全 文 ：348 植物生理学报 , 195 9 , 1 5 ( 4 ) : 3 45一35 3
城 ct 全 P勿君妒hy st’o 崛 ,’ca S扭介律
水分胁迫对露花叶片中PEP梭化酶活性及其调节特性的
影响
一`
陈景治 王岳浩 施教耐
(中国科学院 上海植物生理研究所 , 上海 2 0 0 0 32)
·提 要
水分胁迫期间露花叶片中P E P趁化酶的活力
随胁迫时间的延长明显增加 , 复水后P E P C 同工
酶的活力下降。 从露花叶片中分离到 3 个具有不
同动力学和物理学特性的 P E P C 同工酶 ( P C I , ’
P O I
,
.
P C 互 ) , 其中同工酶 P C I 只存在于水分
胁迫下露花叶片中 , 复水后消失。
这 `3 .个同工酶的尤功 (P E )P 值不相同 ; P c l
的 K 。 ( p E p ) 值介于 p e l 与 p C I 之 l’ed , 它在
P A G E 上的相对迁移率 ( R m ) 比 P C I 和 P C I
大 , 对效应剂 G 一6一P及 M al 的反应不敏感 , 分
子量为 p C I 之半 ; P C I 被 G 一6一 P 激活和被M a l
抑制的程度介于 P C I与 P C ! 之间 ,它在 P A G E
上的相对迁移率和分子量与 P C I 极相近 。
中只有一种 P E P C 。 施教耐等 ( 19 79) 在高
粱绿色叶片中分得 2 个 r E r 狡化酶的同工
酶 ; A m a g 、 s a ( 1 9 5 4 )从.K da l’g r e从 o n t 2’a n a , .
中分到 3 个 P E P C 同工酶 , · 本文报道在水
分胁迫下露花从 C 3 型向 C AM 型过渡过程
中 , 叶片中 r E P梭化酶酶活力水平及其调
节特性的变化 , 并从叶片中分离到 3 个具
有不 同动力学及物理学特性的 P E P C同工
酶 ( P C I , r C I , 尹C I ) , 其中P C I 只存
在于水分胁迫下的露花叶片中 , 在复水后`
消失 , 说明 P C I 是在 水分胁迫下新产生
的。
材 料 与 方 法
关健词 : 磷酸烯醇式丙酮酸狡化酶 , 磷酸烯醇式
丙酮酸矮化酶同工酶 , 水分胁迫 ,露花 ,景天科植
物酸代谢
P E P 毅化酶广泛存在于高等植物 、 微
生物和藻类中 , 是植物固定 CO : 的重要酶
之一 。 它具有从光合 CO : 固定到氮同化的
各种功能 , 在 C AM 植物的CO : 暗固定和苹
果酸的合成中起着 重要 作用 ( A m ag as a
1 0 5 4 )
。
B
r l众fe rt 等 ( i o s Za , 19 5如 ) 比较
研究了生长在短日和长日下 植 物 的 r E P
梭化酶 , 发现它们酶的特性不同 。 W i n 七er
( 1 0 5 0 )也指 出 , 五了。 e m b叨 a n t hem u m c少 s at -
il n um 在昼 、 夜循环中不同 型 的 P E P C
对 M al 的敏感性 不 同 。 N ot t 和 sO m o n d
( 19 5 2 ) 指出在 aK l a n hc o e da ig rem o n t艺a n a ,
刀期即勺 l l u m 夕艺n n a tum 和 A n a n as co m o s us
植物材料 露 花 ( A` “ m西脚 n ht em咖 co dr 诉 ilu m )
种子经 5%漂白粉消毒后 , 播于装有蛙石和石英
砂混合的盆中 , 侯幼苗长到 4 片叶片时 , 移到塑:
料花盆中 , 土培生长在自然光照玻璃温室中 , 温
度白天25 ao , 夜间1 50 0 。 胁迫处理前选苗龄 30 d .
长势均匀的露花数盆 , 分为 2 组 , 移到人工气侯 -
室中(光强 33 0 拜m o l -m , s一 1 ,温度 2 5 0 C ) 1周后 ,
胁迫处理的植株开始停止灌水 , 让其自然干旱 ,
对照植株仍每天浇水 1次。 3 周后胁迫处理植株
叶片的相对含水量为20 %一 26 % , 即分别取样进
行分离纯化 , 不同天数的干旱处理和复水试验的
材料采取分期处理后 , 同一天取样。
粗酶液提取 叶片用 0 . 1 m ol / L T r i s 一 H c l缓冲
液 ( PH 7 . 4 ) , 1 m m o l / L E D T A , 7 m m o l / L琉
1 9 8 8年 10月 1 9日收到 .
缩写 M a l: 苹果酸 ; M D :H 苹果酸脱氢酶 。
国家自然科学基金资助课题 。
4 期 水分胁迫对露花叶片中卫 EP 狡化酶活性及其调节特性的影响 34 9’
基乙醇和 5 % (v /v )甘油 , 按 1 , 3 ( w v/ )在冰浴中
研磨提取 , 滤液 10 0 0 灯im n 离心 10 im n ,上清
液即为粗酶液 。
纯化醉的制备 叶片用T ir s 一甘油`琉基乙醇铆液按 仁3( w / v )在挤oO冰库中甩组织捣碎机匀浆 , ·
经 4 层纱布过滤后 ,滤液进行硫酸钱分部沉淀 ,取
朽 %~7 喇饱和度的沉淀物复溶后透析去盐 , 再
通 过 D E A E 纤维素 D E一5 2 , D E A E一 S e P h a d e x ;
郎。 , s e p h a cr 妙 s一 0 和轻基磷灰石等一系列
层析柱用不同缓冲浓洗脱 , 分部收集。
醉的活性浦定 反应 系 统 为 伙“ m ol / L T ir s -
H C I ( PH 8
.
0 )
,总体积 1 m l , 内含 : 0 , 0 1 m o l /L
M g C 1
2 ,
0
.
0 1 m
o l / L N
a H C O
。 , 0
.
l m g N A D H
,
过量的M D H , 底物 P E P及适量的酶液 。用偶联法
在岛津 u协 2 50 分光光度计追踪 3初 n 垃波 长下
光密度下降 , 以下降0 . 01 为一个酶活性单位。
旅丙烯醉胺凝胶电泳 按 D a vi : ( 19 64) 方法 , 胶
长 6 c m ,每管上样量为 90 八g 蛋白 。 每管电流为
2 m A
, 试样进入浓缩胶后增加 至 3 功A , 室 温
下操作 , 蛋白染色用考马斯亮蓝 , P E P C专一 显
色采用 K a r n 等 ( 197 3 )的方法略加改进。 用 fa s t
vi ol et B染色 , 使由 p E P 致化酶产生的草酞乙酸
和 fa st vi ol et 起反应形成亮红色的区带 , 以鉴定
P E P竣化酶在 P A G E上的位置 。 取各同工酶相应
位置上的凝胶用反应缓冲液提取 , 进行 P E P C 活
力测定以对 P E P c 同工酶作进一步的鉴定。
结 果 与 讨 论
水分胁迫对母花 P E P狡化酶活性水平的影
响
随着水分胁迫时间的延长 , . 露花叶片
中拙 p c 活性逐渐增加 , 第 7 , ` 16 ; 21 )
的相对酶活性各为对华醉活性的 1邓 · 7% .’,
6 9 8
.
6 %和 1 143 . 9% , 受胁迫 3 .周的露花
叶中 P E P C .的活性比对照 的增加 1 1 . 4 倍
(表 i ) , 这与 F o s t er 等 ( 10 5 2 )用高盐诱
导 C AM型 M . `尽` at il n um 的
`
P E户C 活性
增加 10 倍的报道一致 , 证明卫E P 竣化酶对
外界条件变化的敏感 。 r E P 拨化酶的活性
水平是随着水分胁迫的不断加剧而增高 ,
这似乎暗示 , P E P C 水平的提高并非是 由_
于胁迫达到一定的阂值后启动新 的 r E P 。
基因 , 而可能是随着水分胁迫的加强影响
了 P E P C基因的表达 。
表 1 水分胁迫对露花计 P E p翔化酶活性的影响
aT
b l e I E几 c t s o f aw t e r s t r e s s o n t h e a e t i v 泣t y o r P E p C 益n 一e a v e s o f M . c o 犷d如 l’ u m
D r o u g h t ( d )
0 7 16 2 1
R
e w a t e r ( d )
1 0 19
·
P E P C a e t i v iyt
(U m有-n 1 m g· 1 e h l) ` 13 0 . 2 16 4 . 9 9 0 9 . 6 14 8 9 . 牛 1 7 7 . 5 1犯 . 0
R
e la t iv e a e t ivi yt
、 ’
1 0 0 一26 . 7 69 a . 6 ,一l怪3 . 9 13 6 . 3 10 9 . 1
(% )
尽花叶中P E P 拨化酶同工酶的分离及其特
性的比较 ·
利用聚丙烯酞胺凝胶电泳结合酶活性
专一染色研究了 PE 尹C的变化 , 胁迫条件下的露花叶样品在 r A G E上出现一条新的
蛋 白带 , 通过专一显色和直接 测 定 该 酶
蛋白的活性 , 可确定该蛋白是 新 . 产 生 的
r E P C 同工酶 。 当复水后 , 叶中 P E P竣化
酶活性水平下降 , 新出现的酶蛋白带消失
(见表 1 , 图 1 ) 。
为 了较大量的提取纯化露花叶 r E P 淡
化酶及其同工酶 ,应用柱层析进行了分离 、
纯化 。 依照酶的纯化程序 , 从胁迫的露花 .
叶片提取液经硫酸按分部 , 透析去盐后在
3 50 植 物 生 理 学 报 15卷
月 1水分肋迫和汉水后 P P E C同工醉变化
F地. 1口巨. g e. 坛 护 E护 C加如扣. . . d ud峪
d r o. g五t 叨 d r e, 明 a t e t t er a t也 e时
1
.
D or u g h t fo r Z l d ; 2
.
1 9 d a f t e r r e aw etr de ;
3
.
C o n t r o l
.
浓度洗脱下来 。 为进一步纯化 P C I , 将分
部收集的 P C I 与 P O ! 相交叉的收集液再
次上 D E 一即柱 , 分段洗脱得到纯化的 P C I
(图 3 ) 。
动力学的测定表明 3 个同工酶之间有
明显的差异 , P C I 的瓜 ( P E r )值为 1 . 5 4
m m o l/ L
, P C I 的米氏常数较 低 , 其 K 二
( P E P )值为 0 . 3 1 m m o l /L , 比P C I 低 4 . 0 7
倍 , 类似于 aC植物的 r E p C的瓜 ( r E P )
值 , 而 P C I 的 K m ( r E P )值 为 0 . “ m
m ol / L
,
(图 4 A一 C ) 。
l…lì n,.lwees`eswelspóóOO乙|`nU口l卫E A E 纤维素 D E 一52 柱上用 T ir s e H OI 进行洗脱 , 分离到 3 个 F E P 梭化酶蛋 白峰
( P C I
,
P C I
, P C I ) (图 ZB ) 。 对照露花
在 D E一 52 柱上只分得 2 个 r E r C 蛋白峰
( P C I
,
P C I
。 见 图 Z A ) 。 P C I 在 0 . 0 8
。 o l/ L T ir s es H CI 浓度被 洗脱 , P C I 和
P C I 各在 0 . 0 9 和 0 . 1 6 m o l / L T r i s卫 C I
T r i s
、
H C I(m o l / L )
0
。
1
1
P C 11低10 2 0 3 0
内匕42.0
.
.0ǎ一任\nà扮! >!-。V、
F r a c t i o n n o
圈 3 p C I 通过刀E A E纤维紊 D F · 犯柱进一步
纯化
F泣9 . 3 F血 rt h e r P . 叮伍c a t i o n of P C I 勿
D E A E
一 c e il u l o s e D对 se 5 2 c o l u ” 比。
月弓日à己岑仍毛卜.02.4351
l
目J刁`|.T|刁T.el ,0尹%n11.七飞1Q州11飞卜,洲C八尸七P梦尸
咬0 5 0 60 7 0 80 90
F r a e t i o n n o
.
!
一`.r卜llwse|Lóo
.04532.1
。
ǎ一日\口à入1ǐ>ōluV
肠帆.03.21110ǎ毛污à公层七代
。以2 0 孙0 40 石0 60 70 8 0 9 0
F阳 e t io n n o .
栩 2 盆花叶片 P E P翔化醉的 D E A E一纤维紊
D E一 52 柱层析
F盆9 . 2 T h e p ae k s o f P E P C ` e p a ar t de fr o m
l e a v e s 好 .M c o ,’d 如 I’ um b y D E A E一 c e l lu l o s e刀E 一 5 2 e o lu m n e 五r o ma t o g ar P卜y
比较 3个同工酶对效 应 剂 G一 6一P 和
M al 的反应 , 发现 3 个同工酶被 G一 6一 P激
活和被 M al 抑制的程度存在一定 的 差 异
(图 6 , 6) 。 在有 6 m o l/ L的份 6 es r 存在下 ,
P C I 与 P C 血的活性分别为对照的 140 %和
15 5% (图 6 B , C ) , 而对 P C I 则无明显的
效应 (图 S A ) 。 P C I 对本试验所用各种浓
度的 M al 同样无明显反应 , 而在 6 m ol/ L
M掀 存在下 P C I 和 P C I 的酶活性各被抑
制了 1 2 . 8 %及 15 % (图 6 ) 。 还观察到在低
p E值下 , 同工酶 P O I 比 P C I 有较高的活
力水平 , 如在 4 . 9 9 1 , 6 . 7 9 7 , 6 . 2 2 7 , 6 . 9 16 ,
7
.
4 5 9 , 以及 7 . 8 31 等一系列 p H 条件 下
r C I 酶活 性 分别 比 P C I 大 3 . 6 , 3 . 4,
2
.
0
, 1
. 。 , 1 . 5 5 , 及 1 . 魂倍 。 P C I 酶的这
4
` 期 水分胁迫对露花叶片申 PE户狡化酶活性及其调节特性的影响
A
.
PC I
A
.
C I P
0一 0
ǎ飞。之 flà公龙七`
主尹 2
之
(m m ol/ L)
?一 0、 ~ ~勺 8
一 1 .5 一 1 . D一 0 .5 0 0· 5 1 . 01 .乓 2 .0
1江 E P护 ~ l o/ L l
1 0
0,二砍二过二 0
4
多 P C l l
。仪B
6 0 90 12 0
_
T im e (s )
P C 11
息“
ǎ一考。之息云ù卜妇。V42
一 1 0 1 2 3 4 5
1 / P[ E P m ol /L]
`睽了ol)L/刃、 U
心. PC nI
10
冬粗
0
.
10 ZQ 3 0 4 0 50
iT m e (s)
`
2 0
10 o陡 C . P C l ll
几 :正 ’ 一 2 . 。 一 1. 0 0 05 .10 · .15 .20
1 /[P E P r n r n o l /L ]
珍 4 皿花 EP P c 同工酶在 p H 8 . 0下的 L扭 e we -
a
v-er
B u
r k图
F玉9 . 4 L恤ew e va e r』 ur k p l呼 5 of p即 c
J os
z , ” , e fr o m M
·
c o
dr 如 l’u ` (p H S · o )
m( m ol /)L
气。之nà公.W卜一-。川
一特性可能比 P C I 更有利于露花 P E P C在
暗中苹果酸的合成 。 P E P 狡化酶在低 PH
值下有较高的酶活性水平 在一 些其他 的
C A M 植物中也有报道 ( K l u g e 和 O s in o n d
正9 7 2 , W i nt er 19 5 0 , A m a g a s a 1 9 5盛) 。
3 个同工酶在 P A G E 上的相对泳动率
·
40
`爪犷扩亩岌了一布减厂甲 ` ’ `
T im e ( s )
图 S G 一 6干对 P E P C同工酶活性的影响
F i g
.
5 E . 兔c t o f G 一6一p 0 0 P E p C 注5 0 2 ” . .
ac
t泣讨 t y
15卷5 32
图 6
植 物 ` 生 理 学 ·报
也不能排除在从 a C向 C AM 过渡中还可能
存在亚基的解离一聚合 , 这还有待证实 。
参 考 文 献
CPIlc
10908沁ǎ次口必!卜一1。司>川工侧·
·
60 L e es es J一一 - - 一 L一` 一工-
0 1
.
2 2
.
4
. ’
3
.
6 4
.
8 6
.
0
M a la t e (m m
o l / L )
苹果酸对 P E P梭化酶活性的影响
F i g
.
6 E任 ce t o f 口 a l a t e o n P E P C 盆s o z y也 e
. e t i v 泣t y
R m 也有差别 , 从表 2 可看出同工酶 r C I
和 P C I 的 R 。 极相近 , 而同工酶 P C I 的
丑 m 比其他 2 个同工酶都大。
表 2 露花 P EP C同工酶某些特性的比较
T a b l e 2 C c m r
a r i s o n o f s o m
e e石a口 e t e r宜s -
t盖e s c f P E P C i s o z y幻比 e fr o m M
.
c o r d如 I’ u 二
I so z v m
e K m (P E P ) R m MW
(m m
o ll L ) (k D )
P C 1 0
.
54 0
.
6 8 5 13 0
P C 亚
P C I
1
.
5 4
0
.
3 1
0
.
15 4
0
.
1 5 2
2 60
2 75
应用聚丙烯酞胺梯度胶及 S D S 电泳测
得正常生长条件下露花叶纯化 的 r C I 酶
的分子量为 2 6 0 k D , 亚基分子量 0 4 k D ,
为四聚体。 采用同一方法 , 测得经水分胁
迫的露花叶的P C I , P C I 及 r C I 的分子
量各为 1 3 o kD , ? 6 0 七D 及 2 7 5 k D
。 从
初步的结果看 , r C I 的分子量 为 P C I 的
一半 , 它是否是植物 因缺水而新形成的酶
蛋白 , 抑或是在缺水下 P C I 或 P C皿的解
离产物 , 尚需进一步研究 。 ;
从上述实验结果可看 出 : 露花在从 aC
向 C AM过渡过程中 ,除以酶的活性进行调
节以适应外界条件的变化外 , 以同工酶对
底脚亲和力的差异以及各同工酶对不同效
应剂的反应不同来调节代谢途径 , 这些都
可能是适应外界条件变化的方式 。 另外 ,
施教耐 、 昊敏贤 、 查静娟 。 高梁磷酸烯醇式丙酮酸
拔化酶的研究 1 . P E P梭化酶同工酶的分离和变
构特性的比较 。 植物生理学报 · 19 7夕, :5
2 2 5一2 3 4
A m昭 as a T . E n z y anz it e P r oP e r it es o f p h o s P o e no l·
P
Ur va
t e e a r b o x y las
e i s o fo r n ” in th e C A M
lP an
t aK al chn oe 由 ig , m on iat an
. 尸 al n t a “
丑妙 J io l 19 8 4 , 2 5 : 6 2卜6 3 3
B ur lfrC t J
,
K lu g e D M
, 切l ie or z 0 . P h o t oP ier o d is m ·
a n d e r a占 su la c e a n a e id m e t a b o l坛m 1. Im
m u on l
o
ig
e a l a n d k in e it e vie d
e n e es fo
r id fe
r e n t
p a t t e r sn o f Ph o s p h o e n o IP界 u v a t e e a r b o x y las e
is o fo
r
srn i n P h
o t
oP
e r i o d ie a lly in d u e ib l e e r a -
s s u la e e a n a ic d m e t a b o lis m P la n st
. 尸2口 n at ·
19 8 2
a , 154
: 3 2-6 3 3 1
B ur l fe
r t J
, 切l e ior z 0 . Ph o t o P e r i o d七m a n d e r a 一
s s u la e ae n
a ic d m e t a bo l i
s m 1
. 众价 r e n t
e h a ar e t e r is t ics o f th e P h o t o p e r io d s e n s i t iv e a dn
n o ns e ns i it ve 妇o fo nsrz
o f Ph o SP h o e n o IP y ur va t
e
ca
r b o即 l as e a n d e asr s u la e e a n a e id m e t a b o lis爪
o P e r a it o n
. 尸2口n at 19 8 2 b , 154 : 33 9一 3 4 3
D a v is BJ
.
D i s e e le e t r o P h o r es i :
. 亚 . M e t h o d a n d
.
a P P lie a t i o n t o h um
a n s e r u m P or t e i n s
.
A n n
N 犷 A ca d 余 1 19 6 4, 1 2 1: 4 0卜 42 7
F
o s t e r JG
,
E dwa dr
s G E
,
W i
n t e r K
.
C h a n g es i n
l e v e ls o f P h o sP h o e n o lP y
r u v a t e ca
r b ox y l
a s e
初 t h i n d u e t io n o f e r as s u la e e a n a e i d m e份 b-o .
l坛m in 几介 se m b少 nhet m u m c少 at l iln u m L .
尸之口 n t eC l P勺5 10 1 19 8 2 , 2 3 : 5 8-5 5 9 4
K a r n R C
,
K iv ie P A
,
H u d o e k G A
,
rP
o e e d u r e fo
r
t h e e le e tor p h o er it 七 a n a l” 15 o f Ph os hP oe n o l-
p yr vu
a t e e a r b o材 l a s e · B io c h如 B i0P hys A c t a ·
19 73
,
2 9 3 : 5 6-7 5 6 9
K lu g e M
,
o
s m o n d C B
.
S t
u d i es o n p h o s Ph o
·
e n o lP y r u v a t e e a r b o x y las
e
an d
o th e r e n z y m es 几
o f c r as
s u la c e a n a c i d m e t a b o lis m o f B口OP h-y
u u m t u西脚 r u m a n d eS du m P ar 。石u m . 之邢` n 二
召助勺`勿l ` 19 72 , “ : 9不 105场 t t n L , o smo 记 e B . P u r i6 c a t io n a n d p苗p -er
it es o f p h o s P h o e no lP y ur
v a t e e a br
o x y las
e fr o爪
户la n st 诫 th e似 u l a e e a n a e i d 垃 e t a玩 lis m ,
A公 t 了尸勿n t 只勺5 10 1 1 9 8 2 , 9 : 4() 0~ 4 2 2
W i
n t e r K
.
D a yl n i g h t
c h 注n g o i n ` t h e s e ns i t i vi t丫
o r p五。印 h o e no lp卿 v a t e e a r b d动 a s百t o 功 a la t。
彝
d
u ir n g c 川留” u la e e a n a e id m e t a b o万s m ` 尸细心
尸妙痴之 1 98 0 , 6 5’ : 792 “ 7 96
人c t“ Py h to py hs t’o 勺 ,’ca S动加
砚98 9, 15 (4 ) 、 34 8e 35段 _
3 53
T h e E fe
c t o f W a t
e r S t r e s s o n 正七` L e v 以 6 f P h o s P h o e n o l p y r u va t e
C a r b o x贝 a s e i n t h e L e va e s
I t s R e g d a t o r y P r oP
e r t i e s
时 M~
byr 翻 ht , um co dr 如 l’u m ,an d
CH E N iJ gn
一
hZ i
,
w A N G uY
e 一H aO an d S H I iJ ,
一万“ .
加 it ut 6t of 烈 a n t只妙s I’0佃粉 , A ca 公m l’a inS ic a , S h a n g h ia 2 0 0 0 32 )
一 (
气口 , ,
I n e o n t
r a s t t o e o n s t i t u t ive C AM P l an t s
w h i e h a lw ay s P o s e s s t h e me
t ab o l i e m ac h i n e r y
n e e e ss a r y of r
` t h e P e r of rm an
e e o f C AM i n
e x p a 只d e d . l e a ve s ,
.
i n du
e i b l e C八M p l a n t s p r 。二m北 ly d e v日o P th e er q u i r e d m e e h a o i sm s i n
r e s p o sn e t o s o m e e n v i r o n m e n t a l s ig n a l su e h
a s w at e
r
, t
r e s s` P E p C (
_
E C
’ 斗 . 1 . 1 . 3 1 . ) 15
a k e y
e n z y m
e 豆n C A M · H e r e , a r e s o me
r e s u l t s o f o u r e x p e r im e n t s o n p耳p C i n .M
c0 心的 ilu m · `
1
.
T he
a e t i v ify o f P E P C i n le av e s in e r e
-
as e d m a rk e dl y w i t h t h
e a
g g
r
av a t i o n o f aw
t e r
s t r e s
.
I t w a s 1 1
.斗 t ime s g r e a t e r i n P lan t s
、 v a t e r 一 s t r e s e d fo r 3 一w e e k s t h a n i n u n s t r e s s e d
p lan ts
·
I t b e g an t o ds e
r e a se hw
e n t h e
s t r e s
·
s e d lP a n t s we
r e r e w a t e r e d
,
fa l li n g t o n e a lr y
t he
s a
me l
e
ve l as ht 就 i n co n t r o l l e va e s 19
d a ” a ft e r b e i n g w a t e r e d ·
2
.
T h r e e P or et i n P e
a
k s w i th P E P C a ct i
-
v i t y ( P C I
,
P C I
,
P C I ) w e
r e s e P a
r a t e d for m
铸 , t e r : s t er 努 e d le vae
s
、
of 此 e o丫d的 l认。
D E A E
一
52
of w h ihc
e e
l lu l o
s e
P C x w a g
.
; c0 诉 ilu 饰
e o l u m n c h or m盆t o g r a p h儿
n d t of un d i
n
on
n 一 s t r e s s e d
p l a n t s
·
D u r i n g w a t e r s t r e s s , ht e 朗 t iv i yt o f ’
P C I
,
b u t n o t t h a t o f P C I
,
i n e er as e d m a r
-
k e d l y
·
p C I a P P ea er d
a ft e r d r o u g h t t r e a -t
me
n t a n d d i s a p P e a r e d aft
e r er w a et r i n g
·
iA l
t h r e e i s o z y m e s w e r e a e t iva t e d by G 6p a n d
,
i n h i b i t e d by m
a l a te
,
T h e K .
`
(P E P ) o f
’
P C I , P C 1 a n d
`
P C 互 w e r e 0 . 5斗 m m o l / L -
1
.
5牛
nmt
o l / L
a n d 0
.
3 1 m m o l / L
, r e sP e e t i
-
ve l y
.
I n P A G E
, _
P C I m o v e d fa s t e
r t o w a
r d s
·
a n o d e t h a n P C I
`
a n d p C 1
.
T h e a P p a r e n t m o l e e u l a r m a s s e s d
e t e r
·
m i n ed by g e l e o n e e n t
r a t i o n g r ad i e n t e l e e t
r o ·
P h o
r e s i s w e er 130 k D
,
2 60 k D an d 27 5 k D
fo r P C I
,
P C 1 an d P C I
, r e sP e ct i v e ly
, a l
-
t h o u g h t h e m o b il i t i e s o f P C 1 a n d P C I
d ur i
n g P A G E w e r e m u e h t h e s
ame
, w he th e t
P C I w a s n e wl y s yn ht e s i z e d u n d r w a t e r s t
r e s
o r w a s a d is o e i a t i v e P r o d uc t o f P C 1 o
r
P C 1 15 u n d e r i n ve
s t i g a t i o n
·
K e y w o川 s : P E P · e a r b o xy l as e , w aet r S tr eS 一
粼七s e。 吞秒 a , ht e m , c o, d诉 I细用 , C A M , P E P ca r b o x卜
加 e is oz y m es
尸ù ·