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中 国 药 科 大 学 学 报
J Ou
r n a l成 Ch i n a Ph a r mac eu t ic a lU n ive rs it y1 9 92 ; 2 3 ( 2 )
: 1 1 8一 12 1
组织培养川贝母化学成分和药理作用的研究
朱丹妮 蒋 莹 陈 婷 高山林`
(中药理论研究室 , ’遗传育种研究室 )
关妞词 暗紫贝母 ,生物碱 ;培养鳞茎 ;止咳化痰
贝母为常用中药之一 , 味苦 、 性寒 , 有清热
润肺 ,化疥止咳 、散结等功能 , 用于痰热咳嗽 、 咯
痰带血 , 疽病疮疡肿毒 。 国内入药主要是川 贝 、 ·
浙贝 、平贝和伊贝 。 《本草纲目拾遗 》将力}贝和浙
贝明确分开 ,谓川贝味甘而补 ,虚寒咳嗽以川贝
为宜 , 可见川贝有其独特的药效 。 ·
, 暗紫贝母 (外必沥即匆 抓交护侧公姐勿 )是 川贝中的
真品和主要品种 , 只能生长在海拔 3 5 0 0 m 左右
的高山地区 , 目前人工栽培尚未成功 , 仅靠野生
资撅供药用 . 由于资源短缺 , 供需矛 盾突出 , 为
扩大贝母的药用资源 , 我校遗传育种研究室应
用生物技术 , 对暗紫贝母鳞茎器官培养技术进
行了系统研究 。本文报道组培川贝的总生物碱
及微量元素的含量测定 , 对组培 川贝及野生川
贝的化学成分及生物碱种类进行定性比较 , 同
时对组培川贝母的镇咳祛痰作用进行了实验研
究 。
昆明种小鼠 (本校动物房 ) ,雌雄各半 。体重
18一 2 2 名 ,供安全性试验和镇咳试验 ; 20 一 25 9
供祛痰试验 。
1 实验材料
1
.
1 样品
组织培养川 贝由本校遗传 育种研究室提
供 .野生川贝购自四川阿坝州红原县 , 经本校生
药学教研室鉴定为暗紫贝母 。
1
.
2 仅器 和试荆
72 2光栅分光光度计 ; p H s 一 Z c 精密 p H 计 ;
P B Q
一
1型薄层 自动铺板器 ; A A 一 67 0原子吸光 /光
焰发射分光光度计 (配岛津 P R 一 4记录仪 ) ;实验
所用试剂均为分析纯 .
1
.
3 动抽
2 方法及结果
2
.
1 组培川 贝化学成分研究
2
.
L l 化学成分预试 ’
参照文献 l[] 进行化学成分预试 ,结果表 明
组培川贝及野生川贝药材都可能含有生物碱 、
有机酸 、 皂贰 、 氨基酸等化学成分 。
2
.
L Z 贝母生物城的定性分析
贝母样品于 60 ℃干燥 ,粉碎过 60 目筛 ,取 贝
母适量 , 加等量 10 % 氨水碱化湿润 , 用氯 仿 回
流 ,冷却后分出氯仿液 , 用 2 . 5写盐酸萃取三次 ,
每次 ] 0 m l , 加入 2 0%氨水碱化至 p H 1 0 , 以氯仿
萃取 ( 10 ml x 3 ) , 合并氯仿液 , 回收溶剂 ,残渣
用 1 ~ 2 m l 氯仿溶解 , 点样 .薄层层析 见图 l , 图
谱显示 , 两种 贝母具有相似的几种生物碱 。
2
.
1
.
3 酸性染抖比色法浏定组培川 贝总生物
城含 1
贝母碱在 p H S缓冲溶液条件下 z[] , 与染料
滨察香草酚蓝或澳 甲酚绿能形成黄色离子对 ,
可定量地被氯仿提 出 。 本实验以贝母碱标准品
为基准物 ,用澳甲酚绿作染料 ,在 p H S缓冲溶液
条 件 下 , 于 41 0 n m 进 行 比色 测 定阁 。 标准 溶
液 回 归 方程 为 y ~ 一 0 . 0 2 2 4 + 1 . 8 9 4 l x ( , =
0
.
9 9 9 1
, 几
~ 5 )
精称样品 0 . 5 9 , 加适量 10 %氨水碱化 , 置
收稿 日期 1 9 92 一 03 一 07 江苏省科学技术委员会资助课题
2期 朱丹妮等 : 组织培养川贝母化学成分和药理作用的研究 1 19
微量元素参与生物体中酶 、 激素和维生素
的生理作用 , 对有机体的正常代谢和生存也有
着重要意义 。 为了全面评价组培川贝的质量 ,对
两种贝母的巧种元素含量进行分析比较 ,结果
见表 2 。
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·
索氏提取器中乙醚浸泡过夜 , 热回流 3 h , 回收
乙醚 , 残渣用抓仿溶解 , 定量转移至 10 ml 容量
瓶中 ,吸取 1 ~ 2 m l . 移至 60 ml 分液漏斗中 , 加
氯仿至 8 m l , p H S缓冲液 2 m l , 0 . 0 0 1 m o 一/ L 漠 甲
酚绿 2 m l , 剧烈振摇 1 m i n ,静置 15 m in , 氯仿层
过干滤纸至 10 ml 容量瓶中 , 水层用氯仿洗 , 合
并氯仿液 , 定容 , 4 10 n m 测定吸收度 , 加样 回收
率平均为 9 7 . 4 3% 士 4二 8 5% ( n = 6 ) , C v = 0·
8 5%
。
本试验分别对不同生长时 间 ,不 同培养温
度 , 不同激素配比 、 不同培养基组成 、 不同培养
方法等各个试验的 30 多批组培川 贝母样品进行
了总生物碱含量测定 , 每个样品均取二次平行
测定之均值 ,平行误差不超过 5% ,测 定结果见
表 1 。
从表 1可见 , 除 25 ℃培养条件下 , 因温度过
高 , 对生物碱积累不利 , 总生物碱含量较低外 ,
其他各组试验 ,组培 川贝总生物碱含量均 比野
生川贝总生物碱含量高 ,最高的达到 1 . 67 倍 , 从
总生物碱含量测定结果看 , 通过组织培养方法
生产的川贝能有效地保持和提高其总生物碱的
含量及药用价值 。
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0
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8 0 8
12 0 中 国 药 科 大 学 学 报 2 3卷
据报道 , 人体的必需元素有 27 种 , 其中常量 清液于 7 2 光栅分光光度计 5 58 n m 处测定吸收
元素 1 种 ,徽量元素 16 种 。对 15 种元素的测定结 度 , 绘 制 标 准 曲 线 , 求 得 回 归 方 程 为 y -
果表明 : K , N a , aC , M g , M n , z n , F e , M o , e o 的含 0 . 0 6 0 s 7 x 一 0 . 0 0 ` 1 4 ( , = 0 . 9 9 9 9 , n = 5 ) 。
量 ,组培川贝比野生川贝有较大的增加 ,而有害 2 . 2 . 2 . 2 祛疾作用
元素 P b , cd 的含量 , 则组培川贝比野生川贝有 采用酚红排泌法 ,稍加改进 。取 20 一 25 落 小
所降低 。究其原因 , 可能在组培过程中 , 川 贝鳞 鼠若干 , 分四批进行 , 每批 鼠雌雄兼用 , 随机分
茎培养物吸收了培养基中对人体有益的一些必 为三组 (每组 12 ~ 16 只 ) : 生理盐水 ,组培川贝和
需元素 ,而有害元素的降低 , 则是 由于继代次数 商品川贝组 。 其 中三批以 3 . 0 9 / k g i( g) 剂量作
的增加而不断稀释的缘故 。 时效曲线 ,分别在给药后 3 。 、 6 0 、 12 0 m in 立即 iP
微量元素对人体机能具有协 同和拮抗作 0 . 25 %酚红 (0 . 2 m l/ 】0 9) 。 以生理盐水作对照 。
用 , 目前这方面的作用正越来越受到人们的重 各鼠均在给酚红后 30 m in 处死 , 分 离气管 , 用
视 ,组培川贝能使对人体有益的微量 、 常量元素 5% N a H c oa 抽洗气管三次 , 每次 0 . s ml , 合并洗
的含量增加 ,这无疑对人体健康治病是有益的 。 液 ,精密 吸取上清液 l ml 于离心管中 . 加无水
2
.
2 组培川 贝镇咳祛夜 的药理实脸研 究 乙醇 Z ml , 摇匀 、 离心 ,取 上清液于 7 2 光栅分光
2
,
2
.
1 毒性试验 光度计 5 5 8 n m 处测得吸收度 , 从标准曲线换算
小鼠 ig 组培川贝和野生川 贝混悬液 , 8 . 0 成浓度 , 求得排泌酚红的含量 。结果表明 ,组培
盯kg 为可能用 的最大剂量 , 观察 1 w k , 小 鼠一 川贝和野生川贝均具有祛痰作用 , 给药 60 m in
切活动正常 ,均未出现死亡 。 后为作用峰值 ,给药 Z h 后各药作用下降 ( 见表
2
.
2
.
2 祛疚试验 3) 。据上述结果 , 选时效曲线峰值时间 60 二 in ,
2
.
2
.
2
.
1 阶红标准 曲线的绘制 按 1. 5 9 / kg 及 3 . 0 9 / kg 给药 , 同上操作 。结果表
精密吸取不 同浓度的酚红标准液 1 . 0 ml 明 ,两种川 贝的祛痰效果均随着剂量加大而增
于试管中 , 各加无水 乙醇 Z ml ,摇 匀 , 离心 ,取上 强 (见表 4) 。
T a b 3
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3 镇咳试验
采用氨水引咳法 , 取 18 ~ 2 9 小 鼠若干 ,分
四批进行 , 每批鼠雌雄兼用 , 随机分为四组 ( 每
组 12 一 14 只 ) ;生理盐水 、 组培川贝 、野生川贝和
磷酸可待 因组 , 其中三批按 3 . 0 9 / k g( ig )剂量作
时效 曲线 . 分别在给药后 30 、 60 、 1 20 m in 于玻
璃钟罩内给 30 川氨水 ( 25 . 0% ~ 28 . 0% ) 引咳 ,
以生理盐水及可待因 60 m g / gk 作对照 , 记录小
鼠 Z m in 内咳嗽 次数 。 咳嗽 以小 鼠腹肌剧烈收
缩 ,张 口 有时伴有咳嗽声为准 。 从小鼠Z m in 内
咳嗽次数的结果可知 , 组培川贝和野 生川 贝均
具 有显著 的镇 咳作用 , 给药 后 30 m in 作 用较
强 , 各组止咳率大于 50 % , 在 60 m in 时两种 川
贝作用均 已 下降 , 但直 至 Z h 药物仍 有显著作
2期 朱丹妮等 :组织培养川贝母化学成分和药理作用的研究 ] 2 1
用 ,见表 5 。 根据上述结果 ,选镇咳作用较强的时 培川 贝和野生川 贝药材一样 ,止 咳效果随剂量
间 3 0 m i n , 按 l · 5 9 / k g 及 3 . 0 9 / k g 给药 , 以生理 加大而增强 ( 见表 6 ) 。
盐水及可待因作对照 , 同上操作 。结果表 明 ,组
T a b 5 oC m
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安全 。 实验表明 , 用组培川贝代替野生川贝供药
参 考 文 献
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3 19
R e s e a r e h o n C h e m i e a l C o m P o n e n t s a n d P r im a r y
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e l ie v in g e o u g h a n d e l
e a n i n g a w a y Ph le g m o f e u l t u r e d b u l b w e r e e o m P a r ed w it h
th a t o f w i ld b u l b
.
T h e r e s u l t s o f P r im a r y Ph a r m a e e u t i e a l e x pe r im e n t s s h o w e d t h a t bo t h b u l bs h a v e s im i la r
e f fe e ts o f r e l ie v i n g e o u g h a n d e le a n i n g a w a y P h le gm o n m i e e
.
I t 15 Po s s i b le to u s e e u lt u r e d b u lb a s a
沁加 t it u t e f o r w i ld b u l b f o r m e d i e i n a l u se s .
K e y w o r ds 外祝沥护犯 un 咖。 d 八汉d ; A l k a l o id ; C u l t u r e d b u l b ; R e l i e v i n g e o u g h ; C le a n i n g a w a y P h le gm
飞