全 文 ：分子植物育种 , 20 7 年 ,第 5 卷 ,第 6 期 ,第 7 58一764 页
M o l ec ul ar P lan t B er idn g
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6
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75 8一 764
研究报告
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acr h R
e P o rt
甘菊 D IB A D H I 基因启动子 刀刀于, 2表达特性研究
曹华雯 ’ 刘振林 ` , 夏新莉 2 尹伟伦 2 戴思兰 ”
1北京林业大学园林学院 , 北京 , 10以】8 ;3 2 北京林业大学生物科学与技术学院 , 北京 , 1以洲) 8 3 ; 3河北科技师范学院园艺园林系 , 昌黎月倪沼沁
. 通讯作者 , ia l助d`画咖 .co m
摘 要 用 pC A州旧IA 1305 . 2 做载体 , 构建含有甘菊e(D dn r an 名he ma 枷田心ul 如il um )D BIA DH I 基因 (登录号 :
D ()Q川 5 1) 启动子 刀刀刀2( 登录号 : D 4Q 9 7621 )的质粒 CP H w . 2 。 利用叶盘转化法 , 通过农杆菌 EHA 105 菌株介导 , 将重组质粒导入烟草叶片 。 采用 G U s 组织活性检测法鉴定烟草转基因植株 , 结果表明 : 刀尸旧12 启动子
驱动的 ` sU 基 因表达无组织特异性 。 对转基因植株进行 N ac l 、 AB A 、 SA 处理 , G U S 荧光测定发现 :
10 0卜m o比 BA A 胁迫处理 24 h 和 40 ~ 比 N
a CI 胁迫处理 48 h , 转 pC HW 一2 烟草植株叶片中GU s 酶活性均有大幅度提高 。 该结果表明 : 刀任从刀万 1基因启动子 刀召刃 2 是一个诱导型启动子 。 这一研究结果为进一
步研究甘菊中BA D H 基因调控表达机理提供了参考 。
关挂词 。召刊 2 启动子 , 转基因烟草 , BA A
,
s A
,
N aC I
,
G u S 活性
E xP er s s i
o n Pat em
o f D B于甘2 rP o m o t e r o f D IB A D H I G e n e for m eD dn r an
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A卜蛇ar d T七e c on s tr u c t PC HW e Z eons l s tin g o f D B1P 2 Por m o et r (eG nb an k A e e e s s i o n No : D 4Q 97 6 2 1 ) o f DI
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BA D H I (G
e n b a nk A c es is on N :o D Q 0 l l l sl ) ge ne for m eD nd
r . 公he ma 俪 J 以以如ilu m L . g e n o me ~ 加川 s -介n ℃ d i in o obt a e e o P lan st vi a A脚b二 et ir u m t u n刁征 ic o EH A 10 5 . hT e r e g en e r a t e d p l a n st w e er an lyZ e d b y G U S
hi sot 一 h e m i c al sat in in g
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K e y w o r ds D B1P 2 Por m
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,
T邝nL s ge n i e t o b a e e o , A B A , SA , N a C I , G U S ac t ivi yt
启动子是 RN A 聚合酶能够识别并与之结合 , 从
而起始基因转录的一段 D N A 序列 , 通常位于基因上
游 。 植物基因工程中常用的启动子按其作用方式及
功能可分为三类 : 组成型启动子 ( co sn it ut ive p or m ot -
e r )
、 组织特异型启动子 ( t i s s ue 一印 e e i if e p or m o t e r ) 和
诱导型启动子 ( in d u c ibl e p or m ot e r) 。 这种分类大体上
反映了它们各 自的特点 , 但在某些情况下 , 一种类型
的启动子往往兼有其他类型启动子的特性 。
目前植物基因工程中使用最为广泛的是花椰菜
花叶病毒 C a M V 3 5 s 启动子 ( e au l i if o we r m o s a i e ~3 5 5 , C a M v 3 5 s ) 、水稻 A e t l (ac t in l , A e t l )启动子 (王颖
等 , 2 0 0 3 ) 和木薯叶脉花叶病毒启动子 (c a s s a va v e i n
m o s a i c
iVrU
s
,
C s v M V )四e dr a gu e r e t a l . , 19 9 8 ) 等组成
型启动子 。 由这类启动子控制的结构基 因的表达大
基金项目: 国家 自然科学基金项目 (N o . 304 71 41 9)
甘菊 D之 B月刀万 1基因启动子 刀肠月 2表达特性研究
Ex Pr e s sio n P at em o D B fP1 2r Po mo tr e
o I D B f摊刀厅 1 Gn e er D fm D e耐护 .似 h em a如口记以如l i um
体恒定在一定水平上 , 在不同组织部位表达水平也
没有明显差异 。 其特点是 : 表达具持续性二R N A 和蛋
白质表达量也是相对恒定的 ; 它们不表现时空特异
性 ;也不受外界因素的诱导 (孙乃恩等 , 1990) 。 对于转
基因植物来说 , 持续大量的表达外源基因 , 打破了植
物的代谢平衡 , 阻碍植物的正常生长 ,甚至死亡 。 此
外 , 重复使用同一种启动子驱动两个或两个以上的
外源基因可能引起基因沉默或共抑制现象 (路静等 ,
2 004 )
。 有时也存在表达效率低的问题 。 基于以上原
因 , 近年来 ,人们致力于研究组织特异性启动子和诱
导型启动子 , 并取得了一定的进展 , 如从拟南芥中分
离 到的低温诱 导型启 动子 r d2 9 A (K as u g a at .al ,
2 0“ ) , H s P l o l伴 o un g e t a l . , 2 0 5 ) , 马铃薯光诱导型
启动子 hL e心似 e iyal a hg an e t a l . , 2 0 0 6 )等 。
菊科是被子植物第一大科 , 也是双子叶植物最
为进化的科 , 目前关于菊花的转基因体系研究较为
成熟 ,但关于菊科植物启动子的研究较为少见 。 本课
题组在前人研究的基础上 , 选用菊科菊属植物甘菊
【eD dn r . 哪he lan 如山双忿以如 il u m L . 伊is hc · ex T r 压u Vt .)
L in g et s hi 伪试验材料 ,利用锚定 P C R 步移法克隆
了甘菊 D IB摊刀万 基因的四个启动子序列 , 与 ` sU 基
因融合构建植物表达载体 , 通过农杆菌侵染法 , 转入
甘菊中 ,通过瞬时表达法鉴定发现 : 四个启动子序列
均具有启动下游 ` sU 基因表达的活性 , 因此这四个
序列具有启动子功能 (刘振林 , 2 0 06) 。 本研究选取其
中一个启动子 刀召子, 2 将其与质粒 p C A州旧 IA 13 05 . 2
融合构建表达载体 p C HW . 2 , 并转化烟草 。 对转基因
株系 ` sU 基因的活性进行了测定 , 并对启动子的功
能进行了初步研究 。 期望为菊花分子育种中寻找调
控元件的工作提供参考 。
聚合酶为天为时代公司产品 ; 水杨酸 ( sa ilc 贝ic ac id,
S )A购 自北京化工试剂厂 ;其它生化试剂均购 自上海
生工 、欣经科等公司 。
L 3转基因烟草的培养和鉴定
采用叶盘法 ,用分别带有 C a MV 3 5 S 启动子的阳
性质粒 p C A州田认 1305 . 2 (图 l) 和带有 刀刀月 2 启动子
重组质粒 pC H W es Z (图 2) 的农杆菌 EH A 105 菌株侵
染烟草叶片 。 将被侵染的烟草叶片于共培养培养基
伽+s l m叭 6 一B A 十。 . l m叭 N A A ) 中暗培养两天 ,之
后转入分化筛选培养基 阿S+l m叭 6一B A功 . l m目1
N A A+ 30 m留L H兴妙50 o m留1 c b) 中 , 每周继代一次 ,
约 -6 8 周后 , 当转化苗长至 3一 5 cm 高时将其剪下转
入 生根筛选培养基 伽 S功 . l m创L N A A + 30 m g/ L
H y扩50 0 m创L cb )中 , 约 10 天左右生根 , 30 ~ 4 0 天可
以出苗 (赵瑾等 , 2 004 ; 周涵韬等 , 2 0 04) 。
L 4 转基因烟草植株 G U S 组织活性检测
1 材料和方法
L l 植物材料和菌株
烟草N( ic ot ~
t ab ac “ m L N) C 89 由北京林业大
学刘美芹博士惠赠 。
根癌农 杆菌 (A尹b ac et ir “ m ut 刀照伽 is sn L ) E -
H A 105
, 转基因载体 p c A M旧 IA 13 0 5 .2 由北京林业大
学吕晋慧博士惠赠 。
L Z 酶和化学试荆
4一 甲基伞形酮酞一 p一称娜翻撇散 4~ 由y l um
-
b el h fe yr 卜p一D . g l u c uor in d e
,
M U )G
, 购 自德国 M e r c k
公司 ; 4一 甲基伞形酮 m( e t h y l u m b e il fe orn e , M )U 、 脱落酸 ( ab s e i s i e a e id , BA A )购 自 5 1脚 a 公司 ; aqT D N A
分子植物育种
M oe le ula rP lt a ne r B
e dg ni
将转基因烟草再生植株叶片剪成小块 , 浸泡
于 G u s 染色液 ( 5 0 un o比 磷酸钠缓冲液 ( p H 7
.
0 )
,
10
n
o比 N aZE D T A, 0 . 1% (v加 ) T ir t o n X一 100, 2 0 % 甲醇 , .0 5 m留m l x 一 G hi c) 中 , 于 28 ℃保温数小时至过
夜 , 将染色后的叶片转入 70 % 乙醇中脱色 2一 3 次 ,
至阴性对照材料呈白色 。 脱色后 , 白色背景上的蓝
色部位即为 G U s 表达位点(王关林和方宏箔 , 2 002) 。
1.5 转基因烟草植株的胁迫处理
分别以 100 林m o比 脱落酸 (BA 助 (刘璞等 , 2 0 0 2 ;
江力等 , 20 6 ) 、 s
uon 比 水杨酸 (
s )A (s a e t a l
, ,
2 0 0 3 ;
L i e t a l
. ,
200 5) 处理转 p C HW we Z 、 p CA M B认 130 5 . 2 质
粒的烟草植株组培苗 , 以清水为对照 , 采用喷雾法 , 在
处理 12 h 和 2 4 h 后分别取样 : 以 10 0 r o r n o比 、 2 0 0
un
o巩 、 4 00 un o比 氯化钠N( a C )I处理转 pC HW 一2 、
pC AM B IA 130 5
.
2 质粒的烟草植株 (栽于蛙石 :珍珠岩
=2 :l 的基质中) , 以清水为对照 , 采用根灌法 , 每盆每
棵植株浇 2 0 0 m L 溶液 ,在处理 6 h 、 12 h 、 2 4 h 和 4 8 h
后分别取样 。 每次处理取 5 个转基因株系 , 每个转基
因株系取 4 个不同单株 , 每次处理共计 20 个单株 。 用
液氮分别研磨至粉末状 ,保存在超低温冰箱中备用 。
G U S 检测呈 阳性的有 31 棵 , 转化率为 79 .5 0% :
p c AM B IA 130 5
.
2 转化生根苗 23 棵 , G U S 检测呈阳
性的有 17 棵 ,转化率为 73 . 91 % 。
为了鉴定 BD IP Z 启动子是否具有组织特异性 ,
还对整株 pC H W一 2 和 pC AM B IA 1305 . 2 转基 因烟草
苗进行了 G U S 组织活性检测 , 结果表明 , 刀召刃 2 启
动子不具有组织特异性 , 在烟草转基因苗的各个组
织和器官中均可表达 , 且表达活性较强 (图 3) 。
1 .6 转基因烟草 G U S 活性检测
取超低温冰箱中保存的植物材料粉末 ,加入 60 0 林L
提取缓冲液 (5 0 un o比 N a 3P o 。 (P H 7
.
0 )
,
1
un
o比
E D T A, 0
.
1% (v/ v) T ir t o n X
一 100, 1 0
un
o比 p一琉基乙
醇 ) , 振荡混匀 , 冰浴 3 0 m i n ; 4 00 0 印m 离心 10 m i n ,
收集上清液即为 G U S 粗酶液 。 G U S 活性检测参照
eJ fe sr on 等( 198 7) 方法进行 。 G U S 活性以每毫克可溶
性蛋白每分钟产生的 4一 甲基伞形酮 (4 一m e ht yt um b el -
h fe or en
,
4一M U )摩尔浓度为单位 (附ol · m in 一 , · m g 一 l) , 植
物可溶性总蛋白质含量测定按 Br ad fo dr ( 19 76) 的方
法进行 。 G U S 活性数据是 5个不同转基因株系测定
值的平均值 。
图 3 转基因烟草苗整株 G U S 组织化学检测
注 : ( a )为 pe A M丑认 130 5 . 2 转化苗 ; b( )为 p C HW一 2 转化苗
F i gj 灯e 3 hT e G U S hi s ot e h e m ie a l s at in in g o f ht e n妞 n s g e n ie ot bac
-
e o P lan st
N o et : (
a ) 15 。妞n s g e in e Plan t o f PC A M B IA 130 5
.
2 ; b( ) i
s tr a n s g e n i e
Pl a n t o f P C HW
一 2
2 结果
.2 1转墓因烟草的筛选与鉴定
试验结果表明 : 叶盘在筛选培养基中进行分化
时 , 采用每周继代一次的方法可以持续保持筛选压
力 , 有效地减少转基因植株假阳性苗的比例 , 提高转
化效率 。 将在生根筛选培养基上生根的转化苗的叶片
浸泡在 G U S 染色液中 , 可以直接鉴定转基因植株 。
试验中共检测 p C HW 一 2 转基因生根苗 39 棵 ,
.2 2 N a a 胁迫处理对启动子活性的影响
对转 p C H W es Z 和 pC A M B IA 13 05 . 2 质粒的烟草
植株进行 G U S 活性检测发现 : 在不同浓度 N a CI 处
理下 BD P] 2 启动子均比 C a M V 35 S 启动子活性低 。
由图 4 A 与图 5 比较可知 刀B IP Z 启动子在无 N a cl
胁迫处理时其活性为 C a M V 35S 启动子的 0 . 1倍 , 在
10 0 r n r n o比 、 2 00 1l l r n o比 N a C I浓度处理 6 h 后其活性
为 C a M V 3 5 S 启动子的 0 . 17 和 0 . 23 倍。在 4 0 0 r n r n o比
N a C I浓度处理 4 8 h 后其活性为 C a M丫 35 5 启动子的
0
.
3 5倍 。
研究结果同样显示 : 刀召尸22 启动子比 C aM V 35 S
启动子响应诱导更为敏感 。 从图 4 B 中可 以看出 :
N ac l 处理 p c HW一 2 转基 因植株 6 h 后 , 启动子
D B P 12 已经开始进行表达 。 用浓度为 10 0们n们。 o比 、
2 0 0们。m o比 、 4 00 r 。们n o比 N a C I处理 6 h 后 , D B 1P 2 启动
子活性分别为未处理植株的 1 . 6 倍 , 2 . 1倍和 .2 2 倍。 用
浓度为 2 0 0 In 们。 o lL/ 和 4 0 0 r n们。。巩 N a C I处理 6 h 后 ,
D B P 12 启动子活性差异不大 , 但都高于 10 0 们。r n o比
N a C I浓度处理下启动子的活性 , 为其 1 . 3 倍 ;用浓度为
10 0们。幻。 o比 、 2 0 0mm o比 、 4 00 n l n o比 N aC I处 理 12 h
甘菊 刀扭冷刀刀 1基因启动子 刀召刊 2表达特性研究
后启动子活性分别为未处理植株的 1 . 6倍 、 2. 2倍和
2. 2倍 , 相对于处理 6 h 后启动子活性没有变化 ;处理
24 h 后 , 启动子活性分别为未处理植株的 1 . 7倍 、 2鸿倍
和 .2 5 倍 , 相对于处理 6 h 和 12 h 启动子的活性略有
升高 ; 处理 48 h 后 , 启动子活性分别为未处理植株的
1
.
9 倍 、 2 . 4 倍和 3 . 7 倍 , 10 0 和 200 m o比 N a C I浓度的处理相对于 6 h 、 12 h 、 24 h 处理没有大的变化 , 而
4 00 幻。 r o o比 处理的启动子活性相对于 6 h 、 1 Z h 、 2 4 h
处理的活性有了大幅度的提高 ,提高了 1 . 5 倍 。
对试验结果分析发现 : 用浓度为 10 0~ 。比
、
2 0 0 r n r n o比 N a C I处理 6 h 后 , G U S 酶活性就已经达
到了其最大值 , 而 6 h 之后 10 0
uon 比
、
20 0 r n r n o比
N aC I处理下 G U S酶活性没有变化 , 说明 10 0 n u n o比 、
200 刃n r n o比 N a C I浓度处理 6 h 后 D B P 12 启动子的
活性己经达到最大 (图 4 A ) 。
4 00
n
o比 N a C I浓度处理 6 h 后 G U S 酶活性
与对照相比有了很大的增加 ,增加幅度与 Zo ln 。比
N a CI 处理相同 , 但在 12 h 和 24 h 时 G U S 酶活性没
有明显变化 , 48 h 后 G U S 酶活性增加 , 为未处理植株
的 3 . 7 倍 , 为 10伪且m o比、 2 0 0 r Dr n o比 处理浓度的 1 . 9
倍和 1 . 5倍 。 说明 4 0 0m o比 N a C I处理 6 h 时 D B P 12启动子活性已经表达 , 且表达量同 20 0 〔n r n o比 N a CI
处理相同 , 之后随着处理时间的延长到 24 h 时启动子
活性不再变化 ,但随着时间的进一步延长 , 启动子表达
活性大幅度增加且明显高于 10 ~ 。比
、
20 ~
0比
N a CI 浓度处理时的活性 (图 4 A ) 。
图 5 N aC I不同浓度、 不同处理时间下 p CAM B IA 13 05 .2 转基
因植株叶片中 G U S 酶活性变化
Fi g 江 e 5 T b e le ve l o f G U S a e it v i yt in ht e le a v e s o f tn 切 59画e -ot
bac e o Pl a n st o f PC A N B[ IA 13 0 5
.
2 etr aet d iw ht N
a C I at id fe er n t
C o n e e n t . it o n an d it m e d切ar it o n
.2 3 A B A 胁迫处理对启动子活性的影响
由图 6A 可以看出 10 0 林m o比 BA A 处理 12 h
和 2 4 h pC HW es Z转基因植株叶片中 G U S 酶活性为
对照的 1 . 4 倍和 1 . 6 倍 。 说明刀刀刀 2 启动子可以响应
A B A 信号 , 并且起始其启动子功能 ,在处理 12 h 后
启动 子活性达 到 最大 , 之 后无 明显增 加 。 与
C a MV 35 S 启动子活性相 比处理前后分别为其 0 . 15
倍和 .0 23 倍 。
.2 4 sA 胁迫处理对启动子活性的影晌
由图 7 可以看出 5 ~
。比 S A 处理 12 h 和 24 h
后 pC HWes Z 转基因植株叶片中 G U S 蛋白含量没有
变化 ,说明 D P B 12 启动子不受 S A 的诱导 。
3 讨论
图 4 N ac l 不同浓度 、 不同处理时间下 p C H w es Z转基因烟草植
株叶片中 G U S 酶活性变化
注 : A 为 G U S 酶活性变化 ;B 为 G U S 酶活性倍数变化
iF g 叮 e 4 T五e l
ve
l o f G U S 即 it v iyt in het le va es o f 尔犯s g e n l c ot -
bac e o P lan st o f P C HW
we Z能 . 忱 d 初ht N a C I at id fl 免r e n t e on e e n -
七妞石。 n an d 石m e duj ar d o n
N oet
: A : hT
e c on etn t
c h an g
e of G U S ac it vi 伙 :B hT e m ul itP le
hc an g e o f G U S a c it vi yt
3
.
1 N a C I胁迫处理
不同 N a cl 浓度处理转基因植株发现 : 处理 6 h
后 刀召于呀2 启动子己经启动其表达活性 , 且在 N aC I
浓 度 为 10 0 t 。幻。 0比 、 2 0 0 r o r n o比 时 处理 6 h 后 ,
刀刀于呀2 启动子已经达到其最大表达活性 , 此后启动
子活性不再增强 ; 用 4 0
~ 讥
N a CI 浓度处理 6 h ,
分子植物育种
M o】 c eu l a rl Pa n tB e rd i n g
度的增加刃归刀 2启动子的表达活性随之增大 。
甜菜碱醛脱氢酶 伽扭 i n ed al e hd y ed e hyd ro g e-
a n s
e
,
B A D均 基因是植物体内催化合成甜菜碱的一
个关键基因 。 该基因的表达受干早 、盐碱 、低温 、脱落
酸 (BA A )等条件的诱导担助 s o n , 19 8 ;5 1994 ; ( s hi 加nL i
et .al
,
19 ;4 eL giar a et .al
,
19 ;8 刘振林和戴思兰 ,
20 04 ; 刘振林等 , 2 0 05 ; 2 006 ) 。 这与 N aC I胁迫处理的
结果相一致 。
图 6 10 林m o比 BA A 处理不同时间转基因烟草植株叶片中
G U S 活性变化
注 : A 为 CP H w ` 2 转基因烟草植株 G U s 活性变化 ; B 为
解 A M旧 IA 130 52 转基因烟草植株 G U s 活性变化
iF g u er 6 hT
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Of CP H W
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e le v e l o f G U S aC 石vi yt o f ot 切 s g e苗 c ot b a c c o
P lan tS o f CP AM B LA 13 05
.
2
图 7 5
~ 比 s A 不同处理时间 CP HW
.
2 转基因烟草植株叶
片中 G U S 活性变
F igU er 7 hT
e le ve l
o f G U S ac 石v iyt in het le vae s o f tr 出拐 g e ia e ot
-
bac c o Pl an tS
o f CP 甘W es Z加aot d iw ht s r。〔 n o lL/ S A a t id 价湘 n t
丘m e 如比 it o n
刀旧月 2 启动子的活性与 20 0 I n i l l o比 N ac l 浓度处理
下相同 , 在处理 12 h 和 24 h 后启动子活性略有增
加 , 当处理时间增加到 48 h 时 刀刀刀 2 启动子的活性
大幅度增加 。 试验结果同时表明 : 随着 N aC I处理浓
1 2 A B A 信号传导
在植物响应逆境刺激的反应中 , A B A 是一种必
需的传递体 (m e d i a t e r ) (M elr o t an d G ir a u da t , 1997 ) 。 许
多逆境胁迫诱导基因的表达需要内源 A B A 的增加 ,
并且对外源 BA A 的处理有反应 an gr a l n an d B别 rt e l s,
1 9% )
。 本研究中 刀召刃 2 启动子可以响应 A B A 信号 ,
并起始表达 , 在 or o 脚。比妞A 处理 12 h 后启动
子活性达到最大 。 由此说明 刀刀川 2 启动子受干早 ,低
温等逆境胁迫的诱导 。 这与前人研究中发现 的
B A D H 基因响应逆境胁迫诱导是相一致的 。
1 3 SA 信号传导
以往的研究发现 : S A 能诱导多种植物对病毒 、
真菌及细菌病害产生抗性 (心此 5 an d j eb ilc k, 1995 ) ,
s A 己被普遍认为是诱发 s A R (植物产生系统获得性
抗性 ( s ys te而 。 ac q u ir e d er is s切nL c e ) 的信号分子之一 ,
涉及并参与植物 H R 和 SA R 反应 , 在植物的 SA R 信
号转导中起着关键作用 (Che n an d 粗 e s s ig , 199 1) , SA
作为 SA R 信号转导途径的一种内源信号分子 , 其作
用已在烟草 、黄瓜和拟南芥等植物中得到证实 (B e n t ,
19 ;6 原永兵等 , 19 97 ) 。 但本研究中刀丑刀 2 启动子并
不响应外界 SA 信号 , 因此推断 刀召月 2 启动子不响
应植物体内的 S A 信号传导途径 , 并且不受病毒 、 真
菌和细菌病害的诱导 。
1 4 不同处理条件下 D B P 12 启动子活性的差异
用 N a CI 和 AB A 处理转基 因 植株 后发现 :
刀刀刀 2 启动子的表达活性不同 , 4 0 1l l n l o比 N aC I处
理 48 h 后 刀刀月 2 启动子活性达到最大 , 为对照的
3
.
7 倍 ;而 10 0 卜m o比 BA A 处理 24 h 后 刀刀刊 2 启动
子的活性达到最大 , 为对照的 1 . 6 倍 。 这一结果说明 :
刀召川 2 启动子对于 N ac l胁迫处理反应较为敏感 。
在未经胁迫处理时刃召刀 2 启动子也有一定量
的表达 , 其表达活性较 C a MV 35 S 启动子低 , 为
C a MV 3 5 S 启动子的 0 . 1司 . 15 倍 。 经 4 0 0 n n n o比
甘菊 刀任从刀万 1基因启动子 刀召于呀2表达特性研究
N a C I 处理 4 8 h 和 1 0 0 林mo 比 AB A 处理 2 4 h 后 ,
D B P 12 启动子的活性为 C a MV 35 S 启动子的 .0 35 倍
和 .0 23 倍 。 这一结果表明旧召刀 2 启动子在未经诱
导的条件下其表达活性较低 , 对于转基因植株生长
发育的影响较小 , 而通过诱导后其启动子活性得到
了提高 , 虽然较 C a M V 35 S 启动子活性仍较低 , 但相
差不大 。 当启动子接受诱导表达活性达到最大后 , 其
表达活性不再增加 , 因此将对转基因植株的影响降
到了最低 。
通过 P L A C E 数据库检索显示 , 甘菊 刀召IP Z 启
动子序列包括多个与 A B A 诱导相关的 A C A CN N G
co er 元件 , GT 一 1 box (G A A A A A )等与盐诱导相关的
顺 式作 用 元件 以及 与 水 分 胁 迫 相 关 的 M YB
(场该人C C A , Y A A C K G ) 识别元件 和 MY C (C A N -
NT G )识别元件 (刘振林 , 2 0 06 ) 。 这与本试验的结果相
一致 。 这一研究结果为揭示甘菊 B A D H 基因调控表
达机理奠定了基础 。
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