全 文 :第38卷第5期
2011年9月
浙 江 大 学 学 报(理学版)
Journal of Zhejiang University(Science Edition)
http://www.journals.zju.edu.cn/sci
Vol.38No.5
Sep.2011
收稿日期:2010-10-28.
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20777021),教育部重点科技项目(210253),福建省自然科学基金资助项目(D0610012,
2010J01043).
作者简介:郭沛涌(1969-),男,博士,副研究员,主要从事水环境科学研究.
DOI:10.3785/j.issn.1008-9497.2011.05.015
2种陆生植物浸提液对四尾栅藻的化感作用
郭沛涌,李庆华,江中央,田美燕,苏东娇
(华侨大学 化工学院环境科学与工程系,福建 厦门361021)
摘 要:通过合果芋(Syngonium podophyllum)和榕树(Ficus microcarpa)2种陆生植物不同质量浓度、不同部位
浸提液对四尾栅藻(Scenedesmus quadricauda)化感作用的研究,结果表明:合果芋叶和茎浸提液对四尾栅藻表现
出促进作用,仅浸提液高质量浓度(50g·L-1)处理组分别在实验前3d和1d表现出微弱的抑制作用.合果芋叶
浸提液对四尾栅藻的促进作用强于茎浸提液.除浸提液30g·L-1处理组第2d之外,各质量浓度的榕树叶浸提液
作用下的四尾栅藻密度均低于对照组,显示了较强的抑制作用.与榕树叶浸提液对四尾栅藻化感作用相似,榕树气
生根浸提液对四尾栅藻显示了一定的抑制作用,且随投加浸提液质量浓度的升高对四尾栅藻的抑制作用增强.榕
树叶和气生根浸提液对四尾栅藻的EC50,96h值分别为11.17和47.97g·L-1,榕树叶浸提液对四尾栅藻的抑制效
果好于榕树气生根浸提液.
关 键 词:陆生植物;浸提液;化感作用;四尾栅藻
中图分类号:X 131.2 文献标志码:A 文章编号:1008-9497(2011)05-555-07
GUO Pei-yong,LI Qing-hua,JIANG Zhong-yang,TIAN Mei-yan,SU Dong-jiao(Department of Environmental
Science and Engineering,College of Chemical Engineering,Huaqiao University,Xiamen361021,Fujian Prov-
ince,China)
Alelopathy of two kinds of terraneous plant extracts on Scenedesmus quadricauda.Journal of Zhejiang University(Sci-
ence Edition),2011,38(5):555-561
Abstract:Alelopathy of two kinds of terraneous plant extracts with different concentrations and different parts on
Scenedesmus quadricauda was studied in this paper.The results showed that leaf and stem extracts of Syngonium podo-
phyllumhad promotive effects on Scenedesmus quadricauda.Only treatment group of high concentration(50g·L-1)
showed slightly inhibitory effect in the 1st day and 3rd day,separately.Besides,the alelopathy of leaf extract was
stronger than that of stem extract.In contrast,leaf extract of Ficus microcarpashowed fairly stronger inhibitory
effect.Except the treatment group of 30g·L-1 in the 2nd day,the densities of Scenedesmus quadricaudain treat-
ment groups of leaf extract with different concentrations were al lower than the controling group,which had no ex-
tract.Similar to leaf extract of Ficus microcarpa,its aerial root extract also showed some inhibitory effect on
Scenedesmus quadricauda and the effect became stronger with the rising extract concentration.In addition,the leaf
extract had stronger inhibitory effect than its aerial root extract.EC50,96hvalues of leaf and aerial root extract were,respec-
tively,11.17g·L-1 and 47.97g·L-1.
Key Words:terraneous plants;extract;alelopathy;Scenedesmus quadricauda
近年来,随着人类活动的增加,导致湖泊、水库
富营养化日益严重,藻类大量繁殖,对水环境安全造
成严重威胁[1].在众多的控制藻类生长的方法中,传
统的物理、化学抑制藻类生长的方法会不可避免地
破坏生态平衡并造成环境污染[2],利用植物化感作
用抑藻已成为研究的热点之一.目前关于植物化感
抑制藻类生长的研究主要集中于水生植物[3-10],但
在重度富营养化水体中,由于浮游藻类数量巨大,向
水体中移栽活体水生植物,除了其自身易受各种环
境因子的影响外,还可能受到浮游藻类带来的营养、
光照以及空间竞争的冲击,导致植株存活率低,无法
有效控制有害藻类的过量增殖;且栽种活体植株适
应待治理水体环境和发挥抑藻功效的周期较长,从
而限制了其应用[11].而向待处理水体中投放植物浸
提液,可以不受水域局限,操作简便,且能短期见效,
因而成为较好的水华防治手段之一[11-12].合果芋
(Syngonium podophyllum)叶和茎含乳汁,茎节有
气生根;榕树(Ficus microcarpa)叶片和气生根中
也含有大量的乳汁,其中含具有化感作用的单宁和
类萜[13-14].并且合果芋和榕树两者都能无性繁殖,
较容易获得,前者为典型的草本植物,后者为典型的
常绿乔木,四尾栅藻(Scenedesmus quadricauda)是
淡水中常见的浮游藻类,也是水体污染的指示种之
一,在水生生态系统占有重要地位.关于合果芋和榕
树2种陆生植物浸提液对四尾栅藻化感作用的研究
目前未见报道.本文选取合果芋和榕树2种陆生植
物,分别探讨了不同种植物以及同种植物不同部位的
浸提液对四尾栅藻的化感作用,以探索不同类型陆生
植物浸提液对微藻化感作用的差异性,从而为陆生植
物对微藻化感作用机理的研究提供科学依据.
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 浸提液的制备
合果芋和榕树均采自华侨大学校园内花圃.取
新采集的合果芋茎、合果芋叶、榕树叶、榕树气生根
各100g,置于80℃烘箱中干燥48h,用粉碎机粉
碎,然后用1 000mL SE培养基[15]浸泡,置于恒温
(25℃)振荡器中提取48h,离心去除残渣,上清液
先用普通滤纸过滤,再经孔径为0.22μm滤膜过滤
除去颗粒杂质和细菌后,得试验用浸提液母液,质量
浓度为100g·L-1(鲜重).
四尾栅藻购于中国科学院武汉水生所.试验前
将四尾栅藻接种于新配置的SE培养基,使之达对
数生长期后用于试验.
1.2 研究方法
1.2.1 浸提液抑藻试验方法
取浸提液母液,于高温灭菌过的250mL三角
瓶内,用灭菌过的SE培养基稀释,并分别接种处于
对数生长期的四尾栅藻,使得终质量浓度分别为
10、20、30、50g·L-1 4个梯度(榕树叶、气生根浸提
液对四尾栅藻化感作用试验为10、20、30g·L-13
个质量浓度梯度),接种后藻液总体积为250mL.试
验设置3个重复,在PYX-250Q-B型人工气候箱内
进行,培养条件为温度25℃,光照3 000~4 000lx,
光暗比12h∶12h.试验期间每天定时摇瓶2次,同
时随机调换三角瓶放置位置.用藻类计数框在显微
镜(16×10倍)下计四尾栅藻细胞数.
1.2.2 试验干扰的消除
浸提液对四尾栅藻的化感作用整个试验过程均在
人工气候箱中进行,能够确保其最适生长温度(25℃)
和较适的光照条件(3 000~4 000lx).pH值作为藻
类生长环境的重要理化指标,无论在自养或异养条
件下都随代谢过程发生变化.研究结果表明,四尾栅
藻能在偏酸性或偏碱性的环境中生长[16],其最适生
长的pH值为6.0~8.0.试验过程中pH值在6.13
~8.05,因此培养基的酸碱度不是限制四尾栅藻生
长的主要影响因子.试验过程中总磷(TP)、总氮
(TN)质量浓度分别为0.329~0.607mg·L-1和
1.016~2.175mg·L-1,这一质量浓度范围的N、P
均能较好地满足四尾栅藻生长的需求;对试验器皿
进行高温灭菌以及浸提液用0.22μm的微孔滤膜
过滤除菌,排除了微生物的干扰,进一步确定化感作
用为抑制藻类生长的主要限制因素.
1.2.3 数据处理
试验数据采用SPSS13.0软件进行统计分析.
化感组分对藻类的相对抑制率计算公式如下:
IR% =(1-N/N0)×100%,
其中,IR为相对抑制率;N 为加入化感组分试验组
的藻密度(ind/mL);N0 为对照组藻密度.抑制率若
为负值表示植物浸提液对四尾栅藻生长有促进作
用.半效应浓度EC50的计算:用生长面积法[17]计算
96hEC50;
A=(N1-N0)/2×t1+(N1+N2-2N0)/2×
(t2-t1)+…+(Nn-1+Nn-2N0)/2×(tn-tn-1),
式中,A为生长曲线以下面积;Nn 为tn 时刻细胞密度;
tn 为试验开始后第n次计数时间.IA=(Ac-At)/Ac×
100% ;其中,IA 为生长抑制百分率,Ac为空白组生长
曲线以下面积;At为受试质量浓度生长曲线以下面积.
以IA 为纵坐标,以质量浓度对数为横坐标作图,IA 值
为50%所对应的质量浓度即为EC50值.
2 结果与分析
2.1 合果芋不同部位浸提液对四尾栅藻的化感作用
2.1.1 合果芋叶浸提液对四尾栅藻的化感作用
图1为不同质量浓度合果芋叶浸提液对四尾栅
655 浙 江 大 学 学 报(理学版) 第38卷
藻生长曲线的影响(a)和抑制率变化情况(b).由图
1可知,除较高质量浓度50g·L-1处理组前3d对
四尾栅藻表现出较弱的抑制效果(最大抑制率仅为
25%),其它各质量浓度处理组对四尾栅藻显示了较
强的促进作用,且随时间延长促进作用提高.第4d
各质量浓度处理组对四尾栅藻均产生促进作用,10、
20、30、50g·L-1质量浓度合果芋叶浸提液处理组
藻密度分别为4.5×105、3.6×105、3.5×105、2.6×
105ind/mL均高于对照组2.1×105ind/mL(P<
0.05),相对抑制率分别为-114.3%、-71.4%、
-66.7%、-23.8%(见图1(b)).第7d,30g·L-1处
理组藻密度最高值为13×105ind/mL;10g·L-1处
理组藻密度最低值为7×105ind/mL,抑制率分别为
-373.7%和-154.5%.造成这种现象的可能原因
是浸提液中的某些其他成分可能被小球藻吸收利
用,为其提供营养,浸提液质量浓度越大,营养成分
越多,因而表现出快速增长趋势.从每天的镜检中
可以看到,各试验组四尾栅藻细胞比对照组小且颜
色略浅,大量的新生细胞均匀地分散在溶液中,新老
细胞的比例明显高于对照组,显示很强的增殖能力.
图1 不同质量浓度合果芋叶浸提液对四尾栅藻生长曲线的影响(a)和抑制率变化情况(b)
Fig.1 Effects of Syngonium podophyllumleaves extract on growth curves of Scenedesmus
quadricauda(a)and inhibitory rate(b)
2.1.2 合果芋茎浸提液对四尾栅藻的化感作用
图2为合果芋茎浸提液对四尾栅藻生长曲线的
影响(a)和抑制率变化情况(b).由图2可知,与合果
芋叶浸提液相似,一般质量浓度越高对藻类生长的
促进作用越大(10g·L-1处理组除外).总体上各质
量浓度合果芋茎浸提液处理组四尾栅藻密度均高于
对照组,表现出较强的促进作用.与合果芋叶浸提液
对四尾栅藻的作用效果类似,50g·L-1合果芋茎浸
提液在试验开始后第1d对四尾栅藻也表现出较轻
微的抑制作用(抑制率为12.7%),此后抑制效果消
失,四尾栅藻细胞快速繁殖.试验第2d后各质量浓
度合果芋茎浸提液处理组四尾栅藻细胞密度显著高
于对照组(P<0.05),对照组、10、20、30、50g·L-1
浸提液处理组藻密度分别为1.68×105、2.5×105、
3.22×105、4.01×105 和3.01×105 ind/mL,抑制率
分别为-48.8%、-90.5%、-138.1%、-78.6%.
试验第7d,10g·L-1浸提液处理组藻密度最大值
为12.0×105ind/mL,相对抑制率为-336.4%;
20g·L-1处理组的藻密度最低也达到 6.5×
105ind/mL,相对抑制率为-136.4%,对四尾栅藻
生长均表现出促进作用.研究表明合果芋茎浸提液
对四尾栅藻的化感作用与蛋白核小球藻有些不
同[18],除较高质量浓度50g·L-1处理组外,各质量
浓度处理组对四尾栅藻显示了较强的促进作用.而
合果芋茎浸提液各质量浓度处理组对蛋白核小球藻
在实验初期表现抑制作用.
图2 合果芋茎浸提液对四尾栅藻生长曲线的影响(a)和抑制率变化情况(b)
Fig.2 Effects of Syngonium podophyllumstems extract on growth curves of
Scenedesmus quadricauda(a)and inhibitory rate
755 第5期 郭沛涌,等:2种陆生植物浸提液对四尾栅藻的化感作用
2.2 榕树不同部位浸提液对四尾栅藻的化感作用
2.2.1 榕树叶浸提液对四尾栅藻的化感作用
图3所示为榕树叶浸提液对四尾栅藻生长曲线的
影响(a)和抑制率(b).试验开始第1d后(30g·L-1
浸提液处理组第2d除外),各质量浓度的榕树叶浸
提液作用下的四尾栅藻密度均低于对照组,显示了
较强的抑制作用.20、30g·L-1处理组随时间延长
抑制率逐渐增大,第2d后20g·L-1浸提液作用下
的四尾栅藻密度急剧减小,到试验第5d,该质量浓
度榕树叶浸提液对四尾栅藻的相对抑制率为
92.1%,藻密度为0.45×104ind/mL,四尾栅藻几乎全
部死亡.10和30g·L-1处理组藻密度分别为4.36×
104 和2.08×104 ind/mL,抑制率分别为23.1%和
63.3%.榕树作为一种重要的药材原料,有多种成分
如黄酮类和内酯类化合物具有抑菌效果,过高的浸
提液含较多的抑菌成分.化感物质对藻类的生长抑
制作用机理主要包括[2]:破坏藻细胞结构,影响藻细
胞光合作用及藻细胞呼吸作用,影响藻细胞酶活性
和藻细胞内小分子物质的含量等,榕树叶浸提液对
四尾栅藻生长影响机制有待深入研究.
图3 榕树叶浸提液对四尾栅藻生长曲线的影响(a)和抑制率(b)
Fig.3 Effects of Ficus microcarpa.leaves extract on growth curves of Scenedesmus
quadricauda(a),and inhibitory rate(b)
2.2.2 榕树气生根浸提液对四尾栅藻的化感作用
图4为榕树气生根浸提液对四尾栅藻生长曲线的
影响(a)和抑制率(b).与榕树叶浸提液对四尾栅藻化感
作用相似,试验开始后在20、30g·L-1质量浓度榕树
气生根浸提液作用下,四尾栅藻细胞密度均低于对
照组,浸提液对四尾栅藻显示了一定的抑制作用,且
随投加浸提液质量浓度的升高对四尾栅藻的抑制作
用增强.以初始藻密度为2.0×104ind/mL分别接种
于几个质量浓度梯度浸提液处理组中,试验1d后,各
质量浓度浸提液处理组四尾栅藻密度显著低于对照组
(P<0.05),之后除10g·L-1浸提液处理组外,四尾栅
藻生长均受到一定的抑制(见图4(b)).试验第5d,对
照组20、30浸提液处理组四尾栅藻细胞密度分别为
5.67×104、5.51×104 和3.67×104ind/mL,抑制率分
别为2.8%和35.3%.
图4 榕树气生根浸提液对四尾栅藻生长曲线的影响(a)和抑制率(b)
Fig.4 Effects of Ficus microcarpa.aerial roots extract on growth curves of Scenedesmus
quadricauda(a),and inhibitory rate(b)
855 浙 江 大 学 学 报(理学版) 第38卷
2.2.3 2种陆生植物不同部位浸提液对四尾栅藻
抑制效果比较
合果芋叶和茎浸提液对四尾栅藻均显示一定的
促进作用,因此仅对榕树不同部位浸提液对四尾栅藻
的化感作用进行比较.图5为榕树叶和气生根浸提液
对四尾栅藻的EC50,96h值.EC50值与浸提液对藻类的
抑制能力成反比,榕树叶和气生根浸提液对四尾栅藻
的EC50,96h值分别为11.17和47.97g·L-1.据此
可知榕树叶浸提液对四尾栅藻的抑制效果好于榕树
气生根浸提液.
图5 榕树叶和气生根浸提液对四尾栅藻的EC50,96h值
Fig.5 EC50,96hvalue of Ficus microcarpa.leaves and
aerial roots extract on Scenedesmus quadricauda
3 讨 论
3.1 不同质量浓度植物浸提液对四尾栅藻的化感
作用效果
合果芋叶和茎浸提液对四尾栅藻表现出促进作
用,仅高质量浓度(50g·L-1)浸提液组试验开始表
现出微弱的抑制作用.这与合果芋浸提液对蛋白核
小球藻的化感作用有一定的差别[18].合果芋浸提液
对蛋白核小球藻和四尾栅藻的作用阈值不同.不同
质量浓度榕树叶、气生根浸提液对四尾栅藻的化感
作用一般低质量浓度处理组对四尾栅藻抑制率较
低,较高质量浓度处理组对四尾栅藻的抑制作用高,
且随投加浸提液质量浓度的升高对四尾栅藻的抑制
作用增强.吴程等[19]研究表明,采用连续添加法时,
粉绿狐尾藻种植水表现出强烈的化感抑藻效应而使
铜绿微囊藻趋向死亡,这说明粉绿狐尾藻抑藻效应
具有累积性.可见,维持较高的质量浓度才能保证抑
藻作用的持续.杨琳等[20]研究表明,伊乐藻和蓖齿
眼子菜两种沉水植物的浸提液均对斜生栅藻的生长
具有化感效应,且都表现为“低促高抑”的现象.伊乐
藻和蓖齿眼子菜20%浸提液试验组对斜生栅藻有
明显的促生长效应,伊乐藻和篦齿眼子菜50%~
90%浸提液试验组对斜生栅藻的生长有不同程度的
抑制,且抑制作用随着浸提液质量浓度的增加而逐
渐增强.胡光济等[11]研究水生植物菖蒲的干体提取
液对铜绿微囊藻和蛋白核小球藻生长的影响也发
现:高体积比菖蒲干体提取液(>40ml·L-1)对2
种低接种密度藻的生长有显著的抑制作用(P<
0.01),最高抑制率分别为98.66%和92.38%;而低
体积比的提取液(<30ml·L-1)能促进蛋白核小球
藻的生长.这与合果芋叶和茎浸提液对四尾栅藻表
现出促进作用,榕树叶、气生根浸提液对四尾栅藻抑
制作用有所不同.大多数化感物质具有广谱性作用
机制,能够影响生物的许多生理生化过程,但主要的
作用机制是影响藻细胞的细胞膜、光合作用和能量
产生步骤及能量使用过程,次要的作用机制是影响
呼吸过程以及酶的作用[21].
3.2 植物不同部位浸提液对四尾栅藻的化感作用
合果芋叶和茎浸提液仅50g·L-1组试验初期
对四尾栅藻表现出抑制作用,其后各质量浓度处理
组均表现出促进作用,由此可知,合果芋不同部位浸
提液对四尾栅藻的化感作用特性相似.而合果芋叶
和茎浸提液对蛋白核小球藻的化感作用特性也是如
此.可见,同种植物不同部位对同一微藻的化感作用
特性相似.比较合果芋叶和茎对四尾栅藻的抑制率
(为负值,实为促进)可知,试验结束时合果芋叶浸提
液对四尾栅藻的促进作用强于茎浸提液,提示起促
进作用的化感物质可能也是由叶片产生,再通过运
输作用达茎组织.李锋民等[12]在研究芦苇不同部位
浸出液对小球藻的抑制作用时发现叶片浸出液对藻
类的抑制作用最强,认为化感物质很可能在叶片中
合成.鲜啟鸣等[22]研究也发现植物的不同部位对化
感作用的贡献是不同的,这与笔者的结论相近.榕树
叶浸提液各质量浓度处理组对四尾栅藻化感作用一
般均表现出抑制作用,而榕树气生根浸提液对四尾
栅藻的化感作用随浸提液质量浓度的升高抑制作用
增强,榕树叶和茎表现出不同的效应.可见,不同植
物产生不同种类、不同量的化感物质,即便是同一植
物不同体系产生的同一种化合物抑藻能力也有很大
差异,在同一植物体不同组织、器官化感物质的量也
不同[23].
3.3 不同类型陆生植物对四尾栅藻的化感作用
除50g·L-1浸提液处理组试验初期外,合果
芋叶和茎浸提液对四尾栅藻在整个试验中均表现出
促进作用,而榕树叶和气生根浸提液一般对四尾栅
藻则表现出抑制作用.由2种植物对蛋白核小球
藻[18]和四尾栅藻96hEC50值以及上述分析可知,
不同种类植物对同一藻类的化感作用效果有所不
同,表现出种类专一性.同一植物对不同藻类的化感
955 第5期 郭沛涌,等:2种陆生植物浸提液对四尾栅藻的化感作用
作用效果也有所不同,表现出选择性抑制或促进的
作用.唐萍等[24]研究表明:几种水生植物的克藻效
应表现为水葫芦、金鱼藻为较快速的类型,而另3种
植物则有一个明显的效应积累的过程;其种植水对
藻体的抑制效应,前2者较后3者也更为明显.其原
因可能在于其分泌物有所不同,分泌的速度有差异,
影响藻类正常生长的阈值大小亦不同,它们在溶液
中稳定性不一样.俞子文等[25]的研究表明:不同植
物种产生的分泌物对同一受体植物产生不同影响,
如五种飘浮水生植物的分泌物对衣藻产生抑制作
用,而西洋菜对衣藻没有抑制作用,甚至稍有促进作
用.分泌物在一定低质量浓度下可能表现为促进作
用,而当质量浓度达一定阈值后,产生抑制作用,这
与笔者的研究结果相似.合果芋为典型的草本植物,
生长速度快,能够无性繁殖.榕树为典型的常绿乔
木,也能够无性繁殖,较容易获得,2种陆生植物对
四尾栅藻的化感作用表现出较大的差异.究其原因
可能是两者起作用的化感物质性质差异较大,合果
芋叶和茎含乳汁,同样榕树叶片和气生根中也含有
大量的乳汁,其乳汁中含具有化感作用的单宁和类
萜.化感物质中很大一部分是植物的次生代谢物质,
主要分为5大类:脂肪族、芳香族、含氧杂环化合物、
类萜和含氮化合物[26].合果芋分泌的化感物质可能
不稳定,容易发生转化,转化产物具有促进四尾栅藻
生长的作用或者合果芋本身能够分泌具有促进四尾
栅藻生长的化感物质,而榕树分泌的类萜物质具有
较好的稳定性,也可能分泌其他一些抑制四尾栅藻
生长的物质,从而表现出较好的抑制效果.
4 结 论
4.1 合果芋叶浸提液除较高质量浓度50g·L-1
处理组前3d对四尾栅藻表现出较弱的抑制效果,
其它各质量浓度处理组对四尾栅藻显示了较强的促
进作用,且随时间延长促进作用提高.合果芋茎浸提
液与合果芋叶浸提液相似,一般质量浓度越高对藻
类生长的促进作用越大(10g·L-1处理组除外).总
体上各质量浓度合果芋茎浸提液处理组四尾栅藻密
度均高于对照组,表现出较强的促进作用.
4.2 试验开始1d后,在各质量浓度的榕树叶浸提
液作用下的四尾栅藻密度均低于对照组(30g·L-1
浸提液处理组第2d除外),显示了较强的抑制作
用.与榕树叶浸提液对四尾栅藻化感作用相似,试验
开始后在20、30g·L-1质量浓度榕树气生根浸提
液作用下,四尾栅藻细胞密度均低于对照组,浸提液
对四尾栅藻显示了一定的抑制作用,且随投加浸提
液质量浓度的升高对四尾栅藻的抑制作用增强.
4.3 榕树叶和气生根浸提液对四尾栅藻的EC50,96h
值分别为11.17和47.97gL-1.据此可知榕树叶浸提
液对四尾栅藻的抑制效果好于榕树气生根浸提液.
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(责任编辑 涂 红)
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