全 文 ：收稿日期：2008 - 10 - 20 录用日期：2008 - 11 - 25
基金项目：国家 863 计划专题课题 （No. 2007AA06Z417）；国家自然科学基金项目 （No . 20777056）
作者简介：葛会林 （1981—），男, 博士研究生 ; * 通讯作者 （Corresponding author），E-mail: ssliuhl@263 .net
微板吸光法测定 9种农药对斜生栅藻的抑制毒性
葛会林 1，刘树深 1，*，朱祥伟 2，王丽娟 1
1. 同济大学环境科学与工程学院 长江水环境教育部重点实验室 , 上海 200092
2. 西南大学生命科学学院 三峡库区生态环境教育部重点实验室 , 重庆 400715
摘要：以斜生栅藻（Scenedesmus obliquus）为指示生物 , 96 微孔板为暴露反应载体 , SpectraMax M5 酶标仪为吸光度测
试设备 , 建立了测定毒物对藻生长抑制毒性的微板吸光法 . 论文系统研究了微板吸光法中斜生栅藻的可见吸收光谱
和生长曲线以及 pH 和暴露时间对藻生长的影响 , 同时应用该方法成功测定了环嗪酮、阿特拉津、西草净、扑灭通、苯
嗪草酮、敌草快、草甘膦 7 种除草剂和磷胺、甲胺磷 2 种杀虫剂对斜生栅藻的剂量 -效应曲线（DRC）. 通过对剂量 -效
应数据进行非线性最小二乘模拟 , 获得了这些农药的半数效应浓度 EC50 及置信区间 . 对比标准锥形瓶栅藻毒性试
验 , 微板吸光法具有测试简便快速 , 所需样品体积少 , 便于多次平行毒性测试等优点 .
关键词：斜生栅藻；除草剂；杀虫剂；微板藻毒性；剂量 -效应曲线
文章编号：1673 - 5897（2008）6 - 606 - 07 中图分类号：X502 文献标识码：A
Microplate Algae Toxicity of 9 Pesticides to Scenedesmus obliquus
Based on Absorbance
GE Hui-lin1，LIU Shu-shen1，*，ZHU Xiang-wei2，WANG Li-juan1
1 . Key Laboratory of Yangtze River Water Environment , Ministry of Education , College of Environmental Science and Engineering ,
Tongji University , Shanghai 200092
2. Key Laboratory of Eco -Environments in Three Gorges Reservoir Region , Ministry of Education , College of Life Science , Southwest
University , Chongqing 400715
Received 20 October 2008 accepted 25 November 2008
Abstract：A microplate algae toxicity assay was developed using the multifunctional microplate reader（SpectraMax M5）to
measure the absorbance of Scenedesmus obliquus and taking the 96-well microplate as exposure reaction carrier. The visible
absorption spectra and growth curve of Scenedesmus obliquus , effects of pH and exposure time on algae growth in the
microplate algae toxicity assay were systematically investigated. The method was successfully employed in dose -response
curve（DRC） tests of seven herbicides（hexazinone, atrazine, simetryn, prometon, metamitron, diquat, glyphosate） and two
insecticides （phosphamidon, methamidophos） to Scenedesmus obliquus . The median effect concentration （EC50）and its
confidence intervals（CI） of these pesticides were computed from the nonlinear least square modeling of dose -response
data. Compared with the standard flask assay of Scenedesmus algae, microplate absorbance assay has some advantages such
as fast easy-operating, requiring low sample volumes, easy to perform more parallel tests of toxicity and so on.
Keywords：Scenedesmus obliquus；herbicides； insecticides；microplate algae toxicity；dose-response curves
2008 年 第 3 卷
第 6 期，606-612
生 态 毒 理 学 报
Asian Journal of Ecotoxicology
Vol. 3, 2008
No. 6, 606-612
葛会林等：微板吸光法测定 9 种农药对斜生栅藻的抑制毒性第 6 期
1 引言（Introduction）
藻类是水体中的初级生产者 , 处于水生食物
链的基础环节 , 在制造氧气和有机物、光能转化和
水体污染的自净等方面具有重要的意义 . 因此评
价污水与化学品的生态毒性时 , 都把藻类生长抑
制试验作为一项重要内容（中国国家环境保护总
局 , 2002）. 一些国际组织和国家已制定了藻生长
抑制毒性试验的标准方法 , 如国际标准化组织
ISO 8692 标准（1989）、经济合作与发展组织 OECD
201 标准 （1984） 和美国环境保护署 US EPA
（1989）等 . 但这些标准一般是用锥形玻璃瓶作为
藻类培养容器 , 毒性测试过程需要样品体积多、工
作量大 . 随着环境样品和工业有毒化学品筛选数
目的增加, 迫切需要改进这种高耗低效的测试方法.
Radetski 等（1995）建立了一种半静态的基于
96 微孔板的藻毒性试验 , 是将含藻和毒物的培养
基加入到微板孔中 , 用粘性膜封盖微板 , 每隔 24h
去掉封膜 , 离心去掉旧培养基 , 加入含毒物的新培
养基 , 培养 72h 后 , 将每孔液体吸出加入到包含
20mL 电解质溶液的池中进行颗粒计数测定 .
Benhra 等（1997）采用低温冷冻藻种解冻后在微板
上培养实现了半静态藻类毒性试验 , 与经典半静
态微板藻毒性试验相比具有更灵敏、重复性更好
和试验效率更高等优点 . Arensberg 等（1995）用玻
璃瓶作对照 , 研究了微板对藻的毒性 , 发现
Corning、Costar（这两品牌现已合并）和 Falcon 3 家
厂商生产的 24 微孔板对藻生长均有一定的抑制作
用 , 相 对 来 说 Costar 微 板 的 抑 制 作 用 最 小 .
Rojickova 等（1998）在藻毒性试验微型化研究中对
塑料管、微板和玻璃瓶中藻毒性试验程序进行了
比较 , 发现 3 个测试程序内部具有较好的一致性 ,
毒性测定结果具有可比性 , 塑料管和微板藻毒性
试验能用来代替标准的玻璃瓶藻毒性试验 . Geis
等（2000）用 24 微孔板对标准锥形瓶实验进行了比
较研究 , 发现微板试验能显著提高空白控制的重
复性 ; 还对手工藻细胞计数与吸光、荧光法测定进
行了比较 , 发现后两种方法能降低平行测定的变
异 , 且节省时间 . Eisentraeger 等（2003）提出了藻类
生长抑制试验的荧光微板法 , 用 24 和 96 微孔板
对玻璃瓶实验进行了比较研究 , 统计分析表明微
板试验非常接近玻璃瓶试验结果 , 且微板试验具
有能处理更多的样品，做更多的浓度与平行，更小
的培养空间等优点 , 能用于更广范围化学制剂和
环境样品的测定 . Paix觔o 等（2008）对藻类微板毒性
试验和标准玻璃瓶毒性试验进行了比较研究 , 统
计分析表明这两种方法具有很好的一致性 ; 对微
板藻试验与浮萍试验比较研究发现 , 两者结果也
能较好地符合 , 藻类比浮萍对毒物灵敏度更高 .
Gómez de Barreda Ferraz 等（2004）用微板生物测定
法同时研究了敌稗、虫酰肼和灭芬草对两种栅藻
与两种小球藻生长的毒性效应 , 选择暴露时间为
0、24、48 和 72h 时在 410nm 吸光测定 , 发现虫酰肼
对这 4 种藻类的毒性最大 , 两种小球藻对毒物的
耐受性比两种栅藻要大 . Gabrielson 等（2003）甚至
提出了用微板生物试验构建化合物毒性指纹的想
法 , 即在 96 微孔板上平行放置 11 种不同的微生
物 , 化合物按一定浓度梯度加入微板 , 用每孔颜色
降低的程度来指示微生物生长受抑制的程度 , 用
微板分光光度计读取微板 , 那么 11 个不同抑制毒
性值的阵列就构成用以表征化合物的一个毒性指
纹 , 结果表明该试验能将文中 12 个标准化合物区
分开来 .
本研究在我国环境保护总局推荐藻生长抑制
试验标准（中国国家环境保护总局 , 2002）基础上 ,
试图建立能低耗快速测定藻生长抑制毒性的方法 .
在对标准藻生长抑制试验测定条件进行优化的基
础上 , 建立了微板藻毒性试验方法（微板吸光法）,
并将其应用于环嗪酮、阿特拉津、西草净、扑灭通、
苯嗪草酮、敌草快、草甘膦 7 种除草剂以及磷胺、
甲胺磷 2种杀虫剂对斜生栅藻的抑制毒性效应测试 .
2 材料与方法（Materials and methods）
2.1 仪器与试剂
SpectraMax M5 型 酶 标 仪 （美 国 Molecular
Devices 公司）, SW-CJ-IF 型净化工作室（苏州佳宝
净化工程设备有限公司）, 150C 恒温光照振荡培养
箱（金坛市亿通电子有限公司）, LS-B50L 型立式
压力蒸汽灭菌器（上海医用核子仪器厂）, BT25S型
五位电子天平（赛多利斯公司）, PHS-25 型数显酸
度计（上海天达仪器有限公司）, Milli-Q 超纯水系
统（美国 Millipore 公司）. 酶标板选用 Costar 96 孔
平底透明聚苯乙烯微孔板（Corning , 9018）.
受试的 9种农药名称、生产商、CAS号与纯度见
表 1. 农药储备液配制方法为在其溶解度内称取一
定量标准品 , 直接用蒸馏水溶解在棕色容量瓶中 ,
607
生 态 毒 理 学 报 第 3 卷
保存于 4℃冰箱 .
2.2 藻种预培养
斜生栅藻（Scenedesmus obliquus）购自中国科学
院典型培养物保藏委员会淡水藻种库（FACHB）,
编号 FACHB-416. 采用 HB-4 号绿藻通用培养基
（况琪军等 , 2003）培养 , 配方为 :（NH4）2SO4 0.2g ,
MgSO4·7H2O 0.08g , NaHCO3 0.3g, Ca（H2PO4）2
0.03g , KCl 0.025g , 1% FeCl3 0.15mL , 土壤浸出液
1mL , 蒸馏水 1000mL . 收到藻种后 , 稍微松开管
盖 , 放入光照培养箱 , 温度 22℃ , 弱光照（光照度
约 1500lx）, 光暗周期 14h:10h, 每天摇动 3 次以上 ,
活化培养 1d . 活化藻种按体积 1:2 接种在 20mL 培
养基中 , 仍按前面条件培养 , 随着藻细胞密度的增
加 , 可逐步提高光照 , 培养 7d 左右 , 再按 1:2 稀释
进行扩大培养 .
2.3 波长、pH 值、生长曲线和暴露时间的选择和
优化
应用酶标仪的紫外 -可见吸收光谱测试功能 ,
用 1cm 比色皿在波长 400~490nm 与 630~710nm 范
围内按步长 1nm 对斜生栅藻的吸收光谱进行扫
描 , 吸收光谱如图 1 所示 . 图中有 5 个吸收峰 , 参
考文献（董金一 , 2006）分析可知其中 416nm 主要
是叶绿素 a 与类胡萝卜素的吸收峰 , 443nm 是叶绿
素 b 与类胡萝卜素的吸收峰 , 470nm 是类胡萝卜
素的吸收峰 , 640nm 是叶绿素 b 的吸收峰 , 684nm
是光合系统Ⅱ中高度特化的叶绿素 a 分子的特征
吸收峰 , 同时发现 680~684nm 范围内光密度（OD）
基本为一平台 , 因此 , 为提高测试精度 , 我们选择
682nm 为测定波长 .
实验用纯水 pH 为 7.30, 斜生栅藻培养基 pH
为 8.00, 加入藻液后 pH 为 8.66. 分别用 HCl 和
NaOH 将藻液 pH 调到 2.29、3.20、4.29、5.75、7.00、
7.80、8.66、9.72、10.25 和 11.31 共 10 个梯度 . 选用
Costar 96 微孔板 , 每个 pH 梯度设 6 孔平行 , 每孔
200μL 藻液 , 在 682nm 处测定藻液培养 0、0.5、
1.5、2.5、4.5、5.5、6.5 和 8.5d 的光密度 , 结果见图
2. 分析图 2 可知 , 当 pH 从 2.29 升至 10.25 时 , 光
密度（OD）-时间曲线基本呈向上移动趋势 , 但 pH
11.31 的 OD-时间曲线却低于 pH 7.8 的曲线 , 说
明斜生栅藻生长适宜 pH 值范围在 7.8 ~10.25 之
间 . pH 在中性或酸性条件下（pH≤7）, 栅藻生长
自 1.5d 后一直受到抑制 . 考虑到藻液在 pH 8.6 左
右以及适宜 pH 范围较宽 , 除某些高浓度毒物实验
外 , 斜生栅藻毒性实验一般不需特意调节 pH .
化合物 英文名称 生产商 CAS号 纯度/%
环嗪酮 Hexazinone Chem service 51235-04-2 99.5
阿特拉津 Atrazine Riedel-deHaen 1912-24-9 97.4
西草净 Simetryn Riedel-deHaen 1014-70-6 99.2
扑灭通 Prometon Riedel-deHaen 1610-18-0 99.6
苯嗪草酮 Metamitron Chem service 41394-05-2 99.5
敌草快 Diquat Chem service 85-00-7 99.0
草甘膦 Glyphosate Chem service 1071-83-6 99.0
磷胺 Phosphamidon Chem service 13171-21-6 98.3
甲胺磷 Methamidophos Chem service 10265-92-6 99.5
表 1 9种受试农药的生产商、CAS号和纯度
Table 1 Manufacturers, CAS No, and purity of 9 pesticides
tested
图 1 斜生栅藻的可见吸收光谱
Fig.1 Visible absorption spectra of Scenedesmus obliquus
416nm
443nm
470nm 684nm
640nm
400 440 480 640 680 720
0.75
0.70
0.65
0.60
0.55
0.50
光
密
度
O
D
波长 λ/nm
■
▲
▲
★
■■■■
■■
■
■
▲▲▲▲▲▲
▲
▲
▲
▲▲
▲
▲▲
▲
▲
★★★★
★★
★
★
0 2 4 6 8
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
时间 Time/d
光
密
度
O
D
68
2n
m
2.29
3.20
4.29
5.75
7.00
7.80
8.66
9.72
10.25
11.31
pH
图 2 pH值和暴露时间对斜生栅藻光密度（OD682nm）的影响
Fig.2 Effects of pH and exposure time on the optical
density（OD682nm）of Scenedesmus obliquus
608
葛会林等：微板吸光法测定 9 种农药对斜生栅藻的抑制毒性第 6 期
生长曲线测定时间较长 , 为减小水分蒸发引
起的测定误差 , 向 Costar 96 微孔板每孔加入250μL
藻液 , 共设置 28 孔平行 , 每天测定 1 次光密度 , 计
算平均值及样本标准偏差 , 共测定 38d , 得到斜生
栅藻的生长曲线（图 3）. 由图可知斜生栅藻前 10d
处于对数生长期 , 10d 后处于生长平台期 , 没有观
察到生长衰落期 .
暴露时间会影响毒性大小的测定 . 图 4 给出
了敌草快对斜生栅藻生长抑制试验其中一板的剂
量-效应曲线（DRC）随暴露时间的变化情况 . 显然 ,
随着时间增加敌草快 DRC 向上移动 , 其毒性增加 .
参考文献方法（中国国家环境保护总局 , 2002）, 本
文选择暴露时间为 96h .
2.4 微板藻毒性试验（微板吸光法）
将培养好的藻液静置半天 , 在超净台内倾去
上清液 , 加入与原体积大致相同的新培养基 , 充分
混合均匀 , 培养 2 ~3d 达到对数生长期 . 选用
Costar 96 微孔板 , 微板设计如图 5 所示 . 微板中间
6×10 阵列共 60 个孔为藻毒性试验孔 , 前 6 列 36
个孔安排各有 3 次平行的 12 个按等比级数设计的
不同浓度污染物的毒性试验 , 试液总体积为
100μL , 后 4 列 24 个孔加入 100μL 纯水作为空白
对照 . 最后在 60 个毒性试验孔中分别加入 100μL
处于对数生长期的藻液 , 使各孔总体积达到
200μL . 为抑制水分蒸发保持孔中液柱体积与高度
不变 , 在微板四周 36 个孔中加入 200μL 水防止产
生边缘效应（图 5）.
将上述试验微板放入酶标仪 , 设置温度 22℃ ,
第一次测读前振荡 5s , 打开自动校正 , 移板速度选
正常 , 选择列优先读 , 其他功能均关闭 , 682nm 测
定光密度（为保证实验精度 , 体积 200μL、高度约
0.596cm 藻液柱的 OD 值应不小于 0.2）. 微板测定
完毕后放入培养箱中 , 设置光照度约 3000lx , 其他
条件同藻种预培养 ; 以后每天同一时间在酶标仪
上测定一次光密度 .
污染物对藻的毒性以对藻的生长抑制率 I 进
行表征 . 本文采用生物量法计算生长抑制率 I（中
国国家环境保护总局 , 2002）, 即用藻生长曲线（图
6）中在（t0, ti）时间范围内所围面积进行计算 .
A =
n
i = 1
Σ ODi + ODi-1 - 2OD02 ×（ti - ti-1） （1）
其中 ti 表示第 i 时刻所经历的时间 , ODi 表示第 i
时刻藻液光密度 . 那么藻生长抑制率 I 可根据空白
609
生 态 毒 理 学 报 第 3 卷
由微板吸光法测定的 9 个农药剂量-效应数据
点、空白变异以及 Logit 函数拟合曲线与相应置信
区间如图 7 所示 .
从表 2 与图 7 可以看出 , 除甲胺磷外 , 其余 8
种农药 DRC 非线性拟合的相关系数都大于或等于
0.9, 其中敌草快拟合的相关系数最高（0.974）. 环
嗪酮相关系数达 0.972, 拟合效果较好 , 但当效应
增大至 80%~90%左右时已趋于平坦 , 是农药降解
还是其他原因导致这种现象值得研究 . 苯嗪草酮、
草甘膦和磷胺 3 种农药的最大生长抑制率大于 1,
通过公式（2）分析可知是 At<0 所致 , 即暴露组藻
是负生长 , 这超过了本试验的毒性终点即对藻正
生长的抑制 , 此时由于毒物浓度过高可能已导致
藻细胞部分死亡、分裂直至溶解 . 此外 , 除敌草快
和环嗪酮外其余 7 种农药毒性测定结果的置信区
间偏大 , 说明其重复性有待进一步提高 . 对于空
白 , 除敌草快实验中有一点偏离较大外 , 所有空白
相对偏差都小于±20%, 微板法显著提高了空白控
制的重复性 .
根据表 2 中各农药的 EC50, 这 9 种农药的毒性
从大到小为环嗪酮>西草净>敌草快>阿特拉津>扑
灭通>苯嗪草酮>草甘膦>磷胺>甲胺磷 . 环嗪酮的
毒性最大 , 甲胺磷的毒性最小 , 甲胺磷的 EC50 几
乎是环嗪酮的 25000 倍 . 除草甘膦 , 本文中除草剂
的 EC50 最少比两个有机磷杀虫剂小两个数量级 ,
说明藻类对于除草剂比杀虫剂更为敏感 , 保护水
环境中的初级生产者时要特别注意控制除草剂 ,
尤其是直接干扰光合作用的除草剂如均三嗪类 .
藻生长曲线所围面积（Ac）与暴露藻生长曲线所围
面积（At）进行计算 .
I = 1-At / Ac （2）
3 结果与分析（Results and analysis）
应用建立的微板藻毒性测试方法 , 测定了环
嗪酮等 9 种农药对斜生栅藻的生长抑制毒性 . 应
用非线性最小二乘模拟方法（刘保奇等 , 2006）得
到拟合剂量-效应曲线 , 并据此计算半数抑制浓度
EC50 及 95%置信区间（CI）, 优化的 Logit 函数及相
关统计量见表 2. 其中 Logit 函数与相关统计量的
计算公式如下 :
y = 1/（1 + exp（-a - b × log10（x））） （3）
R2 = 1 -Σ（y-y赞）2 Σ（y-y）2 （4）
RMSE = Σ（y-y赞）2 /（n-m）姨 （5）
其中 x 代表浓度 , y 代表效应 , y赞代表效应的拟合
值 , y 代表效应的平均值 , n 为样本数（n=36）, m
为模型参数个数（m=2）.
0.6
0.5
0.4
0.3
●
●
●
●
●●●
●●
●●●
●●
●
●
● ●
●
■
■■
■
■
■
■
■■
■■■■■
■
■■ ■
■
■
● Treat
Control
t0 t1 t2 t3 t4
时间 t
光
密
度
O
D
图 6 藻生长抑制率计算原理图
Fig.6 Principle diagram of computing algae growth inhibition
化合物 a b R RMSE EC50/（mol·L-1） CI/（mol·L-1） pEC50 pEC50（文献值）
环嗪酮 15.35 2.42 0.972 0.089 4.54×10-7 （2.34~12.0）×10-7 6.34 7.26a）
阿特拉津 10.04 1.83 0.909 0.140 3.26×10-6 （0.66~16.8）×10-6 5.49 6.74b）, 6.24c）
西草净 12.14 1.92 0.941 0.094 4.75×10-7 （1.70~12.3）×10-7 6.32 7.32b）
扑灭通 12.32 2.25 0.939 0.091 3.35×10-6 （1.51~7.40）×10-6 5.47 6.26b）
苯嗪草酮 15.87 3.29 0.900 0.187 1.50×10-5 （0.38~6.00）×10-5 4.82
敌草快 13.93 2.40 0.974 0.067 1.57×10-6 （0.89~2.62）×10-6 5.80 5.72a）
草甘膦 10.53 2.95 0.927 0.136 2.69×10-4 （1.01~7.16）×10-4 3.57 3.48c）
磷胺 9.40 3.48 0.901 0.155 1.99×10-3 （0.75~5.40）×10-3 2.70
甲胺磷 2.28 1.17 0.897 0.105 1.13×10-2 （0.19~6.67）×10-2 1.95
表 2 9种农药对斜生栅藻的 Logit拟合模型和毒性效应
Table 2 Fitted Logit models and toxicities of 9 pesticides to Scenedesmus obliquus
注: a）: 四尾栅藻（Peterson et al., 1997）; b）: vacuolatus栅藻（Faust et al., 2001）; c）: 斜生栅藻（Ma, 2002）; a: 位置参数; b: 斜率参数;
RMSE: 均方根误差; R: 相关系数; CI: 效应浓度 95%置信区间
610
葛会林等：微板吸光法测定 9 种农药对斜生栅藻的抑制毒性第 6 期
与表 2 中相关文献结果进行对比分析可知 ,
环嗪酮对四尾栅藻的毒性比斜生栅藻大 , 敌草快
对四尾栅藻的毒性比斜生栅藻略小 , 对这两种栅
藻环嗪酮毒性比敌草快大 ; 阿特拉津、西草净和扑
灭通对 vacuolatus 栅藻的毒性比斜生栅藻都大 , 西
草净>阿特拉津>扑灭通的毒性顺序对这两种栅藻
都一样 ; 都使用斜生栅藻 , Ma（2002）使用经典锥
形瓶毒性试验得出阿特拉津的 EC50 是本文的 0.18
倍 , 草甘膦的 EC50 是本文的 1.23 倍 , 两种方法中
阿特拉津毒性都大于草甘膦 . 由于微板法藻量相
对较多 , 本方法灵敏度有时低于文献 , 表现为 EC50
等的效应浓度大于文献值（见表 2）, 重复性也有待
试验条件的进一步成熟和优化 ; 本文各农药的毒
性大小顺序与文献一致 , 能将各农药毒性区分开
来 , 因此本方法结果还是较为可靠的 .
本研究建立的微板吸光法简便快速 , 所需样
品体积少 , 便于多次平行毒性测试 , 同时结果较可
靠 , 适用于昂贵的化学品、新合成的化学物和量少
的环境样品的毒性测试 .
611
生 态 毒 理 学 报 第 3 卷
通讯作者简介：刘树深（1961—）, 博士 , 教授 , 博士生导
师 . 多年来一直从事化学计量学及其在生命与环境科学
中的应用研究 .
References
Arensberg P, Hemmingsen V H, Nyholm N. 1995 . A miniscale
algal toxicity test［J］. Chemosphere, 30: 2103-2115
Benhra A, Radetski C M, Ferard J F. 1997 . Cryoalgotox: use of
cryopreserved alga in a semistatic microplate test［J］. Environmental
Toxicology and Chemistry, 16: 505-508
Dong J Y. 2006 . Image Measurement of Higher Plant Pigment
Contents ［D］. Hefei : University of Science and Technology of
China , 15-18（in Chinese）
Eisentraeger A, Dott W, Klein J , Hahn S. 2003 . Comparative
studies on algal toxicity testing using fluorometric microplate and
Erlenmeyer flask growth -inhibition assays［J］. Ecotoxicology and
Environmental Safety, 54: 346-354
Faust M, Altenburger R, Backhaus T, Blanck H, Boedeker W,
Gramatica P, Hamer V, Scholze M, Vighi M, Grimme L H.
2001 . Predicting the joint algal toxicity of multi -component s -
triazine mixtures at low-effect concentrations of individual toxicants
［J］. Aquatic Toxicology, 56: 13-32
Gabrielson J, Kühn I, Colque -Navarro P, Hart M, Iversen A,
McKenzie D, M觟llby R. 2003. Microplate -based microbial assay
for risk assessment and （eco） toxic fingerprinting of chemicals
［J］. Analytica Chimica Acta, 485: 121-130
Geis S W, Fleming K L, Korthals E T, Searle G, Reynolds L,
Karner D A. 2000 . Modifications to the algal growth inhibition
test for use as a regulatory assay［J］. Environmental Toxicology
and Chemistry, 19: 36-41
Gómez de Barreda Ferraz D, Sabater C, Carrasco J M. 2004 .
Effects of propanil , tebufenozide and mefenacet on growth of
four freshwater species of phytoplankton: a microplate bioassay
［J］. Chemosphere, 56: 315-320
Kuang Q J, Zhao W Y, Deng P. 2003 . Studies on the toxic
efficiency of dibutylphthalate to Scenedesmus obliquus and natural
algae［J］. Acta Hydrobiologica Sinica, 27: 103-105（in Chinese）
Liu B Q, Ge H L, Liu S S. 2006 . Microplate luminometry for
toxicity bioassay of environmental pollutant on a new type of
fresh water luminescent bacterium（Vibrio -qinghaiensis sp.—Q67）
［J］. Asian Journal of Ecotoxicology, 1: 186-191（in Chinese）
Ma J. 2002 . Differential sensitivity to 30 herbicides among
populations of two green algae Scenedesmus obliquus and
Chlorella pyrenoidosa［J］. Bulletin of Environmental Contamination
and Toxicology, 68: 275-281
Paix觔o S M, Silva L, Fernandes A, O’Rourke K, Mendon觭a E,
Picado A. 2008 . Performance of a miniaturized algal bioassay in
phytotoxicity screening［J］. Ecotoxicology, 17: 165-171
Peterson H G, Boutin C, Freemark K E, Martin P A. 1997 .
Toxicity of hexazinone and diquat to green algae, diatoms,
cyanobacteria and duckweed［J］. Aquatic Toxicology, 39: 111-134
Radetski C M, Ferard J F, Blaise C. 1995 . A semistatic
microplate -based phytotoxicity test［J］. Environmental Toxicology
and Chemistry, 14: 299-302
Rojickova R, Dvorakova D, Marsalek B. 1998 . The use of
miniaturized algal bioassays in comparison to the standard flask
assay ［J］. Environmental Toxicology and Water Quality , 13:
235-241
State Environmental Protection Agency of China. 2002 . Detection
of Analytical Methods to Water and Waste Water［M］. Beijing:
China Environmental Science Press , 715-721（in Chinese）
中文参考文献
董金一 . 2006. 高等植物色素含量的图像测量［D］. 合肥 : 中国
科学技术大学 , 15-18
况琪军 , 赵文玉 , 邓萍 . 2003 . DBP 对斜生栅藻及天然混合藻
类致毒效应研究［J］. 水生生物学报 , 27: 103-105
刘保奇 , 葛会林 , 刘树深 . 2006. 测定环境污染物对青海弧菌
发光强度抑制的微板发光法研究［J］. 生态毒理学报, 1: 186-191
中国国家环境保护总局 . 2002. 水和废水监测分析方法［M］.
北京 : 中国环境科学出版社 , 715-721 ◆
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