全 文 ： 鉴别
化学计量学方法应用于贝母化学特征指纹图谱的研究
李玉锋1 ,颜　钫 2 ,唐　琳 2 ,陈　放2
(1.西华大学制药工程系 ,四川成都 610000;2.四川大学生命科学学院 ,四川成都 610064)
　　摘要　采用高效液相色谱法 ,以 XDP-C18(4.6×250 mm)为色谱柱 , 甲醇-水 [体积比为 70∶30, 内含 7.5 mmo l /L
十二烷基硫酸钠(SDS), pH为 4.5±0.1]为流动相 , 检测波长为 215 nm , 测定了 11种贝母样品 ,根据样品中不同化
学组分的保留时间 、相对峰面积 , 应用化学计量学方法计算出描述相邻两个色谱峰分离程度和质量的重要参数并
进行聚类。结果表明 , 聚类分析的结果与其植物学分类相一致。该种方法可用于贝母的鉴别 , 并有助于贝母化学
特征指纹图谱的建立。
关键词　高效液相色谱(HPLC);贝母;化学计量学;聚类分析;指纹图谱
中图分类号:R282.7　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)03-0216-03
　　中药贝母来源于百合科贝母属 F ritillaria多种
植物的鳞茎 ,具有清热润肺 、化痰止咳之功效 〔1〕。
我国产的贝母属植物有 20种和 2变种 ,药用者可分
成五类:川贝母类 (川贝母 、暗紫贝母 、甘肃贝母和
梭砂贝母)、浙贝类 (浙贝和东贝 )、平贝母 、伊贝类
(新疆贝母和伊犁贝母 )和湖北贝母 ,除后者为部标
收载品外 ,前四类均为《中国药典》收载品 〔2〕。不同
种类贝母药材的市场价格差异较大 ,传统的鉴定方
法有一定的局限性〔3〕 ,我们对 11种贝母样品溶液采
用高效液相色谱法 ,根据样品中不同化学组分的保
留时间 、相对峰面积 ,应用化学计量学方法〔4〕计算
出描述相邻两个色谱峰分离程度的重要参数并进行
聚类。本实验的结果表明 ,化学计量学方法不仅可
用于贝母的鉴定 ,还能有助于贝母化学特征指纹图
谱的建立。
1 　药材与仪器
1.1 　材料　见表 1。所有样品均由成都药品检验
所鉴定 。
　表 1 　11个不同种的贝母样品及来源
样品 来源
川贝母　　F. crrihosa 四川理县
康定贝母　F. cirrhosa var. ecirrhosa 四川康定
梭砂贝母　F. de lavay i 四川炉霍县
瓦布贝母　F. wabuensis 四川茂县
暗紫贝母　F. unibractea ta 四川茂县
浓蜜贝母　F. me llea 四川茂县
米贝母　　F. david ii 成都药材市场
伊贝母　　F. pallid iflora 新疆伊犁
浙贝母　　F. tahunbergii 浙江宁波
平贝母　　F. ussuriensis 吉林通化
湖北贝母　F. hupehensis 成都药材市场
1.2　仪器与试剂 　仪器:美国 W aters 515 HPLC
Pump高效液相色谱仪 , XDP-C18柱 (4.6×250 mm)。
试剂:甲醇 (分析纯 )、十二烷基硫酸钠 (SDS)(分析
纯)、重蒸去离子水 。对照品:贝母素甲 (Pe im ine),
由中国药品生物制品检定所提供 。
2　方法和结果
2.1　色谱条件　流动相:参照晁若冰等 〔5〕的方法 ,
略作改动 ,甲醇-水 (70∶30),内含 7.5 mmo l /L SDS,
pH 4.5±0.1。柱温:26℃。检测波长:选定检测波
长为 215 nm。
2.2　样品溶液的制备　称取待测贝母样品各 5 g
左右 ,用液氮处理后研磨至粉末 ,然后过 100目筛 ,
在 60℃的烘箱里烘烤 2 h,精密称取样品 0.5 g,用
20m l氨水饱和乙醚 ,浸泡 24 h,干燥滤纸过滤 ,滤液
经水浴蒸干 ,残留物用 5m l甲醇溶解 ,放置 1 h后取
出 ,通过孔径 0.45 μm的微孔滤膜 ,滤液为样品溶
液。
2.3　对照品溶液的制备　精密称取贝母素甲对照
品约 1 mg,置于 10m l量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 。
2.4　测定方法　精密吸取对照品溶液与样品溶液
各 15 μl,注入高效液相色谱仪中 ,按照高效液相色
谱法进行实验并记录色谱图 。
2.5　贝母样品的 HPLC图谱　选择 215 nm为检
测波长。精密吸取对照品溶液与样品溶液各 15μl,
注入高效液相色谱仪中 ,按照高效液相色谱法〔5〕进
行实验 ,结果见图 1。
2.6　化学特征参数的选择　根据化学计量方法应
用于中药化学特征指纹图谱 〔4〕的原理 ,选择并计算
了 SR(Sum of reso lu tion)、SRPA(Sum of rela tive Peak
A rea)和WSK这三个指标参数 。 SR表示所有相邻
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DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牰牣牥牫牣牥牥牰
两个色谱峰之间的分离度之和 ,而分离度 (Reso lu-
tion,简写为 R)是一个描述相邻两个色谱峰分离程
度的重要参数 ,它与两个色谱峰的保留时间与峰的
宽度有关〔6、7〕 ,计算公式为:
　　R(a, b)=2( tb-ta) /(W a +W b)
　　SRPA代表相对峰面积之和 ,而 WSK则是与分
离度及相对峰面积之和相关的经验指标参数 ,它综
合了 R和 SRPA这两个因素 ,其表达式为:
　　WSK = ( lg(SR))2 +( lg(SRPA)2
2.7　化学特征参数的计算值　11种贝母生物碱
样品分 3个批次进行 HPLC测定 ,根据不同批次的
结果 ,分别计算出 SR、SRPA和 WSK等化学特征参
数值 。 (表 2)
2.8　聚类分析　以 SR、SRPA和WSK的计算值 (3
次)的平均数为可变量 ,采用欧式距离计算方法 ,用
SSPS软件包进行系统聚类 ,其结果见图 2。
图 1　贝母素甲及 11种贝母样品的 HPLC图
a.对照品　b.川贝母　 c.康定贝母　d.梭砂贝母　 e.瓦布贝母　 f.暗紫贝母　g.浓蜜贝母　h.米贝母　 i.伊贝母
j. 浙贝母　k.平贝母　 l.湖北贝母
　　表 2 　贝母样品 HPLC图谱的 SR、 SRPA和W SK值
特征参数
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
SR 3.5171 3.6706 2. 9932 2.2884 2. 9254 2.9740 3.3364 2. 9223 3.2920 3. 0190 2.4253
3.5280 3.5991 2. 9810 2.2004 3. 0231 2.9866 3.3152 2. 9100 3.2810 3. 0883 2.5241
3.5881 3.6921 3. 0125 2.2763 2. 9332 2.9010 3.2941 2. 8995 3.3051 3. 1721 2.4931
SRPA 99.87 102. 20 92.69 189.03 138. 53 133.24 106. 90 175.19 138.86 173. 31 207.56
99.10 100. 12 90.71 181.67 141. 52 134.02 104. 89 173.34 136.21 175. 54 212.40
100.21 104. 43 91.76 184.35 139. 99 131.53 102. 32 169.24 140.41 179. 32 209.48
W SK 2.0535 2.0782 2. 0238 2.1917 2. 1767 2.0954 2.2913 2. 2913 2.2042 2. 2897 2.3488
2.0698 2.0750 2. 0143 2.2851 2. 2038 2.1796 2.0867 2. 2865 2.1957 2. 2972 2.3616
2.0762 2.0970 2. 0202 2.2936 2. 1964 2.1689 2.0756 2. 2760 2.2093 2. 3087 2.3547
217 中药材第 29卷第 3期 2006年 3月
图 2　11种贝母化学计量特征参数的聚类分析
3 　讨论
从图 2的聚类分析看 ,这 11种贝母可分为三
类:第一类是暗紫贝母 、浙贝母和浓蜜贝母;第二类
是川贝母 、康定贝母 、梭砂贝母和米贝母;第三类是
瓦布贝母 、伊贝母 、平贝母和湖北贝母 。其中第一类
和第二类的聚类距离又小于第三类。
在这 11种贝母中 ,按其植物学分类可分为 10
个种 , 1个变种 ,其中 ,康定贝母是川贝母的变种 ,按
其产地又可分为四川 、浙江 、吉林和新疆。图 2表明
川贝母与康定贝母的距离最近 ,这与贝母的植物学
分类相吻合。在距离较近的第 1、2类 7个种中 ,除
浙贝母外 ,其它均是来源于四川产地的贝母 。在药
材市场上 ,川贝母 、康定贝母 、米贝母 、浓蜜贝母是道
地性川产 “松贝”和 “冲松贝 ”的主要来源 ,而在图 2
中 ,它们的聚类距离也较近 ,由此可见 ,该聚类谱系
从一定程度上反映出贝母与道地产地的相关性 ,其
结果证明了应用化学特征指纹图谱的方法鉴别道地
性贝母的客观性 ,可以用于母类药材的鉴定和分析。
参 考 文 献
[ 1] 李萍 , 季晖 . 贝母类中药的镇咳祛痰作用研究 . 中国
药科大学学报 , 1993, 24:360-362.
[ 2] 胡清宇 , 李水福 . 贝母类中药紫外光谱聚类分析 . 时
珍国药研究 , 1997, 8(3):235.
[ 3] L i P, PuM , Jiang X, e t a l. The d iagno stic va lue o f the
cuticle in the leave s from genus F ritillaria L. J. P lan t
Re s. Envir, 1994, 3:60-63.
[ 4] 周福添 , 徐树棋 , 王兆基 , 等 . 化学计量学方法应用于
中药化学特征指纹图谱 . 中药新药与临床药理 , 2001,
12:164-166.
[ 5] 晁若冰 , 胡玲 . 高效液相色谱法测定贝母中贝母辛的
含量 . 药学学报 , 1993, 28:705-708.
[ 6] Jen ingsW , M ittle feh ldt E and S trem dle P. Analy tical Gas
Ch rom a tog raphy ( se cond edition). N ew Yo rk, Academ ic
P ress, 1997:18-21.
[ 7] M eyer VR. P rac tical H igh-Pe rfo rm ance L iqu id Ch rom a tog-
raphy( second edition). N ew York, John andW iley Sons,
1994:26-29.
(2005 - 09 -26收稿)
Study on the Application of Chem om etricsM ethods in Chem ical
Character istic F ingerprinting ofF ritillaria
L IYu-feng1 , YAN Fang2 , TANG Lin2 , CHEN Fang2
(1.Departm ent of Pharm aceu tical Enginee ring, X ihuaUniversity, Chengdu 610000, China;2. Co llege o f L ife Sc ience, S ichuan Uni-
ve rsity, Chengdu 610064, Ch ina)
Abstrac t　A m ethod fo r de term ination o f eleven samp les inF ritillaria byHPLC w ith UV de tection a t 215 nm was desc ribed. The
co lumn was u sed a XDP-C18 , 4.6×250 mm, 5μm , and them ob ile phase wasm ethano l-w ater(vo lume:vo lume=70∶30, to be added
7. 5 mm o l /L SDS, pH 4.5±0. 1). Im po rtan t parame tersw ith chrom atog ram s of e leven samp le sw ere obta ined and c rusted. The re su lts
indica ted tha t it is sim ilar be tw een c lustering analysis and taxonomy ofFritillaria. Iden tification ofF ritillaria and estab lishm ent of the
chem ica l characteristic fing erprinting can used the me thods.
K ey words　H igh Perfo rm ance L iquid Ch rom a tog raphy(HPLC);Fritillaria;Chemom etrics;C luste ring ana ly sis;F ingerp rinting
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