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中 国 药 科 大 学 学 报
Jo u a r n lo fC hi
na
Ph
a rm a e eu tic a lU
ni、 , e r s i t y 19 9 2 ; 2 3 ( 5 ) : 3 0 4一 3 0 6
暗紫贝母鳞茎培养中培养基的选择和简化试验
徐德然 高山林 蔡朝晖 朱丹妮
(中药研究所 )
关工词 暗紫贝母 ; 鳞茎培养 . 生物碱
暗紫贝母 ( 外翻“ 如 ,必 溯伽 a咖at )为 川 贝母的主要来源之一 ,是我国特有的中药材 ,以
地下鳞茎入药 。 用于肺热燥咳 、 干咳少痰 、 阴
虚劳嗽 、 咯痰带血 〔’ 〕。 由于川贝母对生长环境
要求极苛刻 , 喜寒凉气候 , 野 生分 布于海拔
3 2 0。一 4 5 0 0 m 的 高 山高 原草地 上 , 低 于海
拔 3 0 0 O m 就不能生长 , 因此很难人工引种栽
培川 , 产量很少 ,价格昂贵 。 为此我们进行了
川贝母鳞茎器官培养的培养基筛选和降低培
养基成本简化培养基成分的试验 , 以期开辟
药材生产新途径 。
材料和方法
1
.
1 材料 培养材料采集于 四川省阿坝 自
治州红原县山区 , 经我校生药室鉴定为暗紫
贝 母 ( 外翻曲, 她 。 ,咖 a e aet at K isa o e t K . C .
H lsa )
。
1
.
2 方 法
L 么 1 无 菌材抖的获得 取野外采 回的暗
紫贝母鳞茎 , 洗净 , 放入 2%次氯酸钠溶液中
消毒 20 m in ,无菌水冲洗 5 次 ,切成约 0 . s c m
的块 ,接种到附加 6一 B A 1 . 0 m g L/ 和 认A 1 . 0
m s/ L 的 M s 培养基上 , 50 d 后获得无菌的小
鳞茎和芽 , 并在此培养基上继代培养 ,扩大供
试材料 。
1
.
2
.
2 化学成 分分析 取样品 0 . 5 9 精密
称定 , 用适量 10 %氨水碱化 , 然后置沙 氏提
取器中乙醚浸泡过夜 , 回流 3 h , 回收乙醚 , 残
渣用氯仿溶解 , 定量转移至 10 ml 容量瓶 中 ,
吸取 1 ~ Z ml 移至分液漏 斗中 , 加氯仿至 8
m l
,
p H S 缓冲液 2 m l 、 0 . 0 1 m o l / L 澳 甲酚绿 2
m l
,剧烈振摇 1 m sn ,静置 15 m i n , 氯仿层过滤
至 10 m l 容量瓶中 , 水层再用氯仿洗 , 合并氯
仿液 ,定容 。分光光度法 4 10 n m 测定吸收度 。
按浙 贝乙素计算总生物碱含量 , 每个样品测
定均取 2 次平行测定之均值 ,平行误差不超
过 5绒 。
1
.
2
.
3 基本培养基试验 取暗紫贝母 的无
菌材料 , 在尽可能地保持其完整性的前提下 ,
切成约 0 . 5 c m 的块 , 接种到 附加 6一 B A 1 . 0
m g / L
、
IA A 1
.
0 m g / L
, 蔗糖 3% 、 p H 5 . 8 的
M S
、
B S
、
s H 和 67 一 v 四种基本培养基上 。 培养
温度约 20 士 l ℃ , 约 6 0 0 uL x 的中等光照 , 每
天 1 2 h 。
1
.
2
.
4 简化培养试验 采用 M S 培养基 , 分
别用食用 白糖代替蔗糖和冷开水代替蒸馏水
组合成蔗糖 + 蒸馏水 、食用白糖 + 蒸馏水 、 蔗
糖 + 冷开水和食用 白糖 十冷开水 4 个试验 ,
其 中用冷开水而不用 自来水 , 其 目的在于减
少 自来水中无机离子 , 尤其是钙对实验 的影
响 。 接种方法和培养条件同上 。
1
.
2
.
5 计算方法 接种后 50 d 取材 ,每个
处理均测定接种量 、 收获量 、 生长率 、 可增鲜
重 s/ L 、 折干率 、 可增干重 g / L 、 生物碱含量和
可增生物碱数量 m盯 L 等 8 个指标 , 并对生
长率进行 S R 差异显著性测定 。
收稿 日期 19 9 2一 07 一 09 江苏 省科委资助项 目
5期 徐德然等 :暗紫贝母鳞茎培养中培养荃的选择和简化试验 30 5
2 结果和分析
2
.
1墓本培养墓试脸
鲜茎切块接种后约 15d 开始逐渐生长 ,
新接种的小鳞茎缓慢膨大 , 并且有新丛生 芽
T a b 1
.
E x ep r im e n t 时 d i f介 r e n t m记 iu m
形成 。 收获材料的 8 项试验数据列成表 1 ,详
细计算方法参见本室 已发表的暗紫贝母鳞茎
器官培养生长特征和 生物碱累积的研究 s[] 。
对 生长率进行的 s s R 差异显著性测定结果
见表 2 。
M S ( 月= 4 4 ) B ` ( . = 4 2 ) S H ( . = 4 4 ) 6 7一 V ( . 一 4 5 )
In oc u压a t目 w e ihg t . 9 0 . 9 3 5士 0 . 0 2 9 0 . 6 1 1士 0 . 0 2 2 0 . 8 9 7士 0 . 0 3 4 0 . 9 5 5土 0 . 0 3 4
H肚 v es t ed w e ihg 仁. 9 4 . 6 8 1士 0 . 18 2 1 . 9 9 6士 0 . 0 9 2 2 . 8 8 0土 0 . 1 4 2 2 . 8 8 4士 0 . 14 1
G or w t h
r a t e , 云士习E 5 . 18 3士 0 . 2 3 7 3 . 4 0 1士 0 . 1 9 6 3 . 3 0 7士 0 . 1 7 0 3 . 10 2土 0 . 15 7
Y le l d o f f r es h
, g / L 10 7
.
5 7 5 6 0
.
0 2 5 5 7
.
6 7 5 5 2
.
5 5
R a t e o f d r y / f
r es h
,
% 13
.
2 2 14
.
5 9 1 7
.
3 4 14
.
8 9
Y i e l d o f d r y d r u g , 名/ L 1 3 . 8 25 8 . 7 5 8 10 . Q0 0 7 . 8 2 5
e o n t o n t o f a l k a 一说 d , % ( d r同 w 。 盛的 t ) 0 . 0 4 4 7 0 . 0 6 0 3 0 . 0 4 4 6 0 . 0 49 8 5
Y 妞 ld o f a l k a l o i d , m g / L 6 . 1 8 5 . 2 8 1 4 . 4 6 0 3 . 9 0 1
T ab 2
.
S S R t e o t for gr ow ht
r a比 a m on g id f f e r e n t m团 i u m
5 1助if ica n比 o f d i f f e r e n e e
M e d 1U m G r o w t h r a t e—0 . 0 5 0 . 0 1M S 5 . 1 8 3 . AB s 3 . 4 0 1 b BS H 3 . 3 0 7 b B6 7一 V 3 . 10 2 b B从表中可以看出 ( 1) M s 培养基上 暗紫 贝母的生长率明显高于其 他培养基上 的生长
率 ,通过 S R 差异显著性测定 a 均在 0 . 01 和
0
.
0 5 的显著水平上 。 ( 2) 从每升培养基增加
的鳞茎鲜重和干重也可以看出以 M S 培养基
T a b 3
.
T b e ex eP r如 。 n * of s加 Pilf i团 e u l t u r a l m比 i u m
的增值为最大 , 分别比第二位的 B , 高出 79 %
和 58 % 。 虽然 M s 培养基上的培养鳞茎生物
碱含量比 B 。 低 34 . 8% ,但就生物碱含量和每
升可增干重折算出的每升培养基可增生物碱
数量来看 , M s 培养基仍为最 好 , 比第二位的
B 。 高 15 % 。 因此可以认为高硝态氮和高氨态
氮培养基对暗紫贝母的鳞茎是最适宜的 。
2
.
2 简化培养试脸
根据四个处理的八项试验数据结果列成
表 3 。
D is 七1 1目 w 皿t e r D妇 t山 ed w 口 t e t B o i led w . t e r B o i l e d w a t e r
十 s u e r哪 ( . = 4 4 ) + s u s a r ( . ~ 4 2 ) + su cr 咪 ( . = 4 4 ) + s u明 r (一 4 5 )
·
I n o 心u l a t e d w d的 t , 9 0 · 5 8 8土 0 · 0 3 3 0 . 6 16士 0 . 0 4 3 0 . 7 3 3士 0 . 0 4 3 _ ~ 0 . 6 6 2土 0 . 0 17
H a r v es 招 d w e相办t , 9 2 . 2 3 0土 0 . 1 67 2 . 2 46士 0 . 18 9 2 . 5 3 4土 0 . 1 7 5 2 . 16 1土 0 . 13 0
e r o w t h r a t e , 三士 s 召 3 . 8 2 5士 0 . 2 3 2 3 . 6 35士 0 . 2 20 5 . 4 9 5土 0 . 2 0 3 3 . 2 礴l士 。一 5弓
Y i e 记 Of f r es h . 8 / L 7 0 . 6 2 5 6 5 . 9 5 6 2 . 4 5 0 5 6 . 0 2 5
R a t e o f d r y / f r es h
, 写 1 3 . 5 2 1 3 . 9 5 13 . 40 13 . 69
Y i e l d o f d r y d r u g
,
s / L 9
.
5 4 8 5 9
.
2 0 0 0 8
.
3 6 8 3 7
.
6 6 9 9
C on .
n t o r a l k a xio
,
% ( d r i目 w e ihg t ) 0 . 0 4 7 3 0 0 . 0 6 68 5 0 . 0 4 4 6 9 0 . 0 5 12 4
Y l e沁 of 川 k a] 0 记 , m g / L 4 . 5 1 6 6 . 1 5 0 3 . 7 4 0 3 . 9 30
从表中可以看出 ( l) 四个处理中 , 生长率 馏 水处理的生长率未达到显著程度 , 说明用
最高 的为蒸馏 水 + 蔗糖 , 其余各代用 品处理 食用 白糖代替蔗糖或用开水代替蒸馏水均对
的生长率均有所下降 ,但下降幅度不大 , 随着 暗紫贝母鳞茎培养的生长有一定影响 , 其中
代用程度的增加下降幅度也增大 , 用冷开水 食用白糖代替蔗糖后生长率平均下降 6% ,用
+ 食用 白糖的处理生长率最低 , 下降 15 . 3% 。 冷开水代替蒸馏水后生长率平均下降 10 % 。
经显著性测定 , 它和 生长率最高的蔗糖 + 蒸 ( 2) 从生物碱含量变化来看 , 用蒸馏水 + 食用
3 0 6 中 国 药 科 大 学 学 报 2 3 卷
白搪的组 合生物 碱含量最 高 , 其次是冷开水
+ 食用 白糖组 。 用食用白糖代替蔗糖后生物
碱含量不仅没有下降 , 还有所提高 , 这一现象
表明用食用白糖代替蔗糖对生物碱的累积是
有利的 ,至少没有不利的影响 。 但是用冷开水
代替蒸馏水的两对组合中生物碱含量均有较
大程度的下降 。 ( 3) 综合以上结果初步认为 ,
用食用白糖代替蔗糖后 ,虽然生 长率平均下
降 6% ,但生物碱含量却平均增加 28 % , 每升
获得的生物碱数量提高 了 2 % 。 而且食用 白
糖价格仅为蔗糖的七分之一 ,这样 可使每 升
培养基的成本降低 30 %左右 , 因此在生产中
是可以采用的 。 另一方面冷开水代替蒸馏水
后平均生长率 下降约 10 % , 生物碱 含量也降
低约 16 % , 每升培养基可获得的生物碱数量
下降约 28 % , 同时用冷开水代替蒸馏水也降
低不了多少成本 。 因此暗紫 贝母鳞茎培养以
用蒸馏水为好 ,不宜用冷开水代替 。
参 考 文 献
中华人 民共和国卫生 部药典委 员会 . 中华人民共 和 国
药典 . 人民卫生出版社 , 化学工业出版 社 , 1 99 0 : 24
四川省中药学校栽培 教研组编 . 药 用作物 栽培学 . 四
川中药学 校 , 一9 8 1 ; 3 , 3 2 3一 3 1
高 山林 , 朱丹妮 , 蔡朝 晖等 . 暗 紫 贝母鳞茎 器官培养生
长特 征 和 生 物碱 累积 的研 究 . 中 国 药科 大 学 学报 ,
19 9 2 ; 2 , ( 3 )
: 14 4
一
7
S t u d y o n M e d i u m S e l e e t i o n a n ( 1 S i m P l i f i e a t i o n
i n B u l b C u l t u r e o f F r 诬t诬l l a r 诬a u 牡诬b r a e t e a t a
X u D e r a n
,
G a o S h a n l i n
,
C a i Z h a o h u i a n d Z h
,以 D a n n i
介a d i t功朋1 hC i爬 se 户凭a 尹砌 e y nI s t i t u te
T h e e x pe r im
e n t s o f b a s ie m e d i u m se l e e t io n a n d s im Pl i「i e a t i o n w e r e d o n e i n b u l b c u l t u r e o f 价汉z如俨浓
“ 界功 r a e te a at w it h a v i e w t o o b t a i n i n g th e be s t r e s u l t s a n d r e d u e i n g t h e P r do u e t io n e o s t . T h e o b ta i n e d
r e s u lts i n d i e a t e d t h a t M S m
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d iu m w a s t h e m o s t s u i饭 b le m e d i u m w h i e h e o u l d P r do u e e t h e h i g h e s t y ie ld
o f a lk a lo i d a m o n g f o u r t y pe s o f m
e
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d i u m s i m l , l if i c a t i o n e x pe r im
e n t s in d i e a t e d t h a t s u g a r w a s a
s u i at b le s u b s t i t u t e f o r s u e r o s e
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I t e o u ld n o t o n ly r e d :
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,
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e r e a se t h e y ie ld o f a l k a l o i d b y a b o u t 2 2 %
.
T h e s u 饮 ; t i t u t io n 15 w o r t h be i n g u se d ih p r a e t ie a l p r od u e -
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