全 文 ：植物生理学报 , A吻 丹夕印勺 s勿佃拘口 S认纪。 19 8 , 24 ( 2) :加5 一 208
露花磷酸烯醇式丙酮酸梭化酶同功酶及其四级结构
唐 犁
(中国科学院上海植物生理研究所 , 上海 2X( X) 3 2 )
关键词 : 兼性景天科酸代谢植物 , 露花 ,磷酸
烯醇式丙酮酸竣化酶 ,酶的四级结构
学科分类号 : 切 1
PE P C 的多态性在许多植物 中都有报
告 。 在 C A M 植 物中 , 许多实验结果表明
PE CP 有 两 种 分 子 量 稍 有 不 同 的 亚 基
( H
o fl h e r 等 19 8 9 , N i
mo
等 19 8 6 , uM l e r 和
K lu d罗 19 83 , M u l e r 等 19 82 ) 。 近 年 来 ,
PE CP 的多 态性 在基因水 平 也 得 到证实
( Ch
o l e t 等 19 9 6 , C七11 ir g 等 19 9 5 ) 。 冰叶 日
中花 ( 月夕比e 刀访。 u 几￡阮刀 u切乙 c哪at u in uzn ) 中 ,
编码两个不同分子量 PE PC 多肤的基因已
被克隆 ( Cho le t 等 19 9 6 ) 。 但这两个 亚基
究竟是相互结合而成异二聚体 , 还是 以同
聚方式各 自缔合为两个同聚体酶目前尚有
不同观 点 。 有 报告在 有 的 CAM 植 物 中 ,
PE CP 的聚合度有昼夜的变化 ,且这种变化
引起 PE CP 昼夜调 节特性 的变 化 ( W U 和
Wed id gn 198 5 )
。 但是 在其它 的 以M 和 q
植物 中 ,人们发现是 PE邢 昼夜 / 光暗磷酸
化状态 的变化 引起 PE PC 调节特性 的改
变 。 而未发现有昼夜酶的聚合度变化 。
我们 以前报 告 过露 花 叶 片 中除 2 50
kD 的主要 PE CP 同功酶外 , 还有一个 30
kD 的低 丰度同功酶 (唐犁和施教耐 19 9 7 ) 。
在本文 中 , 我们证明这种 P EP C 的多态 性
不是 由于体外条件下蛋 白酶的水解作用引
起的 。 另外 , 我们发现盐胁迫前后 的露花
叶片中均存在两种分子量不 同的 P EP C 亚
基 : 10 k D 和 n o kD 的 亚基 。 进一 步 将
2 5 0 kD 和 30 kD 的 PE CP 同功酶分离 ,并
进行 SD S 电泳分析 发现 此两个同功酶分
别为 10 kD 和 1 or kD 亚基聚合成的同二
聚体 。 因此 , 在露花 叶片中 , 无 PE CP 异二
聚体存在 。 另外 , 我们检测 到露花叶片中
一个八聚体 PE P C 的存在 , 且其丰度无昼
夜变化 。
1 材 料 与 方 法
1
.
1 植物材料 露花的萌发 、 生长 、 盐胁迫 、 及取
样的方法与以前相同 (唐犁和施教耐 19 7 ) 。
1
.
2 粗酶液提取 按样品 :提取缓冲液 ( 1 : Z W /
v) 的 比 例研 磨样 品 。 提取 缓 冲液 : irT -s Q 10
彻加 F L ( p H 7 . 5 ) , E DT A~ aNZ 1 In n刃 l / L
,
2
一琉基乙
醇 7 . 4 !nt n o F L , 甘油 20 % , 可溶性 P VP I % , L 苹
果酸 1 0 n u 刀 o F L ,玩 u pe 西 n 10 1l l n 0 F L , c ll yn l朋 t iat n
or l
止岁而 , PM SF 1 m l n o L尸L 。 样品 的匀浆在 12 仪x〕
x g 离心 5 而 n ,取出上清液进行实验 。 用于大上
样量的电泳实验 的提取液还要经 巧 % PE G 以XX)
沉淀 ,然后复溶于小体积的提取缓冲液 。 以上操
作均在 4 ℃进行 。
1
.
3 P E P C 活力测定 按施教耐等 ( 1卯9) 的方
法进行 。
1
.
4 蛋白含最测定 按 B r a r】fo 攻 1等 ( 1卯6) 的方法
进行 。
1
.
5 P E P C 的同功酶分离 按唐犁和 施教耐
( 19 7 ) 的方法将 P EI 祀 纯化到 PS C L 4 B洗脱这一
步 。 然后洗脱的 PE P C 酶液上到 4% 一 20 % 的非变
性梯度胶 , 电泳胶经 P EI 祀 特异性染色 ( K五n l 等
1叨3) ,将两个条带 ( 30 kD 和 25 0 kD ) 切下 , 用 1
19 7
一的一25 收到 , 1卯 7一 n 一 接受 。
国家自然科学基金资助课题 。
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