全 文 ：中 国 药 科 大 学 学 报
J o u r nal oC h f ia nP h ar me aeu t ie alU n iver sity1 9 92 ;2 3 ( 6)
:3 6 7一 3 6 93 6 7
不同培养条件及方法对组培暗紫贝母生长的影响
蔡朝晖 高山林 徐德然 朱丹妮
(中药研究所 )
关扭词 暗紫贝母 ;鳞茎培养 ;生物碱
暗紫 贝母 (外砚沥护勿 “ 没护爪 ,“ 。如 IH aS o et
K
.
c
.
sH ia )是百合科植物 ,其鳞茎为川贝来
源之一 ,具有清热润肺 、 化痰止咳 、 散结等功
效 。 但由于它喜寒凉气候 , 为高山 、 高原特有
植物 , 只能野生生长在 3 0 0 0 ~ 3 5 o o m 的高
山上 , 栽培很难成活 l[] 。 为了弥补野生资源
的不足 , 探 讨 药材 生产 新途 径 , 本文 在文
献 2[, 3〕研究的基础 上 , 拟对 暗紫贝母培 养的
温度 、 光照及 培养方法进行研究 , 找出最 佳
的培养条件和方法 , 从而得 到生长迅速 、 生
物碱含量高的暗紫贝母培养鳞茎 。
材料和方法
1
.
1 材料
取 自四川省阿坝地区红原县 山区 ,经我
校生药学教研室徐国钧 教授 、 李萍博士鉴
定 。
1
.
2 方法
.1 么 1 无 菌材抖的获得 材料在流水下冲
洗 3 0 m in 后 ,取鳞茎用 2%次氯酸钠消毒 20
m in
, 无 菌水冲洗 5 次 , 切 成直径 为 0 . 5 c m
的小块接种到 附加 6 B A 1 m s/ L , IA A 1 m s/
L 的 M s 培养基上 ,蔗糖 3 % , p H 5 . 8 , 每天光
照 1 h2 , 获得无菌的小鳞茎 。 5 0 d 后进行继代
萦殖 。
1
.
2
.
2 不 同培养条件的试验 在尽量保持
继代培养的贝母丛生小鳞茎形状的情况下 ,
分切成约 0 . 5 c m 直径的小块接种到预先称
重的附加激素的 M s 固体培 养基上 ( 40 ml
培养基 /瓶 ) , 蔗糖 3% , p H S . 8 , 再称重 后分
别置于 a . 1 5℃ 光照 ; b . 15℃黑 暗 ; e . Z o C 光
照 ; d . 2 0℃黑暗 ; e . 2 5℃光照 ; f . 25 ℃黑暗条
件下培养 。 其中光照培养强度为 6 0 0 L ux , 每
天光照 12 h 。
1
.
2
.
3 培养方 法试 验 进行 三种方法 试
验 : a . 固体培养 ; b . 摇床液体培 养 ( 1 10 r/
m i n ) ; e
. 转床液体培养 ( g r / m i n ) 。 接种方法
及培养基同前 。 接种后材料分别置于静置 、
摇床 、 转床上 ,在 20 ℃光照条件下培养 。
以上两个试验均在培养 50 d 后 , 计算接
种量 、 收获 量 、 生 长率 、 可增 鲜重 / 升 、 折 干
率 , 可增干重 /升 , 生物碱含量 、 可产生物碱 /
升 。 计算方法见文献 z[] 。 生物碱含量的测定
见文献 [ 3〕 。
对接种量 、 收获量 、 生长 率均计算平均
值和标准差 ` 士 s E ) ,并对生长率进行方差
分析 , 比较各种处理间的差异 。
2 试验结果
2
.
1 不 同培养条件的试脸
培养 15 d 左右即可看到原有的鳞茎长
大 ,并开始在表面或边缘出现数个白色的小
突起 ,逐渐长成小鳞茎 ( 见图 1 ) 。 30 d 后进入
快速生长期 。 暗培养材料 比光培养材料的颜
色略白 。 光培养条件下部分鳞茎长出带绿色
茎 、 叶的完整植株 ( 见图 2) 。 材料培养 50 d
后收获 ,结果见表 1 。
对生长率进行了方差分析 ,结果见表 2 。
收稿日期 19 9 2一 0 4一 2 2 江苏省科学技术委 员会资助项 目
3 6 8 中 国 药 科 大 学 学 报 2 3卷
F场 1 . C冶】tur目 B . l加 ed rl ved fr mo e x Plan l. F堪 2 . P】a n tel t d e ri ved f r o m e x P恤 n t u n de r li gh t·
Ta b 1
.
E x件 r助 e n因 esr ul st o f 加 m ep ra tu re an d il gb t
1 5℃ 〔怕了 k 1 5℃ Li gh t 20℃ D公 k 2 0℃ L i gh t 25℃ Oa r k 25℃ Li沙 *
. . . . . . . . . ~ . . . . ~ . 一一 1 4 1 6 1 6 2 4 1 7 1 4I n o` u场宜司 w e l的 t (吕)H . , . tde w e扭自t ( g)G or w ht ar et (云土 s E )Y i. ld of f r . 匕 d r u g ( . / L )aR肠 ot d叮八 r . b (助Y l e l d o r d r y d r u . (` / L )C o n加 n t of 目七川喇 (% )Y拓 dj of 目医目 0记 ( m日 / L ) 0 . 7 09士 0 . 0 33 0 . 5 39士 0 . 0 3 6 0 . 6 7 4士 0 . 0 5 81 . 7 9 1士 0 . 0 7 7 1 . 6 49士 0 . 18 2 2 . 劣5 8土 0 . 3 2 62 . 5 7 9士 0 . 1 42 2 . 99 6土 0 . 19 6 3 . 压8 8士 0 . 2 4 73 9。 4 81 3。 5 0 49 。 9 01 3。 5 6 6 4 。 7 013。 5 75 . 3 2 90 . 0 6 3 2 63 。 3 7 1 6 . 7 6 60 . 0 5 1 3 23。 4 7 3 8 。 7 8 00 . 0 6 3 2 75 . 5 5 5 0 . 6 1 6士 0 . 0 4 3 0 . 5 9 8士 0 . 0 2 9 0 . 6 0 6土 0 . 0 482 . 2 4 6士 0 . 18 9 2 . 0 16士 0 . 1 7 6 1 . 9 8 1士 0 . 18 73 . 6 38土 0 . 2 10 3 . 4 5 6土 0 . 3 2 4 3 . 35 1土 0 . 2 5 465 . 9 5 6 1 . 4 0 5 8 . 7 81 3 . 9 5 14 . 7 8 1 4 . 2 79 . 2 00 9 . 0 7 5 8 . 3 8 70 . 0 6 68 5 0 . 0 3 4 9 5 0 . 0 2 8 6 76 . 1 5 0 3 . 17 2 2 . 4 0 5Ta b 2 . S R set t 加 r肛 o w ht f at e a m on s ,纽 co m b in a t i o n s o f t e m -沐 . 奴呀 . an d il gb t~ or ~ aert ` 坐竺竺竺经卫竺竺竺竺e .0 . 0 5 0 . 0 12 0℃ L细由t 3 . 6 3 8 a ^20℃幻恤 r k 3 . 5 8 8 a A25℃ U恤 r一 4 5 6 a A B2 5℃ 曰招h t 3 . 3 5 1 a A B1 5℃ 日的 t 2 . 9 9 6 a b A B
1 5℃幻恤 r k 2 . 5 7 9 b B
表 1 、 表 2表明 : 20 ℃条件下的平均生长
率为 3 . 61 3 , 2 5 ℃条件下 的平均 生 长 率 为
3
.
4 0 4
。 无论是光培养还是暗培养 , 25 ℃条件
下的生长率略低于 20 ℃条件下的生长率 ,但
差异不大 ,这与显著性测定结果相一致 。 在
巧℃低温条件下 , 生长率明显降低 , 光培养
和暗培养的平均生长率仅为 2 . 7 8 8 , 比 20 ℃
条件下下降 23 % 。 生长率 显著性测 定中 ,
巧℃光培养接近显著差异 , 15 ℃ 暗培养达到
极显著差异 。 光照和黑暗条件下生长率的差
异不明显 。 表 1 中生物碱含量 20 ℃时最高 ,
平均 为 0 . 0 6 5 0 6 % , 1 5℃ 时 次 之 , 平 均 为
.0 0 5 7 2 9%
,
2 5℃ 时 最 低 , 平 均 仅 为
0
.
0 3 1 8 1%
, 比 2 0℃ 时下降 5 1% , 说明 2 5 ℃
条件下对生物碱累积影响不利 ,而 15 ℃时光
照或黑暗培养对生物碱累积影响不大 。 每升
培养基可产生物碱数量以 20 ℃时最高 ,平均
为 .5 8 53 m g , 15 ℃和 25 ℃时都较低 ,分别为
3
·
4 2 2 m s 和 2 · 7 8 9 m s 。 2 0 ℃条件下分别比
1 5℃和 25 ℃条件下增加 7 1%和 1 10邢 ,差别
悬殊 。 因此 20 ℃是贝母鳞茎培养最适 当温
度 , 其中光培养又略优于暗培养 。
2
.
2 不 同培养方法试脸
培养条件为 20 ℃光培养 ,接种方法及生
长情况同前 , 所得结果见表 3 。生长率显著性
测定结果见表 4 .
6 期 蔡朝晖等 : 不同培养条件及方法对组培暗紫贝母生长的影响 3 6 9
aT b 3
.
E x pe r如 e n at l r es u l st o f d i f f e r e n t c u l t u r a l m e t h do s
M e t h
`川 S o l i d e u l t u t e R ot a t i o n e u l t u r e S h自k e C u l t u t e
几 2 4 2 1 1 8
I n co u 扭 tde w e igh t ( g ) 0 . 6 16士 0 . 0 4 3 0 . 6 9 5士 0 . 0 4 2 0 . 6 3 0士 0 . 0 2 8
H ar v es t曰 w e i g h t ( g ) 2 . 2 46土 0 . 18 9 2 . 3 3 3士 0 . 2 2 5 2 . 9 13士 0 . 14 6
G r o w t h r a t e ` 士 召E ) 3 . 6 38士 0 . 2 10 3 . 3 1 1士 0 . 1 9 5 4 . 7 6 9士 0 . 3 12
Y i e l d Of f
r留h d r u s ( g / L ) 6 5 . 9 5 5 7 . 7 8 9 4 . 2 3
a
t o o f d r y 八 r es h (% ) 1 3 . 9 5 1 1 . 9 3 12 . 5 8
Y ie 一d o f d r y d r u g ( g / L ) 9 . 2 0 0 6 . 89 3 1 1 . 8 5 4
C o n t e n t o f ia k a l o id (% ) 0
.
0 6 6 8 5 0
.
0 5 02 5 0
.
0 6 7 5 3
Y le l d o f a l k ia o i d ( m g / L ) 6
.
1 5 3
.
4 6 4 8
.
0 0 5
T a b 4
.
S S R 比 . t f o r gr o w t h r a t e a m o n g d i f fe r e n t e u l t u r a l
m e t b o山
M e oh` G r o w t h r a t。 止塑哩些竺竺竺塑翌生
0
.
0 5 0
.
0 1
S恤k e e u l t u r e 4 . 7 69 a A
S o l j d e u l t u r e 3
.
6 38 b B
R o扭 t i o n e u l t u r e 3 . 3 1 1 b B
表 3 表明 : 摇床上培养材料生长得最快 ,
固体培养次之 ,转床上生长得最慢 。表 4 表明
固体和转床之间的差异不显著 , 但它们与摇
床 间的差异极显著 。 生物碱含量 以摇床最
高 , 为 0 . 0 6 7 5 3 % ; 固 体 培 养 次 之 , 为
0
.
0 6 6 8 5% ;转床上的最低 , 为 0 . 0 5 0 2 5 % 。 按
每 升培养基计算生物 碱也 以摇 床最 高 , 为
5
.
0 0 5 m g
, 比固体培养基 ( 6 . 1 5 0 m g )上的高
3 0%
, 比转床上 ( 3 . 4 6 4 m s )的高 1 3 1% 。 综上
所述 ,摇床培养无论是生长率还是生物碱含
量均高于固体培养和转床培养 。
3 讨 论
暗紫贝母 自然生长在高海拔冷凉 山区 ,
其正常生长发育需要较低的温度 〔`〕。 组织培
养虽然可以人为地控制植物的生长 , 但同样
也存在植物本身生长习性的影响 。 从本实验
结果看 , 20 ℃是 最佳培养 温度 , 比一般组 织
培养要求的温度偏低 ,而且尽管 巧℃时鳞茎
生长得最慢 , 但其生物碱含量 并不低 , 因此
每升生物碱数量 比 25 ℃条件下还略高 。 而在
2 5℃时 ,虽然生长率高 ,但生物碱含量很低 。
由此看来 , 20 ℃ 以及较低的温度条件下有利
于生物碱的积累 。
参 考 文 献
四川省中药学校栽培教研组 . 药用作物截培 学 . 19 8 1 ,
3 2 3
一
3 3 1
。
高山林 , 朱丹 妮 . 蔡朝晖等 . 暗紫贝母瞬 茎器官培养生
长特征 和 生 物碱景积的研究 . 中 国 药科 大 学学报 .
19 9 2 ; 2 3 ( 3 )
: 14 4
朱丹妮 ,蒋莹 , 陈 婷等 . 组织培养川 贝母化学成分和
药理 作 用的研究 . 中国药科 大 学 学报 , 19 92 . ” (2 ) :
1 18
E f f e e t o f D i f f e r e n t C u l t u r a l C o n d i t i o n S a n d M e t h o d s o n t h e
G r o w t h o f
H S i a o et
.
K
.
C u l t u r e d B u l b o f F r 诬t诬l l a r 诬a U 牡云b r a e t e a t a
C
.
H S i a
C a l Z h a o h u i
,
G a o S h a n l i n
,
X u D e r a n a n d Z h u D a n n i
了乍脚谊如喇 乙凭翻巴男 尸版扩伽刁 石妞它etU
T h e 琳pe r r e po r t s th e g r o w t h r a t e s a n d a l k a l o id e o n te n st o f 外众幼如 , 如 “ 而咖口 c撅侧劝 H s i a o e t . K . C . H s ia
in t iasu
e e u l ut r e b y 3 et m pe r a t u r e s
,
2 l ig h t i n g s a n d 3 e u l t u r a l m e t h od s e x ep r im e n st
.
T h e r es u l st s h o w
坎比 t ht e h翅自est 肛 o w ht r a t e a n d a l k a l o id e o n t e n t o f e u lt u r e d b u lb 15 i n s h a k e e u it u r e a t 2 0 `
.
C
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15 n o s地n if i ca n t d if f e r e n e e be t w e e n l ig h t a n d d a r k e u l t u r e .
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