . 醉同工醉谁的比较分析 如图 1
所示 , 可按主区带的差异将这八种贝母分为
三个类型: ( 1 )具有慢泳主区带的 9 号与 10
号样品 , 即太白贝母和漳县贝母 。 ( 2 )具有
最快泳主区带的 1号和 n 号样品 , 即建始的
湖北贝母和利川的湖北贝母 。 ( 3 )其余样品
都具有一条次快泳的主区带 。 其中 7 号鄂北
贝母还呈现出一条与太白贝母 , 漳县贝母的
主区带位里相同的深色区带。 由此可见 , 贝
母属植物的丽醉同工酶谱种间差异显著 , 而
津县贝母与太白贝母间差异较小 , 不同生长
地的同种栽培植物差异较小 , 同种植物野生
与栽培品之间酶谱也不尽相同 。
二 、 可落性蛋白电泳日 , 比较分析 由
圈 2可见 , 各种贝母的蛋白电泳图谱差异显
若。 其中 9 号太白贝母 , 10 号漳县贝母和 8
也
号紫花哪北贝母的可溶性蛋白区带较少 , 且 图 1 贝母醋酶同工酶产
8号与 10 号的图谱相似 。 不同生长地湖北贝
母 ( 1 号与 n 号 )几乎无差异 。 野生蒲沂贝母 ( 2 号 )与栽培蒲沂贝母 ( 3 号 )间差异明显 , 但小
于种间差异 , 而处于花期的蒲沂贝母 ( 12 号 )比休眠期缺少一条主谱带 。 栽培的浙 贝母 ( 4号 )
与野生的苏贝母 ( 6 号 )间几乎无差异 , 其变种东阳贝母 ( 6 号 ) 与它们的趋异也很小 。 鄂北 贝
母 ( 7 号 )与其交种紫花那北贝母 ( 8 号 )的差别明显 。
加忿 中 国 药 科 大 学 学 报 18 卷1 5
三 、 过妞化 . 蔺同工醉谱比较分析 植物
过氧化物酶酶谱较之醋酶及可溶性蛋白图谱有
较大的变异性 . 。 但从图 3仍可看出 : 1 号与
11号这两种不同产地的湖北贝母的酶谱相似 。
4号浙贝母与 5号纤生的苏贝母酶谱相同 。 其
它变种间与种间差异均明显 。
内, ,月民肥户叮内 仁 , , . 内. . . .曰州目. . . . . . 口目
书
讨 论
1
. 不同种贝母属植物同工酶谱及可溶性蛋
白图谱显示了明显的差异性 。 这种差异大于不
同产地和不同生长环境对同种贝母植物造成的
图讲变异 。 表明了贝母属植物同工酶谱分析具
有一定的稳定性和可靠性 。
2
. 在三类图讲中 , 具有两类图谱相似或相
关的是浙 贝母 、 苏贝母和东阳贝母 。 为其分类
研究提供了依据 。
3
.三种图讲中有一种相似的是太白贝母和
津县贝母 (醋酶 ) 。 具有一种相关图谱的是漳县
贝母与鄂北贝母间 (蛋白 ) , 紫花哪北贝母与太
白贝母间 (醋酶 ) , 浙贝母与蒲沂贝母间 (醋
陇 ) , 湖北贝母与蒲沂贝母间 (蛋白 ) 等 ` 这些
相似性及相关性提示 : 漳县贝母与太白贝母亲
缘关系较近 , 而那北贝母和紫花鄂北贝母与这
两者的关系较其它几种受试贝母为近 。
4
。 鄂北贝母与紫花鄂北贝母虽为变种 , 只
是在蛋白图诺上有一定的相关性 。 它们之间的
关系不及东阳贝母与浙贝母之间密切 。
美 . 闷 贝母属 . 同工酶 , 电沐
图 2 贝母蛋白电材图清
璐
图 3 贝毋过试化物酶同 眨酶 :泣
寻
今 考 文 献
1
·
T r o “ s l o t P 姐 d S e o o n 」 G . 蒋淑玲译 . 国外遗传与育神 1 , 8 5 ; 13 0 ( 4 ) , 二1了
2
·
N o k a ` 。 h r a M . A k i h a m 八 K , Y a m a 卫 0 0 T . J a p o n J (三o n e t 19 7 5 , ( 5 0 ) , · ,了3
3
。 丁 毅 , 游 浚 , 徐乃瑜等 . 武汉植物学研究 I P83 , 1( 1) , 25
` · 余国其 , 李 萍 , 徐国钧等 · 南京药学院学报 1 , 8 5 : 16 (3 ) , 2 5
5
. 李清铣 , 朱 华 , 王彰明 · 植物病理学报 1 0 8 5 ; 1 5 ( 4 ) , 2 1 7
6
. 杨太兴 , 曾孟潜 · 植物生理学报 198 一场 10 (1 ) ’ 声
奋
2 期 中 闰 药 科 大 学 学 报 12
趁
!S ZOYM ES ANALYSIS FO 8 S E P CI ES
FO F RIT ILL A RIA
H e 2 1 1` h o n g , , Z h a o Y i o u , , L i P i n g 月, Y u G u o d i a n a
a n d X u G u o j u n .
A b s t r a e t
E s t e r a s : i s o z y m e :
, p e r 、 ) x i d a : e i s o z y m e s a n d s o l u b l e p r o t e i n s o f s
s P e e i e s o f F r i t i l l
a r i a
。 Ie e t r o p h o r o s i s . T h o i r
L
.
w e r e a n a ly z e d b y m e a n s o f p o ly a e r了 l a m id e g e l
z y m o g r a r Tl s r e v c a l e d s o m e r e l a t i o n s a n d d i f f e r e n e e s
扣
a m o n g t il o m
.
T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t i n g e n o t y p e s F
.
P r z e w a 了: 人11
Z h a n g x i a n w a s e l o s e l y r e l a t e d t o F
.
t a i P a i e n s i s
,
w h i l e F
. e b e i e n s i s v a r
.
P u r e a a n d F
. e b e i e n s `5 e x h ib i t e d e e r t a i n r e l a t i o n s w i t li t h e m . F . th u n b e r 夕11
e h e k了a 件
e l o s e l y
g e n s
.
s , a n d F
.
t h u 陀b e r g j i ( i n e l u d i n g w i l d “ s u b e i m u ” ) s h o w e d t o b e
C V
。
户u r 一
V a f -
In O S t
r e l a t e d
.
F
.
h u P e h e n s i :
,
F
.
t h“ , b e r g i i a n d F . P u口i e n s i s w e r e f a i r l y
d 1f f e r e n t f r o m F
.
t a iP a ` e n s i: .
K e y w o r d s I s o z y m e e l
e e t r o p h o r e s i s
,
F r i r i l l “ r : u
1
.
D e p a r t m e n t o f B i o e h o m i s t r 了
2
。
S t “ d e n t o f 1 9 86
5
.
D
e p a r t m e n t o f P h
a r m a c o g n o s 少
琴
也